血清HBV DNA与肝组织HBsAg和HBcAg免疫组化检测结果对照

乙型病毒性肝炎在我国发生率较高,人群中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带率高达10%.患者血清乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)和肝组织HBsAg、核心抗原(HBcAg)的免疫组化检测是HBV感染及复制的特异性标志.笔者应用聚合酶链反应(PCR)法检测血清中HBV DNA和肝组织HBsAg、HBcAg的免疫组化检测结果做对照比较,以探讨乙型肝炎患者血清HBV DNA和肝组织HBsAg、HBcAg的复制情况及临床意义.     

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体4的变化及其与IL-6的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血单核细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的变化情况及其意义.方法 用流式细胞仪检测30例健康人(对照组),30例HBV携带者(HBV携带组)和65例CHB患者(CHB患者组)外周血单核细胞表面TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清白细胞介素6(IL-6)的水平.结果 外周血单核细胞TLR4的平均免疫荧光强度,CHB患者组明显高于对照组与HBV携带组(P<0.05),HBV携带组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);自对照组到HBV携带组及CHB患者组外周血IL-6水平依次升高,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05或<0.01);CHB患者组外周血单核细胞TLR4表达水平与血清IL-6表达水平呈显著正相关(r=0.674,P<0.01).结论 TLR4可能与CHB发病有关.     

乙型肝炎患者血清中前S1蛋白、HBcAg及HBV DNA相关性临床研究

目的探讨乙型肝炎患者血清前Si(Pre-S1)蛋白、HBcAg、HBV DNA及HBV其他标志物的关系及临床意义,为评判HBV复制和病情发展提供新的思路与证据.方法对136例乙型肝炎患者血清中HBVDNA应用微板核酸杂交法;HBcAg采用ELISA间接法,两种抗体包被,反应孔内裂解Dane颗粒的酶标技术直接检测Pre-S1及HBV其他标志物同时进行ELISA检测. 结果血清中Pre-S1、HBcAg、HBV DNA检出率在HBsAg、HBeAAg抗-HBc组合中最高,分别为33.3%、74.6%、85.7%,与HBV-M其它组合比较P＜0.01;HBeAg和HBcAg阳性组的HBVDNA、Pre-S1检出率最高(91.7%、39.6%),其次为HBeAb和HBcAg阳性组;HBV DNA阳性组的Pre-S1、HBcAg检出率(27.5%、62.6%)明显高于阴性组(2.2%、8.9%),P＜0.001;Pre-S1阳性血清中HBcAg与HBV DNA检出率为96.4%、89.3%,与阴性组比较P＜0.001及P＜0.05;Pre-S1、HBcAg与HBV DNA检出率在各临床类型患者中,除慢性肝炎HBV DNA检出率高,且统计学意义(P＜.001)外,其它无特异性. 结论血清Pre-S1、HBcAg、HBV DNA和HBeAg均是反映乙肝病毒复制的敏感指标,具有较好的相关性.抗HBe的出现并不表示病毒复制停止,应参考其他病毒复制指标情况.乙型肝炎各临床类型HBV复制指标检出率仅HBVDNA具有特异性.     

乙型肝炎病毒感染患者外周血白细胞介素-18表达水平与乙型肝炎病毒感染的相关性探讨

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血白细胞介素(IL)-18表达水平与HBV感染的相关性。方法选取2018年5月至2019年5月我院收治的HBV患者190例,其中包含HBV携带者33例,急性乙型肝炎组30例,慢性乙型肝炎轻度组42例,慢性乙型肝炎中度组26例,慢性乙型肝炎重度组16例,重度急性肝炎组14例,重度慢性肝炎组29例,并选取同期我院接受健康体检的健康人23名作为健康对照组。分析所有入组人员IL-18水平,分析不同HBV载量患者IL-18表达情况,探讨HBV感染患者外周血IL-18表达水平与HBV感染的相关性。结果与健康对照组比较,急性乙型肝炎组与慢性乙型肝炎轻度组患者IL-18水平明显降低(P<0.05),病毒携带组患者IL-18水平无明显变化(P>0.05),慢性乙型肝炎中度组、重度组、重度急性肝炎组以及重度慢性肝炎组患者IL-18水平明显升高(P<0.05),随HBV感染所导致的肝脏炎症坏死程度加重IL-18水平呈现明显升高趋势;本次研究接受组织病理检测患者43例,其中HBV携带者23例,慢性乙型肝炎轻度组20例,G4分级IL-18水平高于G3、G2、G1以及G0患者(P<0.05),G3分级IL-18水平高于G2、G1以及G0患者(P<0.05),G2分级IL-18水平高于G1以及G0患者(P<0.05);HBV高载量患者IL-18水平低于中载量、低载量组(P<0.05),HBV中载量患者IL-18水平低于低载量患者(P<0.05);经相关性分析显示,外周血IL-18与HBV载量存在负相关性,差异有统计学意义(r=-0.862,P<0.05)。结论外周血IL-18水平与患者HBV载量呈负相关性,可以通过对患者IL-18水平进行分析的方式,了解患者疾病进展情况以及预后情况。     

