3种分离流感病毒方法的比较分析

目的：为了比较流感病毒3种分离方法的敏感性及确定流感优势病毒株,1996年5月～9月,对江西南昌地区流感病毒进行了分离和鉴定研究。方法：采用细胞接种培养法、鸡胚羊膜腔接种培养法、鸡胚尿囊腔接种培养法。结果：细胞接种法分离的流感病毒株14株、鸡胚羊膜腔法得12株、鸡胚尿囊腔法得2株,共28株,其中甲1型18株、甲3型4株、乙型6株。结论：流感病毒分离中,细胞接种法与鸡胚羊膜腔接种法同样敏感。鸡胚分离培养中,应高度重视羊膜腔接种法。1996年南昌地区的优势而行珠是甲1型。     

流行性出血热病毒在原代地鼠肾单层细胞上的增殖

流行性出血热病毒(EHFV)通常采用非洲绿猴肾传代细胞(Vero-E_6细胞系)或人肺癌的Ⅱ型肺泡上皮细胞的传代细胞(A_(549)细胞系)增殖,但二者均为传代细胞。且A_(549)细胞乃来源于人的肿瘤组织,不宜用来制备疫苗。我们试将EHFV培养于原代地鼠肾单层细胞,获得了成功。 将EHFV76-118株的10％乳鼠脑悬液,按营养液1/10量接种于已长成单层的地鼠肾细胞,37℃吸附2h后,奔去接种浓,加含2％小牛血清的含糖Hank's液为维持液,置37℃温箱中孵育。从第3d开始,每天用直接荧光染色法观察细胞片,持续至接种后第13d,每次检查均能在细胞浆中观察到特异性EHFV抗原。     

杭M_(13)株麻疹病毒对鸡胚細胞的适应及其減毒活疫苗的試制

Enders与Katz等首先以人胚腎細胞分离出麻疹病毒,他们最初将分离的5株病毒(包括Ed株)經人胚腎細胞传2～23代时試图适应于鸡胚及鸡胚細胞,但未获成功,以后将Ed株再經人羊膜細胞28代、鸡胚6代始成功地适应于鸡胚细胞,这为麻疹疫苗的研究奠定了良好基础。1958年Smorodintsev等分离的列_4株及1950年上海生物制品研究所分离的沪191株亦大致是遵循上述一系列传代过程并适应于鸡胚細胞而制备活疫苗     

人白血病细胞系(J6-1,J6-2,J6-3)某些生物学特性的研究

本文报道人白血病细胞系(J6-1,J6-2,J6-3)某些生物学特性研究结果:1)电镜观察及BudR与DMSO激活试验表明,J6-1,J6-2,J6-3三者均不产生病毒颗粒。2)三者的细胞冻融液转化试验及动物或鸡胚接种亦均阴性,表明均不具生物学活性。3)三者之EB病毒壳抗原(VCA)均阴性,其EB病毒激活试验VCA及EA亦仍阴性。表明三者与EB病毒关系不密     

以組織培养和血細胞吸附試驗分离副流感Ⅰ型病毒

利用组织培养分离流行性感冒(简称流感)病毒已见于国外文献,并指出流感病毒能在田鼠腎、猴腎、人胚腎、人胚肺、猪肺、传代狗腎等细胞上生长繁殖。Vogel等首次发现感染流感病毒的单层细胞培养可为豚鼠血细胞所吸附;Shelokov等以此法分离亚洲甲型病毒,其阳性率较应用鸡胚分离者为高,且可较快地定出型别。今年我国在流感流行期间,分离得亚洲甲型及乙型流感病毒。浙江某地于1964年1月发生局限性流感流行,我们将12例以发热、头痛、流涕等症状为主的急性期患者咽洗液,接种原代人胚腎和人胚肺细胞,并以血细胞吸附试验证实在细胞感染的早期即有病毒繁殖,结果分离到副流感Ⅰ型病毒5株。本文报导其分离、鑑定及某些生物学性状观察的结果。材料和方法     

