Soleris微生物快速检测系统在巴氏杀菌乳中的应用验证

[目的]为了验证Soleris微生物快速检测系统对巴氏杀菌乳中大肠菌群快速检测的时效性,以提高公司巴氏杀菌乳产品的出货时效。[方法]对Soleris微生物快速检测系统和传统国标平板计数法检验巴氏杀菌乳中的大肠菌群的检测结果进行对比验证。[结果]通过实验得出Soleris微生物快速检测系统只需要13.5 h即可出结果,比传统国标方法检出时间大大缩短。[结论]在适宜的条件下,当产品中含有大肠菌群阳性样时,Soleris微生物快速检测系统均能在较短的时间内检出,产品中大肠菌群含菌量越大,检测时间越短,并且与传统国标平板计数法具有良好的一致性,是一种可行的大肠菌群检测方法。     

Soleris微生物实时光电法与平板计数法测定生乳中菌落总数的比较研究

建立Soleris微生物实时光电检测法检测生乳中菌落总数的快速测定方法,并将该方法与国标的平板计数法进行比较。结果表明：Soleris法检测生乳中菌落总数的标准曲线为y=－0.651 5x＋8.263 9（y为菌落总数（lg（CFU/mL））,x为胶体栓变色时间（h））,相关系数R2=－0.939 6,表明标准曲线相关性良好;重复性实验结果的相对标准偏差均小于5%;Soleris法与平板计数法测定结果的比较表明,2 种方法之间没有显著性差异（P＞0.05）。在本研究的实验条件下,Soleris法检测生乳中     

Soleris检测技术在生乳细菌总数快速测定中的应用

通过使用Soleris仪器,建立了一种将实时光电微生物检测技术用于细菌总数快速测定的方法。实验得到了生乳细菌总数标准曲线Log CFU=7.634-0.472×DT(R2=-0.93);并用国标平板计数法对标准曲线进行了验证,结果表明Soleris法测得的结果与平板计数结果之间没有显著性差异,P0.05,重复性实验结果RSD值均小于5%。与平板计数法相比,该方法具有检测时间短、操作简单快捷等优点,可使检测时间缩短至少38 h,是一种可行的生乳细菌总数检测方法。     

Soleris检测技术在冰淇淋中大肠菌群检测的应用研究

冰淇淋中大肠菌群的传统检测方法繁琐且费时费力，不能适应现代化大型食品企业检测工作的需求。本研究将Soleris实时光电微生物检测技术引入到大肠菌群的快速检测中，得到了冰淇淋中大肠菌群检测标准曲线LogCFU=9.5175-0.854＆#215;DT（R2=0.9717）；并用国标平板法对标准曲线进行了验证，结果表明Soleris法测得的结果与平板计数结果偏差在＆#177;0.5范围以内，具有较好的一致性，重复性验证结果RSD值在0.443%～0.501%之间。而与平板计数法相比，Soleris法具有快速的优点，可使冰淇淋产品放行时间缩短13~62h。本研究建立的大肠菌群Soleris检测法具有检测时间短、灵敏度高的优势，为冰淇淋产品的微生物检测提供了一种新的方法。     

泰地罗新原料药微生物限度检查验证

根据《中华人民共和国兽药典》2015年版一部附录1105非无菌产品微生物限度检查的要求,采用薄膜过滤法(每筒冲洗量300mL)进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数检测,对泰地罗新原料药各试验菌进行回收试验测试及其检查方法验证。结果表明,胰酪大豆胨液体培养基适用于需氧菌检测,沙氏葡萄糖琼脂培养基适用于霉菌、酵母菌检测;验证试验中需氧菌、霉菌和酵母菌的回收比值均符合《中华人民共和国兽药典》2015年版规定。结论:可以采用薄膜过滤法对泰地罗新原料药进行微生物限度检查。     

保鲜菌种在搅拌型酸奶中的应用

本文研究了保鲜菌种对搅拌型酸奶的保鲜作用.保鲜菌种不参加酸奶的发酵过程,不影响酸奶的发酵时间及乳酸菌数量,并能显著抑制霉菌和酵母菌的滋生.在4℃冷藏的情况下,在酸奶中添加保鲜菌种能延长产品保质期,且不影响酸奶的感官特征;而在25℃常温贮藏条件下,保鲜菌种在较短时间内会迅速提高酸奶的酸度,严重影响产品品质.     

