SP600125对NO诱导的软骨细胞凋亡及caspase-3活性影响的研究

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和JNK抑制剂SP600125,研究NO对兔关节软骨细胞凋亡及caspase-3活性的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺兰染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检...     

哮喘气道重构时平滑肌细胞增殖周期的研究

目的探讨哮喘气道重构时平滑肌细胞增殖周期的改变及意义。方法建立大鼠哮喘模型,支气管-肺组织行HE染色,光镜及图像分析系统研究支气管内管壁、气道平滑肌的病理改变,流式细胞仪检测气道平滑肌细胞增殖周期分布。结果⑴哮喘组大鼠支气管内管壁厚度、平滑肌层厚度较对照组明显增厚(P<0.01)。⑵哮喘组大鼠G0/G1期气道平滑肌细胞比例显著低于对照组(P<0.01);S期、G2/M期气道平滑肌细胞比例显著高于对照组(P<0.01)。结论哮喘气道重构时平滑肌细胞异常增殖,处于增殖状态的细胞比例明显增多,抑制平滑肌细胞的细胞周期转换有可能阻止气道重构,可望成为治疗哮喘的新途径。     

c-jun氨基末端激酶通路在一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡中的作用

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125,研究JNK通路对NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测软骨细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)法测定核因子(NF-κB)p65和p53蛋白的表达水平.结果 SNP作用于软骨细胞后,随着其浓度的增大,细胞早期凋亡率与对照组比较呈浓度依赖性增加,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-κB p65和p53的表达分别出现上调,差异有统计学意义(P＜0.05);加入JNK抑制剂SP600125能抑制这种增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JNK信号转导通路在NO诱导的软骨细胞凋亡起着非常重要的作用,JNK的特异性抑制剂SP600125能以浓度依赖方式减少兔关节软骨细胞中NO诱导的凋亡和NF-κBp65及p53蛋白的表达活性.     

细胞凋亡在糖尿病胃轻瘫发病机制中的角色

[目的] 探讨糖尿病大鼠胃平滑肌细胞细胞凋亡在糖尿病胃动力障碍中的作用. [方法] SD大鼠随机分为两组:对照组和糖尿病模型组,造模成功10周后应用色素残留率检测胃排空和色素推进率检测小肠传输速率观测胃肠动力学指标.Annexin V-FITC和PI 双染流式细胞术检测胃平滑肌细胞凋亡. [结果] ①模型组大鼠于造模后均出现糖尿病症状;平均体重明显低于对照组(P<0.01);平均血糖浓度显著高于对照组(P<0.01).②模型组大鼠胃内色素残留率明显高于对照组(P<0.01);小肠传输速率显著慢于对照组(P<0.01).③模型组大鼠胃平滑肌细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.01). [结论] 造模10周后糖尿病大鼠出现胃轻瘫症状;糖尿病大鼠胃平滑肌细胞细胞凋亡显著增加,可能是耱尿病胃轻瘫重要发病机制之一.     

谷氨酰胺对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的影响

目的:研究谷氨酰胺(Gln)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺细胞凋亡的影响.方法:将80只大鼠随机分成Gln组(n=36)、SAP组(n=36)和对照组(n=8).术后12、24和36 h处死.用高效液相色谱仪测定血浆和胰腺组织内Gln浓度变化,取大鼠胰腺组织,采用原位末端标记法检测胰腺细胞凋亡指数.结果:SAP时,血浆和胰腺组织内Gln浓度明显下降,经肠道补充Gln能明显提高血浆和胰腺组织内Gln浓度.应用Gln治疗可使SAP大鼠胰腺细胞凋亡指数上升,术后12 h,SAP组为(6.88±0.52)个/100细胞,Gln组为(13.07±0.62)个/100细胞,SAP组相比,其他时点差异也均有显著性意义(P＜0.01).结论:SAP时,应用Gln具有促进胰腺细胞凋亡的作用.     

