多发性骨髓瘤患者CD4+IL-17A+辅助性T细胞/CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞及相关细胞因子的研究

目的检测多发性骨髓瘤(MM)患者外周血CD4+IL-17A+辅助性T细胞(Th17细胞)/CD4+CD2+5Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)比率及相关细胞因子,分析其相关性。方法采用流式细胞术检测MM组初诊患者外周血Th17、Treg细胞占CD4+T细胞比例,ELISA法检测MM组初诊患者血清IL-17、IL-6、IL-23、TGF-β、IL-10水平。结果 MM患者外周血Th17细胞比率升高,Treg细胞比率降低,血清IL-6、IL-17与IL-23水平明显升高;MM患者外周血Th17细胞与Treg细胞含量呈负相关,Th17细胞含量与血清IL-6、IL-17、IL-23水平均呈正相关,Treg细胞含量与血清中IL-6、IL-17、IL-23水平均呈负相关。结论 MM患者存在Th17/Treg细胞失衡,IL-6、IL-17、IL-23影响两者表达,在MM发生发展中起重要作用。     

银屑病患者外周血Th17、Treg细胞检测及临床意义

目的:探讨银屑病患者外周血Th17细胞、Treg细胞检测及临床意义。方法:选取门诊、住院患者及健康体检者共96例。其中,银屑病患者34例,一般慢性皮肤病患者30例,健康对照组32例。采用流式细胞术检测3组患者外周血Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值。结果:3组患者Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过两组t检验结果分析发现,银屑病患者Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值高于慢性皮肤病患者组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。银屑病组患者血清中IL-10及TGF-β水平较慢性皮肤病组及健康对照组患者均有下降(P<0.05)。银屑病组患者血清中IL-17、IL-22水平较慢性皮肤病组及健康对照组患者均有升高(P<0.05)。银屑病患者外周血Th17细胞、Treg细胞水平与IL-10、TGF-β水平呈负相关(P<0.05);银屑病患者外周血Th17细胞、Treg细胞水平与IL-17、IL-22呈正相关(P<0.05)。结论:银屑病患者外周血中Th17、Treg细胞二者表达水平升高,Th17/Treg比值升高,提示Th17、Treg细胞两者可能参与银屑病的发病,而阻断两者的产生途径可能成为治疗银屑病的新方法。     

急性颅脑损伤患者外周血中Th17/Treg细胞及其相关细胞因子的表达及意义

目的 探讨急性颅脑损伤患者外周血中辅助性T细胞17（Th17）和调节性T细胞（Treg）及其相关细胞因子白介素17（IL-17）、白介素23（IL-23）、 转化生长因子（TGF-β1）的变化及临床意义。方法 选取2015年1月至2016年12月住院治疗的104例急性颅脑损伤患者为研究对象,根据格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分分组,轻型颅脑损伤组（A组）34例,中型颅脑损伤组（B组）38例,重型颅脑损伤组（C组）32例。另选取同期行健康体检的志愿者30例作为健康对照组（D组）。受伤后次日清晨分别采集各组的外周静脉血,采用ELISA检测IL-17、IL-23、 TGF-β1水平;采用流式细胞术检测Th17细胞和Treg细胞的比例。结果 各组急性颅脑损伤患者血清中的Th17细胞、IL-17及IL-23均显著高于健康对照组(P＜0.05),且重型颅脑损伤组显著高于轻型和中型颅脑损伤组(P＜0.05),中型颅脑损伤组显著高于轻型颅脑损伤组(P＜0.05);中重型颅脑损伤患者血清中Treg细胞及TGF-β1均显著低于健康对照组(P＜0.05),重型颅脑损伤组显著低于轻型和中型颅脑损伤组(P＜0.05),中型颅脑损伤组显著低于轻型颅脑损伤组(P＜0.05)。与对照组比较,轻型颅脑损伤患者血清中Treg细胞及TGF-β1水平降低不明显(P>0.05)。结论 Th17/Treg细胞失衡参与急性颅脑损伤后免疫炎性反应过程,Th17过亢及Treg不足可能与急性颅脑损伤后的脑损伤程度相关,检测Th17/Treg细胞及其相关细胞因子水平有助于评估急性颅脑损伤患者的病情。     

