贝莱斯芽孢杆菌S6拮抗物质分离纯化及抑菌机理

[目的]旨在明确新型生防细菌贝莱斯芽孢杆菌S6的拮抗物质和抑菌作用。[方法]拮抗物质的研究方法包括硫酸铵沉淀法、DEAE-Sephrose~(TM) Fast Flow阴离子交换、Superdex TM75凝胶层析及SDS-PAGE电泳分析;抑菌作用的研究方法包括菌丝生长速率法和孢子萌发法。[结果]贝莱斯芽孢杆菌S6拮抗物质对多种病原菌具有很好的抑制作用。采用80%饱和度(NH_4)_2SO_4沉淀法提取贝莱斯芽孢杆菌S6的发酵液粗提物,粗提物通过DEAE-Sephrose TM Fast Flow阴离子交换和Superdex~(TM) 75凝胶层析进行纯化,经SDS-PAGE电泳检测到单一的条带,其分子质量为20.1 kDa。贝莱斯芽孢杆菌S6的拮抗蛋白质量浓度为5、10 g/L时,对番茄早疫病菌的抑制率分别为71.13%、90.33%;质量浓度为1 g/L时,对早疫病菌的孢子萌发抑制率为60.42%,质量浓度达到10 g/L时,孢子几乎不萌发。拮抗蛋白处理的菌丝发生了扭曲、畸形、肿大。[结论]本研究结果为利用贝莱斯芽孢杆菌S6开发新的生防制剂奠定了基础。     

Bacillus methylotrophicus菌株产抗菌蛋白性质及对人参锈腐病菌抑菌作用

[目的]菌株Bacillus methylotrophicus是一株对人参锈腐病菌(Cylindrocarpon destructans)有较强拮抗作用的细菌,为了有效防治人参锈腐病,进行了其产生抗菌蛋白的性质研究和抑菌效果试验。[方法]通过混菌法研究抗菌蛋白对紫外、热、酸碱、有机溶剂和蛋白酶的稳定性;采用生长速率法测定抗菌蛋白对锈腐病菌菌丝生长的抑制作用;平板对峙法测定其对锈腐病菌菌丝形态的影响;液培法测定其对锈腐病菌孢子萌发的抑制影响。[结果]抗菌蛋白具有很好的抗紫外线、耐热、耐酸碱和耐蛋白酶的稳定性,当质量浓度大于62.5 mg/L时,对人参锈腐病菌菌丝生长抑制率超过63.8%;显微镜观察其对菌丝生长有强烈的抑制作用,可以导致菌丝生长过程中分支增多、断裂和菌丝空洞,500 mg/L的抗菌蛋白对锈腐病菌孢子萌发的抑制率可达到100%。[结论]为人参锈腐病的防治提供新的生物防治资源。     

八宝景天叶乙醇提取物的抑真菌活性

[方法]采用菌丝生长速率法研究了八宝景天叶乙醇提取物对9种植物病原真菌的抑制作用,同时采用菌丝生长速率和孢子萌发2种方法测定其对玉米弯孢病菌的抑菌活性。[结果]在质量浓度为200 g/L时,对9种植物病原真菌均有一定的抑制作用,且抑制率均达75%以上,其中对玉米弯孢病菌的抑制作用最强,抑制率为82.27%,对其孢子萌发的抑菌活性高于对其菌丝生长的抑菌活性,EC50值分别为74.18、66.53 g/L。[结论]八宝景天叶有着良好的抑菌效果,具有很好的开发价值。     

落地生根萃取物的抑菌活性

[目的]比较落地生根根、茎、芽和花各萃取相提取物的抑菌活性,进一步明确起抑菌作用的活性成分,为以后的分离打下基础.[方法]以番茄早疫病菌、水稻立枯病菌为指示菌,采用生长速率法和孢子萌发法,测定各自的抑菌活性.[结果]落地生根芽氯仿萃取物对2种菌的菌丝生长和孢子萌发具有较好的抑制作用,菌丝生长抑制率分别为92.41%和89.22%,孢子的萌发抑制率依次为91.85%、86.11%.[结论]芽氯仿相萃取物的抑菌效果最好,表明落地生根植物中起抑菌作用的活性成分主要集中在芽部位,且抑菌活性成分主要为弱极性物质.     