慢性乙型肝炎肝组织与血清中病毒标志物关系的研究

乙型病毒性肝炎在我国发生率较高,人群中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带率高达10%。患者血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA和肝组织HBsAg、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的免疫组织化学检测是HBV感染及复制的特异性标志。HBV闭合环状DNA(HBV     

CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白胞内转导功能的检测

目的:观察融合蛋白CTP-HBcAg18-27-Tapasin在抗原提呈细胞内的转导功能.方法:体外分离培养近交系BALB/c小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4培养5d,再加入脂多糖诱导DC成熟.不同剂量的CTP-HBcAg18-27-Tapasin及RP-MI-1640培养液加入细胞培养介质中,激光共聚焦显微镜下观察免疫荧光在细胞内的分布及定位,并对荧光强度进行定量分析,进一步以Western blot观察不同组细胞中Tapasin表达的差异来检测CTP-HBcAg18-27-Tapasin的转导效率.结果:成功体外诱导培养并鉴定小鼠骨髓源性树突状细胞,免疫荧光法证实CTP-HBcAg18-27-Tapasin能够穿透树突状细胞膜进入细胞质,而不能进入细胞核,且荧光强度50 μg/L CTP-HB-cAg18-27-Tapasin组依次高于10 μg/L CTP-HBcAg18-27-Tapasin组和空白组,Western blot 也证实CTP-HBcAg18-27-Tapasin能够穿透细胞膜进入树突状细胞,结果显示差异有统计学意义.结论:CTP-HBcAg18-27-Tapasin具有穿透树突状细胞膜定位于胞浆的能力.     

HBV感染相关性慢性肝病中IL-18的表达及临床意义研究

目的分析不同疾病发展阶段慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的外周血IL-18表达以及其临床意义。方法收集HBV感染相关性慢性乙肝病患者共58例作为观察组,并选择同期在我院门诊体检的健康人58例作为对照组,检测并对比分析两组的外周血IL-18以及血清中的HBV DNA含量。结果 HBV感染患者的血清IL-18显著更高(P<0.05);肝硬化与肝癌之间无显著差异(P>0.05);低水平HBV DNA感患者的血清IL-18水平较中、高水平的HBV DNA患者显著更低(P<0.05);血清IL-18水平与HBV DNA、ALT呈正相关(P<0.05)。结论 HBV感染相关性慢性肝病IL-18的表达参与了HBV感染以后的免疫应答,在感染HBV直至发展成为肝癌的整个过程中具有一定的作用,且其表达水平与HBV DNA水平以及肝功能的损伤程度相关。     

不同来源的抗乙肝免疫核糖核酸对慢性乙型肝炎患者的免疫调节作用

目的 探讨HBV感染后乙肝保护抗体抗－HBs产生机体外周淋巴细胞iRNA(h-iRNA)对慢性乙型肝炎的免疫调节作用,并与目前单用HBsAg免疫动物来源的抗乙肝iRNA(a-iRNA)相比较。方法 利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察h-iRNA对慢性乙肝患外周淋巴细胞HBV抗原特增殖反应的影响。结果 在HBsAg刺激组中,h-iRNA,a-iRNA对慢性乙肝患外周HB－sAg特异淋巴细胞增殖反应皆有一定程度的增强作用;但HBcAg刺激组中,h-iRNA对慢性乙肝患HBc-Ag特异淋巴细胞增殖反应具有增强作用,与a-iRNA相比,差异有显性意义。结论 HBV抗原的特异增殖反应,对主要靶抗原HBcAg特异淋巴细胞增殖反应的增强作用,有利于清除肝内HBV。目前单用HBsAg免疫动物的抗乙肝iRNA,不具有对HBV其它抗原的免疫信息,尤其是不能对免疫细胞识别肝细胞内HBV的主要靶抗原HBcAg产生有效免疫作用,可能是影响其疗效的重要原因。     

