探讨甘氨酸、甘露醇对Lowry法测蛋白含量的干扰

目的L ow ry法是蛋白质含量测定的普遍方法,广泛应用于测定生物制品蛋白质含量,本文目的在于探讨甘氨酸、甘露醇这两种常用制剂辅料对L ow ry法测定蛋白含量的干扰情况。方法用碱性铜试剂、酚试剂,检测波长为650nm,以标准蛋白浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。根据吸光度查标准曲线,求出在有辅料存在情况下的已知蛋白浓度样品的测试值。结果甘氨酸与酚试剂的反应没有特异性,但它的存在会对蛋白测定产生抑制。而甘露醇与酚试剂的作用与其浓度有正相关,会使蛋白测定值比理论值高。结论L ow ry法测蛋白质操作简便,结果准确,但甘氨酸对其有负干扰,甘露醇对测定结果有正干扰。     

不同保护剂对人凝血因子Ⅷ冻干及100℃干热灭活的影响

目的选择一种人凝血因子Ⅷ(FⅧ)冻干及100℃干热灭活过程的保护剂。方法将同一批次的半成品分成多份,分别加入25,50,100 g/L的甘氨酸、甘露醇、蔗糖和麦芽糖,进行冻干和干热灭活,测定灭活后的FⅧ活性、水分残留以及复溶时间。结果采用甘露醇作为保护剂,冻干和干热灭活后水分残留最低、复溶时间最短,而且活性回收率最高;不同浓度甘露醇作为保护剂对制品水分、复溶时间以及活性的影响不显著。结论甘露醇是FⅧ冻干和干热灭活的理想保护剂。     

动态浊度法测定红花注射液中细菌内毒素的含量

目的：建立动态浊度法测定红花注射液中细菌内毒素的含量。方法采用动态浊度法,通过测定供试液中外加内毒素的回收率进行干扰试验,确定样品无干扰浓度,并定量样品中细菌内毒素。结果内毒素检查质量浓度线性范围为0．03125～2．0EU? mL －1（r＝0．9966）,样品在稀释10倍以上对试验无干扰,细菌内毒素回收率在50％～200％范围内,样品中内毒素可定量测定。结论动态浊度法可用于红花注射液中细菌内毒素的含量检测。     

高效液相法测定人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量

目的:建立HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量。方法:采用氨基键合柱进行分离,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(50∶50),流速1.0 m L·min-1,紫外检测波长为205 nm,柱温40℃,进样量20μL;用面积外标法计算含量。结果:在本实验条件下,甘氨酸与精氨酸的分离度符合要求;甘氨酸质量浓度在1.02~5.04 mg·m L-1范围内线性关系良好;3批样品平均含量分别为8.70、8.76、8.80 mg·m L-1,RSD分别为0.57%、0.32%和0.50%。结论:该方法经方法学验证,可用于人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量的测定。     

动态浊度法鲎试验用于检测人凝血因子Ⅷ制品中细菌内毒素的研究

目的 应用动态浊度法定量测定人凝血因子Ⅷ制品中细菌内毒素含量。方法 通过对样品中定量添加标准内毒素的干扰试验,检测其回收率应在50%~200%范围。结果 将样品进行1→100稀释可以有效地消除其对鲎试验的干扰。结论 应用动态浊度法定量测定人凝血因子Ⅷ制品中细菌内毒素含量是可行的,与热原检查法结果一致。     

注射用葛根素脂质体的制备及其包封率测定

目的：制备注射用葛根素脂质体并测定其包封率。方法：采用薄膜分散-冷冻干燥法制备葛根素脂质体;加入甘露醇作为冻干保护剂;用正交试验优选处方;用透析法分离游离药物;高效液相色谱法测定含量。结果：制得的脂质体平均粒径为296nm,Zeta电位为-37．5mV,包封率（72．4±1．6）％（n=3）。在选定的色谱条件下,葛根素与辅料能完全分离。在3．2～72．0μg·ml。范围内,药物浓度与峰面积呈良好的线性关系,r=0．9996。结论：薄膜分散-冷冻干燥法适用于制备注射用葛根素脂质体;透析-高效液相色谱法操作简便、准确、重复性好,可用于测定注射用葛根素脂质体的含量和包封率。     

重组人红细胞生成素制剂中甘露醇含量的测定

目的：建立重组人红细胞生成素制剂中甘露醇含量的测定法。方法：采用分光光度法。结果：甘露醇在10-50ug／ml范围内有良好的线形关系，相关系数r=0．9999，加标回收率为98．7％，葡萄糖基本对其测定无干扰。结论：该法灵敏度高、取样量少、重现性好，适合重组人红细胞生成素制剂中甘露醇含量的测定。     

