大麻染色体制片技术

[目的]探究大麻染色体的制片技术。[方法]对大麻染色体制片技术的预处理液、解离时间、染色时间等进行试验研究,并对其进行染色体数目观察。[结果]研究表明:用大麻根尖在常温下用0.003%的8-羟基喹啉溶液预处理2 h或用饱和对二氯苯处理1.5 h,经卡诺固定液固定30 min后,在1∶1的1 mol/L HCl和45%醋酸60℃下恒温水浴中解离30 s,地衣红染液染色8 h压片镜检,能取得良好的制片效果。大麻染色体数目观察表明,大麻染色体数目2n=2x=20。[结论]该研究为大麻细胞学方面的深入研究提供了资料。     

高质量花生根尖细胞染色体制片方法研究

为了能快速获得用于染色体分带或者荧光原位杂交的高质量花生根尖细胞染色体制片,通过选择适当粗细的花生侧根,经过对二氯苯浸泡预处理,卡诺氏固定液固定后,直接用45%醋酸烘烤压片,得到了细胞平整、染色体分散的根尖细胞染色体制片。与HCl解离压片的方法相比,该方法中试剂对染色体影响微小。与酶解去壁低渗法相比,该方法没有酶解去壁低渗的过程,不需要用果胶酶和纤维素酶等较贵重试剂,节约了时间和成本,提高了制片效率。该方法不仅适用于花生,也适用于芝麻、水稻、玉米、大豆、青豆、番茄等多种植物。     

用于菊花品种核型分析的根尖压片技术研究

根尖压片技术是研究植物中期染色体数目和形态的一种重要方法。以2个大菊品种的根尖为材料,以典型中期分裂相的数目、中期染色体的分散程度、聚缩程度和中期染色体的清晰性为衡量制片效果优劣的标准,通过对比不同预处理药剂、取材时间、预处理温度、预处理时间长短以及解离时间条件下的制片效果,得出如下结论：当根长至1 cm时,在9：00~10：00取根,用饱和对二氯苯溶液在4℃条件下预处理4 h,然后用卡诺固定液固定22~24 h,用1 mol/L的HCl60℃下解离10 min,能够得到数量较多、染色体分散良好、染色体形态清晰以及染色体长度适中的中期分裂相。     

鉴定马铃薯染色体数目的方法研究

用块茎根尖、试管苗根尖及组培移栽苗匍匐茎尖为材料鉴定马铃薯的倍性,结果表明：利用匍匐茎尖作为材料,用饱和的对二氯溶液处理10-12h后,用改良的卡洛氏固定液固定24h,用1M的HCl60℃解离10-15min,进行染色15-20min,效果很好,表明在不易取材或材料稀少的情况下,用匍匐茎尖制片是一个鉴定马铃薯染色体数的有效经济的方法。     

藜麦品系的染色体数目及核型分析

为探明西藏目前主推藜麦的染色体数目及核型,以西藏农牧学院植物科学学院提供的藜麦品系W4为材料,对其进行根尖染色体常规压片法制片,比较采用8-羟基喹啉、秋水仙素和冰冻方法的预处理时间、1mol/L HCl酸解时间对藜麦染色体制片的影响,探讨最优的根尖处理方法并进行核型分析.结果显示:用0.1%秋水仙素溶液(离体)处理3h,1mol/L HCl 60℃酸解13～14 min的总体作用效果最佳;藜麦W4的核型公式为2n=36=32 m(2SAT)+4sm,核型不对称系数为57.87%,核型分类中属2B型.     

金铁锁染色体制片技术研究

以金铁锁组培苗根尖为材料,对其染色体制片过程中预处理、固定、解离、染色等环节的最佳处理条件进行探讨。结果表明,金铁锁根尖在室温下用0.003 mol/L 8-羟基喹啉溶液预处理5.0 h后,放入预冷的卡诺固定液[V(无水乙醇)∶V(冰乙酸)=3∶1]中于冰水中处理30 min,然后用解离液[V(浓HCl)∶V(无水乙醇)=1∶1]处理120 s,再用卡宝品红染色液对根尖染色25 min(先染色20 min后复染5 min),能得到良好的镜检效果。金铁锁根尖体细胞的染色体数目为2n=2x=28,为二倍体。     

3个广藿香品种染色体制片技术优化与计数

以广藿香根尖为试验材料袁采用常规压片法比较取材时间尧预处理液尧处理时间尧酶液浓度尧酶解时间尧 低渗时间对广藿香染色体制片效果的影响袁采用去壁低渗法对石牌尧海南尧高要3 个广藿香品种进行染色体计数遥结 果表明院上午10:30~11:00 取材尧冰水混合液处理24 h尧4%混合酶液渊纤维素酶和果胶酶各占4%袁g/V冤酶解30 min尧低 渗15 min 所得广藿香染色体制片效果较好曰3 个广藿香品种分散良好尧清晰的50 个分裂相细胞袁70%以上的细胞染 色体数目为2n=64袁3 个广藿香品种在染色体数目上没有差异遥     

