干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究干扰素-α对人肝癌SMMC7721细胞的增殖及迁移的抑制作用,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法:常规培养的人肝癌SMMC7721细胞,加入干扰素-α孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化,通过Annexin V-FITC检测干扰素-α诱导SMMC7721细胞组的凋亡情况。结果:干扰素-α可以明显抑制体外SMMC7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡,导致Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显下降。结论:干扰素-α可以直接抑制体外肝癌细胞SMMC7721的增殖和迁移并诱导细胞凋亡。     

干扰素对U937细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨干扰素α对白血病U937细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法 以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的U937细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR—ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 干扰素α可显的降低U937细胞端粒酶活性，抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论 干扰素α能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡，降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

蜈蚣酸性蛋白对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响

目的 研究蜈蚣酸性蛋白(CAP)对血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响及机制.方法 在培养原代乳鼠心肌细胞的基础上,通过MTT法观察CAP对培养心肌细胞活力的影响;采用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况;使用半胱胺酸-天门冬胺酸酶(caspase-3)活性检测试剂盒,分光光度法检测心肌细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化;并采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定相关基因c-fos mRNA表达.结果 AngⅡ模型组与空白对照组比较,心肌细胞活力明显降低,凋亡明显增加;Caspase-3活性显著增加;c-fos mRNA的表达显著增加.CAP高、低剂量组与AngⅡ模型组比较,心肌细胞活力明显增加,凋亡明显降低;Caspase-3活性显著降低,c-fos mRNA的表达显著降低.结论 CAP对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制与降低Caspase-3活性以及下调c-fos mRNA表达有关.     

激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V/PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡

目的激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V／PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡的形态。方法对不同剂量含药血清处理的体外培养人肺癌PGLH7细胞株进行Annexin V／PI双染,激光共聚焦显徽镜观察细胞凋亡的形态特征。结果Annexin V／PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察,经含药血清作用的人肺癌细胞ee,凋亡早期细胞呈AnnexinV高染而PI低染,细胞膜呈绿色而细胞核不着色;凋亡中、晚期细胞则AnnexinV和PI均为高染,细胞膜呈绿色而细胞核呈红色;部分细胞的核呈碎片状或梅花状,为典型的细胞凋亡形态。结论FITC—AnnexinV／PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞是目前观察凋亡的理想方法,特别适用于凋亡细胞的早期检测。     

野西瓜多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的观察野西瓜多糖诱导人肺癌HepG2细胞凋亡作用。方法通过MTT法测定野西瓜多糖对HepG2细胞的细胞毒作用;倒置显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;PI染色法,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示野西瓜多糖对HepG2细胞有抑制作用,IC50为471.53mg/L;倒置显微镜、激光共聚焦扫描显微镜下观察细胞形态,表现为细胞皱缩、碎裂、甚至出现凋亡小体;流式细胞术检测到野西瓜高剂量组凋亡率为74.926%。结论野西瓜多糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用。     

体外培养过程中软骨细胞凋亡与Caspase-3基因表达的关系

目的:探讨软骨细胞在体外培养过程中或药物诱导下细胞凋亡与细胞表达Caspase-3之间的关系,TNF-α和Cycloheximide(CHX)诱导凋亡的软骨细胞,检测Caspase-3基因表达及细胞凋亡,为阻断细胞凋亡寻找理想的作用靶点;为增加软骨组织工程种子细胞的产量提供理论依据和新策略;为临床耳廓成型及修复提供新的材料来源。方法:①胎儿软骨细胞常规分离培养;不同浓度TNF-α+CHX组合诱导软骨细胞凋亡。②MTT法测定细胞生长曲线;TUNEL法和DNA片段化检测细胞凋亡。③所得数据用SPSS软件包分析。结果:①经不同浓度的TNF-α+CHX诱导体外培养的软骨细胞,流式细胞术和TUNEL法检测出细胞凋亡,凋亡指数在18.4%～67.9%之间。②TUNEL法和比色法检测分别显示诱导后凋亡发生时,不同代次软骨细胞Caspase-3基因表达和蛋白表达均比对照组有显著上升。结论:体外培养软骨细胞通过诱导凋亡,观察到凋亡发生时,Caspase-3基因和蛋白表达均出现显著上升。为体外规模培养工程细胞提供了阻滞凋亡的分子靶点。     

