Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的探讨生存素反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌细胞SGC7901凋亡的诱导作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。胃癌细胞株SGC7901分为4组:空白对照组(Sham)、单纯脂质体对照组(Lip)、正义链转染对照组(Lip-SODN)、ASODN转染组(Lip-ASODN)。作用12、24、48 h后收获各组细胞。Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,倒置显微镜观察细胞生长形态变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,免疫组化SP法检测细胞中Ki67表达。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞出现survivin蛋白表达明显下降;形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、凋亡小体形成;细胞凋亡率明显高于各对照组(P<0.05);细胞中Ki67表达水平明显降低。结论survivin反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,具有明显的抗癌作用。     

Survivin联用bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨survivin、bcl-2反义寡核苷酸(ASODN)联用对白血病细胞凋亡的诱导作用。方法:设计并合成靶向survivin ASODN和bcl-2的ASODN,应用脂质体Lipofectamine TM2000作为载体,转染寡核苷酸入白血病K562细胞。实验分为空白对照组、脂质体空转染组、无关序列寡核苷酸组、survivin ASODN组、bcl-2ASODN组和survivin、bcl-2ASODN半量联用组。转染48h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR半定量检测K562细胞survivin mRNA表达。结果:survivin ASODN和bcl-2ASODN对K562细胞均有一定的增殖抑制作用,抑制率分别为48.78%、40.24%。而survivin、bcl-2ASODN半量联用组的细胞增殖抑制率为60.98%,明显高于单用组(P<0.01)。与非ASODN组相比,survivin ASODN和bcl-2ASODN均可诱导K562细胞凋亡,凋亡率分别为(13.36±4.03)%、(10.40±1.71)%,两者联用凋亡率提高到(26.14±4.39)%(P<0.01)。Survivin、bcl-2ASODN半量联用组survivin mRNA水平明显低于survivin ASODN组和bcl-2ASODN组。结论:survivin、bcl-2ASODN联用可协同抑制K562细胞的增殖,增强凋亡诱导作用,可为白血病基因治疗提供一项新策略。     

超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对CHG-5细胞的阻断作用

目的探讨超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对人胶质瘤细胞系CHG-5的阻断作用。 方法针对survivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸,将实验分为4组。A组：survivin反义寡核苷酸（ASOND）并超声微泡造影剂联合超声照射;B组：survivin反义寡核苷酸（ASOND）并脂质体转染联合超声照射;C组：survivin反义寡核苷酸（ASOND）并脂质体转染;D组：空白对照组。利用免疫细胞化学及Western blotting检测survivin蛋白的表达变化,MTT法检测细胞增殖的变化。 结果采用超声微泡造影剂联合超声照射介导的survivin反义寡核苷酸基因组,CHG-5细胞中survivin蛋白表达无论是免疫组化检测结果还是Western blotting检测结果都较其他组明显降低（P〈0.05）,CHG-5细胞生长率也明显受到抑制（P〈0.05）。 结论超声微泡造影剂介导的survivin反义寡核苷酸转染是一种无创、新型、高效的基因转染方法。     

凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的实验观察

目的：探讨凋亡：抑制基因survivin反义寡核苷酸单用或联用bcl-2反义寡核苷酸对肺癌细胞株的作用，探讨其在抗癌方面的作用。方法：①实验于2002-08／2003-04在蚌埠医学院免疫学实验室完成。将对数生长期NCI—H446细胞分为6组：空白对照组，脂质体10mg／L组（仅加空脂质体），NSODN 500nmol／L组（该3组均为对照组），survivin反义寡核苷酸500nmol／L组，bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L，survivin反义寡核苷酸500nmol／L＋bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L组（分别在脂质体介导下转染不同寡核苷酸，48h后收取细胞进行以下检测）。②在脂质体介导下，以survivin的反义寡核苷酸作用于肺癌细胞株NCI-H446和SPC—A1，于72h用反转录聚合酶链反应检测survivin mRNA表达。凋亡指数：（静止期／DNA合成前期）占整个细胞周期的百分比；增殖指数=（DNA复制期＋合成后期／有丝分裂期）占整个细胞周期的百分比。②survivin反义寡核苷酸单独或联合bcl-2反义寡核苷酸作用NCI—H446后，用四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长抑制率并计算两药相互作用指数，锥虫蓝拒染实验检测细胞死亡率。（3）计量资料差异性比较采用方差分析和q检验。结果：①两种肺癌细胞株皆表达survivin基因。survivin反义寡核苷酸作用细胞株后，出现生长抑制和细胞凋亡，细胞survivin mRNA明显下调，反义寡核苷酸500nmol／L作用72h后NCI—H446和SPC—A1细胞survivin mRNA抑制率分别达62．72％和67．43％。②四甲基偶氮唑盐法检测结果显示，survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸单独应用对NCI—H446细胞均有生长抑制作用；联合应用survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸的细胞生长抑制率为64．9％，优于单独应用（单用bcl-2反义寡核苷酸为34．2％）（P〈0．01），两药相互作用指数为0．708。锥虫蓝拒染实验显示，survivin反义寡核苷酸500nmol／L＋bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L组细胞死亡率为62．1％，高于两药单用时的31．4％和41．4％。流式细胞仪检测凋亡显示，与各对照组相比，survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸均可诱导细胞凋亡，凋亡率分别为43．6％和30．7％，两者联用凋亡率提高到58．6％（p〈0．01）。结论：①survivin反义寡核苷酸能抑制肺癌细胞株survivin基因表达，并诱导细胞凋亡和抑制生长。②survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸具有显著协同抗癌作用。     

