芪玉三龙汤调节mTOR/Beclin1/LC3信号轴相关分子的表达诱导肺癌A549细胞自噬

目的 从细胞水平探讨芪玉三龙汤干预肺癌A549细胞对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）/微管相关蛋白1轻链3（LC3）信号轴关键分子表达的影响。方法 选择肺癌人A549细胞作为研究对象,采用细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）法检测芪玉三龙汤含药血清对A549细胞活性的影响;原位末端标记法（TUNEL）,透射电镜（TEM）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白免疫印迹法（WB）分别检测芪玉三龙汤对A549细胞凋亡、自噬体形成及自噬标记分子表达的影响。结果 芪玉三龙汤血清能以浓度依赖性的方式抑制细胞活性;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的凋亡数量显著增多（P<0.01）,自噬体形成增加;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的mTOR mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,Beclin1,自噬相关基因5（Atg5）,自噬相关基因13（Atg13） mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）。结论 芪玉三龙汤能够诱导肺癌A549细胞发生自噬,其具体作用机制可能与其下调mTOR的表达,上调Beclin1,Atg5,Atg13,LC3的表达,促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ有关。     

顺铂诱导肺癌A549细胞保护性自噬及肺岩宁对自噬蛋白Atg5、Atg7的影响

目的观察顺铂作用肺癌A549细胞后自噬的发生,及肺岩宁对自噬相关蛋白Atg5、Atg7的影响。方法顺铂和肺岩宁处理肺癌A549细胞,CCK-8筛选顺铂和肺岩宁的优化给药浓度,CCK-8检测各组A549细胞增殖能力,Western blot检测各组自噬蛋白表达。结果与单药顺铂相比,3 mg/L的顺铂联合20 mmol/L的自噬抑制剂氯喹明显提高了A549细胞增殖的抑制率(P0.05)。同时,顺铂导致了微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3Ⅱ)蛋白表达增加(P0.01)。肺岩宁干预A549细胞后,自噬蛋白Atg5蛋白表达低于模型组和顺铂组(P0.05),Atg7蛋白表达显著低于模型组和顺铂组(P0.01)。结论顺铂诱导了A549细胞产生保护性自噬,肺岩宁可能通过抑制肺癌细胞自噬来发挥抗肺癌细胞增殖作用。     

基于自噬探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜保护的作用机制

目的 通过观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠自噬相关分子表达的影响,探讨其肠黏膜保护 的作用机制。方法 将 SD 大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组。采用 2, 4, 6-三硝基 苯磺酸 （TNBS） -乙醇溶液复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型;模型复制成功后灌胃给药,每日 1 次,持续 14 d。 观察大鼠一般状况,计算疾病活动指数 （DAI） 评分;苏木素-伊红 （HE） 染色法观察结肠组织病理形态;透射电 镜观察结肠上皮细胞自噬情况;免疫荧光染色法、蛋白免疫印迹法 （Western Blot） 检测结肠组织肌球蛋白样 BCL2 结合蛋白 （Beclin1） 、微管相关蛋白 1 轻链 3 （LC3） 蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应 （Real-time PCR） 检测自噬蛋白 5 （Atg5） 、自噬蛋白 7 （Atg7） 、泛素结合蛋白 62 （p62） mRNA 表达。结果 与正常组比较, 模型组一般情况较差,DAI 评分明显升高 （P＜0.000 1） ;结肠组织出现明显的上皮细胞损伤,电镜下自噬体的 数量明显减少;结肠组织 Beclin1、LC3-II/LC3-I 蛋白及 Atg5、Atg7 mRNA 表达明显降低 （P＜0.000 1） ,p62 mRNA 表达明显升高 （P＜0.000 1） 。与模型组比较,健脾益肠散组大鼠一般情况明显恢复,DAI 评分明显降低 （P＜0.000 1） ;结肠组织病理损伤有不同程度的改善,电镜下自噬体的数量明显增多;结肠组织 Beclin1、LC3-II/ LC3-I 蛋白及 Atg5、Atg7 mRNA 表达明显升高 （P＜0.01,P＜0.001,P＜0.000 1） ,p62 mRNA 表达明显降低 （P＜0.01） 。结论 健脾益肠散可通过上调自噬相关分子 Beclin1、LC3、Atg5 及 Atg7 的表达,下调 p62 的表 达,增强自噬以达到保护溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜损伤的作用。     