血清乙型肝炎病毒阴性肾小球肾炎与乙型肝炎病毒感染关系的探讨

目的了解乙型肝炎病毒(HBV)感染与肾小球肾炎的相关性,探讨肾组织中HBV抗原的来源及其与病理变化的关系,以有助于进一步研究HBV相关性肾炎的发病机制。方法应用免疫组织化学(SP)法检测96例血清HBV感染标志阴性,5例血清HBV感染标志阳性肾炎肾组织中的HBV抗原[HBV表面抗原(HBsAg)、HBV核心抗原(HBcAg)],用原位杂交方法检测32例肾炎组织HBV抗原阳性的(包括5例血清HBV感染标志阳性者)中的HBV-DNA。5例肾组织中检出HBV抗原的膜性肾病(其中1例血清HBV感染标志阳性)作透射电镜观察。结果发现血清HBV感染标志阴性肾炎肾组织中HBV标志物沉积与在血清HBV标志阳性肾炎中一致:HBV抗原除在肾小球沉积外,肾小管常有阳性表达,并且肾小管HBcAg阳性率高于其在肾小球中的表达(43.6%vs23.8%)。肾小管HBcAg阳性组的肾组织病变程度明显严重于肾小管HBcAg阴性组,且差异有显著性(P<0.05)。27例血清学阴性肾炎中8例肾组织中HBV-DNA阳性,主要沉积于肾小管上皮细胞质。电镜观察显示,血清HBV标志阴性膜性肾病表现为基底膜弥漫增厚,电子致密物在上皮下沉积及上皮足状突细胞融合;血清HBV标志阳性膜性肾病表现为基底膜不均匀增厚,基膜内小而散在的高密度电子致密物沉积。结论血清HBV感染与肾炎[膜性肾小球肾炎(MGN)、膜增生性肾小球肾?     

HBV感染者IL-18基因转录及其血清中含量测定

为探讨白细胞介素18(IL-18)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的作用,从68例HBV感染者(无症状携带者15例,慢性肝炎35例,重型肝炎18例)和24例健康献血员血液中分离出外周血单个核细胞(PBMC)及血清,应用RT-PCR及ELISA分别对IL-18基因的转录和血清中IL-18的含量进行检测。结果表明,重型肝炎组IL-18基因转录水平高于正常对照组(P<0.01),无症状携带者组低于正常对照组(P<0.05,P<0.01),慢性肝炎组与正常对照组差异无显著意义(P>0.05)。随着病情加重,IL-18水平上升。肝组织炎症活动度不同的慢性肝炎病人之间IL-18基因转录水平及其血清中的含量的差异均有显著意义(P<0.05),肝组织炎症程度越重,IL-18含量越高。结论:IL-18可能参与了宿主对HBV的免疫应答,与肝脏炎症程度相关。     

CpG oligodeoxynucleotide-adjuvanted fusion peptide derived from HBcAg epitope and HIV-Tat may elicit favorable immune response in PBMCs from patients with chronic HBV infection in the immunotolerant phase

The absence or insufficiency of specific immune response results in chronic hepatitis B virus (HBV) infection and immunotolerance. Therapeutic fusion peptide containing hepatitis B core antigen (HBcAg)(18-27) CTL epitope and human immunodeficiency virus (HIV)-Tat(49-57) peptide was synthesized and the activity when adjuvanted with CpG oligodeoxynucleotide (CpG ODN) was evaluated in PBMCs from patients with chronic HBV infection in the immunotolerant phase in this study. Results showed that the fusion peptide when adjuvanted with CpG ODN could induce significantly higher levels of IFN-γ and IL-4 in the PBMCs compared with fusion peptide or CpG ODN alone. The magnitude of augmentation to IFN-γ by the fusion peptide plus CpG ODN was much higher than that to IL-4. Cytotoxicity assay showed that the percentage of target cell lysis by effector cells stimulated by fusion peptide plus CpG ODN was higher than that in fusion peptide or CpG ODN alone at most of the E/T ratios tested. The magnitude augmented to IFN-γ by fusion peptide plus CpG ODN was also much higher than that to the percentage of target cell lysis. It is concluded that HBcAg(18-27) and HIV-Tat(49-57) fusion peptide when adjuvanted with CpG ODN may have much higher potency to induce IFN-γ than to induce IL-4 and cytotoxicity, suggesting the favorable immune response towards noncytolytic inactivation of the virus mediated by IFN-γ and the potential to break the tolerant state in chronic HBV infection.     

乙型肝炎患者治疗前后检测HBV抗原蛋白特异性T细胞的反应

目的探讨HBV抗原蛋白特异性T细胞在乙型肝炎患者治疗前后变化的临床意义。方法收集本院2008年1月至2011年9月的58例慢性乙型肝炎患者进行抗病毒等内科治疗3个月后,检测其治疗前后的外周血单个核细胞,并以HBv特异性抗原蛋白HBsAg、HbcAg和HBeAg为刺激物,酶联免疫斑点检测其分泌1FN-γ产生斑点的情况。同时对血清HBV DNA和HBsAg、HBeAg等病毒学指标及丙氨酸转氨酶(ALT)等生化学指标进行检测。以10例接种过乙型肝炎疫苗的健康人为对照组,均为HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc阴性,抗-HBs阳性。结果治疗前所有患者的HBV-DNA>104拷贝/mL,经过3个月治疗后,45例患者的HBV-DNA的水平降到正常值范围内。结论 HBV抗原蛋白特异性T细胞的反应可能做为乙型肝炎病毒复制和抗乙型肝炎病毒疗效评定实验室敏感指标。     

