SARS恒河猴动物模型比较病理学研究

目的综合对比 SARS 患者和恒河猴动物模型的病理学改变,为恒河猴动物模型应用于阐明 SARS 病变机制等研究提供理论依据。方法 SARS 病毒感染8只恒河猴,在感染后不同时间安乐死动物,应用光镜、组织化学、免疫组化法对动物的各脏器进行观察研究,并与人类 SRAS 患者的病理改变进行比较。结果人类 SARS 患者的主要病理变化主要包括肺部病变,免疫器官损伤及全身中毒性脏器损伤三方面,恒河猴动物模型出现的病理改变基本符合人类 SARS 病变特点。结论SARS 病毒感染的恒河猴具有类似人类 SARS 的病理改变,可以作为 SARS 发病机制等研究的模型动物。     

SARS-CoV动物模型研究之中国现状

目的综合对比SARS-CoV感染的恒河猴、布氏田鼠及Lewis大鼠的病理学、免疫学以及病毒的复制与外排情况的变化,来探讨此三种动物在建立SARS模型上的特点。方法SARS病毒感染8只恒河猴、9只Lewis大鼠和20只布氏田鼠,在感染后不同时间安乐死动物,应用光镜对动物的各脏器进行病理观察研究;用病毒分离和RT-PCR方法检测病毒外排与复制的情况;用ELISA法检测动物产生特异性抗体情况。结果在SARS-CoV感染恒河猴、Lewis大鼠和布氏田鼠后,肺组织均出现一定的与人类SARS疾病相似的病理改变,在动物体内均可检测到活病毒或病毒核酸,并可检测到特异性IgG抗体的存在。在病死率上布氏田鼠最高;在病毒的复制与外排方面恒河猴的检出率最高,持续时间最长;在抗体产生情况上恒河猴与Lewis大鼠基本相似;在病理变化上恒河猴病变最重且最为复杂,与人类SARS疾病的病理变化最为接近。结论布氏田鼠,Lewis大鼠,特别是恒河猴动物模型可以用于SARS发病机制、疫苗和药物的研发,恒河猴动物模型是目前研究SARS疾病最理想的动物模型。     

SARS-CoV感染猴模型病毒学研究

建立SARS-CoV病毒分离培养方法,确定SARS-CoV病毒感染动物后在不同时间和不同组织病毒的复制和存活时间,并比较中国恒河猴和食蟹猴对病毒的敏感性,筛选出对SARS冠状病毒敏感的动物,完善SARS冠状病毒感染猴模型的病毒学指标。方法:SARS-CoV经鼻腔接种实验用猴,定期采集动物的鼻咽拭子、血浆和组织标本进行病毒分离培养,分离出来的病毒用免疫荧光方法和中和试验等方法进行测定。结果:SARS冠状病毒均可感染恒河猴和食蟹猴,在鼻咽拭子、血浆和组织中可以分离到病毒。结论恒河猴和食蟹猴均可作为SARS感染动物模型,而病毒分离培养可以作为感染模型的重要指标。     

实验恒河猴肝脏自发病变的组织学初步观察

目的 了解人工饲养条件下恒河猴脏器自发病的发生情况,建立恒河猴自发病变的病理图谱。方法 采用常规组织学技术结合特殊染色方法。研究了包括各个年龄阶段的70只恒河猴肝脏的组织病理变化。结果 发现94.3%的猴肝脏存在不同程度的病变,包括实质细胞的各种变性,不同程度的坏死和增生,结缔组织的增生和纤维化,炎性细胞浸润,脓肿,囊肿等共23种病变,肝脏病变程度和病变发生率与年龄密切相关而与性别无关,同一个体肝脏病变的种类数随年龄增长而增加。结论 应加强实验动物组织学病挛 病理监测,为获物安全性评价试验提供脏器病变的基本资料。     