小麦纹枯病生防海洋放线菌的筛选与鉴定

[目的]筛选对小麦纹枯病菌有抑制作用的生防菌。[方法]采用平板对峙法、生长速率法和盆栽法筛选海洋放线菌对小麦纹枯病菌的抑制作用和防治效果;采用显微观察和分子鉴定对生防菌进行分类鉴定。[结果]2个菌株对小麦纹枯病菌具有较好的抑制作用。菌株YC_3发酵上清液对小麦纹枯病菌菌丝生长的抑制率为69.13%,盆栽防效为63.84%,菌株YC_1和YC_3分别为孢淡灰链霉菌(Streptomyces spororaveus)和肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)。[结论]菌株YC_3发酵液对小麦纹枯病具有显著的防效。     

海洋生境芽孢杆菌HTTAZ10-03菌株的抑菌作用

[目的]研究海洋生境芽孢杆菌HTTAZ10-03的抑菌应用潜力。[方法]通过gyr B序列同源性等分析鉴定菌株,96孔板和抑菌率法测试MIC值和抑菌谱,PCR扩增菌株2个重要生防基因,盆栽实验测定菌株对番茄叶霉病和油菜菌核病的防治效果。[结果]HTTAZ10-03菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),菌株具有与抑菌活性有关的fen D,itu C基因簇,茄链格孢病菌抑菌MIC值为2 m L/L,对番茄灰霉等8种植物病原菌抑制率74.1%~85.4%,番茄叶霉病和油菜菌核病菌的防效为62.1%~63.6%。[结论]芽孢杆菌HTTAZ10-03具有较好的杀菌剂开发潜力。     

6种中草药水提物对黄瓜黑星病菌抑菌活性的室内筛选

采用生长速率法和孢子萌发法测定了地肤子、丹皮、落地生根等6种水提物对引起黄瓜黑星病的黑星病菌菌丝生长和孢子萌发的作用.结果表明:6种水提物对黑星病菌的菌丝生长和孢子萌发均有一定的抑制作用,且对孢子萌发的抑制活性好于对其菌丝生长的抑制活性.地肤子和丹皮水提物抑菌活性较好,对菌丝生长的EC50值分别为8.95、11.58 g/L,对孢子萌发的EC50值分别为2.09、16.21 g/L.     

落地生根叶乙醇提取物的抑真菌作用

采用菌丝生长速率法研究了落地生根叶乙醇提取物对9种植物病原真菌的抑制作用,同时采用菌丝生长速率和孢子萌发2种方法测定其对番茄早疫病菌的抑菌活性.结果表明:在200 g/L的质量浓度下,对9种植物病原真菌均有一定的抑制作用,抑制率达50%以上,其中对番茄早疫病菌抑制作用最强,抑制率达93.80%,对其孢子萌发的抑菌活性高于对其菌丝生长的抑菌活性,EC50值分别为38.70、28.97 g/L.     

