低聚体葡萄籽原花青素对顺铂损伤HEK293细胞及抗癌活性的影响

目的：探讨低聚体葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidins extract,GSPE）及其结构单元儿茶素（catechin,C）对顺铂（cis-dichlorodiamineplatinum (II),DDP）损伤HEK293人胚肾细胞的保护作用以及对DDP抗A549人肺腺癌细胞活性的影响。方法：体外培养HEK293细胞和A549细胞,以DDP建立损伤模型,分别用不同质量浓度的低聚体GSPE和儿茶素对细胞进行预处理,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞抑制率和存活率。结果：当低聚体GSPE质量浓度为16 mg/L时,对DDP诱导的HEK293细胞损伤的保护作用最佳,与DDP损伤组相比有显著差异（P＜0.05）,并且在达到此质量浓度时可显著增强DDP对A549细胞的损伤效果（P＜0.05）。相同条件下儿茶素对DDP诱导的HEK293细胞损伤无显著影响（P＞0.05）。结论：体外培养条件下,一定质量浓度的低聚体GSPE对DDP诱导的HEK293细胞损伤具有一定的保护作用,同时能增强DDP对A549细胞的杀伤作用。儿茶素对DDP诱导HEK293细胞损伤的保护作用不明显。     

低聚葡萄籽原花青素对顺铂所致人胚肾细胞线粒体损伤的保护作用

目的:探究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric grape seed proanthocyanidins,O-GSP)对顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)导致的人胚肾细胞HEK293中线粒体损伤的保护作用及其作用机制。方法:通过试剂盒检测O-GSP、CDDP及O-GSP+CDDP处理后细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reaction oxygen species,ROS)含量、细胞质内糖代谢酶(己糖激酶和乳酸脱氢酶)活力和线粒体糖代谢酶(苹果酸脱氢酶)活力变化情况,并采用流式细胞术对各组细胞ATP含量、线粒体膜电位变化以及细胞凋亡率进行检测。结果:O-GSP预处理极显著改善了CDDP引起的细胞内MDA含量升高,还原型GSH、ROS、ATP含量及线粒体膜电位降低和糖代谢异常(P0.01),从而减轻了CDDP诱发的线粒体损伤,对HEK293细胞凋亡有极显著的缓解作用(P0.01)。结论:O-GSP对CDDP所致HEK293细胞线粒体损伤具有拮抗作用,并且该作用与O-GSP的抗氧化活性有关。     

葡萄籽原花青素对顺铂所致人胚肾细胞毒性的拮抗作用

目的：体外研究葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞毒性的保护作用,并探讨其可能的机理。方法：体外培养人胚肾细胞(HEK293),四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察葡萄籽原花青素、CDDP对HEK293细胞生长的影响及葡萄籽原花青素对CDDP所致细胞毒性的保护作用,硫代巴比妥酸法观察葡萄籽原花青素对CDDP引起脂质过氧化的影响,利用二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应,比色定量测定吸光度以观察葡萄籽原花青素对CDDP诱导的谷胱甘肽耗竭的影响。结果：低浓度的GSPE可显著增强HEK293的细胞活性,适宜浓度的GSPE可显著抑制CDDP对HEK293细胞的毒性作用,GSPE可减缓CDDP引起的谷胱甘肽的耗竭。结论：GSPE能抑制CDDP诱发HEK293细胞的细胞毒性,其机理可能与GSPE强抗氧化功能和猝灭自由基的功能有关。     

枸杞多糖对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响

目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum(Ⅱ),CDDP)诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:噻唑蓝法测定CDDP、LBP分别对TM4细胞生长的影响以及LBP对CDDP诱导的细胞毒性的拮抗作用。硫代巴比妥酸法测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。结果:5~100 mg/L LBP可极显著提高TM4细胞存活率(P0.01),20~100 mg/L LBP能够极显著抑制CDDP造成的细胞毒性(P0.01),50 mg/L的LBP保护效果最佳。50 mg/L LBP能够极显著抑制CDDP(12 mg/L)引起的MDA含量升高以及GSH含量和SOD活力降低(P0.01)。结论:LBP能有效拮抗顺铂诱导的TM4细胞氧化损伤,其机制与LBP较强的抗氧化作用有关。     