外源性一氧化碳对体外培养的SH-SY5Y细胞的影响

目的 研究不同浓度的外源性一氧化碳(CO)对体外培养的神经细胞SH-SY5Y的影响,进一步探讨CO中毒脑损伤的机制.方法 SH-SY5Y细胞在含有不同浓度CO的装置中培养12 h,然后用MTT法检测细胞存活率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,用荧光酶标仪测定caspase-3的活性,并用Western印迹的方法 检测Bax蛋白的表达水平.结果 1000、10000 ppm CO处理SH-SY5Y细胞12 h后显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率分别达29.03%和41.67%;激光共聚焦显微镜结果 细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高;线粒体膜电位明显降低,红/绿荧光强度的比值由正常的5.97分别降低为1.56±0.07和0.34±0.02;而且细胞中Bax蛋白表达水平显著升高.而100 ppm CO对体外培养的SH-SY5Y细胞的存活率、caspase-3的活性、活性氧水平、线粒体膜电位以及Bax蛋白的表达无明显影响.结论 高浓度的外源性CO(1000、10 000ppm)对体外培养的SH-SY5Y细胞造成损伤,具有明显的细胞毒性;而低浓度的CO(100 ppm)对SH-SY5Y细胞没有明显的损伤作用.     

TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞凋亡Caspase-3活性的研究

目的：探讨凋亡“核心蛋白酶”-半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)凋亡中的作用。方法体外培养HPMVECs,空白对照组置于CO2培养箱中常规培养, TNF-α组分别以10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL浓度刺激HPMVECs,使用MTT比色法检测各组细胞活性,AnnexinⅤ/PI双染色联合流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果空白对照组的细胞凋亡率及Caspase-3活性最低;空白对照组和TNF-α组(10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL)比较,100 ng/mL TNF-α组的相对细胞活性最低,而细胞凋亡率及Caspase-3活性最高,TNF-α诱导HPMVEC凋亡时呈现出浓度依赖性,随着时间的延长,Caspase-3活性逐渐升高(P<0.05)。结论 TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞凋亡呈现浓度依赖性,Caspase-3可能参与了这一细胞凋亡过程的调控。     

α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞株U937细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)细胞U937细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting检测cyclinA2和cyclinD1蛋白质表达。结果α-干扰素和(或)脂多糖组较对照组能显著地抑制U937细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05);α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素、脂多糖组能显著抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05),能够显著下调CyclinA2蛋白质表达、上调CyclinD1蛋白质表达(P<0.05)。结论α-干扰素与脂多糖对U937细胞的增殖抑制、细胞凋亡和G1期细胞的比例有协同增强作用,其机制可能与细胞周期素Cy-clinA2、CyclinD1蛋白的调节有关。     

创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人Jurkat-T淋巴细胞凋亡的研究

目的：探讨创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVvhA）对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的作用及凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。方法：利用基因工程方法体外表达、制备和纯化rVvhA;MTT法检测rVvhA对Jurkat T淋巴细胞的细胞毒活性影响;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测rVvhA诱导Jurkat T淋巴细胞凋亡情况;Hochest33258荧光染色激光共聚焦显微镜观察rVvhA诱导Jurkat T细胞核形态的改变;分光光度法检测凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。结果：纯化复性后rVvhA的纯度达到92%以上;MTT结果显示rVvhA活性蛋白能显著抑制Jurkat T淋巴细胞的生长,有效浓度为1.5 HU/mL;流式细胞仪和激光共聚焦检测发现rVvhA作用后Jurkat T淋巴细胞核固缩,产生亮蓝荧光,1.5 HU/mL rVvhA,作用4 h后即可有效诱导其凋亡,凋亡率为（39.13±3.33）%,对照组为（3.43±0.34）%,且能被Caspase全酶抑制剂一定程度抑制。1.5 HU/mL rVvhA作用Jurkat T淋巴细胞3 h,Caspase-3酶活性达到高峰。结论：rVvhA能损伤人Jurkat T淋巴细胞,诱导其发生细胞凋亡,Caspase-3可能在rVvhA诱导的Jurkat T细胞凋亡过程中起重要作用。     

尼美舒利对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作斥及其机制研究

目的探讨尼美舒利体外抗宫颈癌的活性及相关机制。方法采用体外培养的Hela细胞株为研究对象,MTT法检测尼美舒利对Hela细胞的抑制率．倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变,Westernblot检测细胞凋亡关键蛋-环氧化酶-2（COX-2）、Caspase-3的表达变化。结果尼美舒利可显著抑制Hela细胞增殖,形态学观察发现尼美舒利可诱导肿瘤细胞凋亡;尼美舒利还可抑制Hela肿瘤细胞COX-2表达,引发Caspase-3促凋亡蛋白Caspase-3高表达。结论尼美舒利具有明确的抑制宫颈癌细胞的作用,其机制之一可能是通过抑制COX-2引发肿瘤细胞的凋亡。     

