SARS冠状病毒空斑技术的建立和应用

目的　建立SARS病毒空斑形成试验 ,用于病毒滴定和中和抗体检测。方法　用Vero E6细胞接种6孔塑料细胞培养板 ,加两层含琼脂糖培养基 ,以中性红为染色剂建立空斑试验 ,以能减少 5 0 %的空斑为标准 ,测定抗SARS中和抗体。结果　应用空斑试验能稳定清晰地形成SARS病毒特异性空斑 ,可用于病毒滴定、抗SARS病毒抗体的测定和疫苗效力的检定。结论　为正确滴定病毒、检测中和抗体、评价疫苗的有效性提供了依据     

腮腺炎病毒蛋白组分疫苗的免疫效果

目的观察腮腺炎病毒蛋白组分疫苗的免疫效果。方法SP株腮腺炎病毒液经灭活、浓缩、裂解后,采用SP SepharoseTM Fast Flow阳离子层析柱及Sepharose CL-4B分子筛层析柱纯化,收集各峰样品,经12%SDS-PAGE、Western blot分析及HPLC检测。并取第1峰样品免疫ICR及BALB/c小鼠,检测血清中和抗体效价及CTL杀伤活性。结果所收集的第1峰样品为单一的腮腺炎病毒蛋白组分。免疫ICR小鼠可诱导产生中和抗体,其免疫后各检测时间点的GMT水平与减毒活疫苗组相比,差异均无统计学意义;免疫BALB/c小鼠可诱导产生针对HN肽段的CTL杀伤活性,而减毒活疫苗组则未能诱导此特异性CTL反应。结论腮腺炎病毒蛋白组分疫苗在小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为新型腮腺炎疫苗的研制提供了实验依据。     

原型株及变异株SARS-CoV-2灭活疫苗在大鼠体内的免疫原性评价

目的 评价原型株、Beta株、Gamma株和Delta株SARS-CoV-2灭活疫苗在大鼠体内的免疫原性。方法 分别将原型株、Beta株、Gamma株和Delta株SARS-CoV-2灭活疫苗经大腿肌内免疫5只雌性Wistar大鼠2次,间隔14 d,免疫剂量均为3μg病毒蛋白/（0.5 mL·只）,初次免疫后14、28和42 d,经静脉采集血,分离血清。间接ELISA法检测血清IgG抗体水平;微量中和试验检测血清中和抗体效价;计算血清中和抗体效价的抗原比,以评价2株病毒间的抗原性差异。结果 初次免疫后14 d,全部免疫血清中均可检测到针对4株病毒的IgG抗体,28 d的IgG抗体水平较14 d提高10倍以上,42 d时效价略有下降。首次免疫后14 d,免疫原型株或Delta株疫苗的大鼠血清中,针对4株病毒的中和抗体全部阳转;免疫Beta株和Gamma株疫苗的大鼠血清中,针对Beta株和Gamma株病毒的中和抗体全部阳转,针对原型株或Delta株病毒的中和抗体部分阳转。初次免疫后28 d,4种病毒免疫血清中和抗体均阳转,中和抗体效价较14 d大幅升高;初次免疫42 d时中和抗体效价较28...     

肠道病毒71型灭活疫苗免疫原性比较

目的探讨新上市国产肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠体液免疫和细胞免疫应答特性。方法分别用我国3家企业生产的EV71灭活疫苗(V1、V2、V3)按0、14 d程序免疫BALB/c小鼠,采用体外微量中和试验检测血清单剂和2剂免疫后14 d的EV71中和抗体效价,ELISA法检测2剂免疫后14 d的小鼠脾单个核细胞(mononuclear cells,MNC)分泌细胞因子水平。结果 3家EV71疫苗1剂免疫后即可诱导90%以上小鼠产生EV71中和抗体阳转,V1疫苗组诱导的中和抗体效价显著高于V2和V3疫苗组,GMT分别为627.1、25.9和75.3(P0.01);2剂免疫后中和抗体阳转率均为100%,V1和V3疫苗组抗体效价相近,GMT分别为1 752.9和2 013.5(P0.05),均显著高于V2疫苗组(GMT为228.2,P0.001)。3家疫苗均可诱导BALB/c小鼠产生Th1和Th2类细胞因子应答,但细胞因子种类具有差异,V1和V3疫苗组诱导小鼠分泌IFNγ的水平显著高于V2疫苗组(P0.05);3个疫苗组间IL-2分泌水平差异无统计学意义(P0.05),IL-4和IL-5分泌水平与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);V2疫苗组诱导小鼠分泌的IL-6水平显著高于V3疫苗组(P0.01);V3疫苗组诱导小鼠分泌的IL-10水平显著高于V1和V2疫苗组(P0.05)。结论 3家EV71疫苗均可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,但呈现出不同的免疫应答特征。     

人用狂犬病脂质体疫苗的免疫效果

目的对狂犬病脂质体疫苗进行免疫效果评价。方法用狂犬病脂质体疫苗和无佐剂疫苗分别免疫小鼠,以NIH法检测保护效力,RFFIT法检测中和抗体,流式细胞仪检测淋巴细胞表面标记,体外实验法检测淋巴细胞增殖能力,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性,ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠IL-2和IFN水平。结果狂犬病脂质体疫苗与无佐剂疫苗相比,可提高效力2~3倍,脂质体疫苗组中和抗体水平明显高于无佐剂疫苗组,两组之间差异有显著意义。狂犬病脂质体疫苗可增强细胞免疫,小鼠CD4+/CD8+比例、淋巴细胞增殖指数、NK细胞活性、IL-2及IFN活性与无佐剂疫苗相比,差异均有显著意义。结论狂犬病脂质体疫苗可同时增强细胞免疫和体液免疫。     