大鼠细小病毒H-1株培养方法的建立

目的 建立用大鼠胶质瘤细胞系(Rat glial cell line C6)替代大鼠原代胚细胞( primary rat embryo cells,RE)培养大鼠细小病毒(Toolan virus,H-1)的方法.方法 将0.8mLH-1病毒接种C6细胞(75T培养瓶,细胞接种量为2×105/mL,培养过夜),待细胞病变CPE达++～+++时,用免疫荧光(FITC)鉴定所培养病毒的抗原,用血球凝集试验(HA)测定培养物上清效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,用96孔板培养法测定H-1病毒的TCID50.结果H-1在接种到C6细胞的第3～4天,细胞发生明显的病变,CPE可达++++,FITC鉴定呈H-1抗原阳性,病毒的培养上清中HA效价为1:320.测序结果表明:该病毒序列与NCBI中H-1序列同源性达99％,确定为H-1病毒.收获的H-1的TCID50为103.2/0.1 mL.结论用大鼠胶质瘤细胞系(C6)可以替代大鼠原代胚细胞(RE)进行大鼠细小病毒的培养.     

甲型流感病毒M2基因真核表达载体的构建及初步表达

目的:构建含有甲型流感病毒M2基因的真核表达载体。体外转染真核细胞株HEK293细胞并检测目的蛋白的表达。方法:从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增M2基因。通过分子克隆技术将所扩增片段插入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)。经酶切及PCR鉴定后用PolyFect脂质体将其转染到HEK293细胞中,通过免疫荧光技术鉴定其表达。结果:经双酶切、PCR及测序鉴定证实M2基因的真核表达载体构建成功。免疫荧光技术证实流感病毒M2基因的表达。结论:甲型流感病毒M2蛋白是一种具有高保守性,可形成离子通道并影响流感病毒表面蛋白血凝素(HA)天然构象的形成,被认为是具有交叉免疫保护性的结构蛋白。甲型流感病毒M2基因真核表达质粒的构建及成功表达将为甲型流感病毒基因工程疫苗,通用疫苗和核酸疫苗的研究打下基础。     

经卵白给药研究利巴韦林在鸡胚内抗甲型流感病毒的作用

目的建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型。方法设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度。结果在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。结论在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制。     

流感病毒感染成年树鼩的研究

流感是最常见的多发病,但是目前尚无较为合适的动物模型。雪貂虽敏感,但不易获得。小鼠必须连续传代,始可适应。金黄仓库、大鼠、猪等需使用幼年或初生者始较敏感。至于猴、豚鼠、狗等接种后多为不显性感染。现认为树鼩属于灵长类动物,分布于云南及缅、泰地区。国内外尚未见其对流感病毒实验感染之报导,我们对树鼩开展了以下研究。材料与方法一、病毒:流感病毒新A_1/腊科80-1(T_2E_2)、A_3/京科76-2(E_8)、B/昆、生-448(L_1E_4)/京科79-5-15(E_6)、C/Georgia/1/69(E_(12))各株毒种,均经鸡胚尿囊腔或羊膜腔传代,进行无菌试验,并滴定其EID_(50)/0.2ml,分管贮存于-60℃备用。(注:E系指鸡胚接种、T系指组织培养、数字为传代次数)。     

腮腺炎病毒结构多肽分析

腮腺炎病毒Enders疫苗株和M_(56-1)强毒株在鸡胚内繁殖和蔗糖密度梯度离心纯化后,经SDS-PAGE分析,表明两株病毒的SDS-PAGE图谱有差异。两株病毒均有6～8条多肽,分子量范围Enders株为145K～37K(VP_1～VP_8),其中VP_1、VP_2、VP_3是糖蛋白;M_(56-1)株为76K～36K(VP_1～VP_8),PAS糖蛋白染色未显示出糖蛋白。     

