荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究

本文利用四氯苯醌与赖氨酸之间的荷移反应测定食品中赖氨酸的含量。主要研究了吸收波长、反应时间、温度、硼砂用量、定容溶剂以及四氯苯醌用量等对测定结果的影响。试验结果表明：荷移反应最优条件为：λmax=348nm,时间60min,温度60℃,硼砂用量2mL,四氯苯醌用量2mL,水为溶剂。在0.3～1.5mol/L赖氨酸范围内测定,相对标准偏差在0.41%以内,相对误差为0.53%～1.39%,结果令人满意。     

L-赖氨酸脱羧酶活力测定方法的研究

以蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)为基础,进行L-赖氨酸脱羧酶活力的研究。对酶活测定过程中影响酶活力的三个主要因素:生物量,转化时间和初始底物浓度进行了选择和优化。最终确定了一种较为简便的L-赖氨酸脱羧酶活力的测定方法,即:调整发酵液的初始OD620=6(稀释10倍),补加200 g/L的L-赖氨酸母液至20 g/L,35℃静置转化3 h,测定L-赖氨酸的消耗量。酶活定义为:在35℃下,在1 min内能转化1μg L-赖氨酸的酶量为1个活力单位。本方法操作简单,无污染,且检测结果准确可靠(r=0.9901),稳定性良好(RSD=5.07%)。     

应用GQA—31EL近红外谷物品质分析仪测定小麦种子中赖氨酸含量

应用近红外反射光谱法测定小麦、大麦种子中赖氨酸含量,国外已有过报道,所使用的仪器均为带有微机的研究型近红外光谱仪。1985年中国农科院中心分析室吴秀琴应用 FQA-51型近红外反射光谱仪测定小麦种子中赖氨酸获得成功。而用 GQA-31EL 近红外谷物品质分析仪(简称 GQA,表为 NIR)测定小麦种子中赖氨酸含量,国内外尚无报道.该仪器是应用近红外光谱法的初级产品,采用固定波长,不带微机,只是为测定谷物、油料作物种子及饲料中粗蛋白、粗脂肪及水分含量而设计。为了扩大仪器使用范围,提高利用率,我们进行了测定小麦中赖氨酸含量的研究。     

采用三硝基苯磺酸法测定乳基婴幼儿配方奶粉中的有效赖氨酸

采用三硝基苯磺酸法建立了乳基婴幼儿配方奶粉中有效赖氨酸的测定方法,研究了乙醚用量、水解时间以及三硝基苯磺酸的孵化时间对水解液吸光度的影响。方法线性范围为0.02～0.12 mg/mL,相关系数r2=0.999 3,检出限为3.72μg/mL,定量限为10.23μg/mL,样品重复性相对标准偏差RSD为1.55%～5.57%,回收率为86%～115%。     

响应面优化L-赖氨酸培养基

通过Plackett-Burman试验设计、最陡爬坡试验以及响应面分析法,对L-赖氨酸棒杆菌株发酵赖氨酸培养基进行优化。利用Plackett-Burman试验设计来确定影响L-赖氨酸得率的主要因素,结果表明:NaCl、MgSO4·7H2O、玉米浆对L-赖氨酸得率的影响最大。利用最陡爬坡试验确定最大响应区域,在该基础上利用响应面分析法中的Box-Behnken设计,确定培养基的最佳条件为NaCl 2.72%,MgSO4·7H2O0.05%,玉米浆21.13g/L。在该条件下,L-赖氨酸的理论得率为104.75g/L,实际得率为104.60g/L,比优化前的87.93g/L提高18.96%。     