氟环唑与三环唑复配对水稻纹枯病和稻曲病的联合生物活性及田间防效

[目的]筛选能同时防治水稻纹枯病和稻曲病的高效药剂。[方法]采用菌丝生长抑制法、菌体指标测定和田间药效试验,评价氟环唑与三环唑混配组合的联合生物活性及对水稻纹枯病和稻曲病的田间防效。[结果]氟环唑与三环唑质量比1∶3复配,对水稻纹枯病菌和稻曲病菌的联合作用为增效作用,EC50值分别为2.1911、0.2374 mg/L,联合作用系数CTC分别为120.32、121.20;纹枯病菌初生分枝菌丝长度17.4～21.3μm,分枝菌丝间隙117.8～128.7μm,菌丝畸变明显;培养5.5 d后稻曲病菌孢子数2.6×10~5～3.5×10~5。田间防效表明:60%氟环唑·三环唑可湿性粉剂(质量比1∶3)288～360 g a.i./hm2防治水稻纹枯病,对"川绿优188"防效80.5%～87.6%,对"绿优4923"防效69.5%～85.3%;防治水稻稻曲病,对"川绿优188"防效76.2%～83.6%,对"绿优4923"防效62.6%～79.5%;显著高于单剂和对照药剂。[结论]氟环唑与三环唑质量比1∶3复配,用量288～360 g a.i./hm2,能兼治水稻纹枯病和稻曲病,达到农药减量增效的目的。     

生防芽孢杆菌的分离筛选与初步鉴定

从不同环境中采集7份土壤样品用于芽孢杆菌的分离纯化,通过多次平板划线分离纯化得到30个菌落形态不同的菌株。以黄瓜枯萎病菌为指示菌对得到的菌株进行抑菌活性筛选,其中的4个菌株具有明显的抑菌作用。采用对峙生长法,测定4株芽孢杆菌对其它植物病原真菌的活性,结果显示4个芽孢杆菌均具有广谱抑菌性。进一步试验表明,4株芽孢杆菌的发酵液也具有明显的抑菌作用,说明对病原真菌有抑制作用的物质水溶性较大,大部分释放到发酵液中,并且发酵液可使黄瓜枯萎等植物病原真菌菌丝膨大、褐变、末端钝圆,促进镰刀菌产生小孢子。通过菌落形态特征、系列生化测定对其进行初步鉴定,结果表明其中一株为枯草芽孢杆菌。     

贵州省水稻稻曲病菌对咪鲜胺的敏感性基线

[目的]监测水稻稻曲病菌对咪鲜胺的敏感性。敏感性基线是科学用药和抗药性监测的依据。[方法]采用菌丝生长速率法测定从贵州省的8个稻区分离的107株稻曲病菌菌株对咪鲜胺的敏感性。[结果]不同稻区的107株稻曲病菌菌株的EC_(50)值介于0.0086~0.2573mg/L之间,菌株之间的EC_(50)值最大相差29.91倍。[结论]供试菌株敏感性频率呈近似正态分布,初步确定将所有菌株的EC_(50)均值(0.1064±0.0578)mg/L作为贵州省稻曲病菌对咪鲜胺的敏感基线。     

蛇床子素对稻曲病菌的抑菌活性及诱抗剂与其协同增效作用评价

[目的]明确蛇床子素对稻曲病菌的抑菌活性以及植物诱抗剂与其协同增效作用。[方法]采用生物学方法测定了蛇床子素对稻曲病菌菌株WC49和AC27的菌丝生长、产孢能力、培养滤液毒力和致病力的影响；田间药效试验测试了诱抗剂6%寡糖·链蛋白和生物药剂1%蛇床子素对稻曲病防治的协同增效作用。[结果]蛇床子素在质量浓度55 mg/L时，其对稻曲病菌菌丝生长、产孢能力、培养滤液毒力和致病力等有显著的抑制作用。田间试验结果表明诱抗剂和生物药剂分别在分蘖后期和叶枕平时期协同应用，2者的协同防治效果显著高于单独施用。[结论]蛇床子素对稻曲病菌有较好的抑菌活性，其与植物诱抗剂的协同应用具有很好的增效作用。     

