贝氏隐孢子虫及其与大肠杆菌共感染对雏鸡肠道菌群的影响

为调查贝氏隐孢子虫单独以及与禽致病性大肠杆菌合并感染对雏鸡肠道菌群的影响,将1日龄SPF级雏鸡分为隐孢子虫单独感染组(灌胃隐孢子虫1×10~6个/只)、隐孢子虫和大肠杆菌共感染组(肌注大肠杆菌2×10~6 CFU/只,同时灌胃隐孢子虫1×10~6个/只)与健康对照组,分别于接种后第3、9、15、21和27天采集新鲜粪便,提取DNA后进行16S rRNA高通量测序及生物信息学分析。结果显示,3组雏鸡肠道微生物相对丰度最高的门为厚壁菌门,其次为拟杆菌门和变形菌门。多样性分析表明,2组感染雏鸡的肠道菌群多样性降低,但隐孢子虫单独感染组较共感染组先恢复。从属水平分析发现,与健康对照组比较,共感染组的乳杆菌属丰度明显降低(P0.05),而大肠/志贺菌属则显著升高(P0.05),两者此消彼长。2感染组雏鸡肠道中的布劳特菌属和瘤胃球菌属伴随雏鸡日龄增长呈上升趋势,但相比健康对照组绝对丰度较低。以上结果表明,大肠杆菌的共感染可加剧隐孢子虫感染造成的雏鸡肠道微生物多样性和菌群结构的变化,这可能与采食量的改变以及对免疫力和代谢功能的影响有关。     

基于16S rDNA测序分析柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群的影响

为探究柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群的影响,采集对照组和球虫感染组雏鸡盲肠内容物,提取DNA,16S rDNA测序分析鸡盲肠菌群丰度、多样性的变化,采用粪菌移植验证正常鸡肠道菌群对柔嫩艾美耳球虫感染的保护作用。16S rDNA测序结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染后盲肠内菌群丰度、多样性显著降低。在门水平上,感染前,两组雏鸡盲肠的优势菌门均为厚壁菌、变形菌、放线菌;感染后厚壁菌门丰度下降,变形菌门、放线菌门的丰度上升,差异显著(P<0.05),感染组出现了拟杆菌门。在属水平上,与对照组相比,感染组鸡盲肠微生物菌群中乳杆菌属、埃希菌-志贺菌属、拟杆菌属、罗姆布茨菌属、棒状杆菌属、肠球菌属、变形杆菌属丰度增加但差异不显著(P>0.05),毛螺菌科未定属、瘤胃球菌属、梭菌UCG-014、瘤胃球菌科未定属丰度显著下降(P<0.05),GCA-900066575丰度降低但差异不显著(P>0.05)。粪菌移植结果显示,与生理盐水移植组相比,盲肠内容物移植组和粪便菌移植组能显著减轻柔嫩艾美耳球虫感染后鸡增重降低的影响,减轻盲肠损伤,卵囊产量显著下降(P<0.05)。盲肠内容物...     

莱芜仔猪肠道菌群组成初步分析

猪的肠道菌群组成与种类及健康状态密切相关,研究健康、品种优良的猪的肠道菌群组成对于养猪业的发展具有积极意义。本研究采用16SrRNA高通量测序方法对10日龄莱芜哺乳仔猪腹泻仔猪的粪便进行测序分析。结果显示,健康仔猪共有优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidetes）,共有优势菌属为乳杆菌属（Lactobacillus）;腹泻仔猪共有优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）,共有优势菌属为乳杆菌属（Lactobacillus）。此外,两组比较,Lactobacillus、Escherichia-Shigella、Prevotella＿9、Fusobacterium、Prevotellaceae属在腹泻仔猪组丰度水平高,而Acinetobacter、Jeotgalibaca、Treponema＿2、Psychrobacter属在健康仔猪组丰度水平高。本研究结果为莱芜猪肠道菌群多样性研究提供基础数据,并为后期调节肠道菌群、促进猪的健康成长提供参考依据。     