鸡蛋壳赖氨酸螯合钙的制备及其结构表征

为提高废弃鸡蛋壳的利用率,对鸡蛋壳赖氨酸螯合钙的制备工艺进行研究,并对其结构进行表征,以开发一种新型氨基酸生物钙制剂。本文以鸡蛋壳和L-赖氨酸为原料,赖氨酸螯合钙螯合率为指标,优化鸡蛋壳赖氨酸螯合钙的制备工艺。通过单因素试验和响应面试验,考察螯合反应时间、反应温度、溶液p H和L-赖氨酸与Ca Cl2摩尔比等因素对赖氨酸螯合钙螯合率的影响,优化确定最佳螯合工艺为:反应时间为49 min,反应温度为70℃,溶液p H为8.7,L-赖氨酸与Ca Cl2摩尔比为2:1。在此条件下,赖氨酸螯合钙螯合率为82.84%,较柠檬酸钙和谷氨酸钙螯合率分别高3.55%和1.72%。采用红外光谱、X衍射分析了鸡蛋壳赖氨酸螯合钙的结构,结果表明L-赖氨酸中的-NH2键和-COOH键均参与了螯合反应,L-赖氨酸中氨基上的N原子和羧基上的O原子均参与了反应,因此赖氨酸与钙形成了螯合物。     

高赖氨酸玉米对肉仔鸡饲喂效果的研究

参照肉鸡饲养标准(NY/T33),以高赖氨酸玉米替代基础日粮中的全部普通玉米配制试验组和对照组日粮,对体状良好、22日龄艾维茵商品代肉用仔鸡900只分成两组,进行饲喂效果的对比试验。证明高赖氨酸玉米的生物效应确实高于普通玉米,同时替代50%豆饼饲喂肉用仔鸡也具有显著的经济效益。     

小米-豆粕复合挤压中有效赖氨酸损失的动力学

小米一豆粕按不同比例混合后在不同的操作条件下进行挤压,测定了混合物料在挤压机内的停留时间分布,分析了挤压产品中有效赖氨酸的含量.结果表明,小米-豆粕复合挤压后有效赖氨酸的损失率在29.2%～64.3%之间;套筒温度是影响有效赖氨酸含量的主要因素,温度越高,有效赖氨酸的含量越低;有效赖氨酸损失的动力学级数为1.5,反应速率常数在0.000 41～0.001 26 s-1之间.     

利用玉米浸泡水生产酵母及其在赖氨酸下游工艺中的应用

利用玉米浸泡水生产酵母,将培养基pH调至4.0后在未灭菌的情况下接入酵母培养,摇瓶培养酵母菌,湿菌体量可达约10g/100mL,发酵罐培养可达20～30g/100mL。将培养好的酵母添加到已调至pH4.0的赖氨酸发酵液中,非无菌条件下再发酵约6h,降低了赖氨酸发酵液残糖,降低了发酵液黏度。该工艺不仅解决了玉米浸泡水的污染问题,同时也极大地改善了赖氨酸下游工艺,取得了良好的经济效益和社会效益。     

染料结合法测定稻谷中有效赖氨酸含量

用实验室常见的仪器设备—722型电光分光光度计,对染料结合法(DBL法)测定稻谷中有效赖氨酸含量的最适条件进行了摸索。同时将DBL法与氨基酸自动分析仪测定结果进行了比较,二者相关密切。并用DBL法对我国部分地区主要稻谷品种中有效赖氨酸的含量进行了测定。实验证明,DBL法是测定稻谷中有效赖氨酸的最佳方法,它具有快速、简便、经济、无需特殊仪器且能获得满意结果等优点,适合当前我国的技术水平。     

三文鱼中晚期糖基化终末产物含量测定及产地特征因子分析

建立超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱同时检测三文鱼中羧甲基赖氨酸（N-carboxymethyllysine,CML）和羧乙基赖氨酸（N-carboxyethyllysine,CEL）的分析方法。色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1?mm×150?mm,1.8?μm）,流动相A为100%乙腈、B为0.1%甲酸,电喷雾离子源正离子模式扫描,多反应监测模式定性分析,同位素内标稀释法定量;样品经脱脂、还原、水解和Oasis?MCX固相萃取柱净化等步骤后上机分析;方法平均回收率为90%～95%,精密度相对标准偏差小于5%,CEL检出限为0.032?7?ng/g,定量限为0.142?2?ng/g。采用该法对来自挪威、智利和法罗群岛的21?份三文鱼样品进行含量测定,并对所获数据进行主成分分析。结果表明,即使是相同品种的三文鱼在不同国家和不同个体之间CML和CEL含量存在很大的生物差异性,并且发现CEL有望成为鉴别挪威三文鱼和智利、法罗群岛三文鱼的产地特征因子。     

