Src羧基端激酶结合蛋白影响线粒体分裂及NK细胞杀伤肺癌细胞活性的分子机制探讨

目的:探究Src羧基端激酶结合蛋白（csk-binding protein,CBP）在人肺癌组织中的表达水平,及其对线粒体分裂和自然杀伤（natural killer,NK)细胞杀伤肺癌细胞活性的影响。方法:免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测肺癌组织及癌旁组织中CBP的表达;含CBP慢病毒感染人肺癌细胞株A549,通过荧光倒置显微镜、qRT-PCR 和Western blot检测细胞感染效果;CCK-8法检测各组A549细胞活性,Mito-Tracker染色观察各组A549细胞内线粒体形态和长度变化,Western blot检测各组A549细胞线粒体动态相关蛋白Mfn1、Mfn2、Drp1的表达,免疫荧光染色检测各组A549细胞内细胞色素C（Cyt C）的表达,流式细胞术检测各组A549细胞凋亡情况;从人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中分离NK细胞并进行鉴定,乳酸脱氢酶释放实验检测NK细胞对各组A549细胞的杀伤率。结果:肺癌组织中CBP的表达水平较癌旁组织中明显下降（P＜0.01）;感染CBP过表达慢病毒的A549细胞中CBP mRNA和蛋白的相对表达量均升高,培养48 h、72 h、96 h后细胞增殖活性下降,线粒体呈椭圆状或短杆状,长度明显缩短,线粒体分裂相关蛋白Mfn1、Mfn2蛋白表达减少,Drp1蛋白表达增加,有大量Cyt C从线粒体释放,细胞凋亡率升高,同时NK细胞对A549细胞的杀伤率明显提高,差异均具有统计学意义（P＜0.01）;而在使用线粒体分裂蛋白抑制剂Mdivi-1预先处理A549细胞后再感染CBP过表达慢病毒,线粒体分裂受到抑制,Mfn1、Mfn2蛋白表达增加,Drp1蛋白表达减少,Cyt C释放减少,细胞凋亡率降低,NK细胞对A549细胞的杀伤率也受到抑制,差异均具有统计学意义（P＜0.01）。结论:CBP在人肺癌组织中低表达,在A549细胞中过表达CBP能够促进线粒体分裂与细胞凋亡,并提高NK细胞对A549细胞的杀伤率。     

NDV-HN致人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨NDV-HN诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的相关机制。［方法］ （1）构建包含绿色荧光素蛋白（GFP）及NDV-HN的慢病毒sfGFP-HN载体，用293V细胞包装慢病毒Lv-sfGFP-HN，用293V细胞进行空载质粒转染组（空载组）慢病毒包装，命名为Lv-sfGFP；（2）以空载组A549-sfGFP细胞和空白组A549为对照，用慢病毒转染方法建立稳定表达NDV-HN蛋白的A549细胞株，即A549-sfGFP-HN细胞株，RT-PCR、Western blot检测A549细胞NDV-HN蛋白的表达；（3）分别在A549-sfGFP-HN和A549两组细胞中加入顺铂，流式细胞术检测细胞凋亡；（4）在基因水平和蛋白水平上分别用RT-PCR和Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。［结果］ （1）Lv-sfGFP-HN和Lv-sfGFP慢病毒分别转染A549细胞后，只在转染组A549-sfGFP-HN细胞检测到NDV-HN蛋白。（2）转染组A549-sfGFP-HN细胞凋亡率明显高于空白组A549细胞 (P＜0.01)，转染组A549-sfGFP-HN细胞加入顺铂后，其细胞凋亡率明显增加。（3）转染组A549-sfGFP-HN细胞与空载质粒转染组A549细胞和空白组A549细胞相比，凋亡相关蛋白Bcl-2表达量明显下调(P＜0.01)。［结论］ 慢病毒转染NDV-HN到A549细胞后导致A549-sfGFP-HN细胞出现凋亡，且与Bcl-2下调有关。转染NDV-HN的肺癌细胞联合使用抗癌药物顺铂，增加了肺癌细胞凋亡率。     

慢病毒介导shRNA特异性沉默livin基因促进SPC-A1细胞凋亡

目的：建立慢病毒介导的livin基因沉默系统,探讨其对肺癌细胞凋亡的影响。方法：Livin shRNA慢病毒感染肺腺癌细胞株SPCA1沉默livin基因表达。应用PI染色经荧光镜下观察SPCA1细胞凋亡形态,流式细胞术检测SPCA1细胞凋亡率及亚二倍体峰形成,Realtime PCR及Western blotting方法检测livin和caspase 3表达的改变。结果：livin基因在肺腺癌细胞株SPCA1中持续高表达。经慢病毒介导shRNA使livin基因表达沉默后,镜下可见肺腺癌细胞出现典型凋亡形态特征,流式细胞术检测出现亚二倍体峰,细胞凋亡率较空白对照及阴性病毒对照细胞明显增加（8.21％ vs 0.08％, 0.13％;P<0.05）,RTPCR及Western blotting 检测结果显示,caspase 3 mRNA表达无改变,但cleavedcaspase 3蛋白表达上调。结论：慢病毒载体介导的shRNA能抑制肺腺癌细胞株SPCA1中livin基因的表达,从而促进SPCA1细胞凋亡。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