葡萄籽原花青素对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的拮抗作用

目的： 探讨葡萄籽原花青素（ g r a p e s e e d p r o a n t h o c y a n i d i n , G S P E ） 对顺铂（cis-diamminedichloroplatinum,CDDP）诱导人胚肾细胞HEK293凋亡及相关凋亡基因的影响,并探讨可能的机制。方法：体外培养正常HEK293细胞,噻唑蓝法测定GSPE、CDDP分别对HEK293细胞生长的影响以及GSPE对CDDP诱导HEK293细胞毒性的保护作用,流式细胞仪测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡率的变化,Western blotting测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：GSPE对CDDP所致HEK293细胞毒性具有拮抗作用,可减轻CDDP所致HEK293细胞凋亡,减弱Bax表达、增强Bcl-2表达。结论：GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡具有拮抗作用,其机制可能与GSPE降低促凋亡基因Bax,升高抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

枸杞多糖联合顺铂对人肺腺癌细胞A549氧化损伤及凋亡的影响

目的:探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)联合顺铂(cisplatin,DDP)对人肺腺癌细胞A549氧化损伤、细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:细胞分为对照组、DDP组(6 mg/L)、LBP组(8 mg/L)和DDP(6 mg/L)+LBP(8 mg/L)组,CCK-8法检测DDP、LBP单独及联合用药对A549细胞存活率的影响;黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;流式细胞术检测活性氧(reaction oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡率;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果:LBP能极显著增强DDP对A549细胞存活率的抑制作用(P0.01)。DDP导致A549细胞SOD活力和GSH含量极显著降低(P0.01),MDA含量和ROS含量极显著升高(P0.01)。而LBP联合DDP组与DDP组比较,细胞内SOD活力、GSH含量、MDA含量无显著变化(P0.05),而ROS含量明显降低(P0.01)。一定质量浓度DDP和LBP单独及联合处理均能极显著促进细胞凋亡(P0.01),并且能极显著降低Bcl-2、提高Bax、Caspase-3表达量及Bax/Bcl-2值(P0.01)。结论:LBP与DDP联合作用可明显促进A549细胞凋亡,其机制主要与两者对细胞凋亡相关蛋白表达的调节有关。     

蓝莓花色苷对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用

为探究蓝莓花色苷（BA）对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其机制,通过MTT法测定A549细胞存活率,采用ELISA法检测细胞内丙二醛（MDA）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,采用流式细胞分析仪测定细胞凋亡率,通过RT-PCR技术测定细胞内抗氧化酶和凋亡相关蛋白的mRNA表达量,用免疫印迹法（Western blot）测定凋亡相关蛋白表达量。结果表明：选择H2O2浓度400 μmol/L、处理时间24 h来构建细胞氧化损伤模型。BA质量浓度为30,60,90 mg/mL对A549细胞无毒性作用;BA能显著抑制H2O2造成的A549细胞存活率降低（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡率、MDA和胞内ROS水平（P<0.05）,显著增加GSH-Px、SOD和CAT活性及其相对mRNA表达量（P<0.05）,并显著上调Bcl-2/Bax的比值和下调Cytochrome c、Caspase-9和Caspase-3相对mRNA和蛋白表达量（P<0.05）。BA对H2O2诱导A549细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡通路相关蛋白的表达,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS,降低细胞凋亡率有关。     

枸杞多糖对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的影响

目的：研究枸杞多糖(LBP)对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞(HEK293)凋亡的影响,并探讨其可能机理。方法：体外培养HEK293,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察LBP对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,流式细胞仪检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡率的变化：Western blotting检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：LBP能够拮抗CDDP诱发的细胞毒性,并且随着质量浓度的不同而产生变化。 流式细胞仪检测表明随着LBP质量浓度的增加,细胞凋亡率随之减少;Western blotting表明,加入LBP后能够使Bax基因的表达减少而Bcl-2基因的表达增加。结论：LBP对CDDP诱导人胚肾细胞凋亡有抑制的作用,其作用机理可能与其下调Bax及上调Bcl-2蛋白表达有关。     