三种乳酸菌对蛋雏鸡盲肠微生物区系的影响

试验旨在研究3种乳酸菌对蛋雏鸡盲肠微生物的影响。选取1日龄体重相近的健康罗曼褐蛋公雏432只,随机分成A、B、C、D 4个组,每组6个重复,每个重复18只鸡。A组为对照组,饲喂基础饲粮;B、C、D组为试验组,饲喂基础饲粮另分别添加粪肠球菌制剂、嗜酸乳杆菌制剂和乳双歧杆菌制剂(添加量均为:1×107cfu/g),试验期为42 d。试验结束后,每个处理组随机取6只鸡(每重复1只,共24只),收集盲肠食糜样,并应用Illumina-Mi Seq高通量测序技术分析微生物群落结构和组成的变化。结果表明:不同处理组间雏鸡盲肠菌群均以厚壁菌门、拟杆菌门及变形菌门3种为主。与对照组相比,试验组Faecalibacterium菌属的相对含量升高,而梭菌属、链球菌属、埃希氏菌属/志贺氏菌属等潜在致病性菌属的相对含量不同程度降低。从α多样性上看,粪肠球菌和乳双歧杆菌制剂组盲肠微生物丰度指数下降,而嗜酸乳杆菌制剂组丰度指数上升。同时,3种乳酸菌组多样性指数均下降。从β多样性上看,添加乳酸菌可使盲肠菌群差异变大,与对照组相比,粪肠球菌和乳双歧杆菌制剂组差异性大于嗜酸乳杆菌制剂组。由此可见,乳酸菌可改变蛋雏鸡盲肠菌群结构;添加乳酸菌一定程度上可促进有益菌生长,而抑制有害菌增殖;粪肠球菌和乳双歧杆菌添加效果优于嗜酸乳杆菌制剂。     

葛根多糖对猫肠道菌群的影响

为探究葛根多糖（PPL-1）对猫肠道菌群的影响,本试验选取8只体重为2.5～3.7 kg的家猫,按体重随机分为2组,包括对照组（W）和试验组（E）,每组4只（两只公猫,两只母猫）,试验组猫连续口服30 d葛根多糖后,收集粪便,通过IlluminaMiseq高通量测序技术对肠道菌群的多样性进行分析。结果显示：葛根多糖能够显著提高变形杆菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、罕见小球菌属（Subdoligranulum）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）的相对丰度;显著降低厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）的相对丰度。结果表明,葛根多糖能显著提高猫肠道菌群多样性,并改善肠道菌群结构,对机体产生有益影响。     

腹泻仔猪与健康仔猪肠道微生物多样性比较

目的通过研究对比哺乳期腹泻仔猪与健康仔猪粪便菌群,探讨腹泻对哺乳期仔猪肠道微生物的影响。方法通过高通量16S rDNA测序技术对腹泻组仔猪（n=6）和健康组仔猪（n=3）粪便样本进行测序,比较两组仔猪肠道微生物群落的组成和结构。结果腹泻组仔猪和健康组仔猪粪便菌群差异显著（P<0.05）,腹泻组仔猪的肠道菌群多样性显著（P<0.05）低于健康组仔猪。与健康组仔猪相比,在门水平上,腹泻组仔猪的梭杆菌门和变形菌门的相对丰度显著（P<0.05）增加,而厚壁菌门的相对丰度显著（P<0.05）下降;在属水平上,腹泻组仔猪的梭杆菌属（Fusobacterium）、普雷沃菌属（Prevotella）、埃希菌属（Escherichia）、乳杆菌属（Lactobacillus）、厌氧弧菌属（Anaerovibrio）、拟普雷沃菌属（Alloprevotella）和Fusobacteriaceae_unclassified的相对丰度显著（P<0.05）增加,而大部分厚壁菌门菌属的相对丰度显著（P<0.05）降低。结论通过分析对比腹泻仔猪与健康仔猪肠道微生物多样性,为预防和治疗哺乳期仔猪腹泻提供了理论依据。     