当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白LC3，Beclin1，p62表达的影响

目的:研究当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠的防治作用及对自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3),自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),p62表达的影响。方法:将6周龄SD雄性大鼠随机分为正常组,风湿热痹模型组,当归拈痛汤低、中、高剂量组(5.67,11.34,22.68 g·kg^-1),甲氨蝶呤(MTX)组(1.35 mg·kg^-1),每组10只,通过对大鼠尾根部皮下注射灭活结核分支杆菌佐剂建立佐剂性关节炎大鼠模型,用人工气候箱进行风湿热痹证模型造模16 d,于免疫当天灌胃给药,持续28 d。进行大鼠一般情况观察及足趾肿胀度、关节炎指数(AI)检测,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织病理形态学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化法分别检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的蛋白表达。结果:与正常组比较,风湿热痹模型组大鼠给药16,20,24,28 d时足趾肿胀度显著升高(P<0.01),AI显著升高(P<0.01),滑膜细胞增生显著,自噬蛋白LC3,Beclin1蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01),p62蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01);与风湿热痹模型组比较,各给药组大鼠足趾肿胀度减轻,滑膜增生情况有不同程度改善,LC3,Beclin1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p62的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),且当归拈痛汤中剂量组防治效果最佳。结论:当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠有明显的防治作用,且这种防治作用可能与调控滑膜组织中自噬相关因子LC3,Beclin1,p62的表达,抑制自噬有关。     

高良姜素促进胰腺癌PCNA-1细胞凋亡和自噬并抑制移植瘤生长

【目的】 探讨高良姜素对胰腺癌PCNA-1细胞的抑制作用及机制。【方法】 ①体外研究：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞相对存活率,确定高良姜素浓度与处理时间。先设置空白对照组,阳性药物对照组（40 μmol·L-1顺铂）,高良姜素低、中、高剂量组（20、40、80 μmol·L-1）。再设置空白对照组、高良姜素高剂量组、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）siRNA组（转染MAPK siRNA）、高良姜素+MAPK siRNA 组（转染MAPK siRNA +80 μmol·L-1高良姜素）。流式细胞术测定细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）、Bcl-2相关的X蛋白（Bax）、微管相关蛋白 l 轻链 3（LC3）Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、液泡分选蛋白 34（Vps34）、Beclin1,自噬相关蛋白质 Atg7、Atg5,p-MAPK/ MAPK的表达水平。②体内研究：裸鼠皮下注射PCNA-1细胞构建移植瘤模型,测量移植瘤体积和质量,蛋白免疫印迹法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5的表达。【结果】后续细胞实验选择20、40、80 μmol·L-1高良姜素处理PCNA-1细胞24 h。与空白对照组比较,高良姜素高剂量组PCNA-1细胞凋亡率明显降低（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9、Bax、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5、p-MAPK/MAPK蛋白表达明显上调（P < 0.01）,Bcl-2 和P62蛋白表达水平明显下调（P < 0.01）,而抑制MAPK后可逆转上述现象。高良姜素可减小裸鼠胰腺癌PCNA-1细胞移植瘤体积和质量,各蛋白表达情况同细胞实验结果相一致。【结论】 高良姜素可通过活化MAPK促进胰腺癌PCNA-1细胞的凋亡和自噬,并抑制移植瘤生长。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠Beclin1/PI3K-AKT-mTor的影响

