微载体规模化培养Vero细胞制备肠道病毒71型灭活疫苗及其免疫原性分析

目的利用微载体规模化培养Vero细胞制备肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)灭活疫苗,并检测其免疫原性。方法利用免疫荧光法检测从患手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)伴发重症脑炎患儿粪便样本中分离鉴定的EV71毒株KC414134的特异性;用微载体规模化培养Vero细胞制备KC414134,50 KD超滤膜过滤,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,经β-丙内酯灭活后,与氢氧化铝佐剂混合,制备灭活疫苗,经皮下免疫昆明小鼠3次,末次免疫后1周检测血清中总抗体和中和抗体效价。结果特异性荧光分布在细胞质中,表明分离的KC414134为EV71。微载体规模化培养Vero细胞制备得到大量病毒,纯化后未获得理想纯度的病毒颗粒,但病毒灭活完全;灭活疫苗免疫小鼠后,获得了较高效价的总抗体和中和抗体。结论利用微载体规模化培养Vero细胞成功制备了具有较高免疫原性的EV71灭活疫苗,为后期灭活疫苗的开发奠定了基础。     

油泥超声破乳-离心分离除油工艺研究

选用26.05 k Hz的超声振子,分别对超声的辐照时间、沉降时间、温度、功率,以及离心时间、离心转速进行单因素实验。结果表明,控制离心时间20 min,离心转速4000 r·min-1。最佳反应条件为:超声辐照时间45 min,超声沉降时间120 min,超声功率300 W,反应温度50℃,此时达到92.46%的脱油率。在实验结果分析讨论的基础上,进一步分析研究了超声破乳的理论与机理。     

EV71灭活疫苗(人二倍体细胞)灭活工艺验证

目的对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗(人二倍体细胞)的灭活工艺进行验证。方法取3批次经甲醛灭活的EV71灭活病毒收获液样品,分别连续盲传4代,并设病毒对照盲传4代。观察每代次样品的细胞病变情况,采用微量滴定法检测病毒感染性滴度,ELISA法检测EV71特异抗原含量,实时定量PCR法检测病毒核酸水平及病毒负链产生情况。结果 3批灭活的疫苗病毒收获液样品经4次盲传后,各代次均未出现明显的细胞病变,经微量滴定法均未检测到EV71感染性滴度。灭活的病毒收获液盲传至第2代时,病毒负链检测已为阴性;至第3代时,EV71抗原检测为阴性;至第4代时,病毒核酸检测为阴性。病毒对照经盲传4代后,各代次均出现明显细胞病变;自第2代开始,感染性滴度维持在106~107 CCID50/ml,抗原含量为200~370 U/ml,且均可检测出明显的病毒核酸及病毒负链增殖。结论通过经典的"细胞上盲传3代"的检测方法,并结合实时定量RT-PCR对病毒核酸和负链进行检测,证实经甲醛灭活的EV71灭活疫苗样品已完全灭活。     

油溶性二硫化钼分散稳定性影响因素探究

本实验主要研究了实验室自制新型油溶性二硫化钼,探究了样品添加量、超声时间、离心时间对油溶性二硫化钼分散稳定性的影响规律,结果显示,在质量分数为0.6％～1.2％、超声功率500W、超声时间30min和转速2000r·min-1、离心时间90min的实验条件下,实验室自制油溶性二硫化钼无明显沉淀,具有良好的分散稳定性,为...     

降低煤焦油中灰分和喹啉不溶物的研究

为提升煤焦油的利用价值,降低其灰分和喹啉不溶物(QI)含量,系统比较了静置法、离心法和溶剂处理法对煤焦油中灰分和QI脱除的效果。通过实验得出了不同方法的最佳操作条件:静置法最佳条件为静置温度90℃,静置时间30min,蒸馏温度210℃;加热离心法最佳条件为离心转速4 000r/min,离心时间12min,盐酸浓度0.05mol/L;溶剂法煤焦油与混合溶剂最佳比例1:0.3。     

刘房子膨润土提纯关键影响因素分析

采用湿法提纯刘房子膨润土,考察液固比、分散剂用量、搅拌时间和离心转速对提纯效果的影响。结果表明,最佳提纯条件为:液固比12∶1(g/g),分散剂用量0.075%,搅拌时间0.5 h,离心转速4 000 r/min。该条件下膨润土的膨胀容由33 m L/g提高到97 m L/g,蒙脱石含量由60.84%提高到98%以上,SiO_2含量降低,得到较高质量的膨润土产品。     

刘房子膨润土提纯关键影响因素分析

采用湿法提纯刘房子膨润土,考察液固比、分散剂用量、搅拌时间和离心转速对提纯效果的影响。结果表明,最佳提纯条件为:液固比12∶1(g/g),分散剂用量0.075%,搅拌时间0.5 h,离心转速4 000 r/min。该条件下膨润土的膨胀容由33 m L/g提高到97 m L/g,蒙脱石含量由60.84%提高到98%以上,SiO_2含量降低,得到较高质量的膨润土产品。     