缺氧缺血性脑病患儿外周血调节性T细胞和辅助性T细胞17及其细胞因子水平的变化

目的探讨缺氧缺血性脑病(HIE)患儿外周血调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞17(Th17)及其细胞因子白细胞介素(IL)-10、IL-17、IL-23、转化生长因子-β(TGF-β)水平的变化。方法选取2012年1月至2014年1月在临颍县人民医院接受治疗的HIE患儿82例作为观察组,并选取40例健康新生儿作为对照组。抽取新生儿外周血,应用流式细胞仪检测全血中Treg和Th17的比例,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-10、IL-17、IL-23和TGF-β水平。结果轻度HIE组患儿外周血Treg水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),中度HIE组和重度HIE组患儿外周血Treg水平显著低于对照组(P<0.05);轻度HIE组患儿外周血Th17水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),中度HIE组和重度HIE组患儿外周血Th17水平显著高于对照组(P<0.05)。轻度HIE组患儿血清IL-10、TGF-β、IL-17和IL-23水平与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05),中度HIE组和重度HIE组患儿血清IL-10和TGF-β水平显著低于对照组(P<0.05),而IL-17和IL-23水平则显著高于对照组(P<0.05)。结论 HIE患儿存在外周血Treg、Th17及其细胞因子表达的失衡,检测外周血Treg、Th17及其细胞因子水平对判断HIE病情进展、指导临床治疗有一定的临床意义。     

Treg/Th17细胞轴与桥本甲状腺炎自身免疫的相关性

目的 探讨调节性T细胞(Treg)/Th17细胞轴的变化及与桥本甲状腺炎(HT)自身免疫的相关性.方法 流式细胞术检测40例HT患者(HT组)和31例健康对照者(NC组)外周血单个核细胞(PBMC)中Treg和Th17细胞的比例,实时定量RT-PCR检测转录因子Foxp3、RORγt mRNA的表达水平,ELISA检测血清相关细胞因子TGF-β和IL-17A的含量,电化学发光免疫分析(ECLIA)检测甲状腺功能及甲状腺过氧化物酶抗体( TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)滴度.结果 HT组PBMC中Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达均明显低于NC组(均P＜0.01);Th17细胞比例、RORγtmRNA表达及Th17/Treg比值均明显高于NC组(均P＜0.01).HT组患者血清TGF-β的含量较NC组略低,但差异无统计学意义(P＞0.05);IL- 17A的含量较NC组显著升高(P＜0.01).HT组Th17/Treg比值与血清TPOAb、TgAb滴度均呈显著正相关(r=0.349、0.502,P=-0.037、0.002).结论 Th17/Treg细胞轴在不同程度HT中呈动态改变,并且与甲状腺自身抗体滴度正相关,说明Th17/Treg细胞亚群的失平衡可能参与了HT的自身免疫损伤.     

多发性骨髓瘤患者骨髓中调节性T细胞/辅助性T细胞17比值及其与临床指标的关系

目的通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中调节性T细胞(Treg细胞)和辅助性T细胞17(Th17细胞)的比例,分析Treg/Th17比值变化在MM发病机制中的作用及其与MM临床指标的关系。方法采用流式细胞术对新乡医学院第一附属医院血液科46例MM患者(观察组)和20例健康体检者(对照组)骨髓单个核细胞进行检测,分析Treg细胞和Th17细胞的比例及Treg/Th17比值的变化。采用酶联免疫吸附试验检测骨髓中白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-17(IL-17)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平。同时,对患者血清β_2-微球蛋白(β_2-MG)、乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALB)及血红蛋白(HGB)水平与Treg/Th17比值的相关性进行分析。结果观察组患者骨髓中Treg细胞比例为(3.89±1.62)%,显著低于对照组的(12.07±3.03)%(P<0.05);Th17细胞比例为(1.72±0.67)%,显著高于对照组的(0.61±0.11)%(P<0.05)。观察组患者骨髓中Treg/Th17比值为4.87±1.71,显著低于对照组的17.07±4.17(P<0.05)。与对照组比较,观察组患者骨髓中IL-10和TGF-β水平显著下降,IL-17和IL-6水平显著升高(P<0.05)。MM患者骨髓中Treg/Th17比值与β_2-MG和LDH水平呈负相关(r=-0.681、-0.588,P<0.01),与ALB和HGB水平无明显相关性(r=0.126、0.067,P>0.05)。结论 MM患者骨髓中Treg细胞比例及相关细胞因子(IL-10和TGF-β)水平下降,Th17细胞比例及相关细胞因子(IL-17和IL-6)水平升高,Treg/Th17比值下降,并且与MM患者的部分临床指标(β_2-MG和LDH)存在一定的相关性。     

