TIM-3在胃肠癌中的表达及机制的研究进展

T细胞免疫球蛋白及黏蛋白分子-3(TIM-3)是T细胞免疫球蛋白及黏蛋白(TIM)家族成员之一,是一种负性免疫调控分子,主要参与辅助性T细胞1(T_H1)和Ⅰ型细胞毒性T细胞(Tc1)的免疫应答的调节,在诱导肿瘤免疫耐受中发挥重要作用。研究发现,TIM-3可与半乳糖凝集素-9(Gal-9)内的多种配体结合而产生各异的免疫调节作用,同时参与了固有免疫细胞的活化增殖以及诱导T细胞耗竭等,可能在肿瘤的发生和进展中发挥重要作用。该文旨在研究TIM-3在胃肠癌中的表达及作用机制,以期为胃肠癌治疗中的应用提供依据。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓γδ T细胞及其亚群的水平及意义

目的 了解骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）患者骨髓γδ T细胞及其亚群的水平，探索MDS患者骨髓微环境的免疫缺陷状况。方法 收集MDS患者治疗前后及正常供者骨髓样本，多色流式检测骨髓γδ T细胞及亚群水平，并分析MDS患者治疗后各细胞亚群的变化。结果 MDS患者骨髓γδ T细胞和滤泡辅助性γδ T细胞明显降低（P <0.05）。不同分化程度的γδ T细胞，仅初始γδ T细胞水平明显降低（P=0.037），中枢记忆、效应记忆和终末分化γδ T细胞MDS患者与正常供者差异无统计学意义（P> 0.05）。免疫检查点PD1和TIM3阳性的γδ T细胞分别存在一定程度的降低和升高，但差异无统计学意义（P> 0.05）。治疗后获得疗效患者的γδ T细胞和初始γδ T细胞水平较治疗前明显升高，效应记忆γδ T细胞较治疗前明显降低（P <0.05）,85.71%(6/7)的MDS患者γδ+TIM3+T细胞水平治疗后不同程度的降低。结论 MDS患者骨髓微环境γδ T细胞及其亚群的水平存在不同程度的异常，治疗有效的患者，异常的γδ T细...     

基于高通量测序及公共数据库探索紫杉醇抑制T细胞淋巴瘤机制

目的:通过二代测序技术对紫杉醇作用下T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat基因表达谱进行计算生物学分析,以在基因层面探讨紫杉醇抗T细胞淋巴瘤的可能分子机制。方法:采用CCK-8法确定紫杉醇作用于Jurkat细胞的IC_(50),应用二代测序技术获得紫杉醇作用Jurkat细胞后基因表达谱,同时从GEO数据库中筛出与人T细胞淋巴瘤相关的基因芯片数据(其中包括720例T细胞淋巴瘤和153例正常对照组织),结合测序数据结果二者取交集并筛选差异表达基因(DEG);使用DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析,确定和可视化DEG的功能条目,并绘制DEG的蛋白质相互作用网络图。使用RT-qPCR验证基因的表达水平。结果:CCK-8结果显示紫杉醇对Jurkat细胞抑制率有明显的浓度依赖性;紫杉醇作用于Jurkat细胞48 h后进行转录组测序(RNA-seq),对RNA-seq和GEO芯片中的基因,以P 0.05,|log2(FC)|≥1为DEG筛选标准,共发现351个DEG,其中包括323个上调基因,28个下调基因; GO功能注释及KEGG通路富集分析结果表明,紫杉醇抗T细胞淋巴瘤的作用主要富集在蛋白质异源二聚活动、核小体装配以及癌症中的转录失调信号通路等; RT-qPCR基因表达结果与测序结果一致,验证本次测序的可靠性。结论:紫杉醇可以通过上调JUN基因和孤儿核受体NR4A家族基因以及组蛋白家族基因来影响T细胞淋巴瘤的增殖和凋亡。     

以KDR为启动子的双自杀基因系统诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的研究以KDR为启动子的双自杀基因系统CDglyTK诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究。方法用联合基因AdKDR-CDglyTK腺病毒转染表达KDR不同的人结肠癌细胞HCT116和LS174T,检测转染效率;RT-PCR检测双自杀基因CDglyTK的表达;用梯度浓度的前药5-FC及GCV处理,MTT法检测双自杀基因系统对HCT116和LS174T的细胞毒性作用;流式细胞术观察细胞凋亡变化;免疫组织化学法检测caspase-3蛋白的表达。结果携带双自杀基因的重组腺病毒载体成功转染结肠癌细胞。RT-PCR结果显示：表达KDR的HCT116细胞能表达目的基因,而不表达KDR的LS174T细胞不表达目的基因。5-FC和GCV对转染腺病毒的HCT116有明显的细胞毒作用而对LS174T细胞不敏感。流式细胞仪结果显示：给予5-FC和GCV后HCT116细胞出现凋亡峰,G0/G1升高、S期下降。Caspase-3表达增强（P〈0.01）。结论 KDR启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK能特异性杀伤结肠癌HCT116细胞,KDR可作为结肠癌基因治疗的靶点,并通过增强caspase-3途径诱导细胞凋亡。     

