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相似文献
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1.
本研究旨在利用蛋白酶水解绵羊乳酪蛋白,制备新型血管紧张素转化酶(Angiotensin-I-Converting Enzyme,ACE)抑制肽并对其分子抑制机制进行分析,为功能性绵羊乳多肽乳制品开发提供技术支持。试验以绵羊乳酪蛋白为原料,以水解度、ACE抑制率和分子量分布为评价指标,从四种蛋白酶中筛选最适蛋白酶,选择<3 kDa的组分通过LTQ Orbitrap Velos质谱仪进行肽鉴定,筛选潜在的ACE抑制肽进行人工合成并测定其半抑制浓度(IC50),采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接进一步解释肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶为最佳水解蛋白酶;从κ-酪蛋白中筛选出一种新的ACE抑制肽KYIPIQY,半抑制浓度(IC50)为5.73 μmol/L;Linewaver-Burk图表明该肽对ACE为混合型抑制模式;分子对接显示,KYIPIQY通过与ACE的S1和S2活性口袋形成氢键和疏水作用力发生紧密结合并且可以扭曲ACE的Zn2+四面体,抑制ACE催化活性的失活而发挥高效的ACE抑制活性。  相似文献   

2.
为获得含酪氨酸残基的ACE抑制三肽,借助在线Novopro数据库构建C端为酪氨酸的三肽进行虚拟筛选,得到具有ACE-C结构域选择性抑制的三肽,预测其生物活性、水溶性、肠胃吸收性、代谢和毒性等性质,运用分子对接计算出与血管紧张素转化酶(angiotensin-? converting enzyme,ACE)具有高度亲和力的四种ACE抑制肽RWY、FRY、YRY和RFY并进行体外ACE抑制活性测定,探讨结合位点与作用关系。结果表明,经筛选得到的四种三肽RWY、FRY、YRY、RFY具有明显的ACE抑制活性,IC50值分别为228.67、113.10、272.61、101.00 μmol/L。分子对接虚拟结果显示,RWY、FRY、YRY、RFY均与S1′口袋高度亲和,产生氢键相互作用,其中与S1′口袋结合产生2条氢键的RFY的抑制效果最佳。本文利用生物信息学原理,针对性筛选ACE-C结构域选择性抑制的酪氨酸三肽,为ACE抑制肽的高速筛选提供新的可能性。  相似文献   

3.
采用木瓜蛋白酶和糜蛋白酶双酶联合水解坛紫菜蛋白(Porphyra haitanensis protein,PHP)制备降血压活性肽,测定了经超滤后各个分子质量PHP酶解液清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基能力、铁离子还原抗氧化能力(ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)以及血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性。经质谱鉴定和活性肽数据库BIOPEP以及AHTPDB网站查找筛选活性肽,采用分子对接解释多肽抑制ACE机理,并对双酶酶解PHP动力学进行研究。结果表明:经超滤后的8?个分子质量的坛紫菜多肽组分中,<0.5?kDa的组分具有最高DPPH自由基和ABTS阳离子自由基清除能力,<1?kDa的组分具有最高FRAP值,而0.5~1?kDa组分IC50值((2.21±0.28)mg/mL)最低。经查找筛选出14?条降血压肽,其中4?条肽的序列和对接能量分别为AVP(-5.87?kJ/mol)、GPL(-6.13?kJ/mol)、LDY(-7.65?kJ/mol)和LGYL(-7.78?kJ/mol)。酶解动力学模型预测PHP水解度与实验水解度相对误差在10%以下。本实验基于串联质谱与分子对接技术,通过生物信息筛选和体外活性检测从混合多肽中快速鉴定、筛选活性多肽,探究多肽抑制ACE的机理,并建立了描述蛋白可控酶解过程规律的动力学模型,为活性肽的制备提供了参考和借鉴。  相似文献   

4.
本文利用在线数据库对大黄鱼膜突蛋白虚拟酶解,对所得三肽的生物活性、亲水性、吸收、分布、代谢、排泄、毒性等性质进行预测,通过分子对接预测三肽与血管紧张素转化酶(angiotensin-I converting enzyme,ACE)对接能量,同时对其体外ACE抑制活性测定,并阐明与ACE活性位点的分子作用机制。结果表明,获得四种源自大黄鱼的ACE抑制三肽CMK,GWR,WAK和WQK,其IC50值分别为0.19、2.40、0.40和1.10 mmol/L。分子作用机制表明三肽CMK,GWR,WAK和WQK与ACE的S1口袋关键氨基酸Ala354,Glu384和S2口袋关键氨基酸His353产生相互作用,而且氢键促进三肽与ACE活性口袋的结合。本研究表明来自大黄鱼蛋白的三肽可以被用于开发预防高血压的功能性食品组分。  相似文献   