低聚葡萄籽原花青素联合顺铂对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响

目的:研究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric?grape?seed?proanthocyanidins,O-GSP)联合顺铂对人肺腺癌细胞A549抗氧化、细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:细胞分为对照组、顺铂(5 mg/L)组、O-GSP(4 mg/L)组、O-GSP(4 mg/L)+顺铂(5 mg/L)组。硫代巴比妥酸法测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide?dismutase,SOD)活力;流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive?oxygen?species,ROS)含量和细胞凋亡率;Western?blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase-3的表达。结果:顺铂导致A549细胞MDA、ROS含量显著升高(P0.05),GSH含量和SOD活力显著降低(P0.05),O-GSP对细胞内MDA含量、GSH含量、SOD活力无显著影响(P0.05)。O-GSP+顺铂组相对于顺铂组,细胞内MDA、GSH、SOD水平无显著性变化(P0.05),而ROS含量明显降低(P0.05)。顺铂、O-GSP以及两者联用均能显著促进细胞凋亡(P0.05),并且能够显著提高Bax及Bax/Bcl-2值,顺铂和O-GSP+顺铂可显著降低Bcl-2的表达(P0.05),同时激活caspase-3。结论:O-GSP联合顺铂可促进A549细胞的凋亡,其机制与O-GSP的抗氧化作用没有显著联系,而是与两者可共同调节凋亡相关蛋白基因表达有关。     

人参寡肽抗苯并芘诱发肺上皮细胞炎性损伤研究

本研究从人参中提取获得人参寡肽,解析其氨基酸序列;利用CCK-8技术筛选保护人肺上皮II型（A549）细胞免受苯并芘（Benzopyrene,Bap）损伤效果最好的寡肽;流式细胞术检测人参寡肽-1（Renshen Oligopeptides-1,RSO-1）在10 μmol/L及50 μmol/L浓度下对浓度为10 nmol/L的Bap导致的A549细胞凋亡、线粒体膜电位降低和活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）含量增加的影响;蛋白免疫印迹验证10 nmol/L浓度的Bap对A549细胞芳香烃受体（Aromatic Hydrocarbon Receptor,AHR）、NF-κB与MAPK信号通路及AP-1因子的影响,并检测了RSO-1在10及50 μmol/L浓度下对Bap毒性的抑制作用。结果表明,10 nmol/L的Bap暴露诱发A549细胞氧化应激（与空白对照组相比具有显著性差异,P<0.05）,激活芳香烃受体（Aromatic Hydrocarbon Receptor,AHR）和NF-κB信号通路并诱发细胞凋亡（与空白对照组相比具有显著性差异,P<0.05）。而浓度为10和50 μmol/L人参寡肽（Ginseng Oligopeptide,RSO,RSO-1~氨基酸序列-EGHGF）均可抑制Bap暴露导致的AP-1因子表达及芳香烃受体（AHR）和NF-κB的激活,从而抑制Bap暴露导致的细胞凋亡（与Bap组相比均具有显著性差异,P<0.05）。本研究对人参的应用及深层次开发提供理论依据。     

葡萄籽原花青素对顺铂所致大鼠肾脏氧化损伤和线粒体损伤的防护作用

本文研究了葡萄籽原花青素(GSPE)对顺铂(CDDP)所致大鼠肾脏氧化应激损伤和线粒体损伤的防护作用。实验大鼠分为正常对照组、CDDP模型组、GSPE(400 mg/kg)组、CDDP+GSPE(200 mg/kg)组和CDDP+GSPE(400 mg/kg)组。各组分别以蒸馏水和相应剂量GSPE对大鼠连续灌胃15 d。灌胃10 d后CDDP组和CDDP+GSPE组一次性腹腔注射CDDP(8.0 mg/kg),其余注射等量生理盐水。检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr E)、肾脏指数、肾皮质抗氧化和碳水化合物代谢酶指标,光镜观察肾组织结构。GSPE预处理的大鼠在注射CDDP后与模型组相比肾脏指数、BUN、Cr E含量显著降低,肾皮质还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和苹果酸脱氢酶(MDH)、己糖激酶(HK)活力的变化明显改善。病理切片显示,GSPE预处理可减轻顺铂引起的肾小球萎缩等病理损伤。提示GSPE对CDDP所致大鼠氧化应激损伤和线粒体损伤具有明显的防护作用。     