胰腺癌患者外周血中调节性T细胞和辅助性T细胞17的表达及其血清相关因子的检测

目的 检测辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)在不同分期胰腺癌患者中的表达,探讨Th17细胞和Treg细胞与胰腺癌进展的关系.方法 采用流式细胞仪分析的方法分别测定37例胰腺癌患者及34例健康对照组患者外周血中Th17细胞和Treg细胞的比例分布,同时采用ELISA法检测其血浆IL-17A、TGF-β、IL-10表达.结果 (1)胰腺癌患者外周血中Treg、Th17细胞百分比高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.01).(2)胰腺癌患者外周血中Treg、Th17细胞的水平随肿瘤的进展逐渐增加,差异有统计学意义(均P<0.05).不同TNM分期的Th17、Treg细胞的水平分别用Student-Newman-Keuls法两两比较,各组间差异有统计学意义.(3)胰腺癌患者外周血IL-17、TGF-β、IL-6的水平均高于健康对照组,且随肿瘤的进展逐渐增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 胰腺癌患者外周血Treg及Th17水平与胰腺癌患者密切相关,且与肿瘤的进展密切相关;胰腺癌患者外周血IL-17A、 IL-6、TGF-β的表达,在胰腺癌的发生发展中起了重要作用,可能与肿瘤进程相关.     

溃疡性结肠炎中Th17/Treg细胞联合检测的临床意义

目的 检测溃疡性结肠炎(UC)患者血液中Th17/Treg细胞的比例变化,探讨其在UC发病中的作用.方法 该院2009年6月～2011年6月消化内科诊治的UC患者42例,另取健康对照42例.流式细胞仪检测Th17和Treg细胞的表达百分比;Trizol提取血液细胞总RNA,Real-time荧光定量PCR检测ROR γt和Foxp3基因的表达;ELISA检测IL-6和TGF-β1的表达水平.结果 UC患者血液中出现了Th17细胞比例的升高和Treg细胞比例的降低,相应的Th17/Treg细胞比值从对照组的(0.54±0.18)升高到UC组的(7.84±2.07)(P ＜0.01).ROR γt基因在UC患者中表达上调,而Foxp3基因则表达下调,与对照组相比二者的比值从(0.767±0.084)升高到(1.351±0.114)(P＜0.01).ELISA检测结果表明UC患者外周血中细胞因子IL-6的表达水平显著高于对照组(P＜0.01),而TGF-β1的表达水平显著低于对照组(P＜0.01).结论 UC患者存在Th17/Treg细胞的比例失衡,Th17/Treg细胞比例的失衡,可能参与LD患者免疫功能的紊乱,在UD患者肠道的损伤中发挥着重要的作用.     

鼻咽癌患者组织中Treg细胞和Th17细胞与TNM分期相关性研究

目的:探讨Treg细胞和Th17细胞在鼻咽癌TNM分期组织中的表达及相关性.方法:选取我院鼻咽癌患者50例,鼻咽炎患者50例作为对照.采用免疫组织化学法检测初诊鼻咽癌TNM分期组织和鼻咽炎组织中Treg细胞和Th17细胞的表达,并分析其相关性.结果:各组组织中Treg细胞和Th17细胞阳性表达,鼻咽癌各组均高于鼻咽炎,差异具有统计学意义(P＜0.05),并随着分期逐步升高,Ⅰ期与Ⅲ、Ⅳa、Ⅳb期分别比较,差异具有统计学意义(P＜0.05),但Ⅰ、Ⅱ期及Ⅳa、Ⅳb期分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05);鼻咽癌患者组织中Treg细胞与Th17细胞的百分率呈正相关性,具有统计学意义(P＜0.05).结论:Treg细胞和Th17细胞的异常表达可能涉及鼻咽癌的发生和发展过程;亦可能与鼻咽癌恶性进展密切相关.     

