反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究：Ⅰ.具有？…

目的：检测反转录病毒介导的脑肿瘤基因治疗中具有复制能力野生型反转录病毒（ＲＣＲ）。方法．；ＲＣＲ检测主要方法有：ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ），反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交以及ｎｅｏ基因和ｌａｃＺ基因的补救分析。结果：建立了ＰＣＲ的检测系统，从ＤＮＡ水平、ＲＮＡ水平和病毒活体水平对产ＨＳＶ＿ＴＫ病毒我装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ），Ｃ６转ＴＫ基因细胞和实验动物血液可能存在的ＲＣＲ野生型     

双带PCR提高检测血清HBV—DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ。该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性，与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品）和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品），ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交。     

PCR扩增杂交试验检测HCV-RNA

目的：评价ＰＣＲ扩增杂交试验（ＰＣＲ－Ｈｙｂ）在ＨＣＶ－ＲＮＡ检测中的应用。方法：对２８例丙型肝炎患者和５例非丙型肝炎患者采用ＰＣＲ扩增杂交（ＰＣＲ－Ｈｙｂ）试验、套式ＲＴ－ＰＣＲ及ｂＤＮＡ信号扩增试验检测ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果：三种方法的阳性率分别为７１．３４％（２０／２８）、７８．５７％（２２／２８）、１００％（２７／２７）。ＰＣＲ－Ｈｙｂ与套式ＲＴ－ＰＣＴ的阳性符合率为９３．９３％（３１／３３），与ｂＤＮＡ结果呈现较好的相关性（ｒ＝０．８０８３）。结论：ＰＣＲ－Ｈｙｂ具有较好的特异性和敏感性，并在抗病毒治疗时的动态观察有一定价值。     

系列PCR方法检测淋巴细胞白血病克隆性基因重排的选择应用

以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ克隆性基因重排。结果显示：多重ＰＣＲ和１次ＰＣＲ的敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０￣（－５）～１０￣（－６）水平。ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排阳性率为６７．２％和６２．０％；半巢式ＰＣＲ检测ＩｇＨ重排阳性率为７０．７％。上述结果表明：多重ＰＣＲ可同时检测两对目的基因，适于初治病例检测，而对缓解病例的检测则需采用敏感度较高的半巢式ＰＣＲ方法。     

肺炎患儿肺炎支原体感染的实验室检测

目的：探讨肺炎患儿肺炎支原体（ＭＰ）感染的实验室检测方法。方法：使用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测６７６例肺炎患儿ＭＰ的感染,其中１３９例同时采用支原体培养进行检测;１１２例做间接血凝试验（ＩＨＡ）。结果：ＰＣＲ法对ＭＰ感染的检出率明显高于培养法（Ｐ〈０．０１）,双份血清ＩＨＡ的检测率和ＰＣＲ法比较无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,单份血清ＩＨＡ的检出率明显低于ＰＣＲ法（Ｐ〈０．０１）。结论：ＰＣＲ法     

提高半巢式PCR特异性探讨

提高半巢式ＰＣＲ特异性探讨金杨季晓辉李玉峰姚（南京医科大学微生物学教研室，南京２１００２９）关键词半巢式ＰＣＲ；Ｂ淋巴细胞白血病；特异性近年来，在巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）的基础上半巢式ＰＣＲ亦有所发展。普通ＰＣＲ需用一对（即两段）引物，巢式ＰＣ...     

乳腺癌雌激素受体表达与增殖细胞核抗原表达和AgNOR计数关系的研究

目的研究乳腺癌雌激素受体（ＥＲ）表达与增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达和ＡｇＮＯＲ计数关系。方法采用ＡｇＮＯＲ染色技术和免疫组化Ｓ－Ｐ法，用抗ＥＲ单克隆抗体及抗ＰＣＮＡ单克隆抗体（ＰＣ１０），研究５０例乳腺癌ＥＲ与ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲ计数。结果３３例乳腺癌ＥＲ阳性者与１７例ＥＲ阴性者相比，ＰＣＮＡ表达低（Ｐ＜０．０５），ＡｇＮＯＲ平均颗粒少（分别为４．９１±１．６９，６．５２±２．１３，Ｐ＜０．０１）。结论乳腺癌ＥＲ表达与ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲ计数有相关关系，ＰＣＮＡ表达率及ＡｇＮＯＲ计数对评估乳腺癌预后有一定意义     