H5N1人用禽流感疫苗免疫原性检测方法的建立

目的确定人用禽流感疫苗免疫原性检测方法。方法用禽流感病毒R1203株制备疫苗,以不同剂量免疫家兔,检测血清中的血凝抑制抗体和中和抗体,并进行交叉血凝抑制试验、交叉单向免疫扩散试验和交叉中和试验。结果R1203株疫苗接种家兔1针后14 d,中和抗体和血抑抗体滴度均较低;第2针后14 d均明显升高。血抑抗体量-效反应不明显,而中和抗体量-效反应明显。交叉血凝抑制试验显示,异型之间普遍有交叉反应,滴度大部分不低于1∶40。单向免疫扩散试验显示异型之间无交叉反应。禽流感疫苗抗血清不能中和人流感病毒,但能中和同型病毒(R1194),滴度可达1∶240。结论中和抗体能正确反映疫苗的免疫原性;检测中和抗体的方法可用于禽流感疫苗的效力试验。     

流感病毒中和抗体检测方法的建立及验证

目的建立检测流感病毒中和抗体效价的微量病毒中和法(microneutralization tests,MNT),并进行验证。方法建立改进的微孔板病毒中和法,并对该方法的关键影响因素(不同代次MDCK细胞和细胞培养板边缘效应)以及方法的准确性和精密性进行验证;采用改进的微孔板病毒中和法和血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验分别检测甲型H1N1流感疫苗免疫的血清样本85人份,分析两种方法检测结果的相关性。结果采用改进的微孔板病毒中和法,用不同代次MDCK细胞(25、30、35代)以及在细胞培养板不同位置(边缘孔、非边缘孔)检测相同的血清样本的中和抗体滴度结果相同;该方法准确性和精密性良好;改进的微孔板病毒中和法和HI法测定甲型H1N1流感疫苗免疫后血清抗体效价结果的相关系数为0.81,表明两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论建立的微量病毒中和法可满足流感病毒中和抗体效价检测的要求,可用于评价疫苗的免疫效果。     

牛血清质量及其中甲肝抗体对甲肝疫苗生产的影响

目的　对牛血清质量及其中的甲肝病毒抗体进行检测 ,评估此类抗体对甲肝疫苗生产的影响。方法　根据《中国生物制品主要原辅材料质控标准》检测项目 ,全检 4个厂家共 17批新生牛血清 ,另用EIA法检测血清中的甲肝抗体 ,并用此血清中和甲肝病毒抗原 ,用EIA法检测中和后剩余的甲肝病毒抗原 ,以此来评估新生牛血清中的甲肝抗体对甲肝病毒的影响。结果　 17批牛血清 (未灭活 ) ,检出 3批噬菌体阳性 ,4批内毒素和 1批蛋白含量超标。 12批甲肝抗体阳性 ,其中最高 6 87 5 2mIU ml,最低 8 91mIU ml。甲肝抗体阳性牛血清可将甲肝病毒抗原中和 ,1mIU ml的抗体可中和 7 5 3～ 11 6 4EU ml甲肝抗原。结论　牛血清蛋白含量、无菌试验、牛病毒等项目质量控制较好 ,其它则有待提高。牛血清中存在甲肝抗体 ,能将甲肝病毒大量中和。用于甲型肝炎疫苗生产的新生牛血清除按《中国生物制品主要原辅材料质控标准》进行质控外 ,还必须进行甲肝抗体的检测     

艾滋病疫苗的研究进展

艾滋病全称获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),是由人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染引起的,已成为全球性健康难题。HIV通过攻击CD4~+ T细胞而破坏机体的免疫系统,且该病毒易发生突变,使相应疫苗的设计更加困难,诱导中和抗体产生的同时激发机体的细胞免疫将成为开发有效艾滋病疫苗的新思路。本文对HIV的结构特点及疫苗设计、艾滋病疫苗诱导的细胞及体液免疫作一综述,并对该疫苗的开发前景进行展望。     

腮腺炎减毒活疫苗（F-基因型）免疫血清中和抗体效价与特异性IgG浓度的比较分析

目的 对腮腺炎减毒活疫苗(F-基因型)免疫血清中和抗体效价及特异性IgG浓度进行比较分析，评价二者作为相互验证指标的可能性。方法 选取194份人免疫血清，包括疫苗组98份[腮腺炎减毒活疫苗(F-基因型)，免疫前后各49份]和安慰剂组96份(不含腮腺炎病毒，其他成分与疫苗组相同，免疫前后各48份)，采用ELISA法和中和试验分别检测血清腮腺炎病毒特异性IgG浓度和中和抗体效价，并对两个指标的检测结果进行比较。以中和抗体效价为纵坐标，IgG浓度为横坐标绘制散点图，通过逻辑回归分析二者的相关性。以中和抗体效价为标准采用ROC曲线对各组特异性IgG浓度进行分析，评价以特异性IgG浓度判定中和抗体阳转的可靠性。结果 安慰剂组免疫前血清特异性IgG浓度(t=-0.977,P> 0.05)及中和抗体效价与免疫后比较，差异均无统计学意义(Z=-1.405,P> 0.05)，疫苗组免疫后血清特异性IgG浓度(t=-9.959,P <0.001)及中和抗体效价(Z=-5.696,P <0.001)均明显高于免疫前。安慰剂组免疫前后及疫苗组免疫前IgG阳转率均明显高于相应中和抗体阳转...