半胱氨酰白三烯受体拮抗剂pranlukast对小鼠局灶性脑缺血的治疗作用

目的　观察半胱氨酰白三烯受体拮抗剂pranlukast(ONO 10 78)在小鼠局灶性脑缺血后的治疗作用。方法　采用大脑中动脉阻塞造成小鼠持续性局灶性脑缺血 ,缺血后1、6、2 4h分别给小鼠腹腔注射 pranlukast或依达拉奉 ,观察药物对缺血 2 4、4 8h后的神经功能缺损症状 ,4 8h后的脑梗死体积、两侧大脑半球比值、神经元密度的影响。结果　Pranlukast 0 1、0 2mg·kg-1及依达拉奉 3、10mg·kg-1均能减轻神经症状、减小脑梗死体积、降低缺血侧 /非缺血侧大脑半球比值、减轻海马CA1区、皮层和纹状体的神经元密度降低。结论　Pranlukast脑缺血后给药对脑损伤有治疗作用 ,提示有治疗缺血性脑卒中的临床前景。     

依达拉奉、米诺环素及ONO-1078对缺氧缺糖诱导大鼠海马脑片电生理改变的作用

目的建立离体海马脑片缺氧缺糖(OGD)电生理变化模型,观察依达拉奉、米诺环素和ONO-1078 {pranlukast,4-氧-8-［对-(4-苯丁氧基)苯甲酰氨基］-2-(5-四氮基)-4H-1-苯并吡喃半水化合物}的神经保护作用。方法 大鼠海马脑片以无氧无糖处理,记录脑片群峰电位(PS),部分实验以TTC染色观察脑片活性。结果OGD处理4 min为最佳损伤条件,1 h后可恢复至基础水平的(29±6)%。自由基清除剂依达拉奉(1和10 μmol·L^-1)明显增强PS波的恢复;抗炎药米诺环素(10 μmol·L^-1)和白三烯受体拮抗剂ONO-1078(1 μmol·L^-1)无显著恢复作用;阳性对照药氯胺酮也浓度依赖性促进PS恢复。结论4 min OGD为离体海马脑片缺血电生理变化的可行模型;依达拉奉对OGD脑片损伤有浓度依赖性保护作用,而米诺环素和ONO-1078未显示保护作用。     

氯胺酮的神经保护作用及其对p38蛋白磷酸化激活的影响

目的 :研究NMDA受体拮抗剂氯胺酮对大鼠海马脑片缺糖缺氧 (OGD)损伤的神经保护作用及其对p38蛋白磷酸化激活的影响。方法 :采用大鼠海马脑片体外OGD损伤模型 ,TTC染色抽提法观察氯胺酮对海马脑片OGD损伤时的神经保护作用 ,免疫印迹法研究“缺血再灌注”不同时间大鼠海马脑片中p38磷酸化激活变化情况 ,以及氯胺酮对p38磷酸化激活的影响。结果 :氯胺酮显著抑制海马脑片OGD损伤所致的A值降低 ,p38蛋白在缺血再灌注后磷酸化激活增加 ,再灌注 15min后开始上升 ,2h仍可见持续表达。氯胺酮剂量为 5、10 μmol·L-1时 ,能显著抑制p38蛋白磷酸化激活 (P <0 .0 5 )。结论 :氯胺酮具有一定的神经保护作用 ,其保护作用可能与抑制海马神经元p38蛋白的磷酸化激活有关。     

依达拉奉、米诺环素及ONO-1078对缺氧缺糖诱导大鼠海马脑片电生理改变的作用

目的：建立离体海马脑片缺氧缺糖(OGD)电生理变化模型，观察依达拉奉、米诺环素和ONO-1078{pranlukast，4-氧-8-[对-(4-苯丁氧基)苯甲酰氨基]-2-(5-四氮基)-4H-1-苯并吡喃半水化合物}的神经保护作用。方法：大鼠海马脑片以无氧无糖处理，记录脑片群峰电位(PS)，部分实验以TIC染色     

氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元缺糖/缺氧和N-甲基-D-天冬氨酸损伤的保护作用

目的观察氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元的缺糖/缺氧(OGD)和N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)损伤的潜在保护作用及其机制。方法海马脑片OGD以无葡萄糖的人工脑脊液中通95% N₂+5% CO₂诱导。通过测定TTC染色后形成的红色产物来分析脑片活性。结果氟哌啶醇(1和10 μmol·L^-1)抑制OGD损伤,抑制率分别为17.7%和25%,而D₂多巴胺受体拮抗剂多潘立酮无此作用。NMDA也能显著降低海马脑片及原代神经元的活性,而氟哌啶醇可抑制这一损伤作用。结论氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片OGD和原代神经元NMDA损伤有保护作用。     

二氮嗪预处理大鼠海马脑片抗缺氧无糖损伤作用与激活PKC-ERK1/2通路有关

目的观察二氮嗪预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖(oxygenglucosedeprivation,OGD)损伤的作用及PKC、ERK1/2抑制剂对其的影响。方法建立大鼠海马脑片OGD损伤模型,分别以25、50、100μmol·L-1二氮嗪灌流海马脑片30min,或分别用mitoKATP通道、PKC、ERK1/2抑制剂5HD、chelerythrine、U0126灌流30min,再用二氮嗪(100μmol·L-1)预处理,观察OGD13min、复氧1h后顺向群峰电位(orthodromicpopulationspike,OPS)的变化。结果二氮嗪预处理组(50、100μmol·L-1)OPS消失时间明显延长,复氧供糖后OPS恢复良好;二氮嗪(100μmol·L-1)预处理抗OGD损伤作用可被5HD完全取消,可被chelerythrine或U0126部分取消。结论mitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪预处理有抗海马脑片OGD损伤作用,该效应与激活PKCERK信号通路有关。     

依达拉奉对培养乳鼠海马神经元缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨依达拉奉对海马神经元缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:原代培养海马神经元细胞,制成缺血再灌注损伤模型,分别用 1 μmol·L-1、10 μmol·L-1、100 μmol·L-1、300 μmol·L-1 依达拉奉干预后,在细胞水平上研究依达拉奉对脂质过氧化、线粒体膜电位以及细胞内钙离子浓度的作用.结果:海马神经元在缺血再灌注损伤后,依达拉奉干预均能有效地降低脂质过氧化产物丙二醛含量,增加细胞内超氧化物歧化酶活性.与正常细胞相比,缺血再灌注损伤后,海马神经元的线粒体膜电位降低了60%,加入 100 μmol·L-1和 300 μmol·L-1依达拉奉可以显著提高损伤海马神经元的线粒体膜电位,达到正常神经元线粒体膜电位的82% 和87%.与正常对照组比较, 缺血再灌注损伤组细胞内钙离子浓度增加了81%.依达拉奉 100 μmol·L-1、300 μmol·L-1组的胞内钙离子浓度分别降低了35%和36%.结论:海马神经元缺血再灌注损伤后,依达拉奉具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、稳定线粒体膜电位及降低细胞内钙离子浓度的作用.     

不同浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨高浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组(Control)、缺氧缺糖损伤组(OGD)、芬太尼50μg.L-1组(F50)、芬太尼500μg.L-1组(F500)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价高浓度芬太尼对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低;减少LDH释放;减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bc l-2蛋白表达,增加胞内钙离子浓度。不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)进一步上调bc l-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与芬太尼500μg.L-1相比,芬太尼50μg.L-1作用较强。结论高浓度芬太尼具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且芬太尼对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。随着芬太尼的剂量增加,其保护作用减弱,但在临床应用的剂量范围内未见明显的毒性作用。     

依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞氧化应激的保护作用

目的研究依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法以500μmol.L-1硝普钠诱导PC12细胞氧化应激损伤,MTT法测定细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹检测Bax和Bcl-2表达变化。结果依达拉奉在25μmol.L-1能增加氧化应激损伤细胞活力,在75μmol.L-1其保护作用达到峰值,能明显改善细胞形态结构,减少早期凋亡细胞数目,升高细胞Bcl-2/Bax比值。结论依达拉奉对硝普钠诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与依达拉奉清除NO,抑制线粒体凋亡通路有关。     