肝核受体激动剂T0901317对大鼠骨骼肌细胞脂肪酸转运酶基因表达影响的实验研究

目的探讨肝核受体（LXRs）激动剂T0901317对正常SD大鼠骨骼肌细胞中脂肪酸较运酶（FAT／CD36）基因mRNA表达的影响。方法将原代培养的5只SD大鼠骨骼肌细胞分为T09013171μmol／L作用组、0．5μmol／L作用组和未作用（阴性对照）组,采用SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测各组SD大鼠骨骼肌细胞FAT／CD36基因mRNA表达水平,并进行比较分析。结果1μmol／L、0．5μmol／L作用组与阴性对照组比较,差异无显著性意义（P=0．116）。结论LXRs激动剂T0901317对SD大鼠骨骼肌细胞中FAT／CD36基因mRNA的表达水平没有明显作用,提示T0901317在促进SD大鼠骨骼肌细胞内脂肪酸的堆积作用尚无确切的证据。     

稳定转染融合基因TFL舌癌细胞系的建立及辐射敏感性实验

目的：构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL，稳定转染入人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca—8113)中，检测建系细胞T—TFL的生物学性状，并初步观察T—TFL细胞对辐射的敏感性。方法：反转录PCR获得人FADD及TNFR1基因cDNA，重组PCR法构建含二者功能结构域的融合基因TFL；阳离子脂质体法稳定转染TFL基因入Tca—8113细胞中，Westem blot检测融合蛋白TNFR1／DED表达，通过生长曲线检测T—TFL细胞的生物学性状；MTT法检测γ射线对T—TFL细胞的作用效应。结果：获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL，转染入Tca—8113细胞后，能表达融合蛋白TNFR1／DED活性，且T—TFL细胞与亲本Tca—8113细胞的生物学性状无明显差异，T—TFL细胞明显增强了对辐射的敏感性。结论：T—TFL细胞能增强对辐射的敏感性，为进一步临床应用提供实验基础。     

调节性T细胞与异基因造血干细胞移植中的移植物抗宿主病

移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植供者移植物中T细胞识别不同的异基因受者抗原导致的复杂疾病过程,移植物T细胞去除却影响植入、免疫抑制、失去移植物抗白血病作用.CD4+CD25+调T细胞(Tregs)在控制自身免疫性疾病中具有重要意义,在控制异源反应性免疫应答中也起重要作用.Tregs预防GVHD机制是抑制普通T细胞(Tcons)增殖与功能活性.本文主要对CD4+CD25+Tregs调控GVHD及免疫治疗现状及应用前景作一综述.     

人类T细胞白血病病毒1型Tax蛋白研究进展

人类T细胞白血病病毒1型(HTLV-1)是成人T细胞白血病(ATL)的病因。Tax蛋白是HTLV-1基因组中tax基因编码产物,它可通过与宿主细胞转录因子的直接或间接作用,反式激活病毒的长末端重复序列(LTR)和宿主细胞基因(如IL-2、IL-2Rα、c-fos、GM-CSF、TGF-β_1)的转录,导致T细胞的增殖、转化,在致白血病机理中起重要作用。     

大鼠CD4+CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差.目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达.方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组.荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达.结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因.表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达.     

Ⅰ型及Ⅱ型细胞毒性T细胞与血液系统疾病的关系

近年来通过对T细胞亚群及其功能的研究,发现细胞毒性T细胞的细胞亚类即Ⅰ型及Ⅱ型细胞毒性T细胞(Tc1/Tc2)在血液系统疾病的发病及特异性免疫治疗中起着重要的作用.本文就Tc1和Tc2细胞亚群的免疫学特点,体外分离、诱导、扩增及检测的方法和原理,Tc1及Tc2细胞亚群在白血病患者异基因骨髓移植后移植物抗缩主病及移植物抗白血病平衡中的作用及相关机制,在白血病患者异基因骨髓移植后供者淋巴细胞输注治疗中的作用,以及Tc1及Tc2细胞亚群在自身免疫性溶血性贫血和再生障碍性贫血发病中的作用等方面作一综述.     