硝普钠对铅中毒鼠脑组织NO等含量水平影响

长期以来,铅对中枢神经系统的作用机制一直尚未完全清楚〔1,2〕,许多实验研究表明:铅对中枢系统的损伤与内源性一氧化氮(NO)的含量有关〔3~5〕,而硝普钠作为外源性NO的供体,在体内代谢可产生NO,为进一步研究铅中毒的作用机制,我们利用硝普钠作为外源性NO供体的特性对慢性染铅鼠     

硝普钠与米力农对急性心力衰竭的治疗对比分析

目的:对比分析硝普钠与米力农治疗急性心力衰竭疗效。方法:将58例急性心力衰竭患者随机分为硝普钠组(n=29)与米力农组(n=29)。硝普钠组给予硝普钠治疗,米力农给予米力农治疗。结果:两组治疗前与治疗后24h收缩压、舒张压变化均无显著性差异(P>0.05);硝普钠组与米力农组治疗后24h心率明显低于治疗前,且有显著性差异(P<0.05);两组治疗后FS、LVIDd、LVEF与治疗前比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:硝普钠与米力农治疗后对患者症状均有所改善,但两者临床上应用无明显的差异。     

内皮中性粒细胞激活肽-78在哮喘大鼠中性粒细胞中的表达及意义

目的观察大鼠哮喘内皮中性粒细胞激活肽-78(ENA-78),表达及布地奈德对其的影响,探讨中性粒细胞(NEU)参与哮喘发作的可能作用机制。方法采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组、布地奈德组,流式细胞术测定血NEU ENA-78的表达。结果哮喘组(97.65±13.99)MFI NEU ENA-78的平均荧光强度显著高于对照组(50.79±8.66)MFI(P<0.01);布地奈德组(75.81±6.10)MFI NEU ENA-78的平均荧光强度显著性低于哮喘组,且高于对照组(均P<0.01),NEU ENA-78的表达水平与支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数呈显著正相关(n=29,r=0.781,P<0.01)。结论哮喘大鼠NEU ENA-78的表达水平增加,NEU可能通过ENA-78参与哮喘发作的炎症过程;布地奈德可能部分通过下调NEU ENA-78,从而减轻哮喘气道炎症。     

控制性降压下不同程度的低血压对大鼠cTnI的影响研究

目的观察硝普钠(SNP)复合艾司洛尔(ESM)控制性降压下持续不同程度的低血压对大鼠心肌细胞cTnI的影响,研究控制性降压下心肌对不同程度低血压的耐受能力。方法 24只纯种雄性大鼠随机分成4组(n=6):A组为对照组,不予降压干扰,B组MAP降压至50mmHg持续1h,C组MAP降压至40mmHg持续1h,D组MAP降压至30mmHg持续1h。24h后取大鼠心脏组织做HE染色,用免疫组化的方法观察心肌细胞cTnI的表达。结果 HE染色:A、B组心肌细胞呈梭形,核清蓝色,肌纤维呈深红色,胞浆淡红色;C、D组开始出现不同程度水肿。免疫组化染色:A、B组心肌细胞蓝染,而C、D组开始出现不同程度黄染。结论硝普钠(SNP)复合艾司洛尔(ESM)控制性降压至50mmHg持续1h,大鼠心肌未出现明显损伤;降压至40mmHg及30mmHg持续1h时,大鼠心肌出现不同程度的损伤。     

哮喘患者T细胞亚群失衡与气道阻力变化的相关性

目的:探讨哮喘患者T细胞亚群失衡及与气道阻力(Airway Resistance,Raw)变化的相关性。方法:用流式细胞仪测定分析26例哮喘发作期、30例健康正常者外周血T细胞亚群(CD3 、CD4 、CD8 )数量及CD4 /CD8 比值与Raw变化。结果:CD4 :哮喘发作期组显著性高于正常对照组(P<0.01);CD8 :哮喘发作期组显著性低于正常对照组(P<0.01);CD4 /CD8 比值:哮喘发作期组显著性高于正常对照组(P<0.01)。CD3 T与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Raw与CD4 T呈显著正相关(r=0.512,P<0.05),与CD8呈显著负相关(r=-0.571,P<0.01),与CD4 /CD8 比值呈显著正相关(r=0.622,P<0.01)。结论:哮喘患者T细胞亚群失衡可能是哮喘发病的重要机制,CD4 /CD8 细胞比值失衡,表明T细胞免疫功能异常与气道阻力有相关性。     