ILF2通过调控线粒体内稳态促进非小细胞肺癌体内外细胞增殖

目的:探讨白介素增强子结合因子2(interleukin enhancer binding factor 2,ILF2)在非小细胞肺癌细胞增殖中的作用并探讨其机制。方法:选取来自某医院2016年3月至2022年6月间非小细胞肺癌患者癌及癌旁组织各15例,采用shRNA方法抑制非小细胞肺癌A549和H1299细胞系中ILF2表达,通过qRT-PCR、免疫组化和Western blot方法检测组织和细胞中ILF2的mRNA和蛋白表达,采用克隆形成和BrdU方法分析A549和H1299细胞体外增殖,无胸腺小鼠经皮下注射A549细胞后通过免疫组化技术观察Ki67和活化caspase 3(cleaved caspase 3)的表达,通过分析A549和H1299细胞中线粒体DNA(mtDNA)、线粒体质量和线粒体膜电位观察线粒内稳态。结果:与癌旁组相比,肺癌组织中ILF2的mRNA和蛋白表达均显著上调(P均<0.05);抑制ILF2表达可降低A549和H1299细胞体外克隆形成和增殖能力以及A549细胞在小鼠体内肺癌细胞生长能力(P均<0.05),小鼠肺组织中Ki67表达显著降低(P&...     

敲低WTAP基因对肺腺癌A549 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨成肾细胞瘤1-结合蛋白（Wilms?s? tumor 1- associating protein,WTAP）对人肺腺癌A549 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选用人肺腺癌A549 细胞和HEK293T,设计两组shWTAP干扰序列,构建慢病毒载体质粒,在HEK293T细胞中包装慢病毒后感染人肺腺癌A549 细胞,对照组感染277 空载体质粒。用qPCR和WB实验检测A549 细胞中WTAP mRNA和蛋白的表达水平,用BrdU 实验、细胞划痕愈合实验、Transwell 实验分别检测A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：成功构建shWTAP-1 和shWTAP-2 两种慢病毒质粒,感染A549 细胞后,与对照组比较,A549 细胞中WTAP mRNA和蛋白表达水平显著下调（均P<0.05）,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低（均P<0.05）。结论：敲低WTAP 基因的表达对人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力有显著抑制作用,WTAP基因的表达与肺腺癌的发生发展相关,WTAP可能是肺腺癌诊疗的一个潜在靶标。     

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的：探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法：通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果：MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达（均P<0.01）,选取表达水平较高的A...     

雷帕霉素联合缺氧诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其分子机制

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶向(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路抑制剂雷帕霉素联合缺氧诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的分子机制.方法:应用雷帕霉素联合缺氧处理人肺腺癌细胞株A549后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡情况,实时定量PCR和Western印迹法分别检测A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达变化,Western印迹法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF1α)表达的改变.结合染色质免疫共沉淀技术,探讨雷帕霉素通过诱导细胞凋亡而发挥抗肺癌效应的分子机制.结果:雷帕霉素联合缺氧可在体外诱导A549细胞凋亡,雷帕霉素联合缺氧可诱导A549细胞中survivin mRNA(P＜0.01)和蛋白的表达水平明显下调.雷帕霉素通过抑制缺氧条件下诱导的HIF-1α表达增加,进而抑制survivin的表达.结论:雷帕霉素通过抑制缺氧条件下A549细胞中HIF-1α的表达,降低HIF-1α与survivin核心启动子的结合,下调缺氧引发的凋亡抑制基因survivin表达,进而发挥抗肿瘤的生物学效应.     

非小细胞肺癌组织中circ_0006692的表达及其对肺癌细胞增殖转移的调控机制

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中circ_0006692的表达与临床病理特征的关系及机制。方法 收集50对NSCLC和癌旁组织，qRT-PCR法检测癌和癌旁组织中circ_0006692的表达，并分析其与临床病理特征之间的关系。构建过表达、敲低的circ_0006692的A549肺癌细胞株，MTS、克隆形成实验、划痕创伤愈合实验和Transwell侵袭实验检测circ_0006692表达变化对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qRT-PCR和Western blot检测circ_0006692表达变化对EMT相关基因表达的影响。结果 非小细胞肺癌组织中circ_0006692表达水平高于癌旁组织（P<0.05），其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肺膜侵犯密切相关（P<0.05）。circ_0006692敲低抑制细胞增殖、侵袭和转移，过表达可促进细胞增殖、侵袭和转移。qRT-PCR和Western blot结果显示circ_0006692敲低抑制A549肺癌细胞EMT相关基因CDH2和MMP7促进CDH1表达。结论 非小细胞肺癌组织中circ_0006692的表达上调与肿瘤大小、TNM分期及肺膜侵犯密切相关；circ_0006692表达可调节A549肺癌细胞增殖、侵袭、转移以及EMT进展。     