顺铂诱发大鼠睾丸毒性的机制及葡萄籽原花青素的防护作用

目的：探究葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidin extracts,GSPE）对顺铂（cis -diamminedichloroplatinum,CDDP）诱发大鼠睾丸氧化损伤和细胞凋亡的防护作用。方法：将40 只大鼠随机分为空白对照组、CDDP模型组、GSPE低剂量组（200 mg/（kg•d））、GSPE高剂量组（400 mg/（kg•d））。分别以蒸馏水和相应剂量的GSPE对大鼠连续灌胃15 d,灌胃10 d后一次性腹腔注射CDDP,剂量为7 mg/kg,空白对照组注射相同剂量的生理盐水。注射CDDP后第5天处死大鼠,检测精子指标、大鼠睾丸组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）与谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）与丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,流式细胞仪检测大鼠睾丸细胞凋亡率,并观察睾丸组织在光镜下形态的变化。结果：CDDP模型组大鼠睾丸和附睾的质量、附睾精子的浓度和活动度、GSH-Px、SOD活力以及GSH含量均显著降低,而MDA水平和睾丸细胞凋亡率显著升高。预防性口服GSPE显著改善了CDDP引起的大鼠睾丸质量减小、功能减弱以及氧化应激、脂质过氧化和细胞凋亡这些不利影响。结论：GSPE对CDDP诱发的大鼠睾丸毒性有剂量依赖性防护作用,其机制很可能与抑制体内氧化应激及细胞凋亡有密切关系。     

枸杞多糖提取物对顺铂诱发大鼠肾毒性的影响

目的：观察枸杞多糖(LBP)对顺铂所致肾毒性的防护作用,并初步探讨其作用机制。方法：将50只大鼠随机分为空白对照组、顺铂(CDDP)模型组、LBP低、中、高剂量组(277、554、1008g/(kg·d))(以体质量计)。空白对照组和CDDP组每天灌胃蒸馏水,LBP组每天灌胃LBP,每日1次,灌胃10d后,空白对照组腹腔注射生理盐水,其余各组一次性腹腔注射CDDP 7.0mg/kg建立肾损伤动物模型,之后继续灌胃5d。腹腔注射后第5天宰杀大鼠,检测大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)的含量、肾组织中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果：给予LBP可显著降低CDDP引起的BUN、Scr、MDA水平升高(P＜0.05或P＜0.01);并能降低CDDP导致的NO含量和NOS活性的升高(P＜0.05或P＜0.01)。结论：LBP经口给予能减轻CDDP所致的肾损伤,其机制可能与其降低NOS活性和MDA、NO含量有关。     

葡萄籽原花青素对顺铂导致H9c2细胞毒性的保护作用

目的：研究葡萄籽原花青素对顺铂诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的影响并探讨其可能机理。方法：体外培养H9c2细胞,噻唑蓝法测定葡萄籽原花青素、顺铂对H9c2细胞生长的影响及葡萄籽原花青素对顺铂所致H9c2细胞毒性的影响,观察细胞的形态变化,并通过检测H9c2细胞及培养液中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量研究其可能机理。结果：葡萄籽原花青素能明显改善顺铂所致H9c2细胞形态变化,并抑制顺铂所致H9c2细胞及培养液中超氧化物歧化酶活性的降低、丙二醛含量的升高。结论：体外培养条件下葡萄籽原花青素能改善顺铂诱导的H9c2细胞的损伤,其作用机制可能与调高H9c2细胞的抗氧化能力有关。     

英国红芸豆抗氧化肽组分对H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

为了探究英国红芸豆抗氧化肽组分的抗氧化作用,采用超滤、葡聚糖凝胶G-15层析技术对碱性蛋白酶酶解英国红芸豆抗氧化蛋白质制备的抗氧化产物进行分级,研究抗氧化活性较高的组分对H₂O₂损伤的PC12细胞的影响。结果表明:抗氧化肽组分BRKBAPC-2能缓解H₂O₂对PC12造成的细胞生长抑制作用,随着肽浓度的提高,细胞内活性氧（ROS）水平,丙二醛（MDA）含量及乳酸脱氢酶（LDH）胞外活力均有所降低,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力以及还原型谷胱甘肽（GSH）含量均具有所提高,尤其BRKBAPC-2浓度为200 μg/mL时,ROS水平为32.53%,MDA含量为0.96 nmol/μg prot,LDH胞外活力为202.12 U/L,与模型组相比,均极显著降低（P<0.01）;SOD活力为（555.48±3.64）U/mg prot,CAT活力为（14.77±1.30）U/mL,GSH含量为（140.88±8.19）μmol/g prot,与模型组相比,均极显著提高（P<0.01）,此外,其可抑制线粒体膜电位的降低,改善细胞周期的阻滞情况,阻止细胞凋亡关键酶Caspase-3和Caspase-9的激活。可见,抗氧化肽组分BRKBAPC-2对H₂O₂引起的PC12细胞氧化损伤具有一定的保护作用。