PCR和培养法检测泌尿生殖道解脲支原体比较

目的 对聚合酶链反应（ＰＣＲ）和培养法检测泌尿生殖道解脲支原体（Ｕｕ）进行比较。方法 用上述二种方法同时检测１１６例患者的泌尿生殖道拭子。结果 ＰＣＲ检测阳性４６例,培养阳性４５例,培养阳性的４５例中ＰＣＲ阳性４２例。若以培养法为对照,ＰＣＲ敏感性为９３．３％,特异性为９４．４％。ＰＣＲ和增减法检测Ｕｕ的阳性率无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论 ＰＣＲ检测泌尿生殖道解脲支原体,敏感性高,特异性强,与     

聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对结核病的诊断价值。方法：应用ＰＣＲ技术检测４７份结核病患者的各种临床标本，并与传统细菌学检测结果比较。结果：ＰＣＲ检测阳性率为５７．４５％（２７／４７），明显高于传统细菌学检测者（１７．０２％，８／４７）（Ｐ〈０．００５）。其中，ＰＣＲ检测胸膜结核性胸水与脑膜结核性脑脊液的阳性率均显著高于传统学检测者（Ｐ〈０．０５）。ＰＣＲ检测的假阳性率为５．１３％（４／７８），     

含尿嘧啶DNA糖基化酶的聚合酶链反应检测血清HBV DNA

为探讨含ｄＵＴＰ／尿嘧啶ＤＮＡ糖基化酶（ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）ＰＣＲ试剂（抗污染ＰＣＲ试剂，ＰＣＲ－ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）抗ＰＣＲ产物污染的能力及其在临床检测中的应用，采用该试剂检测２０４份病毒性肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ试剂比较。结果显示：抗污染ＰＣＲ试剂有较强的抗污染能力，至少可阻止１００ｎｇ的ＰＣＲ产物的污染。该试剂与地戈辛素探针分子杂交所测结果的符合率（８９．３２％）高于普通ＰＣＲ与分子杂交所测的符合率（８１．４５％）。表明抗污染ＰＣＲ试剂的应用有利于防止ＰＣＲ产物的污染，提高ＰＣＲ的准确性和特异性。     

宫颈鳞状上皮癌蜡块中 HPV16 感染检测方法的比较研究

分别用原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）和原位多聚酶链反应（ＩＳ－ＰＣＲ）方法，检测３９例宫颈鳞状上皮癌石蜡切片中ＨＰＶ的感染。ＩＳＨ的检出率为４６．２％（１７／３９），明显低于ＩＳ－ＰＣＲ的６６．７％（２６／３９，Ｐ＜０．０１）和ＰＣＲ的８４．６％（３３／３９，Ｐ＜０．０１）。用常规ＩＳＨ和地高辛标记探针能检出宫颈鳞状上皮癌ＨＰＶ１６感染的表皮细胞，而用ＩＳ－ＰＣＲ方法在同样标本中可显示出更多的ＨＰＶ１６阳性表皮细胞，并且着色更深。ＰＣＲ方法敏感性最高，但它不能用于组织细胞内的ＨＰＶ１６ＤＮＡ精确定位。     

宫颈非典型增生组织中HPV16—DNA的定量PCR检测

（１）目的建立定量聚合酶链技术（ＰＣＲ）方法，检测宫颈组织中乳头瘤病毒１６型ＨＰＶ１６的基因含量。（２）方法通过重叠延伸ＰＣＲ构建一含ＥｃｏＲＩ酶切位点的内参照模板，用竞争性ＰＣＲ（ＣＰＣＲ）检测６例ＨＰＶ１６阳性宫颈非典型增生组织标本中ＨＰＶ１６Ｅ６，基因的拷贝数。结果６例阳性标本ＨＰＶ１６Ｅ６基因的拷贝数为每毫克ＤＮＡ中含１．９９×１０＾５～２．５０×１０＾７。（４）结论用ＣＰＣＲ检测宫颈组织     

