不可逆电穿孔消融技术治疗兔肌肉VX2移植瘤的研究

目的:通过观察不可逆电穿孔（irreversible electroporation,IRE）消融技术应用于治疗兔肌肉VX₂移植瘤的疗效及安全性,以期为该技术应用于临床提供可靠的实验依据。方法:建立兔肌肉VX₂移植瘤模型（10只）,随机分为IRE治疗组（8只）和对照组（2只,不予以IRE治疗）。分别于IRE治疗的当日处死对照组的兔子、治疗后第1、3、5和14天时分批处死IRE治疗组的兔子（每组2只）,同时收集血浆和血清;肿瘤组织行HE染色,并采用免疫组织化学法检测Bcl-2、热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在肌肉VX₂移植瘤中的表达情况;应用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡的情况;ELISA法检测血浆中caspase 3、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和VEGF的分泌情况,以及血清中实验兔肝肾功能指标、肌酸激酶-MB同功酶（creatine kinase-MB isoenzyme,CK-MB）及心肌肌钙蛋白Ⅰ（cardiac troponinⅠ,CTnⅠ）的表达水平。结果:HE染色结果显示,IRE治疗组中治疗区域和正常组织区域边界清晰,IRE治疗后第3天时,移植瘤组织的边缘区可见大量红细胞以及炎性细胞的浸润,第14天时术区肌肉组织出现纤维化。ELISA法检测结果显示,IRE能有效地增加兔子机体中caspase 3和TNF-α的分泌水平（P值均<0.01）,而降低VEGF的分泌水平。同时IRE治疗后,能够降低术区肿瘤组织中Bcl-2和VEGF的阳性表达率（P值均<0.01）,但HSP70的表达水平不一。TUNEL检测结果显示,IRE治疗组移植瘤组织中细胞的凋亡率明显增加。术后实验兔的肾功能未见明显异常,谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、谷丙转氨酶（alanine transaminase,ALT）以及CK-MB的表达水平有不同程度的升高,但CTnⅠ的水平未见升高。结论:IRE能够通过诱导细胞凋亡、产生特异的抗肿瘤免疫效应及抑制血管生成来抑制肌肉移植瘤的生长,是一种安全且有效的肌肉肿瘤局部治疗的微创手段。     

EGCG通过下调Bcl-2、NF-κB(p65)表达,活化Caspase-3诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨EGCG诱导移植瘤细胞凋亡作用的分子机制. 方法:建立人胃腺癌(SGC7901)细胞裸鼠异种移植瘤模型,用不同剂量的EGCG进行治疗,并设对照;采用TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况. 结果:EGCG对移植瘤生长有明显抑制作用;TUNEL法发现EGCG导致移植瘤内细胞发生凋亡;Western blot分析表明EGCG能下调NF-κB(p65)蛋白的表达,促使Bax/Bcl-2蛋白表达的比值增高,并且可以促进Caspase-3的活化. 结论:EGCG对人胃癌细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,并能诱导移植瘤细胞凋亡.其机制可能与通过NF-κB(p65)的下调,促使Bax/Bcl-2比值增高,进而导致Caspase-3的活化而诱导细胞发生凋亡相关.     

三氧化二砷对裸鼠宫颈癌移植瘤的作用及机制

摘要：目的研究三氧化二砷 (arsenic trioxide,ATO,As2O3)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的作用及机制。方法建立裸鼠移植瘤模型,分为低浓度As2O3组［2mg/（kg·d）］,高浓度As2O3组［5mg/（kg·d）］,顺铂（DDP）组［3mg/（kg·d）］及阴性对照组（0.9%氯化钠0.2ml/d）,连续给药10d,观察抑瘤率及药物对裸鼠的影响。透射电子显微镜观察肿瘤的超微结构,免疫组织化学检测p-P38和Caspase-3的表达。结果低浓度As2O3,高浓度As2O3 及DDP的抑瘤率分别为22.95%、54.86%和54.48%,后两者的抑瘤率与阴性对照组的差异有统计学意义（P<0.05),但DDP的不良反应大。p-P38和Caspase-3在As2O3组的表达明显高于阴性对照组（P<0.05)。结论As2O3可通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制宫颈癌移植瘤的生长。     