拮抗菌株JA38对人参锈腐病室内毒力及田间防治效果

[目的]明确菌株JA38对人参锈腐病的室内毒力及田间防治效果。[方法]采用菌丝生长速率法测定菌株JA38对人参锈腐病菌的室内抑制效果,灌根法进行了人参锈腐病的田间药效试验。[结果]室内毒力测定结果表明:当菌株JA38发酵液浓度为10~9cfu/mL,其抑菌率达100%,EC_(50)值为1.4×10~6cfu/mL;且对人参锈腐病菌的产孢量、孢子萌发、菌丝生长均有抑制作用;显微观察发现菌株JA38能够导致人参锈腐病菌菌丝断裂、分支增多和生长畸形。田间试验结果表明:含有0.25×10~7~1.0×10~7cfu/mL的JA38菌株发酵液防治效果达40.96%~60.77%。[结论]生防菌株JA38具有较好防治人参锈腐病的应用前景。     

放线菌发酵提取物对百合炭疽病的抗菌活性筛选

从云南不同生态环境中采集的土壤样品巾分离到334株放线菌，以百合炭疽病菌作为指示菌，通过菌株发酵提取物对孢子萌发抑制、菌丝生长抑制和温室盆栽防治效果的测定，初步筛选出对炭疽病菌分生孢子萌发有较强抑制能力的18个菌株，对炭疽病菌菌丝生长有较强抑制能力的24个菌株，离体叶片防治效果60％以上的14个菌株，其中YIM31927、YIM31047等10株发酵提取物对百合炭疽病菌孢子萌发、菌丝生长和离体叶片防治试验均表现出了一致活性，筛选到一批具有开发应用潜能的放线菌资源。     

番茄早疫病菌对7种杀菌剂的敏感性比较及其对苯醚甲环唑的敏感性基线建立

采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定并比较了7种杀菌剂对番茄早疫病菌的室内抗菌活性,结果表明.芳烃类杀菌剂百菌清抑制病菌孢子萌发的活性最高,同时对病菌菌丝生长也有较高活性;苯并咪唑类杀菌剂多菌灵对菌丝生长和孢子萌发的活性均较低;二甲酰亚胺类杀菌剂腐霉利、异菌脲对番茄早疫病菌的菌丝生长和孢子萌发两个阶段均有较高活性;三唑类杀菌剂苯醚甲环唑虽然对孢子萌发的抑制活性较低,但其对菌丝生长的活性最高;甲氧基内烯酸酯类杀菌剂醚菌酯和嘧菌酯在离体条件下对菌丝生长的抑制活性较低,但对孢子萌发有较高活性.采用菌丝生长速率法测定了从湖北和山东采集的60株番茄早疫病菌对苯醚甲环唑的敏感性,结果表明这些菌株对苯醚甲环唑均敏感,未出现对苯醚甲环唑敏感性明显下降的抗药菌株,因此,这些菌株的平均EC5o值为(0.3050±0.1361)mg/L,可以作为番茄早疫病菌对苯醚甲环唑的敏感性基线.     

新疆红枣黑斑病病菌的室内杀菌剂筛选

[目的]通过室内药剂筛选为田间有效防治新疆红枣黑斑病提供理论依据。[方法]通过菌落生长法和孢子萌发率法测定和比较12种杀菌剂对新疆红枣黑斑病病原菌(Alternaria sp.)的室内毒力。[结果]40%氟硅唑EC、50%喹啉铜WP的EC50值均小于1 mg/L;50%醚菌酯WG、50%腐霉利WG、50%异菌脲WP的EC50值均小于25 mg/L。孢子萌发测定:40%氟硅唑EC、50%异菌脲WP等7种药剂对分生孢子萌发的抑制率均达85%以上。[结论]氟硅唑、喹啉铜2种药剂对病菌菌丝生长的抑制活性最好,醚菌酯、腐霉利、异菌脲3种杀菌剂次之。     