5.
以大豆粕为原材料,利用超声辅助酶解技术、超滤-?KTA层析相结合的方法分离纯化获取豆粕酶解产物中血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,对其分子质量分布进行研究,后通过质谱分析与分子对接技术鉴定并筛选出ACE抑制活性肽的氨基酸序列,经固相合成肽序列,检测其ACE抑制肽的活性并基于分子对接技术探索其抑制机制。结果表明:经超声辅助酶解提取获得的豆粕肽分子质量主要分布在6 000 Da以下;根据分子对接的最低预测自由能筛选出的GVRP(-8.44 kcal/mol)和IIVTP(-9.04 kcal/mol)可以抑制ACE活性,半抑制浓度(50% inhibitory concentration,IC50)分别为(84±0.06)、(77±0.08)μmol/L;分子对接结果表明:GVRP、IIVTP能够与ACE的活性口袋S1、S1′、S2形成氢键相互作用,共有的过近接触(3.5 ?范围内)ACE氨基酸残基为His513、Ala354和Glu384。本研究基于串联质谱与分子对接技术,建立从混合多肽中快速鉴定、筛选活性多肽的方法,探究活性多肽与ACE稳定结合并体现其ACE活性的抑制机制,为后续的深入研究提供一定参考。  相似文献   

6.
以龙须菜为原料,通过酶解法制备分子量<1 kDa的龙须菜蛋白,分别以冷冻干燥和喷雾干燥收集多肽组分(GLP-F、GLP-S),研究其在体外环境的活性保留率和抗氧化能力。通过血管紧张素转化酶(Angiotensin Ⅰ converting enzyme, ACE)活性抑制、总抗氧化能力、DPPH·清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力等实验测定多肽抗氧化能力及体外稳定性。结果表明,通过ACE抑制活性为指标,两多肽在ACE抑制活性均有较好的IC50值(0.62、0.70 mg/mL),金属离子Zn2+和Cu2+促进两个多肽ACE活性的保留,Al3+、K+、Fe3+等离子均能较好保留两多肽的ACE抑制活性,Ca2+的加入则降低了多肽的ACE抑制活性。随着NaCl浓度的升高,GLP-F和GLP-S的ACE抑制活性降低;高糖浓度下GLP-F的ACE抑制活性较好保留,GLP-S的ACE抑制活性显著增加(P<0.05)。GLP-F在强酸强碱环境下ACE抑制活性略降低5%,GLP-S的ACE抑制活性不受酸碱pH环境的影响;在低于40 ℃的温度条件下,GLP-F和GLP-S的ACE抑制活性得到保留。在模拟体外胃肠消化系统可知:GLP-F为前体型抑制肽,GLP-S为真抑制型抑制肽。?20 ℃条件下两者活性都能保持稳定,而GLP-F在4 ℃贮藏至14 d活性保留降至40.67%。体外抗氧化试验表明,GLP-S在总抗氧化能力、DPPH·、·OH和O2?·清除能力方面均优于GLP-F。因此,GLP-F多肽体外降血压活性稳定性上更优于较GLP-S,而GLP-S在抗氧化方面效用高于GLP-F,此为龙须菜多肽开发为天然降血压肽和抗氧化肽提供理论参考。  相似文献   

7.
对以脱盐乳清蛋白粉为原料的乳杆菌A-2代谢产物中铜离子螯合活性多肽进行分离纯化并进行其抗氧化活性的评价。采用铜离子固定化金属离子亲和层析柱分离,筛选具有铜离子螯合活性多肽,得组分F1、F2、F3,分别经Sephadex G-15凝胶过滤柱层析经进行脱盐分离,得到组分F1-1、F1-2、F2-1、F2-2、F3-1、F3-2,采用ABTS法与抗氧化指数(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)法进行抗氧化活性测定,组分F2-1的清除ABTS阳离子自由基能力IC50值为(3.068±0.15) g/L,组分F3-1的清除ABTS阳离子自由基能力IC50值为(5.510±1.56) g/L;组分F2-1的相对ORAC值为(1 246.59±0.72)μmol TE/g,组分F3-1的相对ORAC值为(518.83±1.15)μmol TE/g。组分F2-1、F3-1与铜离子螯合率分别为(59±1.45)%和(6±0.32)%。结果表明,组分F2-1、F3-1具有铜螯合活性组分,具有良好的抗氧化活性。该实验为...  相似文献   