副干酪乳杆菌直投式菌种中霉菌和酵母菌检测方法的建立

霉菌和酵母菌是直投式菌种中常见的污染菌,严重影响直投菌种的安全使用。在副干酪乳杆菌直投式菌种的霉菌、酵母菌检测中,由于菌种本身对霉菌、酵母菌的抑制作用以及高浓度菌种对污染菌检测的干扰作用,经常造成检测结果的假阴性。本研究根据副干酪乳杆菌菌体比霉菌、酵母菌小的特点,采用抽滤的方法将副干酪乳杆菌和霉菌、酵母菌分开,通过定性和定量两步检验,结合国标检测方法,成功鉴定到副干酪乳杆菌直投式菌种污染的低丰度霉菌和酵母菌。为有效地控制副干酪乳杆菌直投式菌种的产品质量,菌种发酵产品在生产过程中的稳定性提供了有效的保证。     

影响酸奶质量的真菌分析及防止措施

根据酵母菌和霉菌的主要特点和感染途径,制定了车间环境中真菌变化的监测与解决程序,提出了从车间环境建设、公司经营管理等方面控制酵母菌和霉菌对酸奶污染的措施。     

大肠杆菌O157:H7实时定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的大肠杆菌O157:H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157:H7快速定量检测的实时定量PCR方法.该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍.方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157:H7,对非大肠杆菌O157:H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应.利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157:H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具.     

副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VP toxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为4.9 CFU/mL,利用该检测方法对采集的150份样品进行检测,共计检出3份VP阳性样品,与国标法(GB 4789.7-2013)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。     

环介导等温扩增技术检测酸乳中蜡样芽孢杆菌

目的：建立快速准确检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的方法.方法：根据蜡样芽孢杆菌hblA基因设计特异性引物,通过环介导等温扩增技术（LAMP）直接检测酸乳中蜡样芽孢杆菌,扩增产物电泳检测.结果：LAMP法检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的特异性强,方法检出限6.4CFU/mL,人工污染检出限21CFU/mL.结论：LAMP法用于检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的灵敏度高、耗时短,为酸乳中蜡样芽孢杆菌的快速检测提供了新的方法.     

多重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌方法的建立与应用

参照GenBank发表的序列，在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16SrRNA与23SrRNA之间的区域设计了3对引物，参照念珠菌和隐球菌的18SrRNA的序列设计1对引物，建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法。参照Skladny的方法制备模拟了细菌感染l临床标本。结果表明：本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性，多重PCR方法检测乳样中的金黄色葡萄球菌的细菌最小浓度为10^4CFU／mL，检测无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌的细菌最小浓度分别为10^4CFU／mL、10^3CFU／mL和10^3CFU／mL。通过对采自临床型乳腺炎（46个）和隐性乳腺炎（167个）动物共计213个乳样分别用传统细菌学培养法和多重PCR方法进行检测，多重PCR对金黄色葡萄球菌和酵母真菌的检测具有更高的检出率（P〈0．01），但该方法对无乳链球菌和停乳链球菌的检出率与培养法差异不显著（P〉0．05）。     

鲜豆浆中菌落总数的测定

通过稀释平板计数法对鲜豆浆进行菌落总数的测定,在牛肉膏蛋白胨培养基平板上有3种菌落产生,菌落总数为8.3×108CFU/mL。取刚煮沸的鲜豆浆进行测定,菌落总数达610CFU/mL;保持沸腾至少2min,然后再进行测定,发现菌落总数为0CFU/mL。     

纳米金-核酸适配体可视化检测蜂蜜中恩诺沙星的方法研究

目的 建立纳米金-核酸适配体可视化检测畜产品中恩诺沙星的方法。方法 首先利用还原法合成纳米金（gold nanoparticles, AuNPs）颗粒,利用紫外分光光度计对实验原理进行验证,优化了实验条件,建立了恩诺沙星浓度和特定波长下吸光度值之间的关系式。同时也验证了该方法的特异性。结果 所得线性回归方程在低浓度时为y=0.6377x+0.89495,R2=0.99026,方法检出限为0.018 CFU/mL;所得线性回归方程在高浓度时为y=0.04288x+0.95578,R2=0.99812,方法检出限为0.265 CFU/mL。方法除可用来检测恩诺沙星外,还可用于检测盐酸恩诺沙星,具有一定的特异性。对恩诺沙星实际样品测定的回收率为95.5%~97.8%,相对标准偏差小于10%。结论 方法操作方便简便,成本低,检测时间短,可用于畜产品中恩诺沙星快速定量检测。     

酸乳中葡糖醋杆菌赖解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立

建立酸乳中葡糖醋杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)检测方法。根据葡糖醋杆菌16S基因序列(基因号为HQ677466.1)设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的浓度。通过HDA法直接检测酸乳中的葡糖醋杆菌,并确定其检出限,在建立的HDA体系中对酸乳中多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法的特异性。结果表明:用HDA法检测酸乳中葡糖醋杆菌,得到了与设计序列长度(101 bp)一致的基因片段,检出限为102 CFU/g,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.1 μg和5.0 μg。该方法用于检测酸乳中葡糖醋杆菌的灵敏度高、耗时短。     

不同乳酸菌对酸乳中霉菌污染的控制比较研究

以搅拌型酸乳为研究对象,比较A、B2种市售乳酸菌对酸乳中霉菌污染的控制效果及对酸乳营养成分、质构和感官品质的影响.结果表明:乳酸菌A、B对酸乳中污染的霉菌均具有不同程度的抑制作用,其中按厂家推荐量(乳酸菌A 2.0×106 CFU/mL,乳酸菌B 1.38×107 CFU/mL)添加时,乳酸菌B对霉菌的抑菌效果较好;但按2.0×106 CFU/mL的量添加乳酸菌A、B时,乳酸菌A对霉菌的抑制效果较好;乳酸菌B的添加对酸乳的风味会产生不良的影响,乳酸菌A的添加在保质期内对酸乳的感官品质基本无影响;添加了乳酸菌A、B的酸乳样品的营养成分和质构与对照组相比无太大变化.由此可见,部分乳酸菌的添加可以抑制酸乳中霉菌的滋生,而其抑菌效果与菌种种类和添加剂量有关.     