目的观察佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜中自噬相关基因5、7、12(Atg5,7,12)mRNA、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬标志物Beclin1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶向蛋白(m Tor)及血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的表达水平变化及新风胶囊对其的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(来氟米特,5.0 mg/kg)和中药组(新风胶囊,3.0 g/kg),每组12只。干预30天后,观察各组大鼠体质量、足趾肿胀度(E%)、关节炎指数(AI)及踝关节病理及超微结构变化;检测大鼠滑膜中Atg5、7、12 mRNA表达;检测滑膜LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达;检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量。结果与正常组比较,模型组E%、AI、IL-1β、TNF-α升高,体重、IL-4、IL-10、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达降低(P0.01,P0.05),PI3K、AKT、m Tor蛋白表达升高(P0.01)。与模型组比较,两个给药组E%、AI、IL-1β、TNF-α、Atg12 mRNA、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达降低(P0.01,P0.05),IL-4、IL-10、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达升高(P0.01,P0.05);西药组Atg5降低(P0.01),Atg7 mRNA升高(P0.05)。与西药组比较,中药组体重、IL-4、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、PI3K、m Tor蛋白表达升高(P0.01,P0.05)。结论AA大鼠滑膜细胞自噬水平下降,导致滑膜细胞的过度增生,引起关节肿胀,致炎因子上升,抑炎因子下降,引起关节的炎症反应。中药新风胶囊可以改善关节炎指数、足趾肿胀度,改善滑膜自噬相关基因及蛋白表达。     

芪玉三龙汤对Wnt信号通路拮抗基因SFRP-2的影响

目的:探讨中药复方芪玉三龙汤(Qinyu Sanlong decoction)对Wnt(Wingless,Int1的合称)信号通路拮抗基因分泌型Frizzled相关蛋白(SFRP)-2的影响。方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法,构建小鼠移植肺癌模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组、芪玉三龙汤组(低、中、高剂量组)、化疗组、联合组、芪玉三龙汤组,小鼠分别按20.12,40.24,80.48 g·kg-1·d-1灌胃给药,化疗组以顺铂0.4 m L腹腔注射给药(1次/周),联合组以芪玉三龙汤80.48 g·kg-1·d-1灌胃和腹腔注射顺铂联合给药,模型组以等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,连续给药21 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织β-链蛋白(β-catenin),SFRP-2蛋白表达。结果:与模型组相比,各用药组均可下调β-catenin蛋白表达(P0.01);与芪玉三龙汤20.12 g·kg-1·d-1组比较,其他各用药组亦可下调β-catenin蛋白表达(P0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤40.24,80.48 g·kg-1·d-1组、联合组下调较明显(P0.05,P0.01)。与模型组相比,芪玉三龙汤40.24,80.48 g·kg-1·d-1组均可促进SFRP-2蛋白表达(P0.05,P0.01);与芪玉三龙汤20.12 g·kg-1·d-1组比较,其他各用药组亦可上调SFRP-2蛋白表达水平(P0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤40.24,80.48 g·kg-1·d-1组均可促进SFRP-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。用药组电镜下可见凋亡现象,以芪玉三龙汤80.48 g·kg-1·d-1组、化疗组及联合组明显。结论:芪玉三龙汤可一定程度抑制肺癌生长,诱导其镜下凋亡,促进SFRP-2表达,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

基于自噬基因Atg5和Beclin1探讨益气活血方对大鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的探讨益气活血方是否通过调节自噬相关基因Beclin1和Atg5的表达调控发挥对心肌缺血的保护作用。方法将60只健康SD大鼠随机分成空白组、模型组、地奥心血康组、益气活血方高、中、低剂量组,通过腹腔注射异丙肾上腺素制备急性心肌缺血损伤模型。观察心肌梗死面积、心肌细胞超微结构,检测自噬基因Atg5、Beclin1 mRNA和凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达。结果益气活血方高、中剂量组各项指标均明显高于模型组,益气活血方各剂量组大鼠心肌组织中Atg5、Beclinl mRNA表达量均升高(P0.01或P0.05),Caspase-3mRNA表达量降低(P0.01或P0.05)。结论益气活血方可以通过上调自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达,增强细胞自噬,下调Caspase-3mRNA表达,从而发挥对心肌缺血的保护作用。     

芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝脏细胞自噬的影响

目的 观察芪术颗粒对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导大鼠肝纤维化模型自噬的影响。方法 将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组、芪术颗粒组,除正常对照组外其余各组均腹腔注射CCl4建立肝纤维化模型,按照组别对应处理。4周后取肝组织,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及自噬相关基因3（autophagy-related gene 3,Atg3）、自噬相关基因Beclin1介导的蛋白表达,Real-time PCR检测Atg3、Beclin1基因表达,电镜下观察自噬情况。结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝α-SMA蛋白显著增多（P<0.01）;与模型对照组比较,复方鳖甲软肝片组、芪术颗粒组肝α-SMA蛋白显著减少（P<0.05）;与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝Atg3蛋白表达显著增加（P<0.01）,Atg3基因表达增加,Beclin1蛋白及基因表达增加,自噬溶酶体和自噬体数量增多;与模型对照组比较,芪术颗粒组、复方鳖甲软肝片...     

益气活血解毒中药及肾上腺髓质素抑制醛固酮诱导的 HK2 细胞自噬作用研究

目的:观察益气活血解毒中药血清及肾上腺髓质素(Adrenomedullin,ADM)抑制醛固酮(Aldosterone,ALD)诱导的人近端肾小管上皮细胞HK2自噬的作用。方法:本实验采用1μmol/L的ALD诱导HK2细胞自噬,给予10%的益气活血解毒含药血清及100 nmol/L的ADM治疗。实验分为对照组(CON组),ALD组,ALD+益气活血解毒含药血清组(ALD+TCM组),ALD+ADM组,48 h后收集细胞并观察变化。采用免疫细胞荧光、Western blot法检测血清糖皮质激素诱导蛋白激酶1 (Serum and glucocorticoid induced kinase,SGK-1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (Phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,P-ERK1/2)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphorylated mammalian target of rapamycin,P-mTOR)/mTOR、自噬相关基因5(Autophagy associated gene,Atg5)、酵母自噬基因6 (Atg6)的同源物Beclin1、自噬标志微管相关蛋白1轻链3 (Microtubularassociated protein 1 light chain 3,LC3)的表达。结果:与CON组比较,ALD组SGK-1、P-ERK1/2、Atg5、LC3和Beclin1表达明显增强(P 0.01),P-mTOR/mTOR表达减弱(P 0.01);与ALD组比较,ALD+TCM组、ALD+ADM组这些指标表达均减弱(P 0.01),P-mTOR/mTOR表达增强(P 0.01)。结论:益气活血解毒中药、ADM均可抑制ALD诱导的HK2细胞自噬,从而减轻肾小管的损伤,减缓肾脏损伤的进程。     

1-羟基-2,3,5-三甲氧基-酮对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨1-羟基-2，3，5-三甲氧基[口山]酮（QGS）对脂多糖（LPS）致小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法采用ipLPS的方法建立小鼠急性肺损伤模型。检测肺脏指数，酶法检测支气管及肺泡灌洗液（BALF）中NO水平，Westernblotting法检测核转录因子κB抑制蛋白IκB—α，诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）及环氧合酶Ⅱ（COX-2）等蛋白的表达，HE染色观察肺组织病理学改变。结果QGS500mg／kg组能显著降低LPS引起的小鼠的肺脏指数（P〈0．05）。QGS250、500mg／kg组均能显著降低LPS致伤小鼠BALF中NO水平，抑制率分别达到了37％和48．1％。同时QGS500mg／kg组还能够明显增加肺组织中IκB—α蛋白表达量并下调iNOS及COX-2蛋白表达量。结论QGS对LPS引起的小鼠急性肺损伤有保护作用，该作用与其增加IκB—α蛋白表达而抑制iNOS和COX-2蛋白的表达有关。     