8.
为进一步提升南瓜籽多肽的ACE抑制活性,利用Plastein反应对南瓜籽ACE抑制肽进行修饰,探究底物质量分数、反应温度、反应时间以及3种外源氨基酸添加量对ACE抑制率的影响。采用超滤和Sephadex G-25柱层析等分离修饰产物,并利用LC-MS/MS鉴定肽序列。结果表明:Plastein反应修饰的最佳条件为底物质量分数45%,反应温度20℃,反应时间3 h;分别添加亮氨酸、苯丙氨酸或甘氨酸均能显著提升修饰产物的ACE抑制率,其中添加0.5 mmol/g亮氨酸时,修饰产物的ACE抑制率最高,比修饰前提高了24.50百分点;经超滤和Sephadex G-25柱层析分离,获得ACE抑制率达89.61%的组分,经LC-MS/MS鉴定出76个肽段,固相合成其中4种多肽IFH、IFF、LAAF、DFHPR,其抑制ACE的IC50分别为1.55、2.24、3.79 mmol/L和7.86 mmol/L。综上,Plastein反应修饰可显著改善南瓜籽ACE抑制肽的ACE抑制活性,经超滤和Sephadex G-25柱层析分离,可获得高ACE抑制活性的南瓜籽ACE抑制肽。  相似文献   

9.
为了优化天山茶藨茎5种黄酮苷元(木犀草素、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、芹菜素)的酸水解提取工艺,评价其体外抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性,本文利用UPLC-MS/MS法测定天山茶藨茎5种黄酮苷元的提取率,通过单因素实验和正交试验优化天山茶藨茎黄酮苷元酸水解提取工艺。利用DPPH、ABTS自由基清除实验测定天山茶藨茎提取物及5种黄酮苷元的抗氧化活性,并测定了其α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,5种黄酮苷元的检出限、定量限分别在0.8~1.6、2.9~5.4 μg/L,在3.2~207.0 μg/L范围内具有良好的线性关系(R2≥ 0.9962),方法的稳定性、精密度和重复性良好(RSD≤4.4%)。确定最佳酸水解提取工艺为:90%甲醇溶液(含5%盐酸)、提取温度:70℃、提取时间:100 min,该条件下,总黄酮苷元提取率为4.06 mg/g,RSD<5%,表明正交试验优化的提取条件稳定可行。天山茶藨茎提取物及5种黄酮苷元均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性,其中甲醇盐酸提取物与5种黄酮苷元的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照阿卡波糖(IC50:53.84±2.41 mg/L),槲皮素对DPPH自由基的清除活性最好(IC50:(2.94±0.18) mg/L),木犀草素、山奈酚对ABTS自由基清除活性较好(IC50分别为(5.34±0.10)、(5.55±0.17) mg/L),它们的抗氧化活性高于阳性对照VC。本研究建立的UPLC-MS/MS方法灵敏、精确、高效,可以对天山茶藨茎5种黄酮苷元化合物同时进行定量分析。优化的酸水解提取工艺能有效提高天山茶藨茎黄酮苷元的提取率。  相似文献   

10.
目的:探究芋头球蛋白体外调节血糖活性。方法:以磷酸缓冲液提取芋头球蛋白,以蛋白质提取率为指标考察了料液比、温度、时间和次数对蛋白质提取的影响,在此基础上采用响应面优化提取工艺。采用DEAE-52离子纤维素柱层析法纯化粗蛋白,通过高效液相色谱法检测纯化所得球蛋白的纯度,并测定其等电点和分子量。研究了芋头球蛋白对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性及抑制动力学,以阿卡波糖为阳性对照,评价其体外调节血糖活性。结果:最佳提取条件为:料液比1:16 g/mL、温度41 ℃、时间124 min,此时提取率为36.75%±0.31%,得率0.70%±0.04%,纯度85.72%±0.47%。纯化后的球蛋白经高效液相色谱检测得一主峰,纯度为93.27%,得率为0.20%±0.01%,等电点pI=5.6,分子量为22 kDa左右。芋头球蛋白对两种酶的抑制活性与蛋白浓度存在量效关系,对α-淀粉酶的IC50为0.75±0.10 mg/mL,对α-葡萄糖苷酶的IC50为(2.09±0.19) mg/mL,而阿卡波糖对α-淀粉酶的IC50为(0.61±0.13) mg/mL,对α-葡萄糖苷酶的IC50为(0.69±0.16) mg/mL,说明芋头球蛋白对α-淀粉酶略低于阿卡波糖,而对α-葡萄糖苷酶抑制活性远低于阿卡波糖,二者的抑制类型均为可逆性的非竞争性抑制,对α-淀粉酶抑制的Ki=(0.61±0.05) mg/mL,对α-葡萄糖苷酶抑制的Ki=(0.26±0.02) mmol/L。结论:本研究优化了芋头球蛋白的提取工艺,纯化得到芋头球蛋白,研究发现其有一定的体外调节血糖的活性,对功能食品的研发和芋头产品提高附加值具有一定的指导意义。  相似文献   

