小鼠肿瘤致死因子α诱导的TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ亚单位的相互作用

人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α的诱导的蛋白,在小鼠中又称为TNFAIP1,其功能尚未见报导.采用蛋白质pull-down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ的亚单位P50发生直接相互作用.由此推测TNFAIP1蛋白参与DNA复制过程,并为研究人TNFAIP1基因的功能提供参考.     

TNFAIP1与RIN3相互作用的鉴定

TNFAIPI是第一个被鉴定能受TNF-α(tumor necrosis factor-α)诱导的蛋白.TNFAIP1基因是一个多功能基因,参与DNA的复制和修复,细胞周期的调控,细胞信号通路转导的调节等.采用酵母双杂交的方法以TN-FAIP1为靶蛋白筛选得到与其相互作用蛋白RIN3.RIN3含有RIN家族多个多功能的结构域,根据RIN3结构域对其分段,研究与TNFAIPI的相互作用.通过免疫共沉淀,荧光共定位一系列细胞证明TNFAIP1蛋白能直接与RIN3相互作用,提示TNFMP1可能参与细胞的胞吞胞吐.     

TNFAIP1基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡

将TNFAIP1基因成功克隆到真核表达载体pCMV—Myc中,研究TNFAIP1基因诱导细胞凋亡的机制．Hochest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIP1能够诱导HeLa细胞凋亡．通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIP1能够抑制Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡．     

文多灵与DNA相互作用的光谱研究

在pH为7．4的Tris—HCl缓冲溶液中，应用紫外光谱法和荧光光谱法对文多灵与鲱鱼精DNA分子间的相互作用进行了研究．研究结果表明，DNA与文多灵存在较强的相互作用，计算了25℃和40℃两个不同温度下文多灵与DNA的结合常数和结合位点数分别为5．26×10^3L／mol、1．0411和7．77×10^3L／mol、1．056．紫外光谱实验结果表明，DNA的加入可使文多灵252nm处的紫外吸收峰发生显著升高和蓝移；荧光探针实验表明文多灵不能使小檗碱-DNA体系的荧光发生猝灭，证明文多灵是以沟槽结合的方式与DNA结合．     

B12基因在小鼠部分肝切除后的表达差异分析

B12是一种受TNF-α诱导的蛋白．利用肝脏部分切除小鼠模型以及核酸酶保护反应研究了B12基因在肝脏部分切除后不同时间的表达差异，发现在受损后28h，B12的表达开始增强，到36h表达一直呈上升趋势，推测该基因可能与肝脏修复过程中DNA的复制有关，为B12基因的进一步的功能研究提供了理论基础．     

一个人类锌指蛋白家族新基因ZFP28的克隆及表达

Krupple型锌指蛋白是一类具有重要功能的转录调节因子，初步克隆了一个新的人类krupple型锌指蛋白基因，经国际基因命我委员会批准命名为ZFP28。此基因长4076个碱基，含8个外显子，在基因组DNA上长18kb。它编码的蛋白质全长868个氨基酸，含1个信号肽，2个KRAB框和14个C2H2型的锌指。Northem Bolt分析表明该基因在人类早期胚胎的各个组织中普遍表达，在肺和肝中的表达水平最强，其结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子。     

TNFAIP1对肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响

为了深入探讨肝癌的发生机制并寻找肝癌的潜在治疗手段,研究了TNFAIP1基因对肝癌细胞HepG2的细胞增殖及细胞凋亡产生的影响.MTT实验发现过表达TNFAIP1基因或干扰TNFAIP1的表达可以显著地抑制或促进HepG2细胞的生长,这表明TNFAIP1基因对肝癌细胞的增殖具有抑制作用.而流式细胞技术则证实过表达TNFAIP1能显著地促进肝癌细胞HepG2的细胞凋亡.     