豆粕饲料中添加丁酸钠对大口黑鲈肠道菌群组成的影响

为探究豆粕饲料中添加丁酸钠对大口黑鲈肠道菌群组成的影响，以初始体重为（6.30±0.01）g的大口黑鲈为研究对象，试验设对照组（鱼粉组）、豆粕组（豆粕替代30%鱼粉）和丁酸钠组（豆粕组饲料基础上添加0.2%的丁酸钠）。每个处理组3个重复，每个重复30尾。养殖试验为期56 d。结果显示：豆粕组肠道菌群组成显著改变，而添加丁酸钠降低了豆粕饲料引起的菌群组成改变，并与对照组菌群组成更加接近。相比对照组，豆粕组厚壁菌门、乳杆菌属、魏斯氏菌属和片球菌属的相对丰度分别下降了89.4%、95.6%、71.2%和73.9%，软壁菌门和支原体属的相对丰度分别升高了4797.0%和5073.0%(P <0.05)。相比豆粕组，丁酸钠组厚壁菌门、拟杆菌属和萄球菌属的相对丰度分别增加了442.8%、911.1%和569.0%，软壁菌门和支原体属的相对丰度分别降低了98.3%和98.3%(P <0.05)。功能预测表明，豆粕组大口黑鲈肠道菌群在“氨基酸转运代谢”“RNA加工修饰”“能量生成和转换”“翻译、核糖体结构和生物合成”等功能类群的相对丰富显著提高，在“抵御机制”“碳水化合物转运代谢”“复制、...     

鸭肠炎病毒感染对鸭肠道菌群多样性的影响

为揭示鸭肠炎病毒(DEV)感染对鸭肠道菌群多样性的影响,本研究采用16S rRNA基因高通量测序和Illumina Hiseq 2500高通量测序技术对DEV感染后鸭肠道菌群多样性和丰度进行分析。结果显示:与对照组比较,感染组鸭肠道菌群Alpha多样性指数均呈先升高后降低趋势,尤其是在DEV感染96 h和120 h后,鸭肠道菌群Beta多样性(Weighted Unifrac指数)距离越远,相似度越低;DEV感染后鸭肠道优势菌群主要分布于厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和梭杆菌门,梭菌纲、丙型变形菌纲、拟杆菌纲和梭杆菌纲,梭菌目、肠杆菌目、拟杆菌目和梭杆菌目,肠杆菌科、消化链球菌科、拟杆菌科和梭杆菌科,大肠杆菌志贺菌亚属、拟杆菌属、梭菌属和Turicibacter属,尤其是产气荚膜梭菌和坏死梭杆菌呈先下降后升高趋势,这可能与DEV感染所导致的肠道病变存在一定的关联性。本研究结果为DEV致病机理及其所致疾病的防控研究奠定了基础。     

玉屏风多糖复合微生态制剂对草鱼生长和肠道菌群的影响

试验旨在探究玉屏风多糖复合微生态制剂对草鱼生长和肠道菌群的影响。选取360尾健康草鱼，随机分成3组，即基础饵料组（对照组/A组）、复合微生态制剂组（B组）、玉屏风多糖复合微生态制剂组（C组），每组3个重复，每个重复40尾鱼。试验周期为21 d。结果显示，C组草鱼末重、增重率均显著高于对照组（P<0.05）。C组草鱼肠道肌层厚度及脂肪酶活性显著高于对照组（P<0.05）。草鱼肠道菌群丰富度在试验14～21 d时明显提高，优势菌门分别为变形菌门、厚壁菌门，优势菌属为宝石杆菌属、厌氧菌属。研究表明，饵料中添加玉屏风复合微生态制剂可提高草鱼生长性能，增强肠道消化酶活性，改善肠道菌群。     