11.
为了研究大蒜降压肽的酶解制备与超滤分离工艺,采用响应面法优化制备工艺,酶解后利用超滤技术获得不同分子量范围的组分并进行ACE抑制活性评价。最佳制备工艺为碱性蛋白酶处理、温度50℃、pH11、底物浓度45 g/L、酶底比3%、酶解时间1 h,该条件下ACE抑制率为83.91%±0.13%,半抑制浓度为(157.87±0.44)μg/mL。分子量3 kDa以下部位活性最为显著(P<0.05),优化后的超滤工艺为操作压力0.25 MPa,温度25℃,溶液浓度4%,此时3 kDa超滤膜的膜通量为7.32 L/(m2·h),ACE的半抑制浓度为(63.27±0.25)μg/mL。氨基酸分析结果表明酸性氨基酸、疏水性氨基酸及天冬氨酸、谷氨酸含量较高,分别为35.78、32.86、21.66、14.12 mg/100 mL,分子量分布显示2000~2500 Da部分最为丰富,占比为49.50%。本研究为大蒜蛋白的开发利用提供了新的思路,具有一定的理论水平和实际应用价值。  相似文献   

12.
为深入挖掘雀嘴茶的利用价值,本文以其中含量丰富的6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸三大酚类成分为研究对象,对其抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性进行分析。结果表明,雀嘴茶三大酚类成分均表现出较好的抗氧化活性,6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸清除DPPH自由基的IC50值分别为13.56±0.14、104.41±6.52和8.42±0.21μg/mL,清除ABTS+自由基的IC50值分别为18.01±0.06、50.60±1.25和26.93±0.38μg/mL,清除OH自由基的IC50值为2.64±0.06、>10.00和<1.00 mg/mL,对铁离子总还原能力的强度依次为绿原酸>CA>β-熊果苷;雀嘴茶三大酚类成分对酪氨酸酶的抑制活性差异较大,CA对酪氨酸酶兼具单酚酶和二酚酶抑制作用,其IC50值分别为1.114±0.035和95.198±1.117μmol/L,β-熊果苷仅有单酚酶抑制作用,IC50...  相似文献   

13.
目的:优化仿刺参抗氧化多肽的酶解工艺,并研究其对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞株EA.hy926损伤的保护效应。方法:以酶解产物的水解度、体外DPPH自由基清除率为指标,筛选出最适蛋白酶;在单因素实验基础上,选取温度、加酶量、pH作为影响因子,以体外DPPH自由基清除率为响应值,结合响应面试验优化酶解工艺条件;进一步探讨酶解多肽体外抗氧化活性。以MTS法检测低、中、高剂量组的仿刺参抗氧化多肽对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,以MDA含量、SOD活力测定细胞氧化及抗氧化水平。结果:动物蛋白水解酶为最适蛋白酶,酶解工艺优化条件为:料液比1:20 g/mL、酶解时间2 h、酶解温度50℃、加酶量7000 U/g、pH7.5,该条件下制备的仿刺参多肽体外DPPH自由基清除率为68.81%,与模型预测值(68.35%),相对误差为1%,回归模型可靠。酶解多肽对DPPH自由基、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)和ABTS自由基(ABTS+·)的半数抑制浓度IC50分别是9.01、0.63、10.89和20.53 mg/mL,说明其具有较好的体外抗氧化活性。选取200 μmol/L浓度H2O2建立细胞损伤模型,与H2O2组相比,中、高剂量组仿刺参抗氧化多肽能明显抑制H2O2诱导的血管内皮细胞氧化损伤,降低MDA含量,提高SOD活力。结论:采用动物蛋白水解酶酶解优化工艺制备的仿刺参抗氧化多肽对人脐静脉内皮细胞EA.hy926具有显著的保护作用并呈显著的剂量-效应关系。  相似文献   

