乳腺癌组织芯片的应用与HER-2/neu的表达

目的 :构建乳腺癌及乳腺癌 -良性病变组织微阵列 ,研究HER 2 /neu在原发性乳腺癌和乳腺良性病变中的表达并探讨HER 2 /neu的判断标准。方法 :制作乳腺癌 -乳腺良性病变组织微阵列 (tissuemicroarray)。用免疫组织化学方法检测HER 2 /neu在 180例乳腺癌 ,32例乳腺良性病变组织中的表达。结果 :构建乳腺癌及乳腺癌 -乳腺良性病变组织微阵列 4个 ,180例乳腺癌中HER 2 /neu阳性率为 37.78% (6 8/ 180 ) ,32例乳腺良性病变不表达。乳腺癌组织中HER 2 /neu的过表达率显著高于乳腺良性病变组织 (P <0 .0 5 )。结论 :乳腺癌 -乳腺良性病变组织微阵列的建立使乳腺癌相关基因及其蛋白产物的筛选工作简便、快捷。HER 2 /neu的过表达与乳腺癌的发生密切相关     

新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌HPV16感染率对比

为探讨新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌患者中HPV16感染率的差异.采用半巢式PCR技术对152例维吾尔族妇女宫颈癌石蜡组织中HPV16DNA进行检测.结果显示在喀什、库尔勒及石河子地区妇女宫颈癌组织中,HPV16DNA检出率分别为80%,80%及53.1%,在统计学上有差异(x2=9.566,P=0.008);喀什及库尔勒地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16感染率高于石河子地区(x2=8.247,P=0.004;x2=5.906,P=0.015).因此,新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌患者中HPV16感染有所不同.     

新疆维吾尔族妇女宫颈癌中HPV16感染和p53蛋白表达的相关性研究

采用半巢式PCR法检测 80例新疆维吾尔族宫颈癌及 3 4例正常宫颈组织中HPV16DNA ,采用免疫组化法检测p5 3蛋白 ,分析其与宫颈癌发生的相关性 ,探讨HPV16感染和p5 3蛋白表达在新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生中的作用。结果显示 :HPV16检出率在宫颈癌中为 80 .0 % ,与对照组 8.8%相比 ,存在显著性差异 ( χ2 =4 9.88,P <0 .0 0 5 ) ;宫颈癌组织中p5 3蛋白表达阳性率为 6 2 .5 % ,也明显高于对照组 ,P <0 .0 0 5 ;p5 3蛋白表达与HPV16感染在统计学上无相关 ( χ2 =0 .0 ,P >0 .0 5 )。表明 :HPV16感染与新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生密切相关 ;HPV16感染的宫颈癌组织中p5 3蛋白表达有升高趋势     

p16和HPV基因分型对宫颈上皮内瘤变的诊断价值研究

采用基因芯片技术及免疫组化法,对62例CIN组织(30例CINⅠ、17例CINⅡ、15例CINⅢ)进行HPV基因分型及p16基因表达检测.提示p16基因和HPV基因在宫颈CIN组织中的阳性表达率与对照组相比均有显著差异(P<0.01);p16在正常宫颈中无表达,而随着宫颈病变的进展,p16的表达率显著升高(P<0.01),且与HPV有相关性.表明p16在一定程度上可反映HPV的感染程度,可作为宫颈病变及宫颈癌筛查敏感的客观性指标;HPV联合p16基因检测能显著提高宫颈病变的准确性.     

HLADQB1＊03、DRB1＊13与新疆维吾尔族、汉族HPV感染和宫颈癌的相关性研究

运用PCR及PCR-SSP技术检测HPV16 DNA和HLA DQB1＊03、DRB1＊13等位基因在新疆维族、汉族ISCC和对照组织中的分布,探讨HLA DQB1＊03,DRB1＊13等位基因与HPV16感染和ISCC的相关性及在新疆维族、汉族正常人群中的分布。结果显示：HLA DQB1＊03等位基因在维族ISCC和HPV16阳性的ISCC中的分布频率高于维族对照组,差异具有统计学意义（χ2=6.166,P〈0.05;χ2=4.336,P〈0.05）;在维族正常人群中的分布频率低于汉族正常人群,差异具有统计学意义（χ2=14.923,P〈0.05）。HLA DRB1＊13等位基因在维族、汉族ISCC和HPV16阳性ISCC分布频率与对照组比较,差异均无统计学意义;在维族正常人群中的分布频率与汉族正常人群比较,差异无统计学意义。提示HLA DQB1＊03等位基因可能是维族ISCC的遗传易感基因。     