含镁及无镁离子人工脑脊液对小鼠离体脑片谷氨酸损伤模型的影响

目的观察含镁与无镁离子两种不同人工脑脊液对小鼠离体脑片谷氨酸损伤模型的影响。方法以培养的小鼠离体脑片为研究对象,分别用含镁离子和无镁离子人工脑脊液对脑片进行培养,不同浓度的谷氨酸(1、3mmol·L-1)损伤30min,用TTC染色及酶标检测方法评价两种人工脑脊液对离体脑片谷氨酸损伤模型的影响。结果用含镁离子人工脑脊液孵育,空白对照组脑片TTC染色后抽提液490nm吸光度值为0·48±0·06,1、3mmol·L-1谷氨酸损伤组吸光度值分别降到0·40±0·05(P<0·05)、0·31±0·06(P<0·01)。而在相同谷氨酸浓度水平,用无镁离子人工脑脊液孵育的脑片的活性均低于用含镁离子人工脑脊液孵育的脑片活性(P<0·01)。结论用两种人工脑脊液进行孵育,均可建立可靠的脑片谷氨酸损伤模型;但无镁离子人工脑脊液比含镁离子人工脑脊液对脑片损伤更为严重,人工脑脊液中的镁离子可能发挥了对脑片的保护作用。     

Effects of ketamine, midazolam, thiopental, and propofol on brain ischemia injury in rat cerebral cortical slices

AIM: To compare the effects of ketamine, midazolam, thiopental, and propofol on brain ischemia by the model of oxygen-glucose deprivation (OGD) in rat cerebral cortical slices. METHODS: Cerebral cortical slices were incubated in 2 % 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) solution after OGD, the damages and effects of ketamine, midazolam, thiopental, and propofol were quantitativlye evaluated by ELISA reader of absorbance (A) at 490 nm, which indicated the red formazan extracted from slices, lactic dehydrogenase (LDH) releases in the incubated supernate were also measured. RESULTS: Progressive prolongation of OGD resulted in decreases of TTC staining. The percentage of tissue injury had a positive correlation with LDH releases, r=0.9609, P<0.01. Two hours of     

大鼠脑片损伤模型和新型定量评价方法的建立

目的　建立不同性质脑损伤实验模型和一种方便、快速、灵敏的定量评价方法。方法　制备大鼠皮层和海马脑片 ,检测活性后 ,分别接受缺氧缺糖 (OGD)、谷氨酸、过氧化氢 (H2 O2 )损伤 ,氯胺酮、D AP5、异丙酚预处理 ,随后与TTC溶液共同孵育 ,有机溶剂抽提 ,酶标仪测定OD4 90 值 ,同时测定孵育上清液乳酸脱氢酶 (LDH)释放率。结果　室温下恢复孵育 90min后 ,海马脑片CA1区锥体细胞层可记录到群体峰电位。随着OGD时间延长 ,皮层和海马脑片TTC染色明显降低 ,孵育上清液LDH释放率逐渐增加 ,组织损伤百分率与LDH释放率明显正相关 :皮层r =0 960 9,P <0 0 1 ;海马r =0 892 1 ,P <0 0 5。和对照组相比 ,谷氨酸 1mmol·L- 1 和H2 O2 2mmol·L- 1 明显降低脑片TTC染色。氯胺酮5μmol·L- 1 、D AP550 μmol·L- 1 、异丙酚 5μmol·L- 1 分别抑制OGD 1 0min、谷氨酸、H2 O2 损伤所致脑片TTC染色降低。结论　利用大鼠脑片建立的缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢损伤实验模型 ,以及新鲜脑片与TTC溶液共同孵育 ,有机溶剂抽提、比色的定量评价方法具有方便、快速、灵敏的特点 ,能有效的用于脑缺血损伤和药效评价的研究     