肠炎沙门氏菌攻毒对SPF雏鸡粪便微生物区系的影响

试验旨在探究肠炎沙门氏菌攻毒对SPF雏鸡粪便微生物区系的影响。选择1日龄SPF雏鸡24只,随机分为2组,每组12只。在4日龄处理组口服107CFU肠炎沙门氏菌(ATCC13076)攻毒,对照组口服等量PBS溶液。试验期22 d。结果显示:(1)处理组SPF鸡的存活率为75%,对照组全部存活,期间两组鸡的体重无显著性差异;(2)OTU水平上,相同日龄两组鸡粪便菌群的丰富度相近,中期处理组粪便菌群多样性更高(P0.05),后期对照组菌群稳定性更高,而且攻毒对SPF鸡粪便菌群的影响随日龄增加而减弱;(3)在属水平上,与对照组相比,处理组Bacteroides(拟杆菌门)、Enterococcus (肠球菌属)和Aeriscardovia (卡多维亚氏菌属)的相对丰度明显升高(P0.05);Lactobacillus(乳杆菌属)、Alistipes(另枝菌属)、Faecalibacterium(粪杆菌属)、Romboutsia(罗姆布茨菌属)和Ruminococcaceae_UCG_005(瘤胃球菌UCG_005)的相对丰度明显降低(P0.05);(4)KEGG分析显示攻毒影响了菌群参与的多个代谢通路。综上,肠炎沙门氏菌感染影响了SPF雏鸡粪便菌群的结构组成、稳定性及菌群参与的代谢通路。Bacteroides(拟杆菌门)、Lactobacillus(乳杆菌属)等差异菌属可能对SPF雏鸡抵抗沙门氏菌入侵起到积极作用。     

发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响

试验以产气荚膜梭菌感染肉仔鸡建立坏死性肠炎模型,研究发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响。将336只1日龄爱拔益加肉仔鸡随机分成4个处理组,每个处理6个重复。4个处理组分别为对照组、感染组、感染＋LF组（日粮添加1×10⁹ CFU/kg发酵乳杆菌）、感染＋BC组（日粮添加1×10¹⁰ CFU/kg凝结芽孢杆菌）。所有感染肉鸡在14~21 d经口接种A型产气荚膜梭菌。试验期为28 d。结果显示：与对照组相比,灌服产气荚膜梭菌显著降低22~28 d肉鸡的日均采食量（P<0.05）,显著增加28 d十二指肠和空肠损伤评分（P<0.05）,显著提高21 d肉鸡盲肠的产气荚膜梭菌和大肠杆菌数量,显著降低28 d回肠产气荚膜梭菌数量（P<0.05）。与感染组相比,日粮添加发酵乳杆菌显著提高21 d肉鸡回肠的乳杆菌属数量（P<0.05）,显著降低21 d盲肠大肠杆菌的数量（P<0.05）;日粮添加凝结芽孢杆菌显著降低28 d肉鸡十二指肠损伤评分（P<0.05）,显著降低21 d十二指肠隐窝深度（P<0.05）,显著提高21 d空肠绒毛高度与隐窝深度的比值（P<0.05）,显著降低21 d肉鸡回肠和盲肠的大肠杆菌数量（P<0.05）,显著提高28 d肉鸡回肠乳杆菌属数量（P<0.05）。综上所述,日粮中添加发酵乳杆菌或凝结芽孢杆菌均对感染肉鸡的肠道微生物具有调控作用;其中添加凝结芽孢杆菌有利于肠道绒毛发育,缓解肠道损伤,一定程度上提高了肉鸡的生长性能,而发酵乳杆菌没有缓解肠道损伤的作用。     

Antimicrobial-resistance trends in bacterial isolates from companion-animal community practice in the UK

We conducted a longitudinal, retrospective investigation of antimicrobial resistance in bacterial isolates obtained from canine and feline clinical cases in veterinary community practice in UK (1989–1997). Individual-drug resistance was examined using isolates of Escherichia coli and Staphylococcus spp. as Gram-negative and Gram-positive indicator organisms, respectively. The annual prevalence of resistance was calculated for each organism to each of nine (for E. coli) and 11 (for Staphylococcus spp.) selected antimicrobials. The annual prevalence of multiple-drug resistance (MDR) was calculated for E. coli, Proteus spp., Pseudomonas spp., staphylococci and streptococci.