乙肝患者HBV-DNA载量与外周血T细胞CD127及肝功能的相关性研究

目的通过检测乙型肝炎(乙肝)患者乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量,探讨其与外周血T淋巴细胞表面CD127的表达水平及肝功能的相关性。方法将慢性乙肝病毒(HBV)感染患者64例按疾病类型分为慢性乙肝组43例和乙肝性肝硬化21例,另选择健康体检者20例作为对照组,采用流式细胞术检测乙肝患者及健康者外周血T细胞表面CD127的表达水平,实时荧光定量PCR法检测乙肝患者HBV-DNA并进行分析,同时采用全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平,并对各组检测值进行比较和相关性分析。结果乙肝组CD4+CD127+表达率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。乙肝组CD8+CD127+表达率、ALT和TBIL值及血清HBV-DNA定量显著高于对照组,且乙肝性肝硬化组ALT值显著低于慢性乙肝组,差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。HBV病毒载量的对数值与外周血T淋巴细胞表面CD127的表达呈负相关(r=-0.391,P<0.01),但HBV-DNA载量与肝功能无明显相关性。结论乙肝患者HBV-DNA与外周血T淋巴细胞表面CD127的表达水平明显相关,但与肝功能无明显相关性。     

免疫球蛋白 A肾病病人血清白细胞介素 -17、白细胞介素 -18表达变化与乙型肝炎病毒感染的相关性

目的探讨免疫球蛋白 A(IgA)肾病病人血清白细胞介素 -17(IL-17)、白细胞介素 -18(IL-18)表达变化与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。方法选取 2016年 3月至 2019年 3月南阳市中心医院 224例 IgA肾病病人,其中乙型肝炎病毒感染 67例作为感染组,未感染病人 157例作为未感染组。另选取无肾脏疾病的单纯乙型肝炎病毒感染病人 67例作为对照组。对比三组不同乙肝病毒脱氧核糖核酸( HBV-DNA)载量病人、乙肝表面抗原( HBeAg)阴性及阳性病人血清 IL-17、IL-18水平,分析血清 IL-17、IL-18对 IgA肾病病人 HBV感染的诊断价值及与 HBV-DNA载量、肝功能［谷草转氨酶( AST)、谷丙转氨酶( ALT)］相关性。结果三组血清 IL-17、IL-18水平对比差异有统计学意义( P<0.05),且未感染组 IL-17(12.68±2.13)ng/L、IL-18(360.37±     

Transbody against hepatitis B virus core protein inhibits hepatitis B virus replication in vitro

Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the major causes of chronic liver diseases. The current therapeutics show limited efficacy. In the HBV life cycle, virus core antigen (HBcAg) plays important multiple roles. Blocking the pleiotropic functions of HBcAg may thus represent a promising strategy for anti-HBV replication. In this study, monoclonal antibody (MAb) against core antigen of human HBV was coupled with TAT protein transduction domain (TAT PTD) to form transbody, and the effect on virus replication was evaluated in vitro. The HBV transbody, HBcMAb–TAT PTD conjugate, recognized HBcAg and retained cell-penetrating activity in living cells. In HBV-transfected liver cell line HepG2.2.15, HBV transbody suppressed not only the extracellular HBsAg, HBeAg and HBV DNA, but also the intracellular HBsAg, HBeAg, HBcAg and HBV DNA in a dose-dependent manner. These results indicate that the transbody prepared possesses readily cell-penetrating ability and potent antiviral activity, providing a novel approach, a cell-permeable antibody against HBcAg, for the treatment of HBV infection.     

亚硒酸钠对乙型肝炎病毒的体外抑制作用

目的探讨亚硒酸钠在体外对乙型肝炎病毒(HBV)蛋白合成、DNA复制的影响及机制。方法将不同浓度的亚硒酸钠作用于HepG2.2.15细胞系,通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和HBV DNA水平来评价HBV复制情况;免疫组织化学检测HepG2.2.15细胞p53蛋白的表达情况。结果亚硒酸钠对HBV复制具有抑制作用,随着亚硒酸钠浓度的升高,对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,但对HBsAg的抑制作用要小于HBeAg。细胞内HBV DNA复制水平也逐渐下降(P<0.01)。p53蛋白的分布也发生了改变。结论亚硒酸钠对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg和HBcAg表达、HBV DNA复制均有抑制作用,作用机制与其干扰p53蛋白的表达有关。