基于DNA环介导等温扩增技术快速检测溶藻弧菌的研究

溶藻弧菌是引起海产鱼类、虾、贝等细菌性疾病的主要病原之一,严重危害水产养殖业的发展,建立快速、准确的检测方法对防控溶藻弧菌及保障水产养殖安全具有重要意义。本研究引入环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术,以溶藻弧菌胶原酶基因为靶基因,建立了溶藻弧菌LAMP快速检测方法,45~60 min内即可完成检测。试验结果显示,该LAMP方法可特异性检测溶藻弧菌,且灵敏度高,对纯培养溶藻弧菌的检测灵敏度约10 CFU/mL,对污染水产品中溶藻弧菌的检测灵敏度为19 CFU/mL。本研究建立的溶藻弧菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。     

快速检测奶粉中阪崎肠杆菌新型酶免疫传感器

为探求奶粉中阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii,E.sakazakii）更好的快速检测技术,将硫堇和辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体依次自组装到多壁碳纳米管/羧甲基壳聚糖-海藻酸钠修饰的丝网印刷碳电极上,制得一种阪崎肠杆菌酶免疫传感器。采用交流阻抗法和循环伏安法对不同修饰电极进行电化学特性表征测试,根据免疫电极CV还原峰电流在孵育前后的变化差值（ΔI）对阪崎肠杆菌进行检测。优化试验条件下,该方法对阪崎肠杆菌检测线性范围为103～10^9 CFU/mL,检出限为6.6×10^1 CFU/mL;且具有良好的特异性（非目标菌ΔI〈0.5μA）、准确性（与GB/T 4789.40-2010符合率为100%）、稳定性（免疫电极在4℃无菌环境下保存30d,响应电流仍能达到初始值的92.3%）和重现性（RSD=6.3%）。     

2018年天津市原料奶细菌总数、体细胞数及奶牛乳房炎病原菌、耐药基因调研报告

本研究旨在调查天津市原料奶细菌总数、体细胞数及乳房炎病原菌、耐药基因,了解全市原料奶的质量状况及引起奶牛乳房炎发生的主要原因。采集天津市5家乳品加工企业奶罐车的原料奶样品,用于检测体细胞数和菌落总数;采集天津市奶牛养殖场储奶罐奶样品,用于检测体细胞数;采集奶牛场临床型乳房炎发病乳区的牛奶样品,用于检测乳房炎病原菌及耐药基因。结果显示:2018年天津市乳品加工企业原料奶体细胞数平均值为44.65万/mL,标准差42.41万/mL,变异系数94.97%,最大值为225.50万/mL,最小值为1.20万/mL,SCC≤50万/mL的样品占74.37%,50万/mL200万/mL的样品占3.13%;细菌总数平均值11.54万CFU/mL,标准差26.28万CFU/mL,变异系数227.66%,最大值190.00万CFU/mL,最小值0.095万CFU/mL,细菌总数≤10万CFU/mL的样品占74.37%,10万CFU<细菌总数≤50万CFU/mL的样品占21.25%,50万CFU<细菌总数≤100万CFU/mL的样品占1.88%,100万CFU/mL<细菌总数≤200万CFU/mL的样品占2.50%。2018年天津市奶牛养殖场原料奶体细胞数平均值为38.81万/mL,标准差36.49万/mL,变异系数94.03%,最大值为210.00万/mL,最小值为0.80万/mL,SCC≤50万/mL的样品占79.17%,50万/mL200万/mL的样品占0.83%。乳房炎病原菌检测结果显示:36个样品检出病原菌,总检出率为94.74%;共检出8种病原菌,检出率最高的是乳房链球菌,检出率为73.68%,其他病原体检出率依次为:牛支原体34.21%,牛棒状杆菌13.16%,无乳链球菌10.53%,大肠杆菌5.26%,白色念球菌5.26%,停乳链球菌2.63%,铜绿假单胞菌2.63%。14个样品检出耐药基因,总检出率为36.84%;2种耐药基因的检出率分别为β-内酰胺耐药基因CTX-M934.21%,耐甲氧西林葡萄球菌耐药基因MecA 2.63%。研究表明,2018年天津市原料奶SCC及细菌总数大部分接近欧盟标准,但仍有待进一步提高;引起天津地区临床型乳房炎的3种主要致病菌为乳房链球菌、牛支原体和牛棒状杆菌。