HIV-1感染的小动物模型

[目的]对感染SARS-CoV的恒河猴进行病毒、血清学等指标检测及研究,确定模型动物成功感染,并为SARS发病机制,疫苗评价,药物筛选确定参考指标。[方法]SARSCo-V经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定。[结果]用巢式RT-PCR在感染后每天提取的咽拭子标本中检测SARS-CoV的RNA,以细胞培养冠状病毒为阳性对照,以正常恒河猴咽拭子为阴性对照,在8只动物病毒接种第5天开始可检测到大小为797bp的目的条带,阳性检出最长可持续到第15天。进一步用病毒分离实验对PCR结果进行确证,8只动物中的5只恒河猴接种5天的咽拭子标本中,经Vero细胞培养,细胞产生了典型细胞病变(CPE),提示SARS冠状病毒能感染恒河猴并有病毒的复制和排毒。IFA方法证实为SRAS-CoV抗原存在。SARS-CoV感染恒河猴后,可以检测出免疫反应。在SARS冠状病毒接种前和接种后第5、8、11、15、19、23、26、30、34、每隔4-7天以及安乐死时采血,制备血清测定抗体,8只恒河猴接种病毒前均血清中SARS冠状病毒特异性抗体IgG为阴性,10天后安乐处死的5只感染猴在11-15天开始,至安乐死时,均为阳性。IgG阳性的5只恒河猴均有一定的中和抗体产生,且对SARS病毒感染细胞有一定的保护性。感染SARS病毒猴后与正常猴比较,其细胞杀伤效应明显增强。感染SARS-CoV的恒河猴不仅出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,也在一定时期内排毒,出现特异免疫反应,这些指标均可作为药物筛选、疫苗评价等方面的重要参数。     

实验恒河猴肺自发病变的组织学观察

目的 了解人工饲养条件下恒河猴脏器自发病变的发生情况，建立恒河猴自发病变的病理图谱。方法 采用常规组织学技术结合特殊染色方法，观察了各个年龄阶段的52只恒河猴肺的组织病理变化。结果 发现84．6％的肺存在不同程度的病变，包括各型肺炎、炎性细胞浸润、坏死、脓肿、结缔组织增生、纤维化等共17种病变。随年龄增长肺病变程度和病变发生率增加。结论 肺脏是恒河猴自发病变较严重的器官之一，自发病变对动物实验的干扰应引起足够重视。     

6 例SARS病理学及病原学观察

目的：探讨SARS病理学特点及病原学与临床的关系。方法：应用透射电镜、光镜、组织化学和免疫学方法对2例1—2周病程早期的SARS死亡尸检病例和4例3—5周病程中晚期的SARS死亡病例进行观察研究。结果：电镜下冠状病毒样颗粒大小为60—220nm，呈多态性，还可见到衣原体样颗粒和疑似支原体样颗粒。SARS早期肺部病理改变为急性弥漫性肺泡损伤，肺水肿，广泛肺透明膜形成，脱屑性肺泡炎及小血管病变。SARS中晚期肺部病理改变以肺泡间质纤维增生和肺泡早期纤维化等机化性肺炎的表现为主要特征，同时有弥漫性肺泡损伤和脱屑性肺泡炎。结论：不同病程的SARS有不同的病理学特征。     

SARS-CoV恒河猴模型动物中组织病理学动态变化

目的在感染的8只恒河猴的SARS-CoV模型动物中,观察肺等组织中出现的系列病理学改变,为针对抗SARS药物筛选、疫苗评价中的免疫病理反应等奠定实验依据。方法SARS-CoV经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第5、7、10、15、20、30和60天,分别安乐处死动物,组织病理取材,制片,观察。结果经病毒分离和RT-PCR证实动物感染是成功的。系列病理改变表明,早期肺组织可见间质性肺炎,水肿、结构破坏、出血,巨噬细胞浸润;后期出现内皮细胞受损及再生,透明膜形成,小血管玻璃样变,肺组织纤维化及肺气肿形成,肺泡网状纤维和弹力纤维破坏并增生等,脾脏、淋巴结生发中心早期有萎缩,后期有恢复等病理学改变均和SARS患者相似。结论感染恒河猴出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,为进一步研究该病毒的病原特性、发病机理、药物筛选、疫苗评价等方面的研究奠定了重要基础。     

11 例SARS患者多脏器损伤临床分析

目的：探讨SARS对人体造成的多脏器损伤，进一步加深我们对SARS的认识。方法：对我院今年4月收治的11例SARS患者进行回顾性研究、分析。结果：11例SARS患者出现呼吸系统损伤；8例出现血液系统损伤；6例出现肝脏损伤；3例出现内分泌系统损伤；3例出现泌尿系统损伤。结论：SARS病毒不同于一般的呼吸道病毒，主要引起肺部损伤，多较严重，同时伴有其他多脏器损伤，但多较轻微，为可逆性。     

