含镁及无镁离子人工脑脊液对小鼠离体脑片谷氨酸损伤模型的影响

目的观察含镁与无镁离子两种不同人工脑脊液对小鼠离体脑片谷氨酸损伤模型的影响。方法以培养的小鼠离体脑片为研究对象,分别用含镁离子和无镁离子人工脑脊液对脑片进行培养,不同浓度的谷氨酸(1、3mmol·L-1)损伤30min,用TTC染色及酶标检测方法评价两种人工脑脊液对离体脑片谷氨酸损伤模型的影响。结果用含镁离子人工脑脊液孵育,空白对照组脑片TTC染色后抽提液490nm吸光度值为0·48±0·06,1、3mmol·L-1谷氨酸损伤组吸光度值分别降到0·40±0·05(P<0·05)、0·31±0·06(P<0·01)。而在相同谷氨酸浓度水平,用无镁离子人工脑脊液孵育的脑片的活性均低于用含镁离子人工脑脊液孵育的脑片活性(P<0·01)。结论用两种人工脑脊液进行孵育,均可建立可靠的脑片谷氨酸损伤模型;但无镁离子人工脑脊液比含镁离子人工脑脊液对脑片损伤更为严重,人工脑脊液中的镁离子可能发挥了对脑片的保护作用。     

仙人掌多糖组分对大鼠脑片氧化应激损伤的保护作用

目的研究仙人掌多糖对H_2O_2所致大鼠大脑皮质和海马脑片氧化应激损伤是否有保护作用。方法大鼠离体皮质和海马脑片与2mmol·L-1H_2O_2共孵育30min造成脑片的氧化应激损伤,分别于加入H_2O_2前加入仙人掌多糖作用30min,与H2O2同时加入仙人掌多糖作用30min或在H2O2损伤之后加入仙人掌多糖作用2h。TTC染色法检测脑片活性,并检测脑片培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽(GSH)含量和总抗氧化能力(T-AOC)。结果H2O2孵育30min明显损伤大鼠海马和皮质脑片,TTC染色A490nm值下降,LDH释放增加,GSH含量和总抗氧化能力降低。加入H_2O_2前预先加入仙人掌多糖0.333和1.67mg·L-1作用30min显著抑制上述H2O2所致脑片损伤,使受损脑片孵育液中GSH含量增加,SOD活性和总抗氧化能力升高。结论仙人掌多糖能够减轻H2O2所致大鼠大脑皮质和海马脑片的氧化应激损伤,其机制可能与其增强机体的抗氧化能力有关。     

γ-羟基丁酸受体在羟丁酸钠保护大鼠海马缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨γ-氨基丁酸(GABA)受体与γ-羟基丁酸(GHB)受体在羟丁酸钠(SO)对脑缺血的保护中何者更重要,为临床治疗脑缺血再灌注损伤寻找新的药物靶标。方法采用大鼠海马脑片缺氧复氧(H-R)损伤模型。设正常对照组、H-R模型组、SO1,10和100μmol·L-1组;NCS-382(GHB受体拮抗剂)100μmol·L-1组、荷包牡丹碱(Bic,GABAA受体拮抗剂)100μmol·L-1+saclofen(Sac,GABAB受体拮抗剂)100μmol·L-1(Bic+Sac)组、SO100μmol·L-1+NCS-382100μmol·L-1(SO+NCS-382)组、SO100μmol·L-1+Bic100μmol·L-1+Sac100μmo·lL-1(SO+Bic+Sac)组和SO100μmol·L-1+NCS-382100μmo·lL-1+Bic100μmol·L-1+Sac100μmol·L-1(SO+NCS-382+Bic+Sac)组。用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率及TTC染色法检测脑组织损伤。结果模型组LDH释放率为(41.5±8.1)%,明显高于对照组(n=6,P<0.01);TTC染色的A490nm值为0.030±0.008,显著低于对照组(n=6,P<0.01)。SO1,10和100μmo·lL-1组的LDH释放率较模型组显著降低(n=6,P<0.05,P<0.01,P<0.01);TTC染色的A490nm值则明显升高(n=6,P<0.05,P<0.01,P<0.01)。单用GHB受体阻断剂NCS-382,或联合使用GABAA与GABAB受体阻断剂Bic+Sac,LDH释放率和TTC染色的A490nm值均接近模型组(n=6,P>0.05)。SO+NCS-382组LDH释放率较SO100μmol·L-1组明显升高(n=6,P<0.01);SO+NCS-382组和SO+Bic+Sac组TTC染色的A490nm值较SO100μmol·L-1组显著降低(n=6,P<0.01,P<0.05);而SO+NCS-382+Bic+Sac组LDH释放率和TTC染色的A490nm值都与SO100μmol·L-1组有明显差异(n=6,P<0.01),且较SO+Bic+Sac组更明显(n=6,P<0.01),但与SO+NCS-382比较没有明显差异。结论阻断GHB受体比阻断GABA受体对SO对大鼠海马脑片H-R损伤的保护作用影响更大。     