吉林省水稻鞘枯病病菌生物学特性及药剂敏感性

[目的]对引起吉林省水稻鞘枯病的病原菌进行鉴定,对其生物学特性及药剂敏感性进行研究。[方法]采用组织分离,单孢纯化获得分离物。柯氏证病后结合病菌形态特征及ITS序列对病菌进行鉴定;并对病菌的生物学特性进行研究;采用生长速率法测定病菌对12种杀菌剂的敏感性。[结果]病菌鉴定为Nigrospora oryzae;病菌菌丝最适生长及产孢温度为25℃;菌丝在PCA、OA、在以甘露醇和蔗糖为碳源、胰蛋白胨为氮源的培养基上生长良好;pH值为5.0最适菌丝生长;全光照条件利于菌丝生长。病菌在PCA和OA、果糖为碳源、天冬氨酸为氮源的培养基上产孢良好;pH值为7产孢最佳,全光照条件有利于产孢。菌丝致死温度为49℃,孢子致死温度为52℃。病菌对1%申嗪霉素悬浮剂、25%咪鲜·己唑醇微乳剂、45%丙环唑水乳剂、250 g/L嘧菌酯悬浮剂、40%氟环·稻瘟灵悬浮剂、525 g/L三环·丙环唑悬浮剂、20%井·烯·三环唑可湿性粉剂的敏感性较高,EC50值小于1.0 mg/L。[结论]明确了水稻鞘枯病的病原菌种类及病菌生物学特性,筛选出7种抑菌效果较好的杀菌剂。     

雪白弯颈霉C41发酵液稳定性及粗提物的抑菌活性

[目的]研究雪白弯颈霉C41菌株固体发酵粗提物的抑菌活性及其发酵液在不同条件下的稳定性。[方法]采用菌丝生长速率法,以7种植物病原真菌为供试菌,测定雪白弯颈霉C41固体发酵粗提物的抑菌活性;以玉米弯孢菌叶病菌为指示菌,测定发酵液在不同条件下的稳定性。[结果]固体发酵粗提物对玉米灰斑病、玉米弯孢菌叶斑病和玉米大斑病病菌菌丝生长均具有较强的抑制作用,抑制率分别为90%、84.38%和80%。发酵液在25~60℃范围内有较好的热稳定性,温度高于60℃则稳定性降低;有较广泛的酸碱稳定性,在pH值为6时抑菌活性最好;发酵液对日光和紫外线的稳定性较强。[结论]雪白弯颈霉C41菌株的代谢产物具有广谱的抑菌活性和较好的稳定性。     

4种生物农药对新疆枣果黑斑病的室内及田间药效试验

[目的]筛选出适合新疆枣果黑斑病防治的生物农药。[方法]采用室内抑菌和田间喷雾法分别测定4种生物农药对枣果黑斑病菌室内抑菌效果和田间防效,同时对其安全性进行了评价。[结果]4种生物农药对2株枣果黑斑病菌均有较好的抑菌效果,田间试验中50亿/g绿色木霉菌粉剂667 mg/L和1亿/mL枯草芽孢杆菌10 g/L对枣果黑斑病的田间防效分别为64.44%和66.67%,对红枣落花的影响最小,药后5 d落花率分别为31.53%和32.28%。[结论]绿色木霉菌667 mg/L和枯草芽孢杆菌10 g/L适用于新疆枣果黑斑病的防治。     

防治蔬菜灰霉病解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及抑菌特性

[目的]为研制防治蔬菜灰霉病的新型生物农药,进行高效生防菌的分离筛选及抑菌特性研究。[方法]通过形态学、生理生化和16S rDNA序列分析,对拮抗菌进行鉴定;采用平板扩散法测定发酵液的抑菌特性。[结果]分离筛选出1株对黄瓜灰霉病具有高效拮抗作用解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌株在生长对数期产生抗菌物质,并在30-38 h达到最大值;产生的抗菌物质有很好的热、酸碱稳定性,紫外线照射不敏感,常温储存6个月活性保持在80%以上;抗菌谱测定表明其对黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等多种病原菌具有显著抑菌效果。[结论]该菌株所产抗菌物质性能稳定,抗菌谱宽,抑菌力强,具有开发成新型广谱生物农药的潜力。