CCK-8法和MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的最佳条件比较研究

以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,探讨了CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。CCK-8的最佳检测波长为450nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4h,适宜细胞数量范围为8×10^2-1×10^5个。在检测抗肿瘤药物阿霉素（ADM）对PC3细胞的增殖影响实验中,发现CCK-8法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小。实验结果表明CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。     

小鼠脾T淋巴细胞增殖实验条件优化

目的 探讨刀豆球蛋白A刺激小鼠脾T淋巴细胞增殖的最佳浓度与最佳作用时间。方法 以小鼠脾T淋巴细胞与刀豆球蛋白A共同培养后，采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果 不同浓度的刀豆球蛋白A对小鼠脾T淋巴细胞的刺激效果不同，在作用后48和72 h检测，10～25μg/mL浓度范围内增殖最为明显。结论 刀豆球蛋白A对小鼠脾T淋巴细胞的增殖具有双重作用，推荐浓度为10～25μg/mL,检测时间为48～72 h。     

MTT法和CCK-8法检测中药抗病毒活性成分细胞毒性的比较

中药抗病毒活性成分的筛选首先需要考察化合物在体外的细胞毒性.分别用MTT法和CCK-8法考察穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯这两种存在于中药穿心莲中具有抗病毒潜力的成分在人肺腺癌A549细胞株的毒性情况.结果表明,CCK-8和MTT两种方法检测得到的细胞存活率的数据具有一致性,均提示在A549细胞株中,穿心莲内酯和脱水穿心内酯的无毒浓度分别在0 5μg/mL及0 10μg/mL之间.用MTT法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的CC50值的变异系数(CV)均大于CCK-8法得到CV,表明CCK-8法检测的精密度较MTT法更高.回归方程的拟合优度的判定系数和细胞存活率的数据标准偏差数值表明CCK-8法测定的准确度相对MTT法更高.另外,CCK-8法操作更为简便和快速,对实验者和环境危害低.因而,CCK-8法值得在细胞增殖和药物毒性检测等实验中推广应用.     

CFTR对肺腺癌细胞Calu-3迁移影响的研究

采用常规培养肺腺癌细胞Calu-3的方法,利用MTT和CCK-8法确定囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)的激活剂(Genistein)和抑制剂(CFTRinh-172)的最适浓度,用CFTR激活剂和抑制剂的最佳浓度分别处理Calu-3细胞,然后采用划痕实验观测了培养48h后Calu-3细胞迁移的差异.结果表明:MTT法检测激活剂的最佳浓度为25μmol/L;CCK-8法检测抑制剂的最佳浓度为10μmol/L;划痕实验检测得出25μmol/L激活剂组细胞迁移数量((74.2±5.79)个)与对照组细胞迁移数量((134.1±10.04)个)相比具有显著性差异(P=0.000.01);10μmol/L抑制剂组细胞迁移数量((148.3±17.70)个)与对照组细胞迁移数量((134.1±10.04)个)相比无显著性差异(P=0.270.05).激活剂通过促进CFTR氯离子通道的开放,抑制了肺腺癌肿瘤细胞Calu-3的迁移.     

芒果苷对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其机制研究

利用相差显微镜观察细胞形态变化情况;用MTT法测定芒果苷对A549细胞增殖作用的影响以及Western-Blot法检测芒果苷对Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白分子表达水平的影响.结果显示,与对照组相比,芒果苷对人肺腺癌A549细胞的抑制率与浓度和时间均呈正相关性.在有效浓度为3μM,作用最佳时间为48h时,A549细胞的镜下形态和结构发生显著的变化;并且导致Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性以及它们的剪切小体数量增加.表明芒果苷对人肺腺癌A549细胞具有抑制增殖的作用,并且通过caspase依赖性途径诱导A549细胞凋亡.     