硼替佐米细菌内毒素检查方法学研究

目的对水不溶性药物硼替佐米经加入制剂辅料甘露醇溶液助溶后,采用凝胶法进行细菌内毒素检查的方法学验证,探讨水不溶性药物的细菌内毒素检查方法。方法取硼替佐米按制剂的处方加入10%甘露醇助溶后,进行样品溶液的凝胶法检查干扰试验和细菌内毒素检查。结果硼替佐米原料可溶于10%的甘露醇溶液,经稀释后可排除干扰且干扰试验符合药典规定。结论将硼替佐米用10%的甘露醇溶液配制成5 mg·mL-1溶液并用BET水稀释至0.002 5 mg·mL-1浓度时无干扰,可采用细菌内毒素检查法进行其质量控制。     

高效液相色谱法测定人纤维蛋白原中甘氨酸、盐酸精氨酸含量

目的建立人纤维蛋白原中甘氨酸、盐酸精氨酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,柱外衍生,在色谱柱内层析,以紫外检测器在254nm波长处检测,用峰面积以内标法计算含量。结果在该试验条件下,甘氨酸、盐酸精氨酸与内标物质峰的分离度符合要求;甘氨酸质量浓度在0．1868。0．8094g／L范围内与峰面积线性关系良好,盐酸精氨酸质量浓度在0．1863—0．8073g／L范围内线性关系良好;精密度试验甘氨酸RSD为1．37％,盐酸精氨酸RSD为0．88％;甘氨酸平均回收率99．65％,RSO为1．27％;盐酸精氨酸平均回收率100．19％,RSD为1．06％;溶液稳定性试验中,供试品溶液放置0,2,4,8h后分别进样,甘氨酸RSD为1．51％,盐酸精氨酸RSD为1．94％。结论该方法检测结果准确,可用于人纤维蛋白原中甘氨酸、盐酸精氨酸含量的测定。     

人凝血因子Ⅷ效价测定方法(生色底物法)的建立及应用

摘要：目的:建立适用于人凝血因子Ⅷ效价测定的生色底物法。方法:用生色底物法（包括动力学法和终点法）进行人凝血因子Ⅷ的效价测定,采用量反应平行线法进行效价计算,并对该方法进行方法学验证。采用经验证的方法对来自7家企业的21批人凝血因子Ⅷ样品进行效价测定,并与现行标准的一期法结果进行比较。结果:效价测定范围为标示量的64%～156%;以效价测定值的对数对理论值的对数作线性回归,动力学法的相关系数r为0.998;相对偏倚为-0.2%～1.0%,其90%置信区间为（-2.3%,2.2%）;中间精密度为1.8%～2.1%,其95%置信上限范围在3.2%～3.9%;终点法的相关系数r为0.998;相对偏倚为-0.6%～1.2%,其90%置信区间为（-1.7%,2.6%）;中间精密度为1.5%～2.4%,其95%置信上限范围在2.7%～4.4%;不同批次的试剂盒和不同分析人员对测定结果的影响无统计学意义,方法耐用性良好。21批样品生色底物法量反应平行线测定法测得结果与现行标准结果一致性良好。结论:建立的生色底物法可用于人凝血因子Ⅷ效价的测定,引入的量反应平行线模型可增加试验数据可靠性判断,并有效控制测定方法的误差,从而更好地控制人凝血因子Ⅷ质量。     

高效液相色谱法测定人凝血因子Ⅷ制品中甘氨酸的含量

目的 建立高效液相色谱法测定人凝血因子Ⅷ制品中甘氨酸含量的方法。 方法 采用Shim-pack CLC-ODS色谱柱,以丙氨酸为内标,2、4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生剂,50%乙腈溶液-0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(35:65)为流动相,检测波长为360 nm。 结果 甘氨酸在0.006~0.030 mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均回收率为101.4%,RSD为0.14%(n=9)。 结论 该方法简单灵敏,结果准确可靠,可用于人凝血因子Ⅷ制品中甘氨酸含量的测定。     