Using a chi-square test for trend, significant rising trends were identified in individual resistance of E. coli to clavulanate-amoxycillin and streptomycin, and in MDR of E. coli, Proteus spp. and Pseudomonas spp.. Declining trends were identified in individual resistance of Staphylococcus spp. to ampicillin and penicillin. Comparison with previously reported results from a contemporaneous investigation of companion-animal hospital patients indicated that selection pressures acting on the two populations overlapped but were not identical.     

Effects of benzoic acid on performance and ecology of gastrointestinal microbiota in weanling piglets

The effects of feeding benzoic acid on weanling pig performance and on the ecology of their gastrointestinal microbiota were evaluated. One hundred and forty-four piglets (4 weeks of age) were used. Half of the piglets were fed a control diet and half were fed the same diet with 0.5% benzoic acid, and their performance was measured for 28 days. At the end of the trial, twelve piglets from each treatment were euthanised and samples of ileal and caecal digesta were collected. The digesta samples were cultured to quantify Lactobacillus spp., Escherichia coli,Enterococcus spp. and Clostridium perfringens and they were also studied by restriction fragment length polymorphism to evaluate the biodiversity degree and the similarity between the profiles of the microbiota. Benzoic acid improved piglets’ performance, and this was associated with a greater ileal microbiota biodiversity.     

大肠杆菌噬菌体BP16对鸡大肠杆菌病的防治效果

【目的】 探究大肠杆菌噬菌体BP16对O2血清型禽致病性大肠杆菌感染引起的鸡大肠杆菌病的防治效果, 以及噬菌体BP16的最佳治疗剂量。【方法】 将O2血清型禽致病性大肠杆菌新鲜培养物稀释成5×10¹⁰、5×10⁹、5×10⁸、5×10⁷和5×10⁶ CFU/mL 5个浓度梯度, 以测定禽致病性大肠杆菌的半数致死量(LD₅₀), 确定其感染剂量; 选取常用的对革兰阴性菌有抑菌或杀菌作用的药敏纸片进行药敏试验, 筛选出阳性对照药物; 经无菌试验和安全性试验确定噬菌体裂解液的无菌性及安全性, 用于后续试验。将80只雏鸡随机分为5个试验组与3个对照组, 试验组在雏鸡攻毒前后不同时间腹腔注射大肠杆菌噬菌体BP16, 3个对照组分别腹腔注射氟苯尼考、大肠杆菌菌液、生理盐水, 其余条件一致, 连续饲养7 d, 记录雏鸡的死亡率, 评价大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌人工感染试验鸡的防治效果。【结果】 O2血清型大肠杆菌的LD₅₀为1.5×10⁸ CFU/mL, 筛选出氟苯尼考作为阳性对照药物, 噬菌体裂解液中无菌, 噬菌体悬液对雏鸡安全, 可用于后续防治试验。雏鸡感染大肠杆菌前6 h使用噬菌体能有效预防大肠杆菌病, 在感染同时至感染后6 h内使用噬菌体, 能有效治疗大肠杆菌病, 且噬菌体治疗效果优于氟苯尼考; 当大肠杆菌攻毒剂量为1.5×10⁸ CFU时, 噬菌体剂量为1.5×10⁹ PFU时治疗效果为最佳。【结论】 大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌病具有防治作用, 本研究为进一步应用噬菌体防治大肠杆菌病及开发大肠杆菌噬菌体制剂提供了科学依据。     