RNA干扰沉默DcR3对人胰腺癌细胞裸鼠移植瘤放疗增敏的实验研究

摘 要：［目的］探讨RNA干扰沉默DcR3对人胰腺癌细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响及其可能机制。［方法］ 取对数生长期的AsPC-1细胞 1×107/ml,接种于6周龄裸鼠左后肢腹股沟,当皮下肿瘤直径为8mm左右时,随机分为4组(n=15)：PBS组、DcR3siRNA组、放疗组（RT）和DcR3siRNA+放疗组（DcR3siRNA+RT）,观察DcR3siRNA联合放疗对人胰腺癌AsPC-1细胞裸鼠移植瘤的治疗效果;应用ELISA和Western blot检测各组DcR3的蛋白表达变化;免疫组织化学和Western blot分析各组Caspase-8和Caspase-3蛋白表达的变化;TUNEL检测各组肿瘤细胞凋亡情况。［结果］ DcR3siRNA+RT组较其他各组更能抑制移植瘤的生长,DcR3-siRNA+RT对肿瘤的抑制率明显高于单纯RT组,与RT组相比,DcR3siRNA+RT组的抑瘤率为80.86%±4.17%;DcR3siRNA+RT组的DcR3蛋白量和蛋白相对表达均明显低于RT组,差异有统计学意义(P＜0.05);DcR3siRNA+RT组的Caspase-8和Caspase-3蛋白表达均明显高于单独RT组;DcR3siRNA组、RT组以及DcR3-siRNA+RT组肿瘤组织内均可观察到凋亡细胞,而DcR3siRNA+RT组肿瘤细胞凋亡数目明显高于RT组或DcR3siRNA组。［结论］RNA干扰沉默DcR3基因可以增加人胰腺癌细胞裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,该作用可能与沉默DcR3可激活Caspase-8/Caspase-3凋亡途径和促进肿瘤细胞凋亡有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌细胞裸鼠移植瘤凋亡的研究

背景与目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)诱导人胃癌细胞裸鼠移植瘤凋亡及分子机制。方法建立人胃腺癌(SGC7901)细胞裸鼠异种移植瘤模型,用不同剂量的EGCG进行治疗,并设对照,用流式细胞分析术检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测肿瘤组织的凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果裸鼠异种移植瘤治疗实验结果显示,EGCG对移植瘤生长有明显抑制作用(其中20mg/kg、EGCG抑制率54.64%与对照组比较P<0.05);PI染色FCM分析发现,EGCG20mg/kg能诱导移植瘤细胞凋亡率17.2%与对照组比P<0.05;SP免疫组织化学结果表明EGCG可上调移植瘤细胞中Bax、Caspase-3蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有体内诱导人胃腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2/Bax比值降低导致Caspase-3的活化从而启动细胞凋亡有关。     

穿心莲内酯体内诱导人胃癌BGC823细胞凋亡作用及机制探讨

目的:探讨穿心莲内酯的体内抗肿瘤作用和诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:选取体质量18～20g的6周龄雌性BALB/C裸鼠制备裸鼠移植瘤模型,用400、200和100mg/(kg.d)穿心莲内酯进行体内药敏实验,测定肿瘤生长抑制率,透射电镜形态学观察,RT-PCR和免疫组织化学检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:穿心莲内酯对裸鼠移植瘤有明显的抑瘤效应,低剂量组的抑瘤率为22.2%(P=0.029),中剂量组为44.7%(P=0.009),高剂量组为57.8%(P=0.007),且抑瘤率随剂量增加逐渐增高。光镜和电镜下可见细胞凋亡形态改变。穿心莲内酯低、中、高剂量分别作用14d后,Caspase-3水平均逐渐增加,与阴性对照组(0.71±0.14)比较,低剂量为1.04±0.19(P=0.034),中剂量为1.55±0.34(P=0.008),高剂量为1.89±0.36(P=0.005),并呈剂量依赖性关系;同时,随着药物剂量的增加,肿瘤细胞质的Bax蛋白表达逐渐增加,与阴性对照组(0.179±0.042)比较,低剂量为0.248±0.055(P=0.04),中剂量为0.310±0.051(P=0.032),高剂量为0.337±0.050(P=0.021);Bcl-2蛋白表达逐渐降低,与阴性对照组(0.353±0.066)比较,低剂量为0.291±0.032(P=0.035),中剂量为0.241±0.036(P=0.024),高剂量为0.218±0.042,P=0.018。结论:穿心莲内酯对裸鼠移植瘤有显著的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达、引起Caspase-3的活化进而诱导细胞凋亡有关。     

白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞体外增殖抑制及凋亡作用的研究

摘 要：［目的］ 探讨白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞体外增殖抑制作用及凋亡机制。［方法］ MTT法检测白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制率,Annexin-V-FITC/PI 双染法和Hoechst法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Survivin、Bax、Caspase-3蛋白表达。［结果］ 不同浓度白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞具有抑制增殖作用,呈时间浓度依赖性（P＜0.05）。8ml/L白花蛇舌草注射液能明显诱导CNE-2细胞凋亡,与对照组相比,具有统计学意义（P＜0.05）。8ml/L白花蛇舌草注射液能诱导CNE-2细胞Bcl-2、Survivin蛋白表达降低、Bax及Caspase-3蛋白表达增加。［结论］ 白花蛇舌草注射液对鼻咽癌CNE-2细胞具有明显的体外增殖抑制作用,且呈时间浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低Bcl-2、Survivin蛋白表达,增加Bax及Caspase-3蛋白表达有关。     