慢性牙周炎患者血清RORA的表达水平及其与Th17/Treg细胞平衡的相关性

目的 探讨慢性牙周炎（CP）患者血清维甲酸受体相关孤儿受体A（RORA）的表达水平及其与辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的相关性。方法 选取2019年1月—2021年12月于本院进行检查并接受治疗的90例CP患者作为观察组,并选择同期在本院检查的牙周健康志愿者100例作为对照组,比较两组的年龄、性别、体质指数(BMI)及合并高血压、冠心病、糖尿病等一般临床资料;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清中RORA的相对表达水平;采用流式细胞术检测两组Th17、Treg细胞水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组血清中转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）及白细胞介素-23（IL-23）的水平;采用Pearson法分析CP患者血清RORA与TGF-β、IL-10、IL-23、IL-23及Th17/Treg细胞比例之间的相关性;Logistic回归分析影响CP发生的因素。结果 两组年龄、性别、BMI及合并高血压、冠心病、糖尿病等指标比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者血清中Th17、IL-17、IL-23水平高于对照组,RORA、Treg、TGF-β、IL-10水平低于对照组,且Th17/Treg细胞比例高于对照组（P＜0.05）。Pearson法分析结果显示,CP患者血清中RORA与TGF-β、IL-10呈正相关（P＜0.05）,与IL-17、IL-23及Th17/Treg细胞比例呈负相关（P＜0.05）。Logistic回归分析结果显示,RORA、TGF-β、IL-10、IL-17、IL-23及Th17/Treg是CP发生的影响因素（P<0.05）。结论 CP患者血清中RORA低表达,Th17/Treg细胞比例失衡,RORA的表达与Th17/Treg细胞比例之间呈负相关,RORA可能通过调节Th17/Treg细胞比例影响CP的发生     

鼠胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化

目的：分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法：利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。 结果：诱导24 h后,细胞胞体收缩呈锥形或球形,有突起长出,细胞间突起相互连接,交错成网,为典型的神经元样形态。免疫细胞化学结果显示,经诱导培养后的神经元样细胞的胞体及部分突起NSE和NF染色呈强阳性表达,而GFAP 染色呈阴性。诱导组出现NSE阳性的细胞率为(79.5±3.2)%,而对照组出现NSE阳性的细胞率为(12.1±2.0)%,两组之间比较差异有显著性 (P<0.01)。诱导组出现NF阳性的细胞率为(41.2±2.4)%,而对照组为阴性。结论：鼠胶质瘤细胞上清液可以诱导MSCs向神经元样细胞分化。     

Expansive effects of aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells on hematopoietic stem cells from embryonic stem cells