梅花鹿茸多肽对小鼠成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响

目的探讨3种不同提取方法的梅花鹿茸多肽对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞生物学活性的影响.方法分别采用匀浆法、匀浆裂解法、匀浆超声法在新鲜梅花鹿茸中提取梅花鹿茸多肽(velvet antler polypeptiddes,VAP),用BCA法对梅花鹿茸多肽蛋白质浓度进行分析,培养MC3T3-E1细胞,采用MTT法检测3种提取方法获得的梅花鹿茸多肽对细胞增殖率的影响,利用茜素红染色对MC3T3-E1细胞进行矿化定量测定.结果匀浆法多肽得率9.08%;匀浆裂解法多肽得率15.56%;匀浆超声法多肽得率13.38%;鹿茸多肽能明显促进MC3T3-E1细胞的增殖,并且匀浆超声法的增殖作用最强.钙沉积物的比较表明:与对照组比较,匀浆法、匀浆裂解法和匀浆超声法对MC3T3-E1细胞中的矿化现象呈现递增趋势.结论 3种提取方法综合比较,采用匀浆超声破碎方法提取梅花鹿茸多肽,不仅可以节约时间,而且提高了梅花鹿茸多肽的提取量,是较为理想的鹿茸多肽提取方式,并且能明显地促进MC3T3-E1细胞的增殖和矿化.     

ERK信号转导通路在PDGF诱导的人动脉平滑肌细胞增殖中的作用

了解ERK信号转导通路在PDGF诱导的人动脉平滑肌细胞增殖中的作用.原代培养人脐动脉平滑肌细胞（hUASMC）,取生长正常的细胞分4组：对照组,PDGF（platelet derived growth factor）组,ERK阻断剂组和PDGF＋ERK阻断剂组.继续培养24h后,用免疫细胞化学技术测细胞核内核增殖抗原（PCNA）的表达;用MTT法测细胞的增殖活性.结果显示：1）与对照组相比,PDGF组细胞内PCNA 的表达明显增强,MTT法测得A值也升高（P〈0.01）.2）ERK阻断剂可完全抑制PDGF诱导的PCNA 的表达增多和A值的升高.结论：ERK信号转导通路参与了PDGF诱导的人动脉平滑肌细胞的增殖.     

蛋白激酶D1对骨髓间充质干细胞中CXCR4的调控作用

目的:探讨蛋白激酶D1(PKD1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)存活、增殖、迁移和凋亡的影响,并分析PKD1对趋化因子受体4(CXCR4)表达的调控作用.方法:从Wistar大鼠股骨和胫骨中分离并收集BMSCs细胞,体外培养鉴定.实验分为5组:对照组(Control)、氧糖剥夺-复氧组(OGD)、PKD1组、AMD3100(CXCR4的特异性阻断剂)组和AMD3100-PKD1组.CCK-8法检测BMSCs的存活率,Tunel法检测BMSCs的凋亡情况,BrdU法检测BMSCs的增殖能力,Transwell法检测BMSCs的迁移能力,RT-PCR法检测BMSCs中CXCR4的mRNA表达,Western blot法检测CXCR4的蛋白表达.结果:PKD1预处理可明显提升BMSCs的存活、增殖和迁移能力(P0.05),减少BMSCs的凋亡数量(P0.05);并上调BMSCs中CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P0.05).阻断剂AMD3100可降低PKD1预处理后BMSCs的存活、增殖和迁移能力,增加BMSCs的凋亡数量,下调BMSCs中CXCR4 mRNA和蛋白的表达,从而减弱PKD1对BMSCs的预处理作用.结论:PKD1可能通过调控CXCR4的表达发挥抗氧糖剥夺-复氧作用:减少BMSCs的凋亡,提高BMSCs的存活、增殖和迁移能力.     

去甲去氢斑蝥素衍生物的合成及细胞毒活性

以顺丁烯二酸酐和呋喃为起始原料,经Diels-Alder缩合、取代和缩合3步反应,合成了14个新的去甲去氢斑蝥素衍生物2a~2g和3a~3g以及6个羧酸钠盐4a,4c~4g,其中2a~2g和3a~3g结构均经ESI-MS和1H NMR确证.用MTT法初步测定2a~2g和3a~3g对人肝癌细胞SMMC-7721和人肺癌细胞A549的体外细胞毒活性,结果表明,2e和3a的细胞毒活性优于去甲去氢斑蝥素.用MTT法初步检测了4a、4c~4g对A549增殖的影响,发现其对A549的抑制作用均弱于去甲去氢斑蝥素.     