聚酰胺-胺型树枝状高聚合物介导Survivin反义寡核苷酸抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用

背景：采用反义寡核苷酸等治疗方法可以抑制凋亡抑制因子Survivin的表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡。目前使用Survivin治疗恶性肿瘤仍存在基因载体转染效率低下、不能长期稳定表达、易被酶降解等难题。目的：观察聚酰胺-胺型树枝状高聚合物（polyamidoamine,PAMAM）脂质体介导Survivin-反义寡核苷酸对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法：以人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下注射建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将PAMAM脂质体和PAMAM分别与Survivin-反义寡核苷酸混合得到载反义基因转染复合物。测定复合物的zeta电位及包封率。将两种载基因复合物注射道裸鼠移植瘤体内,观察两组移植瘤大小,检测移植瘤组织中survivin基因的表达。结果与结论：PAMAM脂质体-survivin-反义寡核苷酸复合物的zeta电位高于PAMAM-survivin-反义寡核苷酸复合物（P〈0.05）,基因包封率两组比较差异无显著性意义（P〉0.05）。PAMAM脂质体-survivin-反义寡核苷酸复合物治疗组裸鼠移植瘤质量及survivin蛋白表达低于PAMAM-survivin-反义寡核苷酸复合物组（P〈0.05）。提示PAMAM脂质体能将Survivin-反义寡核苷酸高效递送到人肝癌移植瘤细胞,降低survivin蛋白的表达,诱导移植瘤细胞凋亡。     

TGF-β1反义寡核苷酸对肾间质细胞的作用

[目的]探讨转化生长因子β1(TGF-β1)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASODN)在肾纤维化发病机制中的作用.[方法]采用RT-PCR、Western blot检测脂质体介导的TGF-β1 ASODN目的基因及蛋白的表达;通过细胞生长试验、流式细胞仪检测TGF-β1 ASODN转染前后细胞增殖和凋亡的变化.[结果]转染后可见TGF-β1的基因及蛋白表达明显下调;和对照组相比,可明显抑制成纤维细胞的增殖,诱导其凋亡(P＜0.01).[结论]转化生长因子β1反义寡核苷酸对肾间质成纤维细胞具有明显的抑制作用,转染脂质体介导的TGF-β1 ASODN在治疗肾纤维化探讨中可能具有重要意义.     

STAT3反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的 探讨STAT3反义寡核苷酸对HepG2细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法： HepG2细胞体外培养，人工合成并硫代修饰STAT3 ASODN，通过脂质体转染进入HepG2细胞，倒置显微镜下观察细胞形态学变化、 MTT法检测细胞增殖抑制程度，原位末端标记（Tunel）法检测细胞凋亡指数（AI）， RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA 的表达水平，流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞凋亡率。结果： STAT3 ASODN各浓度组对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用，能明显诱导细胞凋亡。结论： STAT3 ASODN能够诱导HepG2细胞凋亡。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的作用探讨

目的:探讨特异性生存素(survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对急性早幼粒细胞系HL-60细胞增殖、凋亡的影响。方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,原位末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡指数(AI),RT-PCR半定量测定细胞中survivinmRNA的表达。结果:(1)survivinASODN各浓度组对HL-60细胞的增殖均有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。(2)survivinASODN处理组HL-60细胞的凋亡率与空白对照组、正义对照组和空转染组相比,差异有显著性(P<0.01)。(3)survivinASODN处理组HL-60细胞的survivinmRNA表达水平明显下调。结论:survivinASODN能明显抑制HL-60细胞中survivinmRNA的表达,诱导细胞凋亡。     

survivin和VEGF反义寡核苷酸转染对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞经存活蛋白(survivin)和血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)单独和联合转染后细胞增殖抑制率和凋亡率的改变。方法以脂质体(Lip)为载体,介导不同浓度survivin和VEGFASODN单独和联合转染A549细胞,观察细胞生长状态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果200、400、600 nmol/L survivin ASODN和5、10、20μmol/L VEGF ASODN均能抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡率,抑制效应呈剂量依赖性;两者联合转染细胞生长抑制率和凋亡率与单独转染差异显著(P<0.01)。结论 survivin ASODN和VEGFASODN联合较单独应用能明显抑制A549细胞生长,促进细胞凋亡。研究结果为NSCLC双靶点治疗提供了实验依据。     

凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的实验观察

目的探讨凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸单用或联用bcl-2反义寡核苷酸对肺癌细胞株的作用,探讨其在抗癌方面的作用。方法①实验于2002-08/2003-04在蚌埠医学院免疫学实验室完成。将对数生长期NCI-H446细胞分为6组空白对照组,脂质体10m g/L组(仅加空脂质体),NSODN500nm ol/L组(该3组均为对照组),survivin反义寡核苷酸500nm ol/L组,bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L,survivin反义寡核苷酸500nm ol/L+bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L组(分别在脂质体介导下转染不同寡核苷酸,48h后收取细胞进行以下检测)。②在脂质体介导下,以survivin的反义寡核苷酸作用于肺癌细胞株NCI-H446和SPC-A1,于72h用反转录聚合酶链反应检测survivin mRNA表达。凋亡指数=(静止期/DNA合成前期)占整个细胞周期的百分比;增殖指数=(DNA复制期+合成后期/有丝分裂期)占整个细胞周期的百分比。②survivin反义寡核苷酸单独或联合bcl-2反义寡核苷酸作用NCI-H446后,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长抑制率并计算两药相互作用指数,锥虫蓝拒染实验检测细胞死亡率。③计量资料差异性比较采用方差分析和q检验。结果①两种肺癌细胞株皆表达survivin基因。survivin反义寡核苷酸作用细胞株后,出现生长抑制和细胞凋亡,细胞survivin m RNA明显下调,反义寡核苷酸500nm ol/L作用72h后NCI-H446和SPC-A1细胞survivin m RNA抑制率分别达62.72%和67.43%。②四甲基偶氮唑盐法检测结果显示,survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸单独应用对NCI-H446细胞均有生长抑制作用;联合应用survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸的细胞生长抑制率为64.9%,优于单独应用(单用bcl-2反义寡核苷酸为34.2%)(P<0.01),两药相互作用指数为0.708。锥虫蓝拒染实验显示,survivin反义寡核苷酸500nm ol/L+bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L组细胞死亡率为62.1%,高于两药单用时的31.4%和41.4%。流式细胞仪检测凋亡显示,与各对照组相比,survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸均可诱导细胞凋亡,凋亡率分别为43.6%和30.7%,两者联用凋亡率提高到58.6%(P<0.01)。结论①survivin反义寡核苷酸能抑制肺癌细胞株survivin基因表达,并诱导细胞凋亡和抑制生长。②survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸具有显著协同抗癌作用。     

STAT3反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的:探讨STAT3反义寡核苷酸(ASODN)对HepG2细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法:HepG2细胞体外培养,人工合成并硫代修饰STAT3 ASODN,通过脂质体转染进入HepG2细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞增殖抑制程度,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA的表达水平。结果:STAT3 ASODN各浓度组对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,能明显诱导细胞凋亡。结论:STAT3 ASODN能够诱导HepG2细胞凋亡。     

BHRF1基因对丝裂霉素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡影响

目的探讨EB病毒早期基因BHRF1的表达对丝裂霉素诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-BHRF1表达载体,应用脂质体转染法将BHRF1表达载体转染胃癌细胞系SGC7901,MTT法检测细胞生长情况。实验分为细胞对照组、空载体对照组和目的基因转染组,细胞对照组仅接种SGC7901细胞,空载体对照组将pcDNA3.1空载体转染入SGC7901细胞中,目的基因转染组将重组质粒pcDNA3.1-BHRF1转染入SGC7901细胞中。分别培养24、48和72 h后,用浓度为30 mg/L的丝裂霉素处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色方法检测凋亡小体。结果 pcDNA3.1-BHRF1重组质粒构建成功。MTT实验显示目的基因转染能明显拮抗由于丝裂霉素作用导致的细胞生长抑制;BHRF1转染＋丝裂霉素处理组凋亡小体明显少于对照组,细胞凋亡率明显低于对照组,差异均有统计学意义（F=6 250.510,q=56.992、51.613,P〈0.01）。结论 BHRF1基因具有明显拮抗丝裂霉素诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。     