注射用促肝细胞生长素辅料的研究

寻找一种注射用促肝细胞生长素（ＨＧＦ）适用的辅料。方法：以三批不同批次的ＨＧＦ原料液为实验对象,分别通过 Ｆｏｌｉｎ－酚和~３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究了三种辅料： ３％右旋糖酐, ８％甘露醇, ２％右旋糖酐＋ ８％甘露醇对ＨＧＦ多肽含量及活性的影响。结果：８％甘露醇作为辅料时使ＨＧＦ多肽含量测定显著增高,而右旋糖酐则不影响测定结果。三种辅料对ＨＧＦ活性均无显著影响。结论：最终选用３％右旋糖酐作为ＨＧＦ的辅料。     

重组人粒细胞集落刺激因子成品蛋白质含量测定方法的研究

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)成品蛋白质含量测定方法。方法用三氯醋酸 Lowry法和高效液相色谱外标法测定rhG CSF成品蛋白质含量。结果两种方法均能有效排除rhG CSF成品中甘露醇的干扰 ,与经典的Lowry法相比 ,蛋白质的回收率均大于 96 % ,RSD均 <5 %。结论三氯醋酸 Lowry法和高效液相色谱外标法均可用于测定rhG CSF成品的蛋白质含量 ,高效液相色谱法操作更简便 ,更准确。     

简易可靠的细胞膜蛋白含量测定

测定生物样品蛋白含量常用 Lowry 和考马斯蓝以及紫外吸收等方法。但测定细胞膜蛋白则常用 Lowry 和考马斯蓝法,未见用紫外吸收法的报道。本文介绍紫外吸收法测定膜蛋白含量实验方法,结果满意。     

注射用胸腺肽辅料的研究

目的：寻找一种注射用胸腺肽适用的辅料。方法：以三批同一批次的胸腺肽原料液为实验对象,通过Folin-酚法和T细胞活性测定法-脱E受体法研究了三种辅料对胸腺肽多肽含量及活性的影响。结果：7％甘露醇作为辅料时使胸腺肽多肽含量测定显著增高,而右旋糖酐则不影响测定结果,三种辅料对胸腺肽活性均无显著影响。结论：最终选用4％右旋糖酐作为注射用胸腺肽的辅料。     

紫外分光光度法测定苯酚滴耳液的含量

目的：探讨苯酚滴耳液中苯酚含量测定方法。方法：配制系列浓度的苯酚溶液，分别测定在270nm波长处的吸光度，制备标准曲线。测定苯酚滴耳液的含量。结果：苯酚浓度在9．6—48．0μg／ml线性关系良好，辅料对苯酚的测定无干扰。结论：本方法操作简便、快速，可用于该制剂的含量测定。     

二阶导数光谱法测定枸橼酸维静宁片的含量

目的：建立二阶导数光谱法测定枸橼酸维静宁片的含量。方法：采用二阶导数光谱法进行测定,利用振幅Ｄ值计算含量。结果：所建立的方法不需提取分离,可直接测定。辅料等其它成分对测定无干扰,平均回收率为１０００．６４％,ＲＳＤ为０．５７％。结论：该法快速简便,结果满意,重现性好。     

利尿配方注射液中细菌内毒素定量测定的研究

目的 应用动态比浊法鲎试验定量测定利尿配方注射液的细菌内毒素含量。方法对样品中定量添加标准内毒素进行干扰试验，通过回收率定最佳检测浓度再进行三个批号样品的正式干扰试验，样品中定量添加标：住内毒素，其回收率均在为50％～200％内。结果标准内毒素使用5．00，0．500，0．0500Eu／mL，将样品制备成最佳浓度为定量添加标准内毒素，无干扰作用，可用于有效的日常检查。结论动态比浊法鲎试验可以高效地测定利尿配方注射液细菌内毒素含量。     

分光光度法测定卵磷脂注射液中总卵磷脂的含量

目的：采用分光光度法测定卵磷脂注射液的含量。方法：以水为溶媒,检测波长在720nm的条件下,对卵磷脂注射液进行定量分析,另外还对样吕的测定条件进行了优选。结果：卵磷脂在浓度为4μg-20μg范围内线性良好,以标准曲线法得其回收率为101．3％（n=6),RSD为0．93％,结论：结果表明,该方法稳定可靠,重现性好,辅料无干扰。     

天然胶塞的蛋白含量测定

目的:建立天然胶塞的蛋白含量测定方法.方法:用凯氏定氮法考察并对测定样品的总蛋白,用Lowry法测定水溶性蛋白.结果:采用几种消化条件测得的总蛋白含量结果基本一致;Lowry法与凯氏定氮法的结果存在较大差异.结论:凯氏定氮法的消化剂中加入过氧化氢,操作简便、安全,结果准确,可测定天然胶塞的总蛋白含量.