基于caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响

目的 基于caspase-3/Bcl2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响。方法 建立肺腺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxol，将细胞分为pcDNANC组（转染pcDNA-NC空白载体）、pc DNA-SMAC组（转染pc DNA-SMAC载体）、siRNA-NC组（转染siRNANC空病毒载体）和siRNA-SMAC组（转染siRNA-SMAC慢病毒载体）。qRT-PCR法检测细胞中SMACmRNA表达；MTT法检测细胞敏感度；克隆实验法检测细胞增殖能力；Transwell法检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞凋亡能力；Western blot法检测细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 肺腺癌A549细胞较BEAS-2B正常细胞中SMAC mRNA表达明显降低（P<0.05）。pcDNA-SMAC组较pcDNA-NC组细胞中SMAC mRNA表达显著升高（P<0.05）。和siRNA-NC组相比，siRNA-SMAC组细胞中SMAC mRNA表达显著降低（P<0.05）。和pcDNA-NC组相比，pcDNA...     

低表达DJ-1调控PI3K/AKT通路对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨低表达DJ-1对肺癌细胞增殖凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:采用Western blot检测肺癌细胞系中DJ-1蛋白的表达;以脂质体法转染干扰SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达后,MTT法检测细胞的增殖变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达水平;将PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理SK-MES-1细胞48 h后,MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达。结果:与正常肺上皮BEAS-2B细胞相比,肺腺癌A549细胞和肺鳞癌SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的相对表达量均显著升高,且SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达量高于A549细胞,差异均有统计学意义（P＜0.05）。转染后siRNA DJ-1组细胞中DJ-1蛋白的表达量明显低于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,转染24 h后siRNA DJ-1组细胞的吸光值（OD值）变化不显著（P＞0.05）,而转染48 h和72 h后细胞的OD值明显降低（P＜0.05）;转染48 h后,与对照组相比,siRNA DJ-1组细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,p-AKT/AKT值显著降低（P＜0.05）。SK-MES-1细胞经抑制剂LY294002处理48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与下调DJ-1表达的结果相一致。结论:DJ-1在肺癌细胞中高表达,下调其表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

慢病毒沉默PRDX4抑制肺癌细胞A549迁移和侵袭及其机制的探讨北大核心

目的:研究慢病毒沉默过氧化物还原酶4(peroxiredoxin 4,PRDX4)对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:采用shRNA干扰技术敲低肺癌细胞系A549中PRDX4的表达,Western blot和qRT-PCR验证转染效果;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot分析p-ERK1/2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果:成功构建沉默PRDX4的肺癌细胞系;慢病毒感染后A549细胞PRDX4蛋白和mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05);与BC组和NC组相比,Sh组细胞迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05);与BC组和NC组相比,Sh组细胞p-ERK1/2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低。结论:沉默PRDX4可能通过ERK信号通路抑制肺癌细胞的迁移和侵袭。     

lncRNA RP11-297P16.4促进肺腺癌细胞侵袭及迁移的机制探讨

目的:探究长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）RP11-297P16.4对人肺腺癌细胞H1299和A549侵袭及迁移的影响。方法:利用qRT-PCR检测在肺腺癌细胞H1299、A549及人正常支气管上皮细胞HBEC 中RP11-297P16.4的相对表达水平;设计合成针对RP11-297P16.4的特异性shRNA,慢病毒感染建立稳定敲低lncRNA RP11-297P16.4的H1299、A549细胞;将其分为对照/H1299组、实验/H1299组、对照/A549组、实验/A549组,对照组感染shRNA-NC,实验组感染shRNA-RP11-297P16.4;qRT-PCR检测shRNA敲低效率;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测RP11-297P16.4对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2和-9的mRNA和蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,RP11-297P16.4在肺腺癌细胞中高表达,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.01）;qRT-PCR分析确定,shRNA敲低后RP11-297P16.4的mRNA表达水平显著降低(P＜0.001,P＜0.001);划痕实验表明24 h、48 h实验组细胞伤口愈合率均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01; P＜0.001,P＜0.001);Transwell小室检测结果显示,实验组细胞侵袭数量显著少于对照组,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.001）;qRT-PCR和蛋白印迹法结果显示,实验组细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白质表达量均低于对照组,差异具有统计学意义（均P＜0.05）。结论:lncRNA RP11-297P16.4 通过促进MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达来增强H1299、A549细胞的侵袭和迁移能力。     