P2X7受体介导异丙酚对缺氧海马突触前膜谷氨酸Ca~(2+)依赖性释放的抑制作用

目的观察嘌呤P2X7受体激动剂和拮抗剂以及异丙酚对大鼠缺氧海马突触前膜谷氨酸释放的影响及P2X7受体是否介导异丙酚的作用。方法选用SD♂大鼠,制备突触体,置入无糖并充以95%N2/5%CO2的人工脑脊液(aCSF)中进行缺氧实验。向无糖aCSF中加入P2X7受体特异性拮抗剂BBG(终浓度1μmol·L-1)或P2X7受体特异性激动剂BZATP(终浓度100μmol·L-1)。于缺氧前、缺氧20min及40min时测定孵育液中谷氨酸浓度,谷氨酸Ca2+非依赖性释放试验中将Ca2+、DHK(谷氨酸转运体抑制剂)从aCSF中去除。观察异丙酚对谷氨酸Ca2+依赖性释放的影响时,分别向无糖aCSF中加入1～100μmol·L-1的异丙酚,然后进行缺氧40min,测定孵育液中谷氨酸浓度并计算异丙酚的半效抑制浓度(IC50)。观察P2X7受体在异丙酚抑制效应中的作用时,施加异丙酚(2倍IC50水平)、异丙酚和BBG(终浓度1μmol·L-1)或异丙酚和BZATP(终浓度100μmol·L-1)。缺氧40min后测定孵育液中谷氨酸浓度。结果缺氧不同时点海马突触体谷氨酸Ca2+依赖性释放增加(P<0.01),BBG可完全抑制谷氨酸释放(P<0.01),BZATP则进一步使谷氨酸释放增加(P<0.01)。谷氨酸Ca2+非依赖性释放在缺氧各时点无变化。异丙酚可浓度依赖性的抑制谷氨酸Ca2+依赖性释放,IC50为(27.4±5.2)μmol·L-1。55μmol·L-1(2倍IC50)异丙酚与BBG或与BZATP共同作用下的谷氨酸Ca2+依赖性释放水平与单独应用异丙酚比较差异无显著性(P>0.05)。结论缺氧状态下,P2X7受体介导海马突触前膜谷氨酸Ca2+依赖性释放,异丙酚通过抑制P2X7受体而呈浓度依赖性的抑制谷氨酸Ca2+依赖性释放。     

氯胺酮的神经保护作用及其对p38蛋白磷酸化激活的影响

目的 :研究NMDA受体拮抗剂氯胺酮对大鼠海马脑片缺糖缺氧 (OGD)损伤的神经保护作用及其对p38蛋白磷酸化激活的影响。方法 :采用大鼠海马脑片体外OGD损伤模型 ,TTC染色抽提法观察氯胺酮对海马脑片OGD损伤时的神经保护作用 ,免疫印迹法研究“缺血再灌注”不同时间大鼠海马脑片中p38磷酸化激活变化情况 ,以及氯胺酮对p38磷酸化激活的影响。结果 :氯胺酮显著抑制海马脑片OGD损伤所致的A值降低 ,p38蛋白在缺血再灌注后磷酸化激活增加 ,再灌注 15min后开始上升 ,2h仍可见持续表达。氯胺酮剂量为 5、10 μmol·L-1时 ,能显著抑制p38蛋白磷酸化激活 (P <0 .0 5 )。结论 :氯胺酮具有一定的神经保护作用 ,其保护作用可能与抑制海马神经元p38蛋白的磷酸化激活有关。     