宫颈癌中HPV16感染与Ezrin表达的关系

探讨了Ezrin在宫颈病变中的表达及其与癌浸润转移的关系,以及宫颈病变组织中HPV16 DNA的表达及临床意义,探索两者之间的关系。采用免疫组化SP法检测了40例宫颈鳞状细胞癌（CSCC）、38例CIN3、28例CIN1-2和15例正常宫颈组织中Ezrin的表达。采用原位杂交法检测各组中HPV16 DNA的表达。Ezrin在正常对照组、CIN1-2组、CIN3组和CSCC组阳性率分别为26.7%（4/15）、64.3%（18/28）、63.2%（24/38）、80%（32/40）,CSCC组的表达高于正常对照组（P〈0.05）,且与临床分期和病理分级无关,但与淋巴结转移有关;上述各组中HPV16 DNA表达阳性率分别为6.7%（1/15）、25%（7/28）、65.8%（25/38）、80%（32/40）,各组明显高于正常对照组（P〈0.05）;CIN3组明显高于CIN1-2组（P〈0.05）;HPV16 DNA的表达与CSCC临床分期、病理分级及有无淋巴结转移无关;Ezrin和HPV16 DNA表达呈正相关（rs=0.476,P〈0.05）。Ezrin在CSCC中的表达与宫颈癌的侵袭性行为有关,可能成为早期宫颈癌预后指标;Ezrin和HPV16感染呈正相关,两者可能协同作用导致宫颈癌的恶性发展。     

宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中HPV16感染与hTERT,P21wafl和Ki67表达关系的分析

为了探讨宫颈鳞状细胞癌(SCC)及宫颈上皮内肿瘤(CIN)组织中人乳头瘤病毒(HPV)16感染及端粒酶反转录蛋白(hTERT)、抑癌基因P21wafl和增生抗原Ki67表达的关系及其意义,在130例正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞状细胞癌组织中,利用组织芯片技术,结合原位杂交技术,检测HPV16感染及结合免疫组织化学技术检测hTERT,Ki67,P21wafl的表达.结果表明:1)CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织HPV16杂交信号阳性率显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸润性鳞癌HPV16阳性率也显著高于CIN(χ2=5.670,P=0.017).2)hTERT在CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织中的表达都显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸涧性鳞癌hTERT表达率也显著高于原位癌及CIN(χ2=18.870,P=0.000;χ2=66.390,P=0.000).CIN三级之间相比差异也具显著统计学意义(χ2=30.468,P=0.000).3)P21wafl在浸润性鳞癌组织中的阳性率显著低于正常宫颈组织(P＜0.05),但与CIN相比差异无显著统计学意义(P＞0.05).CIN三级之间P21wafl表达差异也无显著统计学意义(P＞0.05).4)随着宫颈病变组织学严重程度的增加,Ki67表达逐渐增加(P＜0.05).5)HPV16感染率与hTERT表达之间呈正相关(P＜0.05,r=0.339),与P21wafl表达之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.337),与Ki67表达无相关性(P＞0.05):hTERT与P21wafl之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.248),与Ki67表达呈正相关(P＜0.05,r=0.398);P21wafl与Ki67表达呈负相关(P＜0.05,r=-0.446).可见:在宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中,hTERT,P21wafl,Ki67表达改变可能与HPV16感染有关,且几者之间互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈鳞癌的发生.这些指标综合分析可能为阐明HPV16的恶性转化机制以及为提高宫颈鳞癌及其癌前病变诊断率提供参考依据.组织芯片技术是高效的研究基因及其表达产物的技术平台.     

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒感染基因型的检测

目的探讨吉林地区尖锐湿疣患者感染人乳头瘤病毒的基因类型和分布.方法收集临床病理学诊断为尖锐湿疣的疣体142例,采用DNA扩增技术检测疣体HPV基因类型.结果在142例标本中,127例(89.3%)基因型为HPV6/11和12例(8.5%)为HPV16/18.结论本地区尖锐湿疣患者感染低危型HPV6和HPV11型为主,少数为高危型HPV16和HPV18型.     