14.
各食用米中活性成分及其抗氧化活性   总被引:2,自引:0,他引:2  
本研究以黑米、白糯米、大米、黄米、糙米、香米、玉米、薏米、西米、高粱米10种常见食用米为研究对象,测定其总黄酮、总酚含量及其体外抗氧化活性。结果显示供试食用米品种间的总酚和总黄酮含量分别在2.61~287.61 mg/g和3.79~175.43 mg/100 g之间,黑米总酚、总黄酮含量最高(分别为287.61±18.38 mg/g和175.43±3.25 mg/100 g),西米的含量均最低(分别为2.61±0.04 mg/g和3.79±0.06 mg/100 g);黑米乙醇提取液的总抗氧化能力(354.18 U/g)和总还原力(吸光度为2.91)最强,大米提取液的总抗氧化能力(4.62 U/g)最弱,而西米的总还原力(5倍稀释时吸光度为0.11)最弱;黑米对DPPH·的清除能力最高(当加入量为2 μL时清除率为50%,IC50=2 μL),西米的清除能力最弱(当加入体积大于105 μL时清除率为50%,IC50>1×105 μL);黑米对·OH的清除能力最高(IC50=250倍稀释),西米的最低(IC50=1.71倍稀释);黑米对NO2-的清除能力最高(IC50=500倍稀释),玉米为最低(IC50=2.97倍稀释);西米和糯米对O2-·的清除能力最高(IC50>105倍稀释),玉米最低(IC50=2.467倍稀释)。综合比较发现黑米具有较丰富的生物活性物质,抗氧化活性相对较好,本研究为进一步开发功能性米类产品提供一定的理论基础。  相似文献   

15.
以金枪鱼皮为原料,超声预处理后酶解制得高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,研究ACE抑制肽的模拟胃肠道消化稳定性,并对消化产物进行分离纯化和鉴定。结果表明,超声处理后不同酶解时间酶解液的ACE抑制活性均有所提高;超声预处理20、40 min后,酶解5 min酶解液的消化产物的ACE抑制活性显著高于其他组(p<0.05)。采用葡聚糖凝胶G-15对E5U20和E5U40进行分离纯化,两组酶解液均可分离为3个组分,其中E5U20组组分2的IC50值最小为0.393 mg/mL。采用半制备高效液相色谱对E5U20组分2进行分离纯化,得到8个组分,其中峰3的IC50值最小为0.102 mg/mL。通过质谱法对峰3进行鉴定,测得峰3序列为GPSGPPGP,来源于α1肽链第842~849的位置,符合高ACE抑制活性的多肽构效特点,目前尚无该氨基酸序列的报道。  相似文献   

16.
以富硒辣木叶为原料提取富硒辣木叶蛋白,通过单因素实验和响应面优化富硒辣木叶蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备工艺,并对最优酶解物的ACE抑制活性、氨基酸组成和硒含量进行分析表征。结果表明,富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的最佳酶解条件为时间3 h,pH7.5、酶底比0.23%、底物浓度5.97%、温度39.2 ℃。该条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制活性较强(IC50=0.522 mg/mL),富含必需氨基酸(24.05%)和疏水性氨基酸(20.6%),其硒含量是辣木叶原料中硒含量的1.86倍。富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽具有功能因子和天然食物的双重特性,此研究可为降血压药物及相关功能性食品的开发提供理论依据。  相似文献   

17.
采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)测定爪哇香茅(Cymbopogon winteranus)、柠檬草(C. citratus)和芸香草(C. distans)三种植物精油的化学成分,并通过DPPH法及炎症因子NO生成量检测法评价这三种植物精油的抗氧化活性和抗炎活性。结果表明,三种香茅属植物精油化学成分以萜类物质为主,含量为76.35%~90.52%,其中萜醛、萜醇类物质含量最高。爪哇香茅、柠檬草和芸香草的主要成分分别为(+)-香茅醛(37.85%)、反式柠檬醛(36.12%)和香叶醇(34.76%);三种香茅属植物精油的DPPH自由基清除能力呈一定的剂量依赖性,但与阳性对照抗坏血酸(IC50值为(0.005±0.002) mg/mL)相比,抗氧化活性较差;在较低浓度(2~4 μg/mL)时,香茅属植物精油减少LPS致炎模型的NO生成能力与10 μmol/L地塞米松(Dexamethasone,Dex)相当,表明这三种香茅属植物精油具有良好的抗炎活性,其中柠檬草(IC50值为(0.472±0.121) μg/mL)的抗炎活性最好,其次为爪哇香茅(IC50值为(0.632±0.147) μg/mL)和芸香草(IC50值为(0.669±0.131) μg/mL)。因此,三种香茅属植物精油具有较大的开发潜力开发成抗炎药物和抗炎功能产品。  相似文献   

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