survivin反义寡核苷酸诱导淋巴瘤细胞凋亡及对化疗药的增敏作用

目的　观察survivin反义寡核苷酸 (ASODN)对淋巴瘤细胞的增殖、凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法　人工合成survivin硫代ASODN ,通过脂质体转染淋巴瘤细胞株Raji后 ,用MTT法检测细胞毒作用 ;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡 ;RT PCR、Westernblot检测survivinmRNA及蛋白的表达。结果　①survivinASODN抑制Raji细胞增殖呈时间和剂量依赖性 ;②survivinASODN处理组Raji细胞凋亡率为 33.0 % ,正义寡核苷酸 (SODN)组为 11.5 % ,两组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;③survivinASODN处理组Raji细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降 ;④survivinASODN和Vm2 6联合处理组Raji细胞增殖受抑率为 5 6 .5 % ,显著高于单用survivinASODN组的 2 9.2 % (P <0 0 5 )和单用Vm2 6处理组的 2 6 .9% (P <0 .0 5 )。结论　survivinASODN能够抑制Raji细胞增殖、诱导凋亡 ,并能增加Raji细胞对化疗药物的敏感性 ,推测可能通过下调survivinmRNA及蛋白表达而起作用。     

Survivin反义寡核苷酸联合AsI3-cys对K562细胞凋亡的影响

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸(ASODN)联合AsI3-cys对K562细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法:K562细胞体外培养,人工合成并硫代修饰Survivin ASODN,通过脂质体转染进入K562细胞,同时与AsI3-cys联用,MTT法检测细胞增殖抑制程度,Tunel法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中Survivin mRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞凋亡率。结果:Survivin ASODN各浓度组对K562细胞的增殖有明显的抑制作用,能明显诱导细胞凋亡,联用组诱导K562细胞凋亡的能力与其他组相比在统计学上差异有显著性。结论:Survivin ASODN能够诱导K562细胞凋亡,并提高K562细胞对AsI3-cys的敏感性。     

Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂作用下K562细胞凋亡的影响

为了观察顺铂作用下细胞周期变化规律和Chk1／2反义寡核苷酸转染K562细胞后对顺铂诱导凋亡的影响，采用流式细胞术检测顺铂作用下K562细胞周期变化；以脂质体作为载体，转染Chk1／2反义寡核苷酸于K562细胞，用Western blot和共聚焦显微镜检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后Chk1／2蛋白表达；用流式细胞术检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后顺铂作用下细胞凋亡率。结果发现，10μmol／L顺铂作用下K562细胞出现S期阻滞，Chk1／2反义寡核苷酸对K562细胞中Chk1／2蛋白表达有明显抑制作用，转染Chk1／2反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下K562细胞凋亡率，Chkl和Chk2联合转染作用优于单独转染。结论：Chk1／2可作为白血病增敏治疗的有效靶点。     

RNA干扰生存素基因表达对肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的采用RNA干扰技术探讨生存素（survivin）对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的分子机制。方法采用脂质体介导将pGCsi—shsurvivin与pGCsi质粒转染人肺腺癌细胞株A549,经G418筛选获得稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型;Westernblot检测转染细胞survivin、p21、鼠双微体基因2（MDM2）蛋白表达;M,丌比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果成功构建稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型。与对照组相比,反义组p21表达及细胞凋亡率显著增加,而MDM2表达及细胞增殖显著降低。结论下调A549细胞survivin表达后,细胞增殖降低而细胞凋亡增加,其作用机制与p21表达增加和MDM2降低有关。     

干细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞中原癌基因蛋白质c-kit及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的探讨干细胞生长因子(SCF)反义寡核苷酸对肝癌HepG2细胞中原癌基因蛋白质c-kit、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及意义。方法以脂质体作为转染载体,转染SCF反义寡核苷酸于HepG2细胞。实验分三组:(1)空白对照组;(2)转染SCF反义寡核苷酸组;(3)转染SCF错义寡核苷酸组。Western blot方法检测转染前后肝癌细胞中SCF、bFGF蛋白的表达,RT-PCR检测转染前后肝癌细胞中c-kit与bFGF mRNA的表达,用流式细胞仪检测转染SCF反义寡核苷酸后HepG2细胞凋亡率。结果与转染错义寡核苷酸组相比,SCF反义寡核苷酸对HepG2细胞中c-kit、bFGF的表达有明显抑制作用,转染SCF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01)。结论 SCF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,SCF/c-kit有可能作为PI3K/Akt信号通路的上游对肝癌细胞bFGF的表达起重要调控作用。     