Background Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood and immune cells and are used in clinical transplantation protocols to treat a wide variety of refractory diseases, but the amplification of HSCs has been difficult to achieve in vitro. In the present study, the expansive effects of aorta-gonad-mesonephros (AGM) region derived stromal cells on HSCs were explored, attempting to improve the efficiency of HSC transplantation in clinical practice.Methods The murine stromal cells were isolated from the AGM region of 12 days postcoitum (dpc) murine embryos and bone marrow（BM）of 6 weeks old mice, respectively. After identification with flow cytometry and immunocytochemistry, the stromal cells were co-cultured with ESCs-derived, cytokines-induced HSCs. The maintenance and expansion of ESCs-derived HSCs were evaluated by detecting the population of CD34+ and CD34+Sca-1+cells with flow cytometry and the blast colony-forming cells (BL-CFCs), high proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFCs) by using semi-solid medium colonial culture. Finally, the homing and hematopoietic reconstruction abilities of HSCs were evaluated using a murine model of HSC transplantation in vivo.Results AGM and BM-derived stromal cells were morphologically and phenotypically similar, and had the features of stromal cells. When co-cultured with AGM or BM stromal cells, more primitive progenitor cells (HPP-CFCs ) could be detected in ESCs derived hematopoietic precursor cells, but BL-CFC’s expansion could be detected only when co-cultured with AGM-derived stromal cells. The population of CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells were expanded 3 times,but no significant expansion in the population of CD34+Sca-1+ cells was noted when co-cultured with BM stromal cells. While both CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells and CD34+Sca-1+ cells were expanded 4 to 5 times respectively when co-cultured with AGM stromal cells. AGM region-derived stromal cells, like BM-derived stromal cells, could promote hematopoietic reconstruction and HSCs’ homing to BM in vivo.Conclusions AGM-derived stromal cells in comparison with the BM-derived stromal cells could not only support the expansion of HSCs but also maintain the self-renewal and multi-lineage differentiation more effectively. They are promising in HSC transplantation. Chin Med J 2005; 118(23):1979-1986     

动员人外周造血祖细胞定向诱导树突状细胞

目的 探讨由动员人外周造血祖细胞体外培养扩增获得的树突状细胞（DC）的生物学特性, 为临床应用肿瘤树突状细胞疫苗建立制备方法。方法 用CS-3000血细胞分离机分离预经干细胞动员的患者外周血单个核细胞（PBMC）,去除淋巴细胞和单核细胞,阴性选择得到外周造血祖细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4培养10~14 d成为树突状细胞,然后进行形态学检测、细胞表型和T细胞刺激能力分析。结果 由外周造血祖细胞来源的树突状细胞可以达到(0.5~1.0)×108数量级;高倍镜和电镜照片显示典型的树突状细胞形态和超微结构;流式细胞仪分析显示细胞高表达HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原和共刺激分子CD80、CD86;同种混合淋巴细胞反应显示细胞具有高效的刺激静止T淋巴细胞活化增殖的能力。结论 用血细胞分离机分离动员外周造血祖细胞体外定向诱导制备树突状细胞可以作为制备肿瘤疫苗的新途径。     

SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能。结果hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长。经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织。结论SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能。     

牙周膜干细胞对脐血单个核细胞分化为破骨样细胞的影响

目的研究牙周组织改建过程中,牙周膜干细胞对破骨细胞形成的影响,初步探讨静压力和诱导因子对牙周膜干细胞调控破骨细胞形成的作用机制。方法有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞。建立直接共培养和Transwell间接共培养体系。实验分组:A组,对照组(单纯共培养);B组,静压力组,共培养后第2天即对共培养细胞施加120 KPa压力,持续作用1 h后继续培养;C组,诱导因子组,培养液中加入诱导因子1,25二羟基维生素D3(1×10-8mol/L)和前列腺素E2(1×10-6mol/L)。采用倒置相差显微镜及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞(osteoclast-like cells,OLC)的形成及功能。结果各组第3、7天OLC计数比较结果显示,施加静压力后,直接共培养组OLC数量明显多于间接共培养组(P<0.01);而诱导因子组,直接共培养组OLC少于间接共培养组(P<0.01)。结论牙周膜干细胞能够促进脐血单个核细胞分化为破骨样细胞,且在静压力作用下,两种细胞直接接触时,这种调控作用更为明显。     