EV71抗原ELISA定量检测方法的建立

目的建立EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于EV71灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测。方法采用EV71全病毒免疫,制备抗EV71单克隆抗体及多克隆抗体,以抗EV71多克隆抗体作为包被抗体,经HRP标记的抗EV71单克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测样品中EV71抗原含量,并对该方法进行验证及应用。结果所建立的方法线性范围为5～80U/ml,R2=0.994,线性关系良好,定量限度为5U/ml;检测不同浓度的EV71抗原内部参考品,回收率为88%～119.0%;变异系数均小于15%;与甲肝病毒收获液、乙脑病毒灭活液、H5N1流感病毒裂解疫苗原液、小牛血清、人白蛋白、Vero细胞、MEM培养基及CoxA16收获液均无交叉反应;检测EV71灭活疫苗原液纯化过程样品的抗原含量,能有效反映抗原纯化趋势;检测铝吸附疫苗成品解离后抗原含量,准确性较高。结论已建立了EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性及重复性良好,可用于EV71疫苗生产过程中及终产品的抗原定量检测。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原超速离心纯化方法的建立

目的建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)抗原的超速离心纯化方法。方法将SFTSV工作种子库毒种接种至Vero细胞,病毒培养物经灭活及浓缩后制备病毒浓缩液。病毒浓缩液通过20%蔗糖超速离心富集分离,再经60%、50%、40%、30%、20%、10%蔗糖密度梯度超速离心进一步纯化,将病毒抗原富集的组分进行合并,经SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果病毒抗原富集于组分22~26中,合并后经SDS-PAGE分析可见相对分子质量约60 000及28 000的糖蛋白(GP)及核蛋白(NP)条带,纯度约90%,浓度为2.58 mg/ml,且可与兔抗SFTSV全病毒多克隆抗体发生特异性结合。结论成功建立了SFTSV的超速离心纯化方法,纯化制备出了高纯度的病毒抗原,为SFTSV灭活疫苗的研制奠定了基础。     

高效价抗肠道病毒71型兔血清的制备及鉴定

目的制备高效价的抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)兔血清。方法分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径(肌肉、皮下、腹腔)免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性。结果未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了最高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶108,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1∶2 000稀释后荧光强度荻时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406~1 280 652 U/0.2 ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高。结论获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件。     

Criteria for the affinity of dyes for fibres

An equation was obtained for evaluating the thermodynamic affinity of a disperse dye for a fibre. Quantities Δh _D and K _D , which are functions of the composition of the dye bath, temperature, and state of the fibre material, can characterize the change in the affinity of the dye for the fibre when the dyeing conditions are varied.     

汽车用灯头的注射模设计

针对汽车用塑料灯头的结构特点与工作环境,分析了灯头结构的复杂性、材料性能,注身工艺条件、合理地设计了注射成型模具,采用了组合式下模型芯来完成内孔的复杂成型,同时采用组合式侧抽芯来完成外侧面的卡钩与上面的穿线孔的成型,简化了模具的结构。     

新型气化型煤粘结剂

介绍一种新型气化煤粘结剂的制备方法和粘结作用机理，该粘结剂属有机粘结剂，粘结能力强，煤种适用范围广。制取的气化型煤机械强度高，灰份低，固定碳含量高。     

焊制三通雌雄样板计算机放样软件的开发

应用VC 语言开发了焊制三通雌雄样板放样软件,该软件能快速、准确地完成正三通、斜三通、顺流三通、Y型三通雌雄样板的放样工作。详细介绍了程序的编制过程以及软件的特点。     

活性石灰回转窑用耐火砖损坏原因及对策

分析了活性石灰回转窑用耐火材料的损坏原因,认为炉衬的附着物质与氧化硅和氧化铁的反应有关,硅酸钙与CaO是结圈的主要成分.改善耐火材料可以提高其使用寿命.     

植物基儿童房用水性涂料的制备

研发出了一种具有强有力的杀菌防霉、有效净化甲醛功能的并且超高耐擦洗的植物基儿童房用水性涂料。重点探讨了乳液、PVC、除醛剂、抗菌剂、工艺和消泡剂的选择及搭配等方面对涂料性能的作用和影响。     

Test procedure for evaluation of catalysts for nitrile reduction

A procedure was developed that examines the effectiveness of nickel catalysts for the hydrogenation of fatty nitriles to amines. Rates of reaction, selectivity, and olefinic reduction were the parameters studied. The procedure can be used for new catalyst screening and is ideally suited for quality assurance testing of production catalysts. It involves the reduction of nitriles to amines at 410°F (210°C) and 500 psig using a .2% Ni loading level. A mixture of primary and secondary amines is obtained which is characteristic of the catalyst’s selectivity. Both sponge and supported nickel catalysts were tested using tallow nitriles as the feedstock.     

研制尿素防结块剂小试简要

1 对尿素结块的思考 喷淋的尿素颗粒细小,粒度为1.0～1.5mm,其比表面积大,颗粒接触点多,加大了结块倾向.