SARS冠状病毒感染Lewis大鼠模型的建立

目的 通过观察SARS-CoV感染Lewis大鼠后,病理学、免疫学以及病毒的复制与外排情况变化,探讨其能否作为有效的SARS动物模型.方法 SARS病毒感染9只Lewis大鼠,在感染后不同时间安乐死动物,应用光镜对动物的各脏器进行病理观察研究;用病毒分离和RT-PCR方法检测病毒外排与复制的情况;用ELISA法检测动物产生特异性抗体情况.结果 在SARS-CoV感染Lewis大鼠后,肺组织出现一定的与人类SARS疾病相似的病理改变,在动物体内可检测到活病毒或病毒核酸,并可检测到特异性IgG抗体的存在.结论 Lewis大鼠出现了特异的免疫反应及特征性病理改变,可做为灵长类SARS动物模型的有益补充用于SARS发病机理及疫苗的研发等.     

SHIV-KB9感染中国恒河猴动物模型的建立

目的为了进一步确证SHIV-KB9感染中国恒河猴的病毒浓度范围,测试动物对病毒的适应性,明确该动物模型的可重复性。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查。选出4只无SIV、STLV、SRV/D和B病毒感染的恒河猴,分别用10倍系列稀释的病毒液静脉感染实验猴,使用流氏细胞术、血常规、病毒分离、DNA-PCR和RT-PCR等方法确定实验猴是否被感染,以及感染后恒河猴体内病毒复制和免疫细胞损伤情况。结果实验猴的血浆病毒载量、病毒分离结果、CD4+/CD8+比值和CD4+T细胞数等证实,4.8×105 copies/mL以上浓度的SHIV-KB9病毒液能成功感染中国恒河猴。结论本研究进一步明确了SHIV-KB9感染中国恒河猴的有效病毒浓度范围,确定了SHIV-KB9病毒感染中国恒河猴的病毒学、免疫学的测定指标,成功的建立了SHIV-KB9/中国恒河猴动物模型。     

人工饲养条件下死亡实验恒河猴肠道病理改变特点分析

目的 观察人工饲养条件下实验恒河猴肠道病理改变,探讨实验猴肠道疾病分布规律和病理改变特点,丰富实验猴自发病变基本研究资料.方法 对1998 ～2008年云南地区饲养的自然死亡的155只恒河猴(年龄2～20岁)的肠道进行病理检查,按年龄分为幼年组、成年组、老年组,并对观察结果进行统计学分析.结果 155例恒河猴中58例检出肠道病变,有慢性肠炎、急性肠炎、黏膜充血水肿、出血、糜烂、溃疡、穿孔、寄生虫共8种主要病变,出现率最高的为急性肠炎(20.00％).实验猴不同年龄组肠道病变类型分布基本相同,肠道病变率随年龄增长而增高,不同年龄组间统计学分析差异无显著性.结论 人工饲养条件下死亡实验猴肠道病变检出率较高,急性肠炎是实验猴的主要致死原因之一,实验猴肠道病理改变随年龄增长而病变加重.对实验猴饲养和研究时,应重视肠道病变因素,尤其是急性肠炎.死亡实验猴肠道病变研究对实验猴的质量控制和相关动物实验有重要指导价值.     

SARS肺纤维化发病机制的比较医学研究

目的初步探讨SARS病毒（SARS-CoV）感染动物模型是否适用于SARS肺纤维化发生机制的研究，阐述SARS肺纤维化发生的可能机制。方法用比较医学的研究的方法，将SARS病人肺纤维化的发病特点及可能的机制同目前已经建立的SARS动物模型进行比较。结果不同病种的肺间质纤维化性改变都是从肺泡炎开始，在发展和修复过程中导致的肺纤维化倾向有共同之处。SARS中大约有7．8％的康复者中出现比较严重的肺纤维化后遗症。SARS肺纤维化发生早，病情进展快，病人可于数日内死亡，病理改变严重。SARS-CoV感染动物模型已经建成，出现了拟人SARS的临床、病理学和血清学改变。SARS肺纤维化在模型动物中表现也比较明显，纤维母细胞及胶原纤维明显增多。结论SARS—CoV感染动物模型可以用于SARS肺纤维化发病机制的实验研究。     