UPLC-MS/MS分析食物煎炸过程中2种晚期糖基化终末产物的研究

建立了一种分析食用油煎炸食物中羧甲基赖氨酸(CML)和羧乙基赖氨酸(CEL)含量的超高效液相色谱-串联质谱法检测方法,并研究了煎炸温度、时间以及不同食用油对CML和CEL含量的影响。样品经硼氢化钠还原4 h后,采用HLB固相萃取小柱进行净化和富集,加标回收率达到86.0%～92.9%。CML和CEL在0.01～1.00μg/mL浓度范围内线性良好,相关系数R~2为0.999 4～0.999 5,检出限均为15.0μg/kg,定量限均为45.0μg/kg。在煎炸温度100～200℃,两者生成量随温度的升高而增加;在煎炸时间10～60 min,两者生成量随煎炸时间的延长呈现先增加后不变的趋势,在40 min时达到最大值;在比较不同食用油煎炸食物中发现,橄榄油煎炸的食物中CML和CEL含量最低。     

基于蛋白沉淀法超高效液相色谱-串联质谱法检测面包中两种蛋白结合型晚期糖基化终末产物

目的 建立面包中两种典型晚期糖基化终末产物（AGEs）的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法以结合型羧甲基赖氨酸（CML）和羧乙基赖氨酸（CEL）为检测对象，面包样品经还原孵育、蛋白沉淀、加同位素内标、酸水解、氮吹、九氟戊酸水溶液复溶后，多反应监测定性及定量分析。结果 方法的检出限CML为4.5 ng/g,CEL为0.5 ng/g；定量限CML为20 ng/g,CEL为2 ng/g;CML加标回收率为89.62%～95.65%,CEL的加标回收率为86.38%～97.17%；标准曲线线性范围为CML2.5～800 ng/mL和CEL0.25～80 ng/mL，决定系数均大于0.999。结论 该方法准确且灵敏，能够满足面包中AGEs的检测需求。     

饲料专用玉米品种的筛选

对河南省市场上销售的18种玉米品种的水分、千粒重、容重、硬度、粗蛋白质含量、粗脂肪含量进行了测定,并对蛋白质含量较高的6种玉米的赖氨酸含量进行了测定,结果表明,18种玉米的水分含量为13.08%-16.87%,平均为15.10%;千粒重为238-376g,平均为329.3g,容重为704-776kg/m^3,平均为748.8g;粗蛋白质含量（干基）为8.3%-12.59%,平均值为10.46%;粗脂肪含量为3.89%-6.32%,平均为4.75%。6种粗蛋白质含量高的玉米品种的赖氨酸含量为0.31%-0.37%。根据玉米的蛋白质、粗脂肪含量和容重计算出了所测玉米品种的增值数据,初步筛选出供推广的、有较高经济价值的饲料专用玉米品种。     

毛细管电泳-电化学发光分离检测饮料中L-赖氨酸

目的:根据L-赖氨酸(L-lysine)具有增强三联吡啶钌(Ru (bpy)32+)电化学发光信号的特性,建立一种毛细管电泳-电化学发光分离检测L-赖氨酸的新方法.方法:研究检测电位、Ru(bpy)32+浓度、进样时间、进样电压、分离电压和缓冲液pH等试验参数对L-赖氨酸检测的影响.结果:在最佳试验条件下,检测电位1.13 V;Ru( bpy)32+浓度7 mmol/L(pH 8.5);进样时间10s;进样电压12 kV;分离电压12 kV;磷酸盐缓冲液pH 8.5,8 min内可实现L-赖氨酸的分离检测,线性范围3.00～87.00 μg/mL,相关系数R=0.9991,检出限(S/N=3)为0.21μg/mL.对样品进行测定,电化学发光强度和迁移时间的RSD分别为3.85％和0.66％(n=6).结论:本法已成功用于饮料中L-赖氨酸的检测,结果令人满意.     