blu基因在鼻咽部淋巴瘤的甲基化状态研究

目的 探讨鼻咽部淋巴瘤blu基因启动子的高度甲基化在肿瘤发生中的作用及在分子病理诊断中的应用价值。方法 选用20例鼻咽部NK／T细胞淋巴瘤（包括NK细胞淋巴瘤，NK样T细胞淋瘤及外周T细胞淋巴瘤）石蜡包埋组织，用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP)方法检测。结果 blu基因在鼻咽部NK／T细胞淋巴瘤中高度甲基化，出现率为30％（20例中6例）。其中在15NK细胞淋巴瘤中4例存在blu的高度甲基化；2例NK样T细胞淋巴瘤中1例有高度甲基化；3例外周T细胞淋巴瘤（非特殊型）中1例有blu高度甲基化状态。结论 blu基因启动子的CpG岛在鼻咽部NK／T细胞淋巴瘤中高度甲基化现象，表明此抑癌基因被失活，提示blu基因的高度甲基化可能与淋巴瘤的发生有关。证实MSP方法在石蜡组织标本中可以检测基因甲基化。blu基因的高度甲基化也可能为鼻咽部NK／T细胞淋巴瘤提供新的肿瘤分子病理诊断标记物。     

HLA、CTLA-4、PTPN22基因在自身免疫性甲状腺病遗传易感性中的作用

自身免疫性甲状腺病（autoimmune thyroid disease,AITD）由于甲状腺T细胞和B细胞的浸润,导致相应的临床表现：甲状腺功能亢进或减退。HLA、CTLA-4、PTPN22基因编码相应产物影响T细胞的活化,从而影响AITD的发生、发展,其作用机制是目前研究的热点。该文阐述了这三个基因在AITD遗传易感性中的作用。     

睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞的毒性作用

目的:分析睾丸支持细胞(塞尔托利氏细胞)对异基因T淋巴的细胞毒性作用。方法:实验于2006-01/07在解放军广州军区武汉总医院实验科完成。睾丸支持细胞取材于二三周龄SPF级Wistar雄性大鼠,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。T淋巴细胞取材于体质量为200-250g的SPF级SD雄性大鼠脾脏,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。将Wistar大鼠睾丸支持细胞与异基因SD大鼠T淋巴细胞共同培养。按睾丸支持细胞含量将实验分6组:对照组(0个睾丸支持细胞 DMEM/F12培养基100μL)、睾丸支持细胞1×103组(100μL)、睾丸支持细胞1×104组(100μL)、睾丸支持细胞1×105组(100μL)、睾丸支持细胞1×106组(100μL)及FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(经0.2μg抗FasL单克隆抗体封闭过的睾丸支持细胞1×106,100μL),每组均加1×105T淋巴细胞,6复孔培养48h,应用噻唑蓝比色法测定睾丸支持细胞对T淋巴细胞的毒性作用,用酶标仪于570nm处测各孔吸光度(A值),细胞毒性百分比(%)=(对照组A值-试验孔A值)/对照组A值×100%。结果:睾丸支持细胞1×103组、睾丸支持细胞1×104组、睾丸支持细胞1×105组及睾丸支持细胞1×106组对T淋巴细胞的细胞毒性百分比显著高于对照组、FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(8.75%,20.37%,65.07%,62.96%;0,3.85%,P<0.01);睾丸支持细胞1×103组-睾丸支持细胞1×105组随睾丸支持细胞数量增加,对T淋巴细胞的毒性作用也明显增加,当睾丸支持细胞数增加至1×105,杀伤作用的增加不再显著。FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞有明显毒性作用,随着睾丸支持细胞增加,对异基因T淋巴细胞的抑制和杀伤作用也越大;但是当睾丸支持细胞达到一定数量后,其毒性作用不再增加;这种作用也可以被抗FasL单克隆抗体阻断。表明睾丸支持细胞FasL的表达是发挥免疫豁免作用的主要作用途径。     

HSV-TK基因转移治疗移植物抗宿主病

异基因骨髓移植的并发症——移植物抗宿主病(GVHD)是影响移植成功的主要障碍之一。用基因转移技术将单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因导入供髓T淋巴细胞并随造血干细胞一起输入受者的疗法,既可保持T细胞的GVL作用等优点,又可在GVHD发生时将T细胞去除以减轻GVHD。本文综述了HSV-TK基因用于基因治疗的原理及在治疗GVHD研究中的进展。     