超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响

目的:通过显微形态观察和功能检测分析超抗原(SEA)对Jurkat T淋巴细胞的影响.方法:应用CCK-8法,原子力显微镜(AFM)体外检测Jurkat T淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变.结果:与对照组比较,不同浓度的SEA随着作用时间的增加,细胞膜超微结构与Ra值明显发生改变.Jurkat T淋巴细胞经过质量浓度为0.1-100 mg/L SEA,作用48 h期间,Jurkat T细胞的表面超微结构(平均粗糙度,Ra)和增殖活性(A值)变化非常明显.其中,质量浓度10 mg/L SEA作用24 h,Jurkat T淋巴细胞表面结构变化最明显,而细胞增殖活性在48 h达最强.结论:SEA作为超抗原作用于Jurkat T淋巴细胞后,Jurkat T淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变,较后者更灵敏.     

MTT法在抗真菌药敏实验中的应用

目的：研究MTT法在抗真菌药敏实验中的应用。方法：采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐方案测定两性霉素B和伊曲康唑对5种常见真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢子癣菌)的最低抑菌浓度(MIC)，终点判定分别采用NCCLS推荐的直接观察法和MTT法，对两法进行比较。结果：MTT法与常规直接观察法进行MIC终点判定所得结果具有很好的一致性。MTT法测得的A值与接种菌量具有正相关性。两性霉素B与伊曲康唑对丝状真菌和念珠菌都具有很好的抑制作用，MTT法测得的A值随药物浓度的增加而显降低。结论：MTT法较之常规直接观察法结果更为客观、准确，且可量化，因而可以很好的替代肉眼观察法来判定真菌药敏试验的终点。     

红景天苷对BMSC生物学特性影响

目的：研究红景天苷对骨髓间充质干细胞（Bonemesenchymalstemcells,BMSCs）生物学活性影响。方法：采用贴壁法分离培养BMSCs,检测细胞表面分子表达对所获干细胞进行鉴定。以终浓度为10¨g／mL红景天苷与BMSCs共培养,通过形态学观察和MTT法分析研究其对BMSCs生物学特性影响。结果：成功培养出BMSCs,免疫荧光染色显示,培养的第3代BMSCs表达CD29、CD44干细胞标志。10μg／mL红景天苷与BMSCs共培养后,较对照组细胞生长更为旺盛,更为规整,形成典型的“鱼群状”。生长曲线显示,实验组细胞较对照组生长稳定,增殖能力活跃。结论：10μg／mL红景天苷可促进BMSCs增殖分化,又不影响细胞增殖分化等生物学特性。     

银杏叶多糖对人恶性黑色素瘤细胞增殖的影响

研究了银杏叶多糖(PGBL)对人恶性黑色索瘤(A375)细胞增殖的影响.采用50μg·ml-1、100μg·ml-1和200μg·ml-1浓度的PGBL作用于A375细胞,MTT法检测细胞生长和增殖情况.结果表明,不同浓度的PGBL都可抑制A375细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性.证明PGBL对恶性黑色素瘤有一定的防治作用.     

柴胡皂甙D对肺癌A-549细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

为探讨柴胡皂甙D对肺癌细胞株A549的增殖抑制和促凋亡的作用及其机理,应用MTT比色法检测不同浓度柴胡皂甙D对A549胞的增殖抑制,采用TUNEL法观察细胞凋亡,RT-PCR法检测用药前后bcl-2和C-myc基因mRNA表达水平,Western blot检测用药前后Fas蛋白的表达.研究发现:柴胡皂甙D对A549细胞增殖抑制作用成剂量正相关,对促使A549细胞凋亡有显著作用,用药48 h后bcl-2和C-myc基因mRNA水平明显降低,Fas蛋白表达增强,认为柴胡皂甙D对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用,可能通过bcl-2和C-myc基因表达下调,Fas蛋白表达上调实现.     