γδT 细胞对卵巢癌 SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的：探讨γδT细胞对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用,阐明γδT细胞诱导卵巢癌细胞凋亡的可能作用机制。方法：将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞设为对照组,将体外分离培养且与γδT细胞共培养72h的卵巢癌SKOV3细胞设为γδT细胞处理组,于激光共聚焦显微镜下观察2组中SKOV3细胞核形态学变化,采用MTT法检测2组SKOV3细胞增殖抑制率,利用Transwell小室检测细胞迁移能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：激光共聚焦显微镜下,γδT细胞处理组SKOV3细胞出现核皱缩等细胞凋亡的形态学改变较对照组明显;MTT法检测,γδT细胞处理组SKOV3细胞增殖抑制率高于对照组（P<0.05）;Transwell小室检测,γδT细胞处理组SKOV3细胞穿膜细胞数少于对照组,细胞的迁移率低于对照组（P<0.05）;流式细胞术检测,γδT细胞处理组SKOV3细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）。结论：γδT细胞能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖及迁移能力,促进细胞凋亡。     

积雪草苷通过Vimentin/NLRP3通路诱导鼻咽癌细胞凋亡研究

目的研究积雪草苷对人鼻咽癌CNE-2细胞生长、凋亡及凋亡通路的影响。方法体外培养CNE-2细胞,将不同浓度的积雪草苷作用于CNE-2细胞,MTT和CCK-8法检测积雪草苷对细胞生长的影响;流式细胞术检测对细胞凋亡的影响;Western blotting检测Vimentin、NLRP3、Bcl-2和Caspase-3表达;ELISA法检测TNF-α和IL-1β含量。结果MTT和CCK-8结果显示,积雪草苷可浓度依赖性地抑制CNE-2细胞的生长;流式细胞仪检测结果显示,积雪草苷可浓度依赖性地促进CNE-2细胞凋亡;Western blotting结果显示,积雪草苷促进Caspase-3蛋白的表达,抑制Vimentin、NLRP3和Bcl-2的表达;ELISA法结果显示,积雪草苷可浓度依赖性地降低TNF-α和IL-1β含量。结论积雪草苷可显著促进人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞凋亡,其机制可能与下调Vimentin,NLRP3蛋白的表达来实现的。     

三氧化二砷对黑色素瘤B-16细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对体外培养黑色素瘤B-16细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用MTT比色法检测细胞增殖活力;采用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率;倒置显微镜、激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态学变化和凋亡特征。结果:6.25~100μmol/L As2O3作用细胞24、48小时后,细胞增殖活力明显下降,且具有时-效和量-效依赖关系;50μmol/L As2O3作用细胞12小时后,细胞凋亡率增加,S期细胞百分率下降;倒置显微镜下可见细胞生长密度减小、形态变圆、体积缩小;hoechst33258核染色可见核染色质边集、浓集;电子显微镜下可见到典型的凋亡细胞。结论:三氧化二砷能抑制黑色素瘤B16细胞的增殖并可诱导其发生凋亡。     

一氧化氮对体外培养大鼠软骨细胞Caspase-3及PKC-α表达的影响

目的:研究NO对大鼠软骨细胞Caspase-3及蛋白激酶C(PKC)-α(PKC-α)表达的影响,探讨NO诱导软骨凋亡的机制.方法:软骨细胞用不同浓度的NO处理24 h后,用TUNEL、MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活力.Western blot检测Caspase-3及PKC-α的表达.结果:NO处理后软骨细胞TUNEL阳性率明显增高,细胞核片段损害明显,Caspase-3的表达升高,同时抑制PKC-α的表达.结论:NO诱导的软骨细胞凋亡可能通过促进Caspase-3表达,作用机制与抑制PKC-α有关.     