THBS2在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:研究血小板反应蛋白2（thrombospondin 2,THBS2）在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞H1299和A549迁移能力、侵袭能力、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并探究分子机制。方法:运用TIMER和GEPIA数据库分析THBS2 mRNA在泛肿瘤和肺腺癌组织中的表达,利用UALCAN数据库分析THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中的表达差异,通过HPA数据库检测THBS2蛋白在肺腺癌组织中的表达情况。通过免疫印迹实验（Western blot）检测THBS2在人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）和肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达情况。应用质粒转染技术在肺腺癌细胞H1299和A549中分别过表达和敲低THBS2。细胞划痕实验和侵袭实验（Transwell）检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot验证THBS2过表达和敲低效率,同时检测EMT相关蛋白和MMP2的表达水平。结果:TIMER数据库与GEPIA数据库检索结果显示THBS2 mRNA在肺腺癌组织中高表达（P＜0.001）。UALCAN数据库分析证明,与正常肺组织相比,THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中均显著表达（P＜0.001）。HPA数据库结果显示,THBS2蛋白在肺腺癌组织中呈现中高等强度表达。细胞划痕实验、Transwell实验和Western blot结果表明,THBS2在人正常支气管上皮细胞和肺腺癌细胞中的表达有显著差异（P＜0.01）;过表达THBS2可增加肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平减少,而N-cadherin和Vimentin表达水平增加（P＜0.01）;相反的,敲低THBS2可抑制肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平增加,而N-cadherin和Vimentin表达水平减少（P＜0.01）。结论:THBS2在肺腺癌组织中高表达;THBS2在肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达均显著高于人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）;THBS2在肺腺癌细胞H1299和A549中的过表达和敲低影响迁移、侵袭和EMT的过程,可作为肺腺癌治疗的新型潜在靶点。     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145，miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异；不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后，Q-PCR检测miR-145表达变化；miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后，CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞，Western blot检测ADAM19蛋白表达；Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后，SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞，再用5 μmol/L吉非替尼干预，Western blot检测ADAM19蛋白的表达；采用siRNA抑制ADAM19表达，再用5 μmol/L吉非替尼干预，CCK8检测细胞活力；采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法，观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示，与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较，肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低；5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后，miR-145表达显著上调；转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降；双荧光素酶报告系统结果显示，miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区；Western blot结果显示，5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后，两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞，之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗，ADAM19蛋白表达下调；siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达，再给予5 μmol/L吉非替尼治疗，CCK8结果显示，两种细胞的细胞活力显著降低；过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后，显著抑制皮下肿瘤生长，并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性，其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域，从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

CD155通过Ras/Erk通路促进肺腺癌细胞增殖及抑制其凋亡的分子机制

目的:研究CD155通过调控Ras/Erk通路对肺腺癌细胞活性、增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制。方法:通过慢病毒转染法构建过表达或敲低CD155的人肺腺癌H23和H522细胞株,qRT-PCR检测肺腺癌细胞中CD155 mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞活力,免疫荧光法测定细胞增殖和凋亡水平;Western blot检测PCNA、caspase-3、Ras、Erk1蛋白的表达及活化水平;小分子药物FTI 277或FR 180204处理过表达CD155的H23和H522细胞抑制Ras及Erk通路,检测对细胞活性、增殖、凋亡的影响;采用慢病毒共转染的方法构建CD155与SPRY2共同过表达的H23细胞系,免疫共沉淀法检测细胞中SPRY2、CD155蛋白间的结合关系,以同样的方法检测对细胞活性、增殖、凋亡的影响。结果:慢病毒转染肺腺癌H23和H522细胞可上调或下调细胞中CD155的表达,差异具有统计学意义（P＜0.05）;CD155过表达可促进肺腺癌细胞活性、增殖及PCNA蛋白的表达,抑制细胞凋亡及caspase-3的活化,敲低CD155则表现出相反的作用,差异具有统计学意义（P＜0.05）;CD155过表达可激活Ras和Erk1,敲低CD155则抑制Ras和Erk1的激活,差异具有统计学意义（P＜0.05）;抑制Ras和Erk通路可抑制过表达CD155引起的细胞增殖及活性的促进作用,缓解过表达CD155诱导的细胞凋亡,差异具有统计学意义（P＜0.05）;SPRY2过表达逆转CD155过表达对H23细胞增殖及活性的促进作用,抑制对Ras/Erk通路激活的促进作用,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:CD155可通过提高Ras/Erk通路的激活程度,促进肺腺癌细胞在体外的增殖及活性,其作用机制可能是部分由CD155与SPRY2蛋白发生相互作用,降低了SPRY2蛋白对Ras/Erk通路的抑制作用引起的。