一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法

采用SBA-40C型生物传感分析仪建立了一种葡萄糖氧化酶活力的快速测定方法。利用生物传感分析仪检测葡萄糖质量浓度的工作原理,葡萄糖氧化酶专一性地与β-D-葡萄糖反应,产生的过氧化氢在过氧化氢电极表面上发生电子转移,内置电子元件将电信号转变为数字信号,用已知活性单位的葡萄糖氧化酶作为测定标准定标后,即可在仪器上直接测出待测样品的葡萄糖氧化酶活性单位。结果表明:利用生物传感分析仪测定葡萄糖氧化酶活力时,缓冲液最佳p H为6.5,测定时间20 s,操作周期小于60 s,连续10次测定RSD值为0.63%,0~100 U/m L的范围内线性良好,r=0.999 1。该方法专一性高、简便、快速、准确、重复性好,适用于样品数目较多的葡萄糖氧化酶活力的快速测定。     

生物传感分析仪在乳酸发酵中的应用研究

简述了生物传感分析仪的检验原理,对5个发酵液样品进行了测定,其结果是精密度和测定周期都优于常规分析。     

基于UPLC-QqQ-MS/MS同步检测热加工食品中典型晚期糖基化终末产物

建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定热加工食品中羧甲基赖氨酸（Nε-carboxymethyllysine,CML）和羧乙基赖氨酸（Nε-carboxyethyllysine,CEL）含量的同步检测方法。首先脱脂样品经硼氢化钠还原8 h,沉淀蛋白,酸水解后,经Oasis MCX固相萃取小柱净化和富集,以乙腈和含0.1%甲酸的1 mmol/L乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱,采用ACQUITY UPLC HSS T3-C18色谱柱分离,多反应监测模式进行定性定量分析。CML和CEL在0.25～500 ng/mL范围内线性良好,相关系数高于0.999,方法检出限分别为8 ng/g和10 ng/g,定量限分别为36 ng/g和40 ng/g。平均回收率分别为96%～103%和94%～107%,相对标准偏差分别为1.48%～2.43%和1.23%～1.84%。利用该方法检测13 种市售热加工食品发现,婴儿肉松和婴儿饼干中CML和CEL含量显著高于烘焙食品和油炸食品（P＜0.05）。结果表明该方法快速、准确、高效,适用于热加工食品中CML和CEL的同步快速检测。     

赖氨酸发酵工业化研究

以黄色短杆菌（Brevibacterium flavum）WSH L1为产生菌,研究确定了2.5 L罐赖氨酸流加发酵中氮源浓度的初始值及过程控制模式。首先分析了不同初始有机氮源浓度对赖氨酸流加发酵过程菌体生长、产物积累以及微生物稳定性的影响,并得到适宜的初始有机氮源浓度为20g/L;在流加糖液中添加10g/L的有机氮源使发酵产酸和产物对耗糖转化率分别达到109.0g/L和38.5%。在分析pH值反馈控制铵离子浓度时的发酵液硫酸铵浓度变化过程的基础上,提出了葡萄糖浓度反馈控制铵离子浓度的基质流加模式。对铵离子浓度采取复合反馈控制方式后,发酵64 h,赖氨酸盐酸盐浓度和产物对葡萄糖的转化率分别达到119.0 g/L和40.2%。     

极谱法测定饲料添加剂中的赖氨酸

在0.08mol/L Na2HPO4—0.2mol/L CH3CHO—pH值为9.0的体系中用单扫描示波极谱法快速测定饲料添加剂中赖氨酸含量。结果表明,在所选定的测定体系中,赖氨酸浓度在1μg/mL¹00μg/mL范围内与极谱峰电流有良好分段性线性关系,方法检出限为0.3μg/mL。