银杏叶多糖对人恶性黑色素瘤细胞增殖的影响

研究了银杏叶多糖(PGBL)对人恶性黑色素瘤(A375)细胞增殖的影响。采用50μg.ml-1、100μg.ml-1和200μg.ml-1浓度的PGBL作用于A375细胞,MTT法检测细胞生长和增殖情况。结果表明,不同浓度的PGBL都可抑制A375细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性。证明PGBL对恶性黑色素瘤有一定的防治作用。     

Linifanib和Tivozanib对肺癌细胞增殖的影响

为探讨小分子化合物Linifanib和Tivozanib对肺癌细胞A549和H358增殖的影响,以不同浓度Linifanib和Tivozanib预处理细胞48 h,用MTT法检测了细胞存活率,并通过流式细胞仪检测了细胞周期和凋亡情况,用RT-PCR检测了肿瘤抑制因子P21的mRNA表达量.结果表明:Linfanib和Tivozanib能抑制肺癌细胞的增殖,呈现剂量依赖性.Linifanib能诱导细胞凋亡,同时引起细胞周期在G2/M期阻滞.Tivozanib主要引起细胞周期在G2/M期阻滞.Linifanib和Tivozanib均能引起A549和H358细胞中P21的mRNA表达量显著升高,说明Linifanib和Tivozanib能抑制肺癌细胞A549和H358的增殖.     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.     

汉黄芩素对人神经胶质瘤细胞U251的凋亡诱导作用

研究汉黄芩素对人神经胶质瘤细胞U251增殖和凋亡的影响,用不同浓度的汉黄芩素作用于U251细胞系,通过核染色观察形态变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式分析检测细胞的凋亡情况.结果显示,药物作用后的细胞,DAPI核染色呈致密浓染,并伴有凋亡小体的出现;MTT法测得U251细胞的增殖得到明显的抑制,抑制率随浓度和作用时间的增加而上升,其中作用24 h的IC50为145.87 μmol/L; Annexin V-FITC /PI流式细胞检测证实汉黄芩素确实可以诱导U251细胞凋亡,并有剂量依赖的性质;通过比色法证明在药物处理过的细胞中,凋亡标志性酶Caspase-3被激活,且活性随着药物浓度的升高而增强.研究表明,汉黄芩素能明显抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有抗神经胶质瘤的作用.     

MTT法检测金黄色萄萄球菌活菌数的研究

以金黄色葡萄球菌为对象,探讨了MTT法应用于细菌细胞数定量分析时,MTT作用时间、毒性、剂量和DMSO用量等因素对活菌计数的影响.结果表明:当细菌数在105～107个/mL时,吸光度值与细菌数目呈良好的正向线性关系,MTT法可准确检测金黄色葡萄球菌的活菌数量.最佳反应条件为:0.25 mg/mL MTT溶液作用2 h,DMSO为2～2.5倍的菌液体积.     

山奈酚抑制人胆囊癌细胞增殖及其对mTORC1通路的影响

目的:探讨山奈酚对人胆囊癌细胞(SGC-996细胞)增殖的影响及其机制.方法:采用浓度为0、25、50、75、100、125、150、175μmol/L的山奈酚干预SGC-996细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测SGC-996细胞的体外增殖能力;干预48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测P-S6K1及P-S6等哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)途径相关蛋白的表达.结果:干预24 h时,浓度为0～175μmol/L的山奈酚对SGC-996细胞增殖的抑制作用不明显;干预48 h时,浓度为75μmol/L及以上的山奈酚可明显抑制SGC-996细胞的增殖(P0.05);干预72 h时,浓度为50μmol/L的山奈酚也可显著抑制SGC-996细胞的增殖(P0.05).浓度为100μmol/L山奈酚干预48 h,可显著诱导细胞凋亡(P0.05),显著降低P-S6K1和P-S6蛋白的表达水平(P0.05).结论:在一定浓度范围内,山奈酚随浓度的增加和时间的延长而明显抑制SGC-996细胞的增殖,并诱导其凋亡,而对细胞增殖的抑制作用可能是通过影响mTORC1信号通路实现的.