核桃青皮水提物对肉鸡肠道微生物菌群结构的影响

试验旨在研究核桃青皮水提物对肉鸡肠道微生物菌群丰度和多样性的影响,初步揭示核桃青皮水提物对肉鸡肠道微生物菌群结构的影响。选取240只1日龄本地土杂鸡,随机分为2组,1个对照组和1个试验组,每个组设4个重复,每个重复30只。试验组于28日龄开始在饮水中添加核桃青皮水提物,6周后,每个重复采集10份肉鸡肛门棉拭子,利用Illumina Miseq测序平台对微生物16S rDNA V3-V4区扩增产物进行双端测序,分析微生物群落结构多样性。高通量测序结果显示,所有样本共含有个17菌门和48个菌属;多样性指数分析结果表明,饲喂核桃青皮水提物的肉鸡肠道菌群丰富度增加。从门水平分析,厚壁菌门（Firmicutes）丰度升高了2.21%（P > 0.05）,变形杆菌门（Proteobacteria）丰度降低了2.22%（P > 0.05）;从属水平上分析,大肠杆菌属（Escherichia）丰度降低了5.35%（P < 0.05）,肠球菌属（Enterococcus）丰度升高了9.63%（P < 0.05）。本研究结果表明,饲喂核桃青皮水提物后肉鸡肠道菌群多样性显著增加（P < 0.05）,据此推测,核桃青皮水提物能有效调节肉鸡肠道菌群并有益于肠道健康。     

复合益生菌对肉鸡肠道微生物区系的影响

【目的】 探究干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌组成的复合益生菌对黄麻肉鸡生产性能及肠道微生物区系的影响, 为复合益生菌在肉鸡生产中的应用提供理论基础。【方法】 将200只1日龄雄性黄麻肉鸡随机分为2组, 每组5个重复, 每个重复20只。复合菌制剂(干酪乳杆菌∶嗜酸乳杆菌∶乳双歧杆菌=1∶1∶2)按1%比例补充于益生菌组肉鸡的饮用水中, 以正常饮水的肉鸡为对照。在42 d时以重复为单位测定肉鸡的生长性能指标, 并进行肠道菌群高通量测序分析。【结果】 与对照组相比, 益生菌组肉鸡的平均日增重显著增加(P<0.05), 平均日采食量、屠宰率和全净膛率增加, 料重比降低, 但差异不显著(P>0.05);益生菌组肠道菌群的OTU总数及回肠的Sob、Chao、Pd、Shannon、Shannoneven指数均降低, Simpson指数升高, 差异均不显著(P>0.05);厚壁菌门在肉鸡肠道中丰度最高, 具主体地位。较对照组而言, 益生菌组回肠中未见梭菌属, 厚壁菌门和乳球菌属的丰度均显著或极显著增加(P < 0.05; P < 0.01), 放线菌门和葡葡萄球菌属的丰度均显著或极显著降低(P < 0.05; P < 0.01), 盲肠中毛螺菌科的丰度显著增加(P<0.05)。【结论】 复合益生菌可通过增加肉鸡回肠乳杆菌属丰度、降低病原菌丰度来改善肠道菌群的组成、功能和多样性; 同时通过增加盲肠毛螺菌科丰度来提高肠道发酵降解非淀粉多糖的能力, 进而提高饲料利用效率, 促进肉鸡生长。     

产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析

为探明大肠杆菌噬菌体的生物学特性和全基因组特征,本研究以在广西某猪场污水中分离得到的1株产志贺毒素且多重耐药的大肠杆菌GXEC010为宿主菌,同时在污水中分离到1株具有裂解作用的噬菌体,并通过透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线绘制、热敏感性与酸碱度稳定性评估、杀菌试验及全基因组测序等方法分析该噬菌体的生物学特性与基因组特征。结果表明,分离纯化得到能高效裂解大肠杆菌GXEC010的噬菌体,命名为vB_EcoM_BP10,其噬菌斑呈清晰透明,边缘光滑整齐;该噬菌体的最佳感染复数为1;一步生长曲线结果显示,感染宿主菌潜伏期为5 min,爆发期为65 min,爆发量为51;可耐受温度范围为30~60 ℃,在pH为5~8的环境中能维持稳定性;噬菌体杀菌试验结果显示,感染复数（MOI）为1时噬菌体vB_EcoM_BP10具有良好的杀菌效果。全基因组测序结果表明,噬菌体vB_EcoM_BP10基因组总片段长度为52 288 bp,GC含量为44.16%,含有71个阅读框（ORF）。GO功能注释表明,噬菌体vB_EcoM_BP10可参与小分子代谢、细胞氮化合物代谢等生物学过程中,具备核苷酸转移酶活性、离子结合、DNA结合等分子功能。与Escherichia phage ST32、 Enterobacteria phage phiEcoM-GJ1的亲缘关系较近。综上所述,噬菌体vB_EcoM_BP10具有清晰的宿主受体特异性,良好的热稳定性和酸碱稳定性,本研究结果能为有效防控产志贺毒素多重耐药大肠杆菌奠定一定的理论基础。     