SARS病原体的检测及其在动物模型鉴定及疫苗评价中的应用

目的:通过RT-PCR及病毒分离等方法，鉴定SARS感染性动物模型是否成立，并对疫苗效果进行评估。方法:选用3周岁的健康SPF级恒河猴8只，分为SARS实验感染动物模型组及疫苗组(Sino 3 SARS灭活疫苗20030904批肌内注射，免疫2次)。经鼻吸入Sino 1 SARS毒株，病毒攻击后7d动物进行安乐死。自病毒攻击后的第一天起每日连续采集动物咽拭子标本，病毒攻击后的第二天、第五天、第七天采集血浆标本。将标本进行病毒分离及RT-PCR检测．结果：模型组动物病毒攻击后第一天至第七天咽拭子RT-PCR检测均为阳性。注射疫苗组动物仅在病毒攻击后第一天咽拭子RT-PCR检测呈阳性。模型组动物血浆RB-PCR检测呈现阳性，疫苗组动物血浆RT-PCR检测均为阴性。病毒分离结果显示仅在模型动物咽拭子标本中分离到病毒，未在疫苗组动物的咽拭子标本分离到病毒．血浆标本中均未分离到病毒．结论：RT-PCR及病毒分离可以及时有效地检测出病毒在体内的复制情况，可作为模型鉴定、疫苗评估及药物筛选的重要手段。     

大鼠自发性乳腺癌瘤株的建立和病理学研究

[目的]评价重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂对预防治疗SARS-CoV病毒感染恒河猴的作用。[方法]10只恒河猴随机分为2组,每组5只。分别为试验组(重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂)和对照组(空白干扰素)。分别在攻毒前19h和1h,攻毒后7h、23h、31h、47h、55h、71h、95h和119h不同时间经鼻吸入受试物,0.4ml/只。按计划定时取咽拭子做real-timePCR检测和病毒分离;取静脉血做病毒分离检测、中和抗体、IgG、血常规、血生化和血凝指标。[结果]1.SARS感染对照组:全部动物咽拭子标本经real-timePCR均检出SARS-CoV病毒,持续时间从攻毒后2天至8天。攻毒后2天3只、5天1只、7天2只,其咽拭子标本中病毒分离阳性,进一步证实病毒在体内的复制。攻毒后,诱导产生高滴度的抗体和中和抗体,证实病毒感染。大体解剖全部动物肺脏为灰白色,有大面积出血,其中2只动物肺脏与胸壁有粘连,组织病理称典型SARS肺炎性病变。2.干扰素试验组:和对照组相同时间取的咽拭子等标本中,real-timePCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应很弱。血常规、血生化和血凝指标结果表明干扰素试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;大体解剖动物肺脏为灰粉色,4只动物肺脏有少量出血,其中1只动物肺脏与胸壁有粘连,组织病理未见典型SARS肺炎性病变。因而认为,重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断SARS-CoV病毒对恒河猴的感染;;为预防人类感染SARS提供参考。     

人柯萨奇B2病毒感染恒河猴模型的初步研究

目的通过对人柯萨奇B2病毒经口腔感染恒河猴婴猴的感染特征进行初步分析研究,为人柯萨奇B2病毒恒河猴感染模型的建立提供实验方法及技术支持,为后续开展其感染机制、病理生理等研究奠定基础。方法将柯萨奇B2病毒经口腔感染方式感染3～4月龄的恒河猴婴猴,观察记录恒河猴临床症、体温;采集血液检测生理生化指标;血样和疱疹检测病毒;疱疹组织进行病理检测。结果恒河猴感染后2～5 d出现手、足、口疱疹;动物出现精神沉郁、活动及饮食量减少的情况;体温呈现稽留热曲线图;疱疹液和血样中都可检测到柯萨奇B2病毒;血常规检测出现白细胞减少、单核细胞增加、淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加、嗜酸性细胞增加、嗜碱性细胞减少的情况。血液生化检测发现肝功、肾功、心肌酶都发生了不同程度的升高;疱疹组织病理学显示恒河猴疱疹呈鳞状上皮增厚,表面角化过度,局部坏死伴炎细胞浸润,脓肿形成。结论人柯萨奇B2病毒感染婴猴后出现一系列较为特征的手足口疱疹、临床症状、生理生化、病毒血症等情况,表明经口腔感染方式恒河猴婴猴可以成功构建柯萨奇B2病毒感染的动物模型,建立的相关检测方法和技术是可行的,为后续建立开展恒河猴柯萨奇B2病毒感染模型、发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础。     