中药小青龙汤对哮喘气道平滑肌细胞周期调控机制的影响

目的探讨中药小青龙汤对哮喘气道重构时气道平滑肌细胞（ASMC）增殖周期的调控机制,为哮喘的防治提供新的思路。方法SD大鼠随机分成正常对照组、哮喘模型组和小青龙汤组,每组20只。各组大鼠支气管-肺组织行HE染色和天狼猩红染色,经光学显微镜和图像分析系统观察分析支气管内管壁、气道平滑肌层和上皮下胶原的病理改变,应用流式细胞仪同步检测各组大鼠ASMC增殖周期时相分布和相应细胞周期调节蛋白（CCRP）的表达水平。结果哮喘模型组大鼠支气管内管壁、平滑肌层、上皮下胶原层的厚度和ASMC数目均显著大于正常对照组（P〈0.01）;S期、G2/M期ASMC比例显著高于正常对照组（P〈0.01）,cyclinE、cyclinA、cyclinB表达水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,P27kip1表达水平显著低于正常对照组（P〈0.01）。小青龙汤组大鼠支气管内管壁、平滑肌层、上皮下胶原层的厚度和ASMC数目均显著小于哮喘模型组（P〈0.05）,S期ASMC比例显著低于哮喘模型组（P〈0.05）,cyclinE、cyclinA表达水平显著低于哮喘模型组（P〈0.05）,P27kip1表达水平显著高于哮喘模型组（P〈0.05）。结论哮喘气道重构时ASMC异常增殖,小青龙汤可通过调控CCRP的表达、影响ASMC通过G1/S细胞周期限制点而抑     

滨蒿内酯抑制组胺诱导的哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放

目的研究滨蒿内酯（scoparone,Sco）剂量依赖性舒张气管平滑肌及降低气道高反应性的可能作用靶点及途径,为进一步将其开发成为平喘的中药新药提供药理学理论依据。方法建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型,通过离体豚鼠气管环的舒缩实验及应用倒置荧光显微成像系统测定培养的ASMCs[Ca2＋]i浓度的方法,分析Sco预先给药及直接作用对ASMCs[Ca2＋]i的影响。结果显示无论细胞外含钙或无钙,组胺具有收缩ASM环及升高培养的ASMC[Ca2＋]i作用,哮喘组明显高于对照组（P〈0.05）,预先给予Sco组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;在细胞外无钙时10-4M Sco直接作用培养的ASMCs,可明显抑制各浓度组胺诱导的ASMCs[Ca2＋]i的上升（P〈0.05）。结论预先给予Sco及直接作用都可不同程度改善哮喘豚鼠ASMCs对不同浓度组胺的高反应性,这可能与Sco抑制哮喘豚鼠ASMCs IP3介导的内钙释放途径有关。     

CTRP9抑制幼年哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖和炎性反应的研究

目的 研究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)对哮喘幼鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖和气道炎症的作用。方法 ELISA检测正常、哮喘儿童和小鼠血清中CTRP9含量;原代培养哮喘小鼠ASMCs,经pcDNA3.1-CTRP9转染后,MTT检测ASMCs增殖,ELISA测定TNF-α和IL-6含量,Western 印记检测TLR4和NF-κB p65蛋白表达以及NF-κB p65磷酸化水平;pcDNA3.1-CTRP9转染哮喘小鼠,HE染色观察肺组织炎性细胞的浸润程度;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),光镜下检测嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和中性粒细胞数目;检测小鼠肺部TNF-α、IL-6、TLR4和NF-κB的表达。结果 哮喘儿童和小鼠血清中CTRP9含量低于正常组;CTRP9能抑制ASMCs增殖、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB通路活化;CTRP9也能抑制哮喘小鼠肺部炎性细胞浸润、各炎性反应细胞数目、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB通路活化。结论 CTRP9能抑制幼年哮喘小鼠ASMCs增殖和炎性反应。     

丹参注射液联合地塞米松对哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 探讨丹参注射液联合地塞米松(DXM)抑制哮喘气道炎症的免疫学机制.方法 50只Wistar大鼠随机分成正常对照(NC)组、哮喘组、丹参组、DXM组、联合用药组,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,HE染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)比例,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5含量.结果 与哮喘组比较,药物干预组细胞总数、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)、嗜酸性粒细胞(Eos)百分率下降(P<0.05,P<0.01),联合用药组下降程度大于丹参组、DXM组(P<0.05).哮喘组呈显著炎症变化,丹参组呈中度炎症变化,DXM组呈轻度炎症变化,联合用药组无炎症改变.与哮喘组比较,药物干预组CD4+CD25+Treg/CD4+T升高(P<0.05),IL4、IL-5含量下降(P<0.05),联合用药组CD4+CD25+ Tree/CD4+T升高程度和IL-4、IL-5下降程度大于丹参组和DXM组(P<0.05).结论 丹参注射液具有抑制哮喘大鼠气道炎症的作用,和DXM联合应用后,抑制作用更加明显,该作用可能和促进CD4+CD25+Treg产生,进而抑制IL-4、IL-5产生,纠正Th1/Th2失衡,最终减轻气道炎症有关.     