DNA序列分类的统计分析

采用系统聚类分析方法，对巳知类别的20种DNA序列中4种碱基的含量及各碱基之间的相关性进行了统计分析，发现不同类别的DNA序列中减基的排列具有明显的规律性，由此建立了一种DNA序列分类的方法，并运用统计分析对这种分类方法的合理性给予了检验．     

二茂铁甲酸与鲱鱼精DNA相互作用的电化学研究

用循环伏安、微分脉冲伏安和计时库仑等电化学方法结合紫外光谱法,研究了二茂铁甲酸（FCA）与DNA的相互作用．循环伏安实验表明FCA在玻碳电极上出现一对可逆的氧化还原峰．DNA的加入导致FCA氧化还原峰电流降低,且式电位往正向移动,表明二者可能通过沟面方式发生作用．计时库仑法表明FCA与DNA作用后,复合物扩散系数明显降低,这可能是FCA与DNA反应峰电流降低的原因．微分脉冲实验表明以FCA作为电化学探针,能在1．3×10^-5mol／L～1．0×10^-4mol／L浓度范围内对DNA进行定量检测．紫外光谱实验进一步证实了二者的相互作用,且作用模式可能够沟槽结合．     

建立可诱导表达TNFAIP1的稳定细胞系

利用Tet-Off可诱导表达系统在HT1080细胞中建立可诱导表达TNFAIP1基因的稳定细胞系.首先将融合表达GFP的TNFAIP1片段克隆到反应质粒pTRE2hyg中,然后将该质粒转染到HT1080/Tet-off细胞中,使用潮霉素B筛选,挑取单克隆,得到稳定转染的细胞系,扩大培养后在荧光显微镜下观察克隆的诱导效率,得到了低背景,高效诱导表达GFP-TNFAIP1的稳定细胞系,便于研究TNFAIP1在细胞生长、细胞周期和细胞信号通路等方面的作用.     

人类基因ZNF569结构域在MAPK信号途径中的作用

有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径是细胞信号转导过程的重要组成部分，MAPK将膜转导蛋白与其细胞内的关键调控靶蛋白联系起来，从而介导胞外的多种信号并将这些信号级联放大后传递给相应的下游因子，通过激活包括SRE，ELK-1，AP-1等在内的多种转录因子，最终开启细胞特定功能基因的表达，锌指蛋白是人类最大的基因家族之一，其蛋白产物主要通过与DNA相互作用而起转录因子作用，调节靶基因的表达以适应生物体发育、分化、成熟过程的需要，运用MAPK信号途径对锌指基因ZNF569的结构域进行了转录活性分析，分析表明在COS-7细胞中过表达ZNF569蛋白可以使MAPK信号途径的两个下游转录因子AP-1和SRE的转录抑制活性显著下降，ZNF569在核质内的亚细胞定位分析进一步证明了其作为转录因子的作用，对ZNF569的分段report assays分析表明，ZNF569可能通过KRAB框和C2H2锌指结构域行使其抑制转录的作用，这些结果表明，ZNF569可以通过MAPK信号途径参与了对细胞生命活动的调控过程。     

Ca2＋对硫酸长春碱与DNA相互作用影响的研究

利用荧光光谱技术、紫外光谱技术和黏度法研究了Ca2＋对硫酸长春碱与DNA的结合模式、结合常数的影响．荧光数据表明，硫酸长春碱与DNA反应的结合常数随Ca2＋浓度增大而增大，说明Ca2＋对硫酸长春碱与DNA的结合起促进作用，黏度实验和紫外光谱实验结果表明，Ca2＋加入前后硫酸长春碱与DNA均以沟槽模式结合．     

ENA抗体与体液免疫检验在SLE诊断中的应用价值

探讨EAN抗体、抗ds—DNA与体液免疫检测在系统性红斑狼疮（SLE）诊断中的应用．选取58例诊断明确的SLE患者为SI,E组,另取健康人群21例为对照组．清晨空腹采静脉血,用免疫斑点法检测EAN抗体及抗ds—DNA,用散射比浊法在IMMAGE特种蛋白分析仪检测IgG、IgA、IgM、C3、C4．结果显示：SLE患者血清中IgG、IgA水平分别为（21．61±3．79）g／L、（2．96±0．52）g／L,明显高于对照组;C3、C4水平分别为（0．66±0．23）g／L（0．16±0．05）g／L,明显低于对照组．SLE患者组中IgG、IgA、C3及C4阳性率分别为67．2％、51．7％、69．0％、65．5％,对照组阳性率低于5．0％．SI。E患者血清中多种自身抗体呈阳性,抗ds—DNA、抗Sm阳性率分别为37．9％、32．8％,但是对照组中未检出抗ds—DNA、抗Sm、抗nRNP、抗SSA、抗SSB、抗ScL-70、抗Jo-1．结果表明：联合检测ENA抗体、抗ds—DNA和体液免疫有助于指导临床疾病诊断及疗效评估．     