五味止痢合剂对大肠杆菌致小鼠腹泻的治疗作用

【目的】研究五味止痢合剂对大肠杆菌致小鼠腹泻的治疗效果。【方法】 选择4周龄清洁级ICR小鼠，分为空白对照组(BC)、模型对照组(MC)、五味止痢合剂高(W-H)、中(W-M)、低剂量组(W-L)和盐酸环丙沙星药物对照组(CPFX)。每组20只，除BC组外均腹腔注射大肠杆菌，构建小鼠腹泻模型，建模5 h后，W-H、W-M、W-L组小鼠分别灌胃25、20、15 mL/kg BW五味止痢合剂(相当于生药2.5、2.0、1.5 g/kg BW)，CPFX组小鼠灌胃盐酸环丙沙星20 mL/kg BW，MC组和BC组灌胃等量生理盐水，2次/d，连用5 d。停药后14 d计算腹泻率和保护率。另取100只小鼠按照上述方法分组和给药，分别于给药后第2天，停药后第1、7和14天采集十二指肠和空肠。HE染色观察各组十二指肠黏膜层形态，采用ELISA试剂盒测定空肠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)和十二指肠α-干扰素(IFN-α)和白介素-4(IL-4)细胞因子的含量，采用免疫组织化学法检测十二指肠黏膜修复因子增殖细胞核抗原(PCNA)和转化生长因子-α(TGF-α)表达情况。【结果】 在停药后第14天，W-H和W-M组腹泻保护率分别高达95%和90%，死亡率均为0，均与CPFX组相当。在治疗过程中，W-H、W-M组小鼠小肠绒毛逐步趋于完整，淋巴细胞浸润逐渐减少，黏膜形态逐步趋于正常。W-H、W-M和CPFX组的空肠sIgA含量均显著高于MC组(P<0.05)。与MC组比较，在停药后第1、7和14天各给药组均能显著抑制空肠黏膜IFN-α的分泌(P<0.05)，显著提升IL-4的分泌(P<0.05);在停药后第14天，W-H组IFN-α和IL-4含量与BC组接近。在停药后第1和7天，W-H和CPFX组肠道修复因子PCNA表达量显著高于MC组(P<0.05);在停药后第1天，W-H和CPFX组肠道修复因子TGF-α表达量显著高于MC组(P<0.05)，在停药后第7天W-H和CPFX组TGF-α表达与MC组相比无显著差异(P>0.05);在停药后第14天各组间PCNA和TGF-α的表达均无显著差异(P>0.05)。【结论】 2.5 g/kg BW五味止痢合剂灌胃给药能显著控制大肠杆菌引起的小鼠腹泻，保护率达95%。其主要通过显著提升空肠灌洗液中sIgA的含量，充分激活免疫细胞，调节肠道黏膜分泌的细胞因子IFN-α和IL-4，有效抑制肠道炎症反应，刺激肠道黏膜修复因子PCNA和TGF-α的表达发挥治疗作用。     