细胞因子在严重急性呼吸综合征中的作用初步探讨

目的：观察严重急性呼吸综合征(SARS)肺损伤的病理学特点，并对细胞因子在SARS中的作用进行初步的探讨。方法：对5例SARS死亡病例进行尸体解剖，HE染色，观察SARS肺组织的病理改变：采用免疫组织化学SP法检测肺组织Fas、Fas配体(FasL)、转化生长因子β1(TGF-β1)、核转录因子-κB(NF-κBp65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子(VCAM-1)的活性。结果：肺部病变主要表现为弥漫性的肺间质炎症及肺泡损伤，肺泡上皮细胞凋亡脱落及肺透明膜形成，肺间隔明显增宽，以淋巴细胞和单核细胞为主的炎细胞浸润。5例肺组织Fas、FasL、TGF-β1、NF-κBp65、iNOS、ICAM-1、VCAM-1的检测均为阳性，阳性信号分别表达于肺泡上皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞的胞浆及胞核内。结论：SARS患者的肺组织表现为急性肺损伤，细胞因子Fas、FasL、TGF-β1、NF-κBp65、iNOS、ICAM-1、VCAM-1在SARS患者肺组织的损伤中起重要的作用。     

阿尔茨海默病转基因小鼠的研究现状与展望

目前主要的阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease，AD）动物模型，诸如损伤模型、铝模型、D-半乳糖模型、AB模型、叠氮钠模型等。这些模型尽管可以存在部分特征病理改变，但是均不能模拟人类疾病渐进性的退行性改变。日趋成熟的转基因动物（transgenie animal）技术可以在活体上研究某一特定致病基因的作用，是研究AD独特而重要的模型，目前多选用转基因小鼠。现有多种转基因小鼠（transgenic mice，Tg mice）町表达与AD病变有关的基因如APP、APP的C末端片段,tau、PSI,ApoE等，但这些基因突变导致的病例数仅占AD总病例数1％左右。下面本文就近年来AD转基因小鼠模型的基因类型、病理特征、行为学特点、成功模型的鉴定等研究进展作一介绍。     

不同动物SARS病毒携带状况的研究

目的通过对与人类生活密切相关的多种野生、驯化和圈养动物携带SARS样病毒状况的研究，比较与野生动物密切接触人群和健康人群SARS病毒感染率，研究探索SARS病毒的来源。方法于2003年5月起在广东等7个省自治区调查并采集动物咽漱液、鼻拭子和肛拭子样本，进行细胞培养、IFA、荧光RT—PCR检测；分析不同动物携带SARS样病毒状况。结果200只动物样本检出10只动物携带SARS样病毒，其中主要是果子狸(9只、阳性率为7．96％)。l740名人员血清的SARS IgG抗体总阳性率为5．06％，其中野生动物销售人员最高(45．45％)结论研究结果支持SARS病毒来源于动物(果子狸)的假设，并推测SARS病毒能从动物传播给人类。     

猴免疫缺陷病毒感染猕猴淋巴结和脾脏的病理学观察

目的 观察SIVmac251病毒感染猕猴后其脾脏和淋巴结组织的病理学变化,探索猴艾滋病毒感染及猴艾滋病的发病机理.方法 采用SIVmac251病毒感染猕猴,取感染过程中死亡猴以及实验结束存活猴的脾脏和淋巴结进行光镜与电镜观察.结果 光镜观察,见三种淋巴结的病理变化,包括增生型,退化型和耗竭型;电镜观察,淋巴细胞胞质、胞核及静脉内皮细胞胞质内见病毒颗粒和晶格状排列的病毒;脾脏和淋巴结超微损伤以线粒体为主,表现为线粒体增生,肿胀和形态改变(长形巨大线粒体).结论 SIV感染猕猴淋巴结病理改变与人HIV淋巴结病理改变相近,是适于研究艾滋病免疫机理的理想动物模型.首次发现晶格状排列的SIV病毒.