丹参注射液抑制哮喘大鼠肺IL-13和嗜酸性粒细胞趋化因子表达

目的 探讨丹参注射液抑制哮喘气道变应性炎症的分子机制.方法 30只SD大鼠随机分成正常对照组,哮喘组,丹参组,每组10只.HE染色行肺组织病理学检查,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用免疫组化SP法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织中白细胞介素-13(IL-13)和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达.结果病理组织学显示:丹参组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少.丹参组BALF细胞总数及淋巴细胞(Lym)、中性粒细胞(Neu)和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组明显减少(P<0.05,P<0.01),与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).哮喘组肺组织IL-13和Eotaxin表达较正常对照组明显增加(P<0.05),丹参组IL-13和Eotaxin表达较哮喘组明显减少(P<0.05).IL-13和Eotaxin表达呈正相关(r=0.90,P<0.01).结论 丹参注射液可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与降低哮喘大鼠肺内IL-13和Eotaxin表达有关.     

一氧化氮在哮喘大鼠气道炎症中的作用

为探讨一氧化氮在哮喘大鼠气道炎症中的作用,采用卵白蛋白作为致敏原制备哮喘大鼠模型,用Ｓ—Ｐ免疫组化染色方法对肺组织诱导型一氧化氮合酶ｉＮＯＳ的活性测定及定位分析。结果显示：哮喘大鼠肺组织（ｉＮＯＳ）的表达活性明显高于正常对照组（Ｐ＜０００１）。主要存在于支气管上皮细胞,支气管平滑肌细胞,肺泡上皮,血管内皮和平滑肌细胞,浸润的中性粒细胞和巨噬细胞,而淋巴细胞表达不明显。用甲基强的松龙处理后哮喘大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶表达明显降低。说明一氧化氮在哮喘气道炎症中起重要作用,甲基强的松龙治疗哮喘可以减轻气道炎症,使哮喘大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶表达降低     

氢醌对人白血病细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响

目的 研究氢醌对白血病细胞株U937细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。方法 用不同浓度的氢醌处理U937细胞24 h、48 h后,采用MTT法来检测细胞增殖抑制率;经瑞-吉染色后,观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果 (1)U937细胞的增殖抑制率随氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(2)氢醌作用后,部分细胞体积增大,胞浆中有空泡,胞核发生畸形;(3)流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(4)免疫印迹结果显示,与空白组相比较,染毒48h时,细胞Bax蛋白的表达量增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05),染毒24 h时,细胞Caspase-3蛋白的表达量增加(P<0.05);与染毒24 h各组相比较,染毒48 h时细胞Caspase-3蛋白的表达量随时间延长呈增加趋势(P<0.05)。结论 氢醌可以诱导U937细胞凋亡,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达有关。     

抑制JAK/STAT通路对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤的作用

目的研究抑制Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用体外培养的新生大鼠心肌细胞造成缺血再灌注(I/R)模型,随机分为正常对照组,缺血再灌注组,JAK抑制剂-AG490治疗组,STAT抑制剂-RMP治疗组。采用MTT法检测心肌细胞活性,检测以上不同条件下细胞上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并检测各组细胞的凋亡率。结果与正常对照组相比,缺血再灌组心肌细胞成活率明显降低(P<0.01),细胞上清液中LDH、MDA含量明显升高(P<0.01),SOD活力则显著降低(P<0.01),缺血再灌组凋亡率升高明显(P<0.01)。AG490及RMP处理后,心肌细胞成活率明显升高(P<0.01),LDH、MDA显著低于缺血再灌组(P<0.01),SOD则高于缺血再灌组(P<0.01)。结论抑制JAK/STAT通路有助于减轻缺血再灌注所致心肌损伤。     

X射线对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的实验研究

目的 研究X射线对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法 体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和放射组,放射组分别用X射线10Gy、20Gy、30Gy、40Gy单剂量照射心肌细胞,采用MTT法观察X射线对乳鼠心肌细胞活性的影响;血生化自动分析仪定量测定X射线作用后心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)的改变;吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)双染色法在激光扫描共聚焦显微镜下观察心肌细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪定量检测心肌细胞的凋亡率。结果 ①X射线剂量在10~40Gy均能抑制心肌细胞活性并成剂量依赖性;②细胞心肌酶谱检测到LDH释放量与X射线剂量相关;③流式细胞仪发现心肌细胞凋亡率与X射线照射剂量有相关性。结论 本研究结果显示X射线对心肌细胞有毒性作用,可致心肌细胞损伤,表现为心肌细胞坏死和凋亡发生率增加。