TCR基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用

基因重排现象是每个淋巴细胞在早期经历的一个正常的过程,由于机体每个淋巴细胞的重排基因都是特有的,使每个淋巴细胞都有独特的重排形式。如若机体在某些致瘤因素的作用下失去对某个基因重排细胞的控制,则该细胞就会出现无控制的、单克隆性增生,最终导致淋巴瘤的形成。所以淋巴瘤所具有的是单克隆性重排。因此通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术进行T细胞抗原受体(T cell receptor,TCR)基因克隆性重排分析,尤其在常规HE形态学与免疫组化结果都不能确诊时,显得尤为重要。该文对其在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用作一综述。     

Ⅰ型及Ⅱ型细胞毒性T细胞与血液系统疾病的关系

近年来通过对T细胞亚群及其功能的研究，发现细胞毒性T细胞的细胞亚类即Ⅰ型及Ⅱ型细胞毒性T细胞(Tc1／Tc2)在血液系统疾病的发病及特异性免疫治疗中起着重要的作用。本文就Tc1和Tc2细胞亚群的免疫学特点，体外分离、诱导、扩增及检测的方法和原理，Tc1及Tc2细胞亚群在白血病患者异基因骨髓移植后移植物抗缩主病及移植物抗白血病平衡中的作用及相关机制，在白血病患者异基因骨髓移植后供者淋巴细胞输注治疗中的作用，以及Tc1及Tc2细胞亚群在自身免疫性溶血性贫血和再生障碍性贫血发病中的作用等方面作一综述。     

应用CD19修饰的嵌合抗原受体T细胞治疗淋巴细胞白血病

应用嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T cell,CAR T）治疗急性和慢性淋巴细胞白血病,在近期已取得了新进展。CAR T细胞是通过将T细胞受体基因和抗CD19抗体基因嵌合,转染至T细胞,在体外扩增以后输注给患者来治疗白血病的新型免疫治疗。经过基因改造后的CAR T细胞的表面具有特异性位点,可以识别淋巴细胞白血病中B细胞表面的CD19抗原。CD19抗原的持续刺激可使CAR T细胞不断增殖与活化,CAR T在患者体内可以增殖1000倍,有效杀伤急性和慢性淋巴细胞白血病细胞。本文就CAR T细胞及其对急性和慢性淋巴细胞白血病的疗效进行综述。     

中线T细胞淋巴瘤的TCR-γ基因重排研究

目的:对中线T细胞淋巴瘤的克隆性进行研究。方法:用一组针对T细胞受体γ链基因V区片段的家族特异性引物和PCR方法,对11例(22个标本)中线T细胞淋巴瘤病例进行了T细胞受体丁基因重排的检测。结果:22个标本中21个有T细胞受体γ链基因的克隆性重排(94.45％)。在9例原发灶的连续活检和1例原发灶及其转移灶的标本中均未发现增生的克隆家族的改变。结论:中线T细胞淋巴瘤的病变组织中存在T细胞的单克隆性增生,为该肿瘤的T细胞起源提供了分子生物学的证据。在中线T细胞淋巴瘤的疾病过程中(包括转移灶)增生T细胞的家族未发生变化,支持肿瘤的单克隆起源学说。     

细胞因子IL-10对ICOS-GL50信号介导的T细胞依赖性B细胞产生抗体的促进作用

目的研究ICOS—GL50信号在T细胞依赖性B细胞体外增殖、抗体分泌中的作用,进一步探讨细胞因子IL-10对ICOS-GL50信号介导的体液免疫中的作用。方法分别采用台盼蓝活细胞计数法和ELISA法检测ICOS—L929基因转染细胞和细胞因子IL—10对PWM介导的B细胞体外增殖及分泌抗体的效应。结果ICOS-L929基因转染细胞能够促进PWM介导的B细胞体外增殖,而不能显著上调抗体的分泌;加入IL-10后,能显著促进PWM介导的B细胞体外增殖和抗体分泌。结论细胞因子IL-10在ICOS—GL50信号介导的机体T细胞依赖的体液免疫应答反应中发挥着重要的协同作用。     

IGFBP7基因慢病毒载体的构建及在K562细胞中的表达

本研究构建胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)基因的慢病毒载体,为研究该基因在白血病中的作用提供基础。采用限制性内切酶酶切获得目的基因,基因重组构建慢病毒载体质粒venus-IGFBP7,用293T细胞包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,并采用多种方法鉴定。结果表明,所获IGFBP7基因经测序与GenBank比对序列一致,慢病毒载体质粒venus-IGFBP7经BamHⅠ酶切鉴定片段大小正确,荧光显微镜及流式细胞术检测到绿色荧光蛋白在293T及K562细胞中表达,RT-PCR和Western blot检测到IGFBP7 mRNA和蛋白在K562细胞表达。结论:成功构建带有IGFBP7基因的慢病毒载体,为研究IGFBP7基因在K562细胞中的作用奠定了基础。