沙苑子的染色体数目观察及核型分析

[目的]对沙苑子染色体的数目及核型进行分析研究。[方法]根尖用0.002 mol/L 8-羟基喹啉处理3 h,卡诺固定液固定30 min以上,1 mol/L盐酸水解5 min,卡宝品红染色5 min,然后制片。[结果]沙苑子的染色体是二倍体,染色体数目为16,染色体核型公式为2n=2x=16=10m（2SAT）＋4sm＋2st,第8号染色体有随体,核型类型为“2B”型。     

紫果西番莲染色体制片方法比较及其核型分析

比较了不同预处理方法、解离方法、酶解时间和制片方法对紫果西番莲细胞中期分裂相、染色体收缩程度和分散度的影响.结果表明:8-羟基喹啉室温下处理根尖2.5 h、混合酶液(2%纤维素酶和0.5%果胶酶)37 ℃酶解70 min、涂片法制片的染色体分散性好,背景干净,着丝点比较清晰,随体明显,效果最佳;紫果西番莲的核型公式是2n＝2x＝18＝14m(2sat)+4sm,属于2A型,第4对染色体上带有随体.     

百合根尖染色体制片技术研究

以卷丹百合根尖为试材,对其染色体制片技术的取样时间、预处理液、解离时间、染色剂等方面进行了试验研究,并对3个居群的卷丹百合染色体数目进行了观察。结果表明,根尖取样时间以上午8:30~9:30为佳,用0.1%秋水仙碱溶液4℃下预处理24小时,经卡诺固定液固定6h后,在1mol/L盐酸60℃下恒温水浴中解离8 min,改良卡宝品红溶液染色压片镜检,能取得良好的制片效果。卷丹染色体数目观察表明,3个卷丹居群的染色体数目均为2n=3x=36。     

黄花菜染色体制片及荧光原位杂交技术体系的建立

[目的]黄花菜(Hemerocallis citrina Barni)是我国特有的经济型蔬菜,目前急需加速分子育种进程,开发遗传学平台。本文旨在优化黄花菜染色体制片技术,构建黄花菜荧光原位杂交体系,为遗传图谱与物理图谱的整合提供技术基础。[方法]以大同黄花菜(H.cv.‘DatongHuanghua’)为研究材料,分别对中期根尖细胞和粗线期花粉母细胞的制片方法进行优化,同时以拟南芥45S rDNA和5S rDNA序列为探针,筛选和优化黄花菜荧光原位杂交体系技术参数。[结果]中期染色体制片最佳体系:2.9μg·mL~(-1)浓度的八羟基喹啉溶液处理4 h,混合酶液(纤维素酶∶果胶酶=2∶1)37℃酶解160 min;粗线期染色体制片最佳体系:采集4～5 mm龄段花蕾,卡诺固定液4℃固定24 h后,混合酶液(纤维素酶∶果胶酶=2∶1)37℃酶解220 min,使用改良火焰干燥法,均可得到理想制片。采用直接标记法对45S rDNA和5S rDNA探针序列进行荧光标记,结果显示杂交信号清晰稳定,背景干扰小。[结论]本研究构建并优化了黄花菜染色体制片技术及荧光原位杂交体系,可为黄花菜细胞遗传学研究和基因组研究的深入开展提供技术基础。     

平邑甜茶根尖染色体制片技术优化及核型分析

为探讨制备平邑甜茶染色体制片的最佳技术参数,以平邑甜茶根尖为试验材料,比较材料的不同采集时间、预处理方法、酶解时间和后低渗时间对平邑甜茶根尖染色体制片的影响。结果表明:在26℃培养条件下,平邑甜茶最佳取材时间为11:00—11:30; 4℃低温冰水混合物进行预处理能够获得较为分散的染色体标本;酶解采用2. 5%果胶纤维素混合酶在37℃下处理最佳时间为2 h,后低渗最佳时间为20 min。核型分析发现平邑甜茶染色体属于小型染色体,染色体臂比变化在1. 01～2. 46之间,差异不大,核型组成成分为中部着丝点染色体(m)、亚中部着丝点染色体(sm),核型属于2B型。     

文心兰染色体的制片技术

以文心兰根尖为材料,采用常规制片法,对染色体制片的取样时间、预处理液、固定液、解离时间、染色液及染色时间进行了研究。结果表明：文心兰组织培养苗培养温度为25℃;适宜的取样时间为5～6月的上午10：00;材料放入1g·L^–1的秋水仙素＋0.002mol·L^–1的8-羟基喹啉混合液中室温预处理4h的效果最好,用卡诺氏液固定12～24h,可获得较多的细胞分裂相,1mol·L^–1的盐酸60℃水浴锅中恒温解离8min的效果较好,用改良的苯酚品红染色制片效果最好。     