辛伐他汀通过Caspase-12活化途径诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 探讨Caspase-12在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用.方法 在K562细胞培养液中分别加入毒胡萝卜素(阳性对照组)和辛伐他汀10、20、30μmol/L(辛伐他汀组)培养72 h,采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2 抖浓度,RT-PCR检测GRP78、Calpain基因mRNA表达水平,Western blot检测GRP78、Caspase-3,-6,-7,-9,-12蛋白水平.结果 10、20、30μmol/L辛伐他汀作用K562细胞72 h后,细胞出现典型的凋亡形态,凋亡率分别为12.41%士0.32%、19.08士0.26%、23.41士0.36%;细胞内Ca2 浓度增加,荧光强度分别为43士2.9、54士2.7、64士2.6:GRP78、Calpain基因mRNA表达上调;Western blot检测显示:Caspase-3,-6,-7,-9,-12剪切活化,GRP78表达增强.结论 Caspase-12作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡.     

6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素抑制酪蛋白激酶诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡

目的:研究6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素(9dFMAChR))抑制体外培养人卵巢癌细胞系CoC1细胞增殖和诱导凋亡作用及机制。方法:体外培养CoC1细胞,MTT比色法测定dFMAChR对CoC1细胞增殖活性的影响;AO/EB染色法荧光显微镜观察dFMAChR诱导CoC1凋亡细胞的形态学改变;DNA凝胶电泳确证dFMAChR诱导CoC1细胞凋亡作用;Western blotting法分析dFMAChR对CoC1细胞酪蛋白激酶CK2α蛋白表达和活性的影响。结果:MTT比色法结果显示,dFMAChR有效抑制CoC1细胞增殖活性,呈剂量依赖性;其IC50值为11.8μM。AO/EB染色荧光显微镜观察dFMAChR处理后,部分CoC1细胞呈现典型凋亡细胞形态特征;dFMAChR(10.0μM)处理CoC1细胞48 h,琼脂糖凝胶电泳出现“梯形”DNA条带。Western blotting分析结果表明:dFMAChR下调酪蛋白激酶CK2α表达,呈浓度和时间依赖性。结论:dFMAChR具有抑制人卵巢癌CoC1细胞增殖和诱导细胞凋亡作用;作用机制与其抑制酪蛋白激酶CK2α表达有关。     

丹参酮ⅡA抗人黑素瘤A875细胞作用

目的 观察丹参酮ⅡA在体外对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞的影响.方法 体外培养A875细胞,0 μg/ml、4 μg/ml、8 μg/ml、16 μg/ml、32 μg/ml丹参酮ⅡA作用A875细胞24 h、48 h,用MTT法检测丹参酮ⅡA对A875细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态;Western blot法检测Caspase-3蛋白表达水平变化.结果 丹参酮ⅡA有抑制A875细胞增殖作用,并且呈明显的浓度、时间相关性;随药物作用时间延长,Caspase-3蛋白表达量逐渐升高.结论 丹参酮ⅡA促进Caspase-3高表达,诱导A875细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

GFP共表达的重构型Caspase-3基因对Hep-2细胞的作用

目的:探讨GFP共表达的Caspase-3基因的表达对人喉癌细胞Hep-2的凋亡诱导作用. 方法:应用DNA重组技术将重构型 Caspase-3基因亚克隆至带有GFP报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中,脂质体介导转染人喉癌细胞Hep-2,通过RT-PCR方法检测转染后Caspase-3基因的表达;荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化; MTT法检测转染Caspase-3基因对Hep-2细胞生长的影响. 结果:RT-PCR方法证实重构型Caspase-3基因可在Hep-2细胞内表达,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征,MTT法结果表明Caspase-3对Hep-2的细胞生长有抑制作用. 结论:重构型caspase-3对喉癌细胞Hep-2的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡.     

金喜素对原代培养的人食管癌细胞的抗癌作用

目的: 研究金喜素(Topotecan)对体外原代培养的人食管癌细胞增殖与凋亡作用的影响及可能的机制. 方法: 原代培养人食管癌细胞,MTT法检测金喜素对食管癌细胞增殖作用的影响;吖啶橙染色观察凋亡细胞形态学变化;流式细胞仪定量检测金喜素处理细胞后细胞凋亡情况;底物裂解法检测金喜素对食管癌细胞半胱天冬酶-3(caspase-3)活性的影响. 结果: 金喜素处理细胞48 h后,可明显抑制癌细胞增殖,并呈浓度依赖性;金喜素处理的食管癌细胞经吖啶橙染色可检测到大量凋亡细胞,流式细胞仪检测其凋亡率为(33.4±6.8)%,而未经金喜素处理组几乎未检测到凋亡细胞;金喜素处理食管癌细胞后其Caspase-3活性较未处理组显著增高. 结论: 金喜素可抑制体外原代培养的食管癌细胞增殖,并通过促进Csapase-3活性而诱导细胞凋亡.