广州市儿童病毒性心肌炎与柯萨奇B组病毒病原关系的初步研究

病毒性心肌炎可由多种病毒引起,但以柯萨奇B组病毒(简称CoxB)为多见。本文报告广州市儿童医院病毒性心肌炎部分住院病人血清中CoxB中和抗体检查结果。一、材料和方法 1.血清标本:选择1984～1985年临床诊断为病毒性心肌炎住院病儿44例,采集血清标本62份。另选30例临床诊断为散发性脑炎血清标本作对照组。 2.病毒株:CoxB_(1～6)型标准毒株购自中国医学科学院医学生物研究所。本实验室用原代人胚肾细胞做毒株传代,病毒置-30℃保存备     

树鼩原代细胞的分离及感染甲型流感病毒模型的构建

目的建立甲型流感病毒PR8株(A/PR/8/34,H1N1)对树鼩原代气管内皮细胞、树鼩原代肺细胞及树鼩原代肾细胞的体外感染模型。方法胶原酶蛋白消化法获得树鼩原代气管内皮细胞、树鼩原代肺细胞及树鼩原代肾细胞,用流感病毒PR8株感染树鼩原代细胞,测定24、48和72 h培养上清病毒载量,并观察细胞感染流感病毒后的形态变化,以确定流感病毒PR8株体外对树鼩原代气管内皮细胞、树鼩原代肺细胞及树鼩原代肾细胞的感染性。结果分离到的树鼩原代细胞经传代培养纯化和形态鉴别,对树鼩原代气管内皮细胞、原代肺细胞、原代肾细胞和犬肾传代细胞(MDCK)进行流感病毒易感性比较,培养48 h时显微镜下均能观察到明显的细胞病变(CPE);培养72h时病毒滴度可分别达到2.40×10~5 TCID_(50)/mL、1.20×10~3 TCID_(50)/mL、1.74×10~4 TCID_(50)/mL和1.79×10~7 TCID_(50)/mL。结论流感病毒可有效感染树鼩原代气管内皮细胞、原代肺细胞、原代肾细胞并有效增殖,且流感病毒对树鼩原代气管内皮细胞感染性最强,与流感病毒易感细胞MDCK相比具有统计学意义。确立了树鼩原代细胞的分离与培养方法,初步建立了流感病毒感染树鼩原代细胞的体外模型。     

RGD-M6P对原代肝星状细胞的影响

目的探讨精氨酸 -甘氨酸 -天冬氨酸 (RGD)和甘露糖 - 6 -磷酸 (M6P)的复合体 (RGD M6P)对原代肝星状细胞 (HSC)活化及细胞外基质分泌水平的影响。方法应用胶原酶原位灌注法分离原代HSC ,接种培养 4 8h后 ,随机分成空白对照组、转化生长因子β1(TGFβ1)组、M6P组、RGD组和RGD M6P组。培养 5d后 ,应用免疫组化方法检测各组HSCα SMA表达水平变化 ,双抗体夹心ABC酶免测定法检测培养 7d细胞的上清液中Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )含量。结果RGD M6P组原代HSC细胞上清液PCⅢ含量和α SMA表达明显低于TGFβ1组和M6P组 (P <0 .0 5 ) ,而与RGD组比较无显著差异。结论RGD M6P显著减少原代HSCα SMA的表达水平 ,明显降低培养上清中PCⅢ含量 ,为肝纤维化的预防和靶向治疗提供新的途径和思路     

地鼠肾原代细胞外源病毒调查

清洁级，普通级2围龄地鼠按卫生部颁布SPF级要求进行血清病毒抗体检测结果均为阴性．但所制备肾原代细胞血吸附试验结果有明显差异；请洁级中没有发现有血吸附现象．而普通级血吸附阳性率高达86％(18／21)．超离浓缩后可谢得血凝1：4～1：64．负染电镜观察到副流感样病毒颗粒．血清学调查．血凝及血吸附抑制试验结果表明与仙台和小鼠肺炎病毒有关．该外源病毒不易按常规方法在鸡胚和同种地鼠肾细胞上传代．     

The Effect of Ribvirin Against Influenza Virus A by Injected Into Albumen in Improved Chick Egg Model

目的 建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型.方法 设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度.结果 在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P＜0.05).感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P＜0.05).结论 在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制.     