衡阳地区EBV感染与乳腺癌相关性研究

目的探讨衡阳地区EBV感染与乳腺癌的相关性。方法收集不同发展阶段的乳腺病变组织100例,分别PCR法,LCMPCR法、ISH法及免疫组化法分别从DNA、RNA、蛋白质三个层面检测标本中EBV的表达情况,分析EBV与乳腺癌发生、发展的关系。结果 DNA层面:PCR法仅在22例乳腺癌标本中为阳性。采用ISH法在100标本中复检EBV DNA时,表达均为阴性。采用LCM PCR检测22例PCR扩增阳性标本的上皮细胞和间质淋巴细胞,仅在间质细胞中扩增出EBV DNA,癌组织无EBV DNA表达。RNA及蛋白质层面:EBVRNA探针的ISH法检测及免疫组化法检测所有标本,结果为阴性。结论在该次试验中选取的衡阳地区的标本中,乳腺癌发生、发展与EBV感染无关。     

人乳头瘤病毒基因分型在宫颈鳞癌及癌前病变的分布规律及临床意义

为探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)基因分型在宫颈鳞癌及癌前病变中的分布规律及其与宫颈鳞癌发生发展的关系,应用PCR-反向点杂交技术对109例宫颈病变患者(宫颈鳞癌40例、CIN69例)进行HPV感染基因分型测定.结果显示,109例标本中HPV阳性检出率为100%,最常见HPV基因型为HPV16型;随着病变程度增加HPV单一感染比例逐渐升高,多重感染比例逐渐下降,单一感染以高危型HPV16型感染为主;HPV16型在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC中阳性率分别为30.77%(8/26)、59.09%(13/22)、90.48%(19/21)、90%(36/40),阳性率呈依次上升趋势.宫颈鳞癌及癌前病变与HPV感染直接相关,宫颈癌癌前病变是高、低危HPV共同作用的结果;高危型HPV持续感染是高级别子宫病变及癌变发生的必要条件;HPV16型病毒感染是国人子宫颈鳞癌形成的主要原因.     

A novel type of human papillomavirus associated with genital neoplasias

The role of human papillomaviruses (HPVs) in the development of genital neoplasias has been well documented. The genomes of two HPV types, HPV16 and HPV18, have been found to be associated with about 70% of invasive carcinomas of the uterine cervix. As, under non-stringent hybridization conditions, HPV DNA sequences have been detected in about 90% of cervical carcinomas, it seems likely that additional HPV types are associated with these tumours. Here we report the molecular cloning and characterization of a novel HPV type, tentatively named HPV33, whose sequences have been detected in 4-8% of biopsies of genital intra-epithelial neoplasias and cervical invasive carcinomas, usually as free monomeric or oligomeric molecules. However, in one specimen of vulvar Bowen's disease, HPV33 DNA sequences were integrated in the host-cell genome. Thus, HPV33 probably represents an additional type of potentially oncogenic genital HPV.     

人乳头瘤病毒感染的宫颈癌组织的病理形态学观察

应用核酸杂交技术结合组织病理学的光镜和电镜观察、检测８０例子宫颈癌、４２例正常宫颈组织、３３例宫颈非典型增生组织和１０例宫颈尖锐湿疣组织中的ＨＰＶｓ基因组相关序列。结果表明：（１）４２例正常宫颈组织ＤＮＡ无一例检出ＨＰＶ，而在宫颈癌组织、宫颈非典型增生组织和宫颈尖锐湿疣组织中，ＨＰＶ检出率分别达４３．７５％、４５．４５％和８０％；（２）宫颈癌组织中阳性３５例，阳性率为４３．７５％；ＨＰＶ型别分布主要为ＨＰＶ１６型（１８例，５１．４３％）和ＨＰＶＲ型（８例，２２．８６％）；（３）１８例ＨＰＶ１６型和３例ＨＰＶ１１／６型均为鳞癌，８例ＨＰＶＲ型中有６例也为鳞癌。ＨＰＶ１６型的１８例中有１２例为低分化癌，ＨＰＶＲ型的８例中有５例也为低分化癌；（４）不同型别ＨＰＶ感染的宫颈癌组织，其病理形态学特征有所不同。研究表明，广西地区相当部分宫颈癌的发生与ＨＰＶ感染有关，其感染的宫颈癌组织具有一定的病理形态学特征。     