肝干细胞--肝卵圆细胞的研究进展

对于肝卵圆细胞的研究已有一定时间，但近几年才明确其属于干细胞范畴，笔者简要综述了肝卵圆细胞的特征、来源、调控分化及与肝病的关系。     

体外定向诱导胚胎干细胞分化为内皮细胞及其与脐静脉内皮细胞的比较

目的：研究干细胞定向分化为内皮细胞的效率,并与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)比较。方法：用两步法诱导干细胞HUES9分化为内皮细胞,前3 d在N2B27培养基中加入骨形态发生蛋白4 (25 ng/mL)和肝糖原合成激酶3β受体的选择性抑制剂CHIR99021(10 μmol/L)使细胞分化到中胚层状态,第4天开始用 VEGF165(200 ng/mL)和Forskolin(2 μmol/L)将细胞诱导为内皮细胞。观察分化第6天细胞形态,并与HUVECs比较。用 CD144作为内皮细胞表面标志物,流式细胞术检测分化效率及分化后细胞的身份。比较两种内皮细胞迁移和成管能 力。结果：分化后的内皮细胞与HUVECs在显微镜下形态一致。分化细胞表面标志物阳性率达到73.4%,重新培养后 的内皮细胞表面CD144阳性率达到86.6%,HUVECs为94.4%。分化后的内皮细胞与HUVECs均具有良好的迁移和成管 能力,但分化后的内皮细胞能力不如HUVECs强。运用SB431542后,能够提高分化后内皮细胞的迁移和成管能力。 结论：此两步法将干细胞分化为内皮细胞有较高的分化效率,可作为理想的分化方法。     

以表皮干细胞与HaCaT细胞为种子细胞构建组织工程皮肤的比较研究

目的 比较人表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)与人永生化角质细胞HaCaT作为种子细胞构建组织工程皮肤的差异.方法 Ⅳ型胶原快速黏附法分选表皮干细胞,无血清培养基DK-SFM培养,取第2代备用;应用DK-SFM培养HacaT细胞,取对数生长期的细胞备用;利用组织工程技术构建真皮等价物(dermal equivalent);将上述备用的两种种子细胞分别接种在真皮替代物的表面,构建组织工程皮肤,先后进行浸没培养和气-液面器官型培养,从形态学、物理特性、HE染色等方面观察比较培养物的差异.结果 以ESCs构建的组织工程皮肤收缩快,分层分化近似于正常皮肤,具有较好的张力和韧性.以HaCaT细胞构建的组织工程皮肤分层少,生长慢,张力韧性较差.两种皮肤的直径都随培养时间的增加而缩短,且在3～7 d各检测时相点间有显著性差异(P＜0.05).结论 ESCs比永生化的HaCaT细胞更适合作为种子细胞构建组织工程皮肤.     

人胚胎原生殖细胞中胚胎干细胞的分离培养

目的：探讨人胚胎原生殖细胞分离培养的条件及在体内、外的分化能力．方法：从5～9wk人胚胎生殖嵴中消化分离原生殖细胞(PGC），将其置于饲养层上培养，采用大鼠心肌细胞条件培养基(RH-CM)，改变了常规使用添加白血病抑制因子(LIF)的培养液．结果：成功地完成了对PGC的第4代培养；经过培养形成的克隆以及克隆的生长方式基本符合胚胎干细胞(ES)的特性：AP染色呈阳性；体外分化实验显示此细胞具有发育多能性；悬浮培养时能够自然分化成类胚体(EB)．结论：离散生殖嵴和增殖的。PGC克隆的时机和方法是影响建系的关键；PMEF和HEF对人PGC克隆的影响无显差异；添加RH-CM可有效抑制PGC的分化。     

特异性抗原致敏的DC-CIK与DC-CTL细胞对黑色素瘤抑瘤作用的比较

目的：比较特异性抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导的杀伤细胞（CIK）和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对B16黑色素瘤的抑瘤作用。方法：采用特异性肿瘤抗原致敏的DC与CIK和CTL细胞共同培养,分析其免疫表型,流式细胞检测癌细胞增殖周期中G0/G1期、S期、G2/M期细胞比率和细胞凋亡指数（AI）、细胞增殖指数（PI）的变化;并用MTT法检测其对肿瘤细胞的抑瘤作用。结果：DC-CIK及DC-CTL均可以影响肿瘤细胞的细胞周期,并具有诱导细胞凋亡的作用,但DC-CIK与DC-CTL之间无显著性差异;DC-CTL细胞组抑瘤作用较DC-CIK明显升高。结论：特异性抗原致敏的DC-CIK与DC-CTL细胞对B16黑色素瘤均有抑瘤作用,但DC-CTL更高效而特异。