全国流感监测网络宁夏监测点2004-2005年度流行性感冒监测结果分析

目的了解宁夏监测地区2004-2005年度流行性感冒(流感)流行情况和病毒流行株及其构成。方法每周统计监测点流感样病例(ILI),采集ILI咽拭子标本,用鸡胚和狗肾传代细胞进行流感病毒分离,采用血凝抑制试验(HI)进行流感病毒型别鉴定。结果两所监测医院共统计上报流感样病例289例,采集ILI标本220份,分离出流感病毒26株,其中H1N1、H3N2和B型流感病毒分别为14株、6株和6株。结论2004-2005年度宁夏流感监测地区的流行情况较为平静,流行优势株为H1N1亚型流感病毒。     

分泌表达肾癌抑制融合肽的重组腺伴随病毒对肾癌移植瘤的疗效

目的 观察分泌表达NT4-TAT-6×His-VHLβ肾癌抑制融合肽的重组腺伴随病毒作用于肾癌鸡胚移植瘤的疗效.方法 将人肾癌细胞系RLC-310接种到鸡胚绒毛尿囊膜上.选取成癌较好鸡胚,分别用rAAV/NT4-TAT-6×His-VHLβ(A组)、空病毒(B组)、PBS缓冲液(C组)进行干预,观察移植瘤生长及各组移植瘤的大小,采用HE染色及免疫荧光法比较各组的作用效果.结果 A组移植瘤生长速度明显慢于其他两组；A组移植瘤体积与B、C两组比较差异有统计学意义(P ＜0.05)；HE染色结果显示,A组鸡胚移植瘤生长受到抑制；荧光显微镜可观察到A组荧光明亮(++),对照组未观察到荧光(-).结论 rAAV/NT4-TAT-6×His-VHLβ对肾癌鸡胚移植瘤有抗肿瘤效应,为肾癌的基因治疗研究提供了一种新的途径.     

禽冠状病毒的分离鉴定及膜蛋白基因的克隆

目的分离鉴定禽冠状病毒,对该病毒的M基因序列进行分析。方法采用鸡胚传代分离培养病毒,用血凝特性、鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚矮小化、动物回归试验等方法鉴定病毒,用RT-PCR克隆病毒的膜蛋白基因并对其测序。结果分离病毒的生物学特性符合禽冠状病毒,膜蛋白基因与标准毒株膜蛋白基因为核苷酸序列同源性为91.9%,氨基酸的同源性为92.5%。结论本研究分离到1株禽冠状病毒,命名为IBV-HN05,该毒株可能是疫苗株的变异株。     

有关成纤维细胞培养外环境的几个问题

材料和方法: 1、材料: 1、动物组织细胞: 1) 兔肾(SRK)细胞:生后1日～2日兔婴体院动物房)。颈静脉放血致死,取肾脏,共8只。 2)豚鼠肾(GPK)细胞:同上。共9只。 3)鸡胚成纤维细胞(CEF):本教研室培育9日-11日胚蛋。共8只、 1、2、人胚组织细胞: 1)人胚肾细胞(Human embryokidney cell):取3月～5月水囊引产     

朱砂七总蒽醌及朱砂七大黄素体外抗甲型流感病毒实验研究

从朱砂七总蒽醌及朱砂七大黄素研究其抗病毒、抗炎、镇痛等方面的研究。试验结果:朱砂七总蒽醌在药液为1-4mg/ml时,在体外对流感病毒PR8株有直接灭活作用(P<0.05)对流感病毒PR8株在鸡胚内的增殖有抑制作用。朱砂七大黄素在药液浓度为2-4mg/ml时,在体外对流感病毒PR8株有直接灭活作用(P<0.05)。