归脾汤对抑郁模型大鼠血清T3 T4和海马神经元形态的影响

目的:观察归脾汤对抑郁模型大鼠血清T3(三碘甲腺原氨酸)、T4(四碘甲腺原氨酸)和海马形态学影响,初步探讨其防治抑郁症的可能机制。方法:40只W istar雌性大鼠分为对照组、模型组、盐水组、中药组。应用慢性不可预见性中等强度刺激复制抑郁症动物模型。Open-field法检测大鼠行为学得分,放免法测定血清中T3和T4含量,电镜观察海马形态学变化。结果:与对照组比较,模型组和盐水组大鼠的体重、行为学得分、血清T3和T4含量均有显著性差异,海马损伤明显,而中药组上述指标均无明显差异。结论:归脾汤的抗抑郁机制与其维持正常的T3、T4分泌及海马形态有关。     

GC法测定高良姜醇提物中两个二苯基庚烷类化合物

目的建立高良姜醇提物中2个二苯基庚烷类化合物的测定方法。方法采用GC法,色谱柱为Cp Sil 5CB(30 m×0.25 mm,0.25μm)石英毛细管柱;检测器:FID;柱温:初始温度80℃,保持2 min,以20℃/min升温到300℃,保持45 min。结果 1-苯基-7-(3’-甲氧基-4’-羟基)苯基-5-醇-3-庚酮在0.2～1.0 mg/mL(r=0.998 8)、1,7-二苯基-5-醇-3-庚酮在0.2～1.0 mg/mL(r=0.997 8)有较好的线性关系;平均回收率分别为99.6%、100.6%。结论本方法可靠、专属性强,可作为高良姜醇提物中2个二苯基庚烷类化合物的测定方法。     

基于自噬途径探讨当归饮子缓解CU模型小鼠过敏反应的效应机制

目的:探讨当归饮子对慢性荨麻疹(CU)小鼠模型过敏反应的影响及自噬干预机制。方法:选用SPF级BALB/c小鼠,腹腔注射卵白蛋白与氢氧化铝悬液复制CU小鼠模型,设立分组并灌胃给药:空白组(生理盐水20 mL·kg~(-1)·d~(-1)),模型组(生理盐水20 mL·kg~(-1)·d~(-1)),开瑞坦组(0. 001 3 g·kg~(-1)·d~(-1)),当归饮子高、中、低剂量组(39. 3,19. 6,9. 8 g·kg~(-1)·d~(-1))。苏木素-伊红(HE)染色观察CU小鼠皮肤组织病理学改变;透射电镜观察皮肤组织细胞的自噬形态学;免疫组化(IHC)检测皮肤组织微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和p62蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测皮肤组织LC3B,p62mRNA转录水平。结果:当归饮子可显著改善CU小鼠皮肤真皮水肿、胶原束分离、毛细血管扩张等病理表现;并促进自噬小体形成,改善胞核染色质浓聚、线粒体肿胀、内质网扩张等异常细胞超微结构;与空白组比较,模型组CU小鼠皮肤组织中LC3B蛋白表达显著增加(P0. 01),LC3B mRNA水平有升高趋势,p62 mRNA水平及蛋白表达均显著降低(P0. 01);与模型组比较,当归饮子各剂量组小鼠皮肤组织LC3B mRNA水平及蛋白表达明显降低(P0. 05,P0. 01),小鼠皮肤组织的p62mRNA水平及蛋白表达明显下降(P0. 05,P0. 01),以高剂量组疗效最佳。结论:当归饮子可调节LC3B,p62 mRNA及蛋白表达,增强细胞自噬水平,进而改善CU小鼠皮肤病理状态。     