橡胶草染色体制片技术研究

以橡胶草根尖和嫩叶为材料,对其染色体制片技术的取样时间、预处理试剂、解离方法及解离时间进行比较研究。结果表明:橡胶草根尖和嫩叶取样最佳时间均为上午8:00~10:00;2 mmol/L 8-羟基喹啉溶液室温预处理4 h效果最好;根尖和嫩叶用1 mol/L盐酸于60℃下分别酸解10和12 min效果良好。     

去壁低渗法制备芦笋染色体标本的研究

应用去壁低渗法进行了芦笋染色体标本制备的研究,其结果是:芦笋种子根尖用2mmol/L的8-羟基喹啉预处理2h,2.0%纤维素酶+1.0%果胶酶37℃酶解45m in,酶解前后各固定1次,能得到效果较好的芦笋染色体标本图;芦笋品种“Atlas”的体细胞染色体数目为2n=20。     

玉米染色体常规制片技术中关键因子处理效应及优化

利用五因素二次回归旋转组合设计研究玉米染色体常规制片技术中5个关键因子(取材时间、根尖长度、α-溴萘水溶液预处理时间、解离时间和α-溴萘水溶液的体积分数)及其处理效应.回归分析结果表明,除根尖长度外,其余4个处理因子对染色体制片效果有极显著影响.此外,基于回归方程的统计选优方法获得了比较符合实际的各处理因子的适宜范围,即取材时间8:00,根尖长度1.49～1.81 cm,97.62%～99.38%的α-溴萘水溶液预处理4.16～4.66 h和60℃1 mol/L HCl解离11.25～11.55 min,将取得较好的玉米染色体制片效果.     

新疆紫草不同材料染色体制片技术研究

[目的]研究新疆紫草不同材料的染色体制片方法,为今后倍性鉴定奠定技术基础.[方法]以新疆紫草根尖及毛状根根尖为试验材料,采用常规制片法,分别考察培养方式及培养时间、取材时间、预处理方法、酸解方法、酸解时间、染色时间对染色体制片效果的影响.[结果]B5固体培养基培养4d的毛状根中期分裂相指数较大,且染色体清晰,制片效果较好;早上08:00取材的毛状根根尖的中期分裂相指数(124.2‰)最高,原植物根尖(115.4‰)在早上10:00取材较为适宜;毛状根根尖采用0.1;秋水仙素、温度15℃、预处理时间4h时的中期分裂指数为97.6‰～124.2‰,室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为12 min、染色时间为20 min有利于毛状根根尖的制片.原植物根尖采用0.1;～0.2;秋水仙素、温度4 ～15℃、预处理时间3h、室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为15 min时的中期分裂指数为128.6‰～128.9‰.[结论]材料不同则取材时间及秋水仙素预处理时间就有所不同.秋水仙素预处理时间、温度及酸解时间是影响新疆紫草染色体制片效果的关键因素.     

去壁低渗法制备长寿沙田柚染色体标本的研究

为了给长寿沙田柚的染色体核型分析、细胞遗传学研究和良种培育提供参考依据,以其幼叶为研究材料,设计4种前低渗时间和12种酶解方式处理,对制片效果的影响进行了研究。结果表明:预处理后的材料经前低渗60min后,用0.2%纤维素酶∶0.2%果胶酶(3∶1,v/v)混合酶液37℃酶解80min,可得到理想的制片效果,背景干净,染色体分散、清晰。     

小麦根尖染色体制片及植株倍性鉴定

[目的]探讨小麦根尖染色体制片的最佳技术参数,并对小麦远杂组培苗进行倍性鉴定。[方法]以品种郑麦9023为材料,通过种子催芽、种子根根尖压片试验对小麦根尖的染色体制片方法进行探讨,找出最适合的技术参数,用于小麦远杂组培苗的根尖染色体压片试验,并对其倍性进行鉴定。[结果]利用冰水混合物处理根尖可代替浓度0.1%秋水仙素的作用;根尖的酸解时间宜控制在9.5～10.0min;夏季染色时间宜在5 min以内,冬季染色时间宜在10～15 min。经染色体压片计数得到该小麦组培苗的染色体数为21条,鉴定其为小麦单倍体苗,可进行下一步育种。[结论]该研究对指导单倍体育种具有重要作用。     

朱顶红染色体核型分析及倍性鉴定

以朱顶红新生根尖为材料,采用常规压片法进行染色体制片,对朱顶红属品种进行了染色体核型分析及倍性鉴定。结果表明:0.002 mol/L 8-羟基喹啉水溶液4℃预处理朱顶红根尖9—24 h,1 mol/L HCl溶液60℃解离根尖9 min获得的染色体制片效果最好。首次对朱顶红品种'柠檬冰糕'进行核型分析,发现其为三倍体朱顶红,核型公式为K(2n)=3x=33=12 m+12 sm+9 st,核型不对称系数(As.K)为70.19%,核型类型为3B型。根据染色体制片结果对6个朱顶红品种进行倍性鉴定表明:'凤蝶'为二倍体朱顶红,'特伦蒂诺'为三倍体朱顶红,'粉色惊奇'快车'苹果花'樱桃妮芙'均为四倍体朱顶红。