白三烯拮抗剂ONO-1078对小鼠持续性局灶性脑缺血的作用

目的在小鼠模型研究白三烯拮抗剂{4-氧-8-[对-(4-苯丁氧基)苯甲酰氨基]-2-(5-四唑基)-4H-1-苯并吡喃半水合物(ONO-1078)}对脑缺血的保护作用.方法以大脑中动脉阻塞法诱导持续性局灶性脑缺血.在脑缺血前30min和缺血后60min腹腔注射ONO-1078、尼莫地平或生理盐水(对照).脑缺血24h后,观察神经症状,并测定脑湿重和脑梗死体积.结果ONO-1078(0.01,0.03,0.1mgkg-1)和尼莫地平(0.2 mg*kg-1)减少脑梗死体积;ONO-1078(0.1 mg kg-1)减轻脑湿重,尼莫地平无此作用;ONO-1078和尼莫地平对神经症状无明显作用.结论ONO-1078对持续性局灶性脑缺血有保护作用,提示白三烯拮抗剂可作为急性脑缺血的一种新治疗药.     

H2受体介导组胺对大鼠海马缺氧缺糖诱导细胞水肿及活性降低的保护作用

目的探讨组胺对海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低的作用，以及与受体亚型的关系。方法大鼠海马脑片以缺氧缺糖(OGD)诱导缺血损伤后，实时检测CA1区透光度变化评价细胞水肿；并测定2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物甲，评价脑片活性。观察不同浓度组胺的作用，以及组胺受体拮抗剂对组胺作用的影响。结果 组胺(0.01～10 μmol·L^-1)明显抑制OGD诱导的海马脑片透光度增加，并提高脑片活性。H₁受体拮抗剂苯海拉明(0.1～10 μmol·L^-1)不影响组胺的作用，H₂受体拮抗剂西咪替丁(0.1～10 μmol·L^-1)则部分拮抗组胺的保护作用。结论组胺对大鼠海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低有保护作用，该作用与H₂受体有关。     

Neuroprotective effects of stearic acid against toxicity of oxygen/glucose deprivation or glutamate on rat cortical or hippocampal slices

AIM: To observe the effects of stearic acid, a long-chain saturated fatty acid consisting of 18 carbon atoms, on brain (cortical or hippocampal) slices insulted by oxygen-glucose deprivation (OGD), glutamate or sodium azide (NaN3) in vitro. METHODS: The activities of hippocampal slices were monitored by population spikes recorded in the CA1 region. In vitro injury models of brain slice were induced by 10 min of OGD, 1 mmol/L glutamate or 10 mmol/L NaN3. After 30 min of pre-incubation with stearic acid (3-30 micromol/L), brain slices (cortical or hippocampal) were subjected to OGD, glutamate or NaN3, and the tissue activities were evaluated by using the 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride method. MK886 [5 mmol/L; a noncompetitive inhibitor of proliferator-activated receptor (PPAR-alpha)] or BADGE (bisphenol A diglycidyl ether; 100 micromol/L; an antagonist of PPAR-gamma) were tested for their effects on the neuroprotection afforded by stearic acid. RESULTS: Viability of brain slices was not changed significantly after direct incubation with stearic acid. OGD, glutamate and NaN3 injury significantly decreased the viability of brain slices. Stearic acid (3-30 micromol/L) dose-dependently protected brain slices from OGD and glutamate injury but not from NaN3 injury, and its neuroprotective effect was completely abolished by BADGE. CONCLUSION: Stearic acid can protect brain slices (cortical or hippocampal) against injury induced by OGD or glutamate. Its neuroprotective effect may be mainly mediated by the activation of PPAR-gamma.     

Monosialoganglioside protected ischemic rat hippocampal slices through stabilizing expression of N-methyl-D-aspartate receptor subunit

INTRODUCTION Monosialoganglioside(GM1) can alleviatecerebraledema and reduce cerebral infarct volume in in vivoanimal models[1-3], and can prevent death of culturedgranule cells in vitro from anoxia as well[4]. However,meaning of data derived from a neural preparation with-out a vasculature and mammalian systemicinteractionis limited. The direct protective effect of GM1 on is-subunits are mainly distributed in the forebrain[5], and μmol/L (control group), 0.01 μmol/L(gr…