二氮嗪预处理大鼠海马脑片抗缺氧无糖损伤作用与激活PKC-ERK1/2通路有关

目的观察二氮嗪预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖(oxygenglucosedeprivation,OGD)损伤的作用及PKC、ERK1/2抑制剂对其的影响。方法建立大鼠海马脑片OGD损伤模型,分别以25、50、100μmol·L-1二氮嗪灌流海马脑片30min,或分别用mitoKATP通道、PKC、ERK1/2抑制剂5HD、chelerythrine、U0126灌流30min,再用二氮嗪(100μmol·L-1)预处理,观察OGD13min、复氧1h后顺向群峰电位(orthodromicpopulationspike,OPS)的变化。结果二氮嗪预处理组(50、100μmol·L-1)OPS消失时间明显延长,复氧供糖后OPS恢复良好;二氮嗪(100μmol·L-1)预处理抗OGD损伤作用可被5HD完全取消,可被chelerythrine或U0126部分取消。结论mitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪预处理有抗海马脑片OGD损伤作用,该效应与激活PKCERK信号通路有关。     

不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的:探讨不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法:建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组、缺氧缺糖损伤组、丹参酮20mg·L-1组和丹参酮200mg·L-1组。利用2,3,5三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价不同浓度丹参酮对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果:不同浓度丹参酮(20、200mg·L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低,减少LDH释放,减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bcl2蛋白表达和胞内钙离子浓度。不同浓度丹参酮(20、200mg·L-1)进一步上调bcl2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与丹参酮20mg·L-1相比,丹参酮200mg·L-1作用较强。结论:不同浓度丹参酮具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且丹参酮对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。     

依达拉奉、米诺环素及ONO-1078对缺氧缺糖诱导大鼠海马脑片电生理改变的作用

目的建立离体海马脑片缺氧缺糖(OGD)电生理变化模型,观察依达拉奉、米诺环素和ONO-1078 {pranlukast,4-氧-8-［对-(4-苯丁氧基)苯甲酰氨基］-2-(5-四氮基)-4H-1-苯并吡喃半水化合物}的神经保护作用。方法 大鼠海马脑片以无氧无糖处理,记录脑片群峰电位(PS),部分实验以TTC染色观察脑片活性。结果OGD处理4 min为最佳损伤条件,1 h后可恢复至基础水平的(29±6)%。自由基清除剂依达拉奉(1和10 μmol·L^-1)明显增强PS波的恢复;抗炎药米诺环素(10 μmol·L^-1)和白三烯受体拮抗剂ONO-1078(1 μmol·L^-1)无显著恢复作用;阳性对照药氯胺酮也浓度依赖性促进PS恢复。结论4 min OGD为离体海马脑片缺血电生理变化的可行模型;依达拉奉对OGD脑片损伤有浓度依赖性保护作用,而米诺环素和ONO-1078未显示保护作用。     

硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ-氨基丁酸释放的影响

目的　观察硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ 氨基丁酸 (GABA)Ca2 + 依赖性和Ca2 + 非依赖性释放的影响。方法　制备大鼠前额皮层粗突触体。用人工脑脊液(aCSF)孵育 ,分为 5组 :基础释放组 (Base)、硫喷妥钠 10μmol·L-1组 (THS10 )、硫喷妥钠 30 μmol·L-1组 (THS30 )、硫喷妥钠 10 0 μmol·L-1组 (THS10 0 )、硫喷妥钠 30 0 μmol·L-1组 (THS30 0 ) ,每组含 8份突触体。向每组各等份突触体反应液中加入不同浓度的硫喷妥钠 (Base组不加入 ) ,于 37℃条件下应用 30mmol·L-1KCl或 2 0 μmol·L-1veratridine诱发谷氨酸和GABA释放。应用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定各反应液中的谷氨酸和GABA浓度。观察谷氨酸和GABACa2 + 非依赖性释放时 ,aCSF中不含Ca2 + 。结果　硫喷妥钠 30、10 0、30 0 μmol·L-1可显著抑制KCl或vera tridine诱发的Ca2 + 依赖性谷氨酸释放 (P <0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 1) ,IC50 分别为 2 5 6 μmol·L-1和 2 6 3μmol·L-1;THS10与THS30组 ,THS30与THS10 0组之间差异有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 1)。硫喷妥钠各浓度组中 ,Ca2 + 依赖性GABA释放及Ca2 + 非依赖性谷氨酸和GABA释放水平与Base组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　硫喷妥钠可剂量依赖性地抑制大     