毒箭木化学成分的研究

从毒箭木限茎中分离得到八个成分,分别鉴定为莽草酸,1-环已烯-1-羧酸-5-羟基-3,4-异亚丙基-二氧,氧-双(5-亚甲基-2-呋哺醛),β-谷甾醇,二十四烷酸,十八烷酸,十六烷酸及三十一烷。     

1-羟基-2,3,5-三甲氧基(口山)酮对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨1-羟基-2,3,5-三甲氧基■酮(QGS)对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法采用ipLPS的方法建立小鼠急性肺损伤模型。检测肺脏指数,酶法检测支气管及肺泡灌洗液(BALF)中NO水平,Western blotting法检测核转录因子κB抑制蛋白IκB-α,诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及环氧合酶Ⅱ(COX-2)等蛋白的表达,HE染色观察肺组织病理学改变。结果QGS500mg/kg组能显著降低LPS引起的小鼠的肺脏指数(P<0.05)。QGS250、500mg/kg组均能显著降低LPS致伤小鼠BALF中NO水平,抑制率分别达到了37%和48.1%。同时QGS500mg/kg组还能够明显增加肺组织中IκB-α蛋白表达量并下调iNOS及COX-2蛋白表达量。结论QGS对LPS引起的小鼠急性肺损伤有保护作用,该作用与其增加IκB-α蛋白表达而抑制iN-OS和COX-2蛋白的表达有关。     

巴天酸模的化学成分

目的 :考察巴天酸模根的化学成分。方法 :硅胶柱色谱进行分离纯化 ,理化常数和光谱测定鉴定结构。结果 :分得 8个成分 ,分别鉴定为 5-甲氧基-7-羟基-1(3H)-苯骈呋喃酮 (Ⅰ) ;5 ,7-二羟基-1(3H)-苯骈呋喃酮 (Ⅱ) ;十九烷酸-2 ,3-二羟丙酯 (Ⅲ ) ;决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷 (Ⅳ) ;没食子酸 (Ⅴ) ;β-谷甾醇 (Ⅵ ) ;胡萝卜苷 (Ⅶ ) ;儿茶素(Ⅷ )。结论 :化合物Ⅲ为新的天然产物 ,化合物Ⅰ ,Ⅱ为首次从该种植物中分离得到。     

海绵Spongia obligue中两种新的多羟基甾醇的分离与结构鉴定

应用各种色谱技术对中国南海海绵Spongia obligue的化学成分进行分离纯化,经MS、IR、^1HNMR、^13CNMR(DEPT)鉴定两个新的化合物;化合物1为24（28）－亚甲基－胆甾－5－烯－1,3,4,11－四醇－18羧酸,化合物2为24（28）－亚甲基－胆甾－5－烯－1,3,8,11－四醇。1和2均为新化合物。     

自噬对槲皮素诱导人肝癌SMMC-7721细胞死亡的影响

 目的 研究自噬在槲皮素（quercetin,Que）诱导的人肝癌细胞系SMMC-7721死亡中的作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝法测定槲皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用;单丹磺酰戊二胺、免疫荧光法观察给药后自噬的发生; 乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率、蛋白印迹法观察槲皮素诱导的SMMC-7721细胞死亡的分子机制。结果 槲皮素对SMMC-7721生长有显著抑制作用,呈明显的时间、剂量依赖性; 槲皮素可激活SMMC-7721 细胞的LC3的表达、诱导自噬的发生;乳酸脱氢酶漏出率实验结果表明,在槲皮素给药前用3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断自噬或者氯喹碱化溶酶体,可增强槲皮素对SMMC-7721细胞的细胞毒作用; 蛋白印迹结果显示,槲皮素可使SMMC-7721细胞溶酶体组织蛋白酶B的表达明显增强。结论 槲皮素能明显抑制SMMC-7721 细胞的生长,并诱导其发生自噬;自噬激活能降低槲皮素对SMMC-7721细胞的毒性;自噬的发生与溶酶体酶组织蛋白酶B表达增强相关。