DNA甲基化与基因调控

DNA甲基化或去甲基化，改变了DNA分子构象，导致某些重要基团的隐蔽或暴露，削弱或增强了DNA与蛋白质因子的结合能力，从而改变了基因表达。     

一种简便的石斛DNA提取方法

对石斛兰基因组DNA的提取方法进行了改良,提出一种简便、实用的DNA提取方法,经紫外检测、电泳检测及PCR检测,结果表明所得DNA的产量和纯度能够满足分子生物学研究操作的要求．     

花粉管通道法转柱头外露棉DNA及转化体RAPD分析

提取“异9-3”柱头外露棉总基因组DNA，通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707．1的胚囊内，D1代田间筛选到柱头外露的转化植株，遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制，50个随机引物进行PCR扩增，33个引物扩增出的DNA在供体、受体和转化体之间呈现出多态性，其中引物S462(TCG GCA CGC A)在供体和转化体之间出现相同产物而受体没有出现扩增产物，该引物有可能作为柱头外露系的分子标记．RAPD分析结果表明转化体与受体有较多相同基因位点，而与供体相同基因位点较少，转化体还有供体和受体都不具有的基因位点，这可能是外源DNA导入时引起碱基突变所致。     

2，3-二氢-9，10-二羟基-1，4-蒽醌与DNA相互作用的电化学研究

合成了准刚性环化合物2,3．二氢-9,10-二羟基-1,4-蒽醌（DHHA）,并用核磁共振谱、红外光谱和质谱确定了结构．循环伏安实验表明DHHA在玻碳电极上有一对明显的氧化还原峰,在加入DNA后,其氧化峰电位出现了正移,且峰电流出现了明显的降低,表明二者的作用模式可能为沟槽结合,当DNA浓度处于9．0×10-6mol/L-4．5×10-5mol/L之间时,DNA的浓度与氧化峰的电流强度具有良好的线性关系,所以,在此范围内可以对DNA进行定量检测．计时库仑实验、微分脉冲实验以及紫外．可见光谱实验都进一步证实DHHA与DNA的相互作用,且它们的作用模式可能为沟槽结合．     

TNFAIPl基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡

将TNFAIPl基凼成功克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,研究TNFAIPl基因诱导细胞凋亡的机制.Hoehest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIPl能够诱导HeLa细胞凋亡.通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIPI能够抑制Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡.     

DNA指纹技术的研究进展及应用

DNA指纹技术是分子生物学中的一种新技术．它是从分子水平区别不同种类生物之间以及同种生物之间差异的重要手段．它在法医学鉴定、物种起源进化研究、动植物及微生物DNA指纹资料库的建立、畜牧科学研究、癌症的研究、疾病的诊断、亲子鉴定等方面具有非常重要的应用．本文简要阐述DNA指纹技术的研究进展及其应用。     

新型多吡啶钴(Ⅲ)配合物的合成、表征及与DNA作用的光谱研究

通过微波辐射加热方式，快速合成了一种新型多吡啶钴功能配合物[Co(5-NO2-phen)2dppz](ClO4)3(5-NO2-phen=5-Nitro-1,10-phenanthroline,5-硝基-1，10-菲咯啉；dppz=dipyrido[3,2-a;2′，3′-c]phenazine,二吡啶吩嗪），利用元素分析、电化学和光谱法对配合物进行了表征，并分别采用紫外和荧光光谱法考察了该配合物与DNA的相互作用。研究表明，该配合物以插入方式与DNA结合。