NDV7793对小鼠肺腺癌皮下移植瘤组织CCL21/CCR7表达的影响

摘 要：［目的］研究NDV7793影响小鼠肺腺癌皮下移植瘤CCL21/CCR7表达来抑制小鼠肺腺癌皮下移植瘤转移的机制。［方法］建立小鼠肺腺癌皮下移植瘤模型。用PBS、顺铂和NDV7793给药对移植瘤进行治疗,每两天给移植瘤瘤内注射1次,一共进行5次注射。11d后杀死小鼠取出移植瘤。观察小鼠胸腔有无肿瘤转移,免疫组化检测移植瘤癌旁组织有无肿瘤细胞浸润,流式细胞术检测移植瘤细胞CCR7表达水平,ELISA检测移植瘤CCL21和CCL19。［结果］ PBS阴性实验组免疫组化实验结果显示移植瘤癌旁组织出现明显肿瘤细胞浸润。NDV7793组免疫组化实验结果显示移植瘤癌旁组织未发现有肿瘤细胞浸润。流式细胞术检查发现,NDV7793实验组的CCR7相对于PBS阴性组及顺铂阳性对照组明显降低。ELISA实验显示,NDV7793组CCL21表达水平高于PBS阴性对照组（P=0.049）及顺铂阳性对照组（P=0.046）,差异具有统计学意义。PBS阴性组、NDV7793组及顺铂阳性对照组CCL19水平差异无统计学意义。［结论］ NDV7793在治疗小鼠肺腺癌皮下移植瘤上,可通过上调CCL21和下调CCR7来抑制肺腺癌细胞的浸润和转移。     

FTY720抑制裸鼠人肝癌细胞系MHCC-97H移植瘤生长的实验研究

目的 探讨不同浓度FTY720对裸鼠人肝癌MHCC-97H移植瘤的抑制作用。方法建立裸鼠肝脏的人肝癌细胞系MHCC-97H移植瘤模型,然后腹腔注射不同浓度的FTY720,治疗1个月后观察肿瘤的抑制效应,采用免疫组化法检测肿瘤细胞的增殖细胞水平。结果FTY720治疗组（5mg／kg和10mg／kg）能明显抑制肿瘤的生长,尤以10mg／kg更显著．FTY720治疗组的P13K—Akt信号通路被抑制,Caspase-3表达水平上调,提示FTY720明显促进肿瘤细胞凋亡。结论免疫抑制剂FTY720是1种有效抑制肝脏移植瘤的抗肿瘤分子,其可能与抑制P13K—Akt信号通路、上调Caspase-3表达水平,进而诱导细胞凋亡密切相关。     

TAT-OSBP-MKK6（E）抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤恶性生物学行为的研究

目的 探讨TAT-OSBP-MKK6（E）对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长、侵袭及转移等恶性生物学行为的影响。方法 18只裸鼠随机分为实验组［TAT-OSBP-MKK6（E）］、阴性对照组［TAT-OSBP-MKK6（E）+SB202190］和空白对照组（生理盐水）,每组6只,细胞接种法建立人卵巢癌腹腔移植瘤模型,每2天测量腹围。4周后解剖裸鼠,观察裸鼠成瘤情况,测定腹水量,统计肿瘤播散器官数及瘤结节数,称量瘤体重量并计算抑瘤率。采用HE染色分析移植瘤的病理形态学特点;采用TUNEL法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（AI）;免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达;Western blotting检测各组移植瘤组织中p38蛋白表达。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,实验组裸鼠腹围增长明显滞后（P＜0.05）,腹水量明显减少（P＜0.05）,肿瘤播散器官数、瘤结节数及瘤体重量均明显减少（P均＜0.05）,抑瘤率达70.99％。实验组的AI为（20.44±1.20）％,显著高于阴性对照组的 （4.94±0.24）％和空白对照组的（4.00±0.79）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组VEGF蛋白的阳性表达率为21.2％,显著低于阴性对照组的81.4％和空白对照组的85.7％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组p38蛋白的相对表达量为0.40±0.01,显著高于阴性对照组的0.22±0.01和空白对照组的0.20±0.01,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 TAT-OSBP-MKK6（E）能显著抑制人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的生长、侵袭及转移。