聚酰胺纳米分子介导survivin反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡

背景:传统的病毒载体及非病毒载体在基因治疗中均存在明显的缺点,采用纳米材料作为反义寡核苷酸载体有望获得更好更安全的基因转导,提高基因治疗的有效性和安全性.实验拟采用聚酰胺纳米分子介导反义寡核苷酸阻断survivin表达,诱导大肠癌凋亡.目的:探讨聚酰胺树形分子高聚合物介导survivin反义寡核苷酸(survivin antisense oligonucleotide,survivin-asODN)转染结直肠癌SW620细胞的可行性以及对结直肠癌SW620细胞survivin表达、细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:肿瘤基因治疗体外实验,于2007-09/2008-05在上海交通大学微纳米科学技术研究院生物纳米工程研究室及南方医科大学珠江医院中心实验室完成.材料:人结直肠癌细胞株SW620购自中国科学院上海细胞研究所,聚酰胺树形分子由上海交通大学微纳米研究院生物纳米工程研究室崔大祥教授提供,转染试剂脂质体LipofectamineTM 2000购自美国Invitrogen公司.survivin-asODN由上海生工公司合成.方法:采用300 μg/L survivin-asODN和4.06 μg/L聚酰胺制备聚酰胺反义基因复合物,同时制备阳离子脂质体反义基因复合物作为对照.透射电镜观察复合物的形态,激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定zeta电位,离心法和紫外分光光度仪测定复合物的的包封率、载药率和体外DNA释放速度.将上述两种基因转染复合物转染结直肠癌细胞,测定其转染效率;Western blotting检测转染后细胞中survivin蛋白的表达:流式细胞术检测两组细胞的凋亡率.主要观察指标:阳离子脂质体-survivin-asODN复合物及聚酰胺-survivin-asODN复合物的粒经,zeta电位,基因载药率,包封率,释放率,转染后survivin表达率及对凋亡的诱导率.结果:聚酰胺-survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物的粒径(P<0.01),但zeta电位高于后者(P<0.05);基因载药率、包封率两组差异无显著性意义:聚酰胺对DNA持续释放14 d,但脂质体只持续5 d.聚酰胺-survivin-asODN转染结直肠癌细胞的效果强于脂质体survivin-asODN(P<0.05).转染后结直肠癌细胞survivin蛋白的表达低于脂质体复合物(P<0.05),细胞的凋亡率高于脂质体复合物(P<0.05).结论:聚酰胺能将survivin-asODN高效递送到结直肠癌SW620细胞,降低survivin蛋白表达并诱导结直肠癌细胞凋亡.     

β1整合素反义寡核苷酸对人结肠癌细胞黏附和侵袭抑制作用

目的研究β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）对人结肠癌HT-29细胞侵袭的抑制作用。方法以脂质体为载体将硫代磷酸修饰的β1整合素ASODN及无义寡核苷酸（NSODN）转染人结肠癌HT-29细胞,通过RT-PCR及Western-Blot试验,分别测定ASODN组、NSODN组和空白对照组β1整合素mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell小室法分别测定其黏附力和侵袭力。结果与NSODN组和空白对照组相比较,ASODN组中β1整合素mRNA和蛋白表达强度明显降低;ASODN组和NSODN组转染的人结肠癌HT-29细胞侵袭力均下降,但前者下降较为明显。结论β1整合素ASODN转染HT-29细胞后,通过降低其β1整合素mRNA和蛋白表达水平,从而抑制其对细胞外基质的侵袭。     

端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对乳腺癌细胞生物学特性及干细胞富集的影响

目的探讨人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸(hTERT ASODN)对乳腺癌MCF-7细胞系干细胞微球体富集及其生物学特性的影响。方法以人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因编码区为靶点合成反义寡核苷酸,脂质体介导转染,以正义序列转染作为对照。实验分设转染组(ASODN组),正义序列转染的对照组(SODN组)及空白对照组。采用无血清悬浮培养法观察转染对MCF-7干细胞微球体富集的影响。Western blot检测各组干性标记物CD44及ALDH1的表达。RT-PCR检测各组ABCG2、MDR1 mRNA的表达。采用单因素方差分析对各组数据进行统计学处理。结果 ASODN组干细胞微球体生长速率及球体体积明显差于两对照组。与空白对照及SODN组比较,Western blot检测发现CD44与ALDH1在ASODN组细胞表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR检测发现,在ASODN组细胞ABCG2及MDR1 mRNA的表达量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。而空白对照组及SODN组两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hTERT ASODN在抑制乳腺癌干细胞微球体的富集、降低乳腺癌细胞干性表达及其耐药性方面具有重要作用。