基于网络药理学联合16S rDNA高通量测序技术分析丹参对感染大肠杆菌小鼠肠道菌群的影响

本研究旨在通过网络药理学联合16S rDNA高通量测序技术分析丹参对感染大肠杆菌小鼠肠道菌群的影响。利用传统中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）筛选丹参有效成分及靶点基因。使用基因数据库（Genecards）获得E.coli靶点基因。两者靶点基因取交集,通过STRING平台进行蛋白质相互作用分析,构建PPI网络,并运用Cytoscape 3.8.2软件构建“丹参活性成分-潜在作用靶点”网络。利用DAVID在线工具进行基因本体论（GO）功能富集分析,Metascape数据库进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。试验选用110只雄性昆明小鼠,随机分为对照组、大肠杆菌组和低、中、高剂量丹参大肠杆菌感染组,每组22只。连续灌胃丹参液28 d后,用E.coli O₁₀₁进行腹腔注射,对照组注射无菌生理盐水,观察24 h后,收集各组粪便。应用16S rDNA高通量测序技术对各组小鼠肠道菌群进行分析。结果显示：1）网络药理学丹参有效成分36个,作用靶点669个,Genecards数据库搜索E.coli靶点8 902个,对两者取交集去除孤立点获得丹参治疗E.coli潜在靶点51个;GO、KEGG分析,获得关键靶点18个、关键通路47条,其中生物过程（BP）、分子功能（MF）和细胞成分（CC）各为174、76、45条;2）通过Illumina Miseq测序共获得950 855条有效序列,2 537个操作分类单元（OTUs）;3） Alpha多样性分析结果表明,不同剂量丹参组肠道菌群多样性与对照组具有显著差异,大肠杆菌组肠道菌群多样性显著低于对照组（P<0.05）;4）相比于大肠杆菌感染组,在门水平上,低、中、高剂量丹参大肠杆菌感染组Bacteroidetes （拟杆菌门）丰度极显著增高（P<0.01）,Firmicutes （厚壁菌门）丰度显著增高（P<0.05）,Proteobacteria （变形菌门）极显著降低（P<0.01）,在属水平上Bacteroides（拟杆菌属）丰度极显著增高（P<0.01）;5）基于LEfSe分析,对照组、大肠杆菌感染组、丹参高剂量大肠杆菌感染组共发现14种显著差异菌群;6） PICRUSt功能预测分析发现,丹参对大肠杆菌感染小鼠肠道菌群调节功能主要富集的途径是氨基酸、碳水化合物运输与代谢,翻译、核糖体结构和生物转化,细胞壁/膜/生物合成等方面。综上,基于网络药理学联合16S rDNA高通量测序技术全面揭示了丹参多成分、多靶点、多途径调节相关菌群生物丰富度,对大肠杆菌感染小鼠的肠道菌群紊乱有缓解作用,为临床应用丹参治疗大肠杆菌感染提供理论依据。     

高渗对多重耐药大肠杆菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响

为了探究高渗对多重耐药菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响,试验应用生长曲线和相对适应性测定,对比考察不同盐胁迫条件对多重耐药大肠杆菌QL15和敏感大肠杆菌ATCC 25922的生长差异,采用RT-PCR方法考察2种盐胁迫条件下外排泵与外膜孔道蛋白基因表达差异。结果表明,大肠杆菌QL15为高水平多重耐药菌,其中对大观霉素和恩诺沙星耐药最为严重,可达耐药标准MIC的32倍;独立培养时大肠杆菌QL15对NaCl胁迫的敏感性大于大肠杆菌ATCC 25922,并且在6.0% NaCl胁迫下,大肠杆菌QL15在10 h内生长缓慢,但是在24 h细菌峰值浓度更高;混合培养时大肠杆菌QL15在6.0% NaCl胁迫时具有更高的适应性,在体外培养中更具竞争优势。大肠杆菌QL15共携带5大类、15种耐药相关基因,其中含8种外排泵基因和3种外膜孔道蛋白基因;大肠杆菌ATCC 25922在6.0% NaCl浓度下的5种基因表达量较3.5% NaCl均出现约50%的显著下调（P<0.05）,大肠杆菌QL15在6.0% NaCl浓度下除acrB、ompF基因下调外,其余3种外排泵与外膜孔道蛋白基因的表达量则显著上调（P<0.05）。推测大肠杆菌QL15对盐胁迫具有更高的适应性的原因可能与细胞膜相关蛋白的表达相关。