小鼠脑片Formazan定量测量方法评价缺血性损伤及神经保护作用

目的　建立一种定量测量 2 ,3,5 三苯基四氮唑(TTC)红色还原产物formazan的方法 ,用于评估离体脑片缺血性损伤以及依达拉奉和ONO 10 78的神经保护作用。方法　以TTC为底物在小鼠脑片生物合成formazan标准品 ,并进行分离、纯化和鉴定。小鼠脑片以缺氧缺糖 (OGD)方法诱导损伤 ,用分光光度法在 4 90nm处测量皮质和纹状体formazan合成量。依达拉奉和ONO 10 78加入培养液 ,观察其神经保护作用。结果　合成并纯化了formazan标准品 ,其纯度为 0 993,线性测量范围在 0 0 5～ 1g·L-1。OGD减少formazan合成 ,与处理时间有依赖性。依达拉奉 (0 0 1～ 1μmol·L-1)抑制OGD诱导的formazan合成减少 ,而ONO 10 78无作用。结论　定量测量formazan是一种评价离体脑片损伤及药物神经保护作用的有用方法。     

Effects of ketamine, midazolam, thiopental, and propofol on brain ischemia injury in rat cerebral cortical slices

AIM: To compare the effects of ketamine, midazolam, thiopental, and propofol on brain ischemia by the model of oxygen-glucose deprivation (OGD) in rat cerebral cortical slices. METHODS: Cerebral cortical slices were incubated in 2 % 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) solution after OGD, the damages and effects of ketamine, midazolam, thiopental, and propofol were quantitativlye evaluated by ELISA reader of absorbance (A) at 490 nm, which indicated the red formazan extracted from slices, lactic dehydrogenase (LDH) releases in the incubated supernate were also measured. RESULTS: Progressive prolongation of OGD resulted in decreases of TTC staining. The percentage of tissue injury had a positive correlation with LDH releases, r=0.9609, P<0.01. Two hours of     

不同浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨高浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组(Control)、缺氧缺糖损伤组(OGD)、芬太尼50μg.L-1组(F50)、芬太尼500μg.L-1组(F500)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价高浓度芬太尼对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低;减少LDH释放;减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bc l-2蛋白表达,增加胞内钙离子浓度。不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)进一步上调bc l-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与芬太尼500μg.L-1相比,芬太尼50μg.L-1作用较强。结论高浓度芬太尼具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且芬太尼对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。随着芬太尼的剂量增加,其保护作用减弱,但在临床应用的剂量范围内未见明显的毒性作用。     

Neuroprotective effects of stearic acid against toxicity of oxygen/glucose deprivation or glutamate on rat cortical or hippocampal slices

AIM: To observe the effects of stearic acid, a long-chain saturated fatty acid consisting of 18 carbon atoms, on brain (cortical or hippocampal) slices insulted by oxygen-glucose deprivation (OGD), glutamate or sodium azide (NaN3) in vitro. METHODS: The activities of hippocampal slices were monitored by population spikes recorded in the CA1 region. In vitro injury models of brain slice were induced by 10 min of OGD, 1 mmol/L glutamate or 10 mmol/L NaN3. After 30 min of pre-incubation with stearic acid (3-30 micromol/L), brain slices (cortical or hippocampal) were subjected to OGD, glutamate or NaN3, and the tissue activities were evaluated by using the 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride method. MK886 [5 mmol/L; a noncompetitive inhibitor of proliferator-activated receptor (PPAR-alpha)] or BADGE (bisphenol A diglycidyl ether; 100 micromol/L; an antagonist of PPAR-gamma) were tested for their effects on the neuroprotection afforded by stearic acid. RESULTS: Viability of brain slices was not changed significantly after direct incubation with stearic acid. OGD, glutamate and NaN3 injury significantly decreased the viability of brain slices. Stearic acid (3-30 micromol/L) dose-dependently protected brain slices from OGD and glutamate injury but not from NaN3 injury, and its neuroprotective effect was completely abolished by BADGE. CONCLUSION: Stearic acid can protect brain slices (cortical or hippocampal) against injury induced by OGD or glutamate. Its neuroprotective effect may be mainly mediated by the activation of PPAR-gamma.     

氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元缺糖/缺氧和N-甲基-D-天冬氨酸损伤的保护作用

目的观察氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元的缺糖/缺氧(OGD)和N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)损伤的潜在保护作用及其机制。方法海马脑片OGD以无葡萄糖的人工脑脊液中通95% N₂+5% CO₂诱导。通过测定TTC染色后形成的红色产物来分析脑片活性。结果氟哌啶醇(1和10 μmol·L^-1)抑制OGD损伤,抑制率分别为17.7%和25%,而D₂多巴胺受体拮抗剂多潘立酮无此作用。NMDA也能显著降低海马脑片及原代神经元的活性,而氟哌啶醇可抑制这一损伤作用。结论氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片OGD和原代神经元NMDA损伤有保护作用。     

H2受体介导组胺对大鼠海马缺氧缺糖诱导细胞水肿及活性降低的保护作用

目的探讨组胺对海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低的作用，以及与受体亚型的关系。方法大鼠海马脑片以缺氧缺糖(OGD)诱导缺血损伤后，实时检测CA1区透光度变化评价细胞水肿；并测定2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物甲，评价脑片活性。观察不同浓度组胺的作用，以及组胺受体拮抗剂对组胺作用的影响。结果 组胺(0.01～10 μmol·L^-1)明显抑制OGD诱导的海马脑片透光度增加，并提高脑片活性。H₁受体拮抗剂苯海拉明(0.1～10 μmol·L^-1)不影响组胺的作用，H₂受体拮抗剂西咪替丁(0.1～10 μmol·L^-1)则部分拮抗组胺的保护作用。结论组胺对大鼠海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低有保护作用，该作用与H₂受体有关。     

钙蛋白酶抑制剂calpeptin对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用

目的通过观察电生理学和神经元凋亡的变化,研究钙蛋白酶抑制剂calpeptin对大鼠离体海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用。方法40片SD大鼠海马脑片随机分为两组:对照组和calpeptin组。根据人工脑脊液中calpeptin的浓度,再细分为1μmol.L-1组、10μmol.L-1组、100μmol.L-1组和200μmol.L-1组,每组8片脑片。采用细胞外记录技术观察calpeptin对大鼠离体海马脑片在缺氧无糖条件下顺向群峰电位(orthodromicpopulationspikes,OPS)及缺氧损伤电位(hypoxicinjurypotential,HIP)变化的影响,采用TUNEL法观察缺氧无糖损伤后海马脑片CA1区锥体细胞凋亡情况及calpeptin对它的影响。结果10μmol.L-1组、100μmol.L-1组和200μmol.L-1组HIP出现率及海马CA1区锥体细胞层凋亡细胞数减少,OPS恢复率和OPS恢复程度与对照组比较提高。而10μmol.L-1组、100μmol.L-1组和200μmol.L-1组之间各项指标差异无显著性。结论(10～200)μmol.L-1calpeptin可以减轻大鼠海马脑片的缺氧无糖损伤,其机制可能与calpeptin减少海马CA1区神经元凋亡有关。     

Monosialoganglioside protected ischemic rat hippocampal slices through stabilizing expression of N-methyl-D-aspartate receptor subunit

INTRODUCTION Monosialoganglioside(GM1) can alleviatecerebraledema and reduce cerebral infarct volume in in vivoanimal models[1-3], and can prevent death of culturedgranule cells in vitro from anoxia as well[4]. However,meaning of data derived from a neural preparation with-out a vasculature and mammalian systemicinteractionis limited. The direct protective effect of GM1 on is-subunits are mainly distributed in the forebrain[5], and μmol/L (control group), 0.01 μmol/L(gr…