低氧条件下巨噬细胞分泌CCL22促进三阴乳腺癌转移

三阴乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer, TNBC)是乳腺癌中恶性程度最高的一种亚型，表现为很高的转移潜能。巨噬细胞，即肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-Associated Macrophages, TAM)，在促进TNBC转移中起了重要作用。乳腺癌作为一种实体肿瘤，往往处于缺氧环境中。低氧环境能够促进癌细胞的转移，然而低氧环境中巨噬细胞在促进肿瘤转移中的作用仍然不清楚。在该研究中，THP1细胞被诱导成TAM，经过缺氧培养后，通过Transwell实验检测其促进三阴乳腺癌细胞BT-549和MDA-MB-231的细胞迁移能力；通过尾静脉注射，将MDA-MB-231细胞移植于祼鼠体内，CT扫描，分析了TAM促进TNBC细胞的器官转移能力；通过ELISA实验检测低氧对TAM分泌的肿瘤转移相关因子的影响，通过GDSC在线软件分析了CCL22受体CCR4和其他CCR在乳腺癌组织与正常组织中表达的差异。结果表明低氧条件下巨噬细胞通过分泌CCL22的表达来促进三阴乳腺癌细胞迁移:经过缺氧培养后的TAM显著增强了TNBC细胞迁移能力，以及促进癌细胞在体内向肺转移；低氧诱导TAM分泌CCL22；CCL22受体CCR4在乳腺癌组织中的表达显著高于在正常组织中的。     

成都地区人乳头瘤病毒型别分布研究

应用反向膜杂交技术对1668例标本进行型别鉴定和统计分析.在1668例标本中,共检出阳性标本673例,感染率为40.3%;其中单重感染512例,占阳性标本的76.1%,双重感染96例,占阳性标本的14.3%;单重感染中的高危型感染318例,占阳性标本的47.3%,低危型感染194例,占阳性标本的28.8%.结果表明成都地区HPV感染率较高,且以单一基因型感染为主,其中HPV-16感染率最高,其次是HPV-18,低危型HPV感染以HPV-6和HPV-11为主.     

Glucocorticoid-dependent oncogenic transformation by type 16 but not type 11 human papilloma virus DNA

Squamous cell carcinoma of the uterine cervix is one of the most common cancers among women. Correlation between human papilloma virus (HPV) infection of the uterine cervix and the development of cervical neoplasia has been established. More recent studies have shown the presence and expression of integrated HPV types 16 and 18 DNA sequences in 70-80% of cervical tumours and tumour cell lines. It has been suggested that, in addition to HPVs, other agents such as hormones and tobacco products act as cofactors in cervical neoplasia (for review see ref. 15). The presence and expression of a glucocorticoid-responsive element in HPV-16 has been reported. Here we provide evidence for the oncogenic transformation of primary cells with a combination of HPV-16 DNA, but not HPV-11 DNA, and the activated form of the human Ha-ras oncogene only in the presence of the glucocorticoid hormone dexamethasone.     

通辽地区179例妇科门诊患者人乳头瘤病毒感染检测分析

目的：以通辽地区妇科门诊患者为对象,检测其生殖道人乳头瘤病毒（HPV）感染情况.方法：采用HPV21型凯普导流杂交法,对179例妇科就诊患者宫颈标本进行HPV基因分型检测.结果：HPV基因检测总阳性率为17.31%,其中以单一感染率为主,比例为74.19%,多重感染率为25.81%;共检出16种HPV亚型,包括高危型12型,低危型4型,其中以HPV16、31、18三种亚型最多见.结论：通辽地区HPV感染以单一感染为主,又包含一定比例的多重感染,常见感染亚型分布总体符合亚洲人群规律,但又具有独特的地域分布特点.     

shRNA-resistant Gankyrin质粒的构建及鉴定

gankyrin是近年来发现的一种癌基因,研究表明其表达产物Gankyrin与肿瘤发生密切相关。实验室前期工作发现Gankyrin表达水平与临床乳腺癌转移存在正相关,并可能通过多个环节影响乳腺癌的转移。本研究利用PCR介导的定点突变技术,构建了shRNA-resistant Gankyrin抵抗型质粒。经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,抵抗型质粒构建成功;经Western Blot检测,抵抗型质粒在HEK293T细胞中正确表达,为进一步研究Gankyrin在乳腺癌转移中的作用及其分子机制提供了重要的实验材料。