利用聚合酶链反应检测肾结核病人尿标本中结核菌初步研究

对８例肾结核病人尿标本进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测，结果ＰＣＲ阳性率７５％（６／８），直接涂片检抗酸菌阳性率２５％（２／８），１０例非结核泌尿系感染病人尿标本１０例ＰＣＲ检查结果均为阴性，说明ＰＣＲ特异性的，敏感性强，与临床符合率高，是一种较为理想的检验方法。     

T—载体在聚合酶链反应扩增产物克隆中的应用

目的 探讨克隆聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物的简便方法。方法 用ＰＣＲ方法分别特异性扩增Ｗｉｌｍｓ瘤基因ｗｔ１和尿激酶受体（ＵＰＡＲ）基因,并利用Ｔａｐ聚合酶具有的延伸酶活性将扩增产物直接克隆入Ｔ－载体,ＥｃｏＲＩ酶切鉴定阳性重组子。结果设计的引物可分别扩增ｗｔ１基因锌指区（３４３ｂｐ）和ＵＰＡＲ基因编码区全长（１０８３ｂｐ）;未经修饰的常规ＰＣＲ和高保真ＰＣＲ扩增产物可被直接克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ     

用多元PCR检测老年患者院内肺部感染的病原

对３０例老年院内肺部感染患者的痰标本分别进行多元ＰＣＲ、一元ＰＣＲ和常规培养检测绿脓杆菌、流感杆菌和肺炎链球菌。结果表明：（１）多元ＰＣＲ的检测结果与一元ＰＣＲ的完全一致，但前者更快速、简便；（２）ＰＣＲ阳性检出率为６６．６７％（２０／３０），细菌培养的为３３．３３％（１０／３０），二者差异显著（Ｐ〈０．０１）。说明多元ＰＣＲ特异性好，敏感性强，比一元ＰＣＲ尤其是细菌培养大大节省时间，更适合检测混     

PCR法检测乙肝病毒－DNA的几种血清预处理方法比较

ＰＣＲ法检测乙肝病毒－ＤＮＡ的几种血清预处理方法比较陈捷平，朱丽杰（临床医学研究所免疫室）目前聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术已广泛用于遗传病的诊断、传染性病源体的检测、癌基因的研究等诸多方面。ＰＣＲ方法具有...     

聚合酶链反应分析多肿瘤抑癌基因1第二外显子纯合性缺失

目的 摸索可靠、高效和特异的聚合酶链反应（ＰＣＲ）条件，分析多肿瘤抑癌基因１（ＭＴＳ１）第二外显子纯合性缺失。方法 对一系列ＰＣＲ参数进行摸索同时设立对照，并对ＰＣＲ产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 ＰＣＲ产物是特异的ＭＴＳ１第二外显子。结论 扩增ＭＴＳ１第二外显子的ＰＣＲ反应条件可以得到可靠、特异的结果。     

用PTVS检测t（14；18）PCR产物的DNA序列

为确定聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛（ＤＩＧ）系统检测ｔ（１４；１８）的特异性，我们采用ＰＧＥＭ－Ｔｖｅｃｔｏｒ系统（ＰＴＶＳ）和双脱氧链终止技术克隆并测定了ＲＬ细胞系和一个ＮＨＬ患者－Ａｍｂｒｏｓｅｎ的ｔ（１４；１８）ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序列。结果表明两者的ＰＣＲ扩增产物均为ｂｃｌ－２－ＪＨ融合基因片段，证实ＰＣＲ－ＤＩＧ系统是一种特异的检测ｔ（１４；１８）的方法。同时还表明用ＰＴＶＳ对ＰＣＲ。产物进行克隆测序优于直接用双脱氧法测序。     

聚合酶链反应法与荧光免疫法检测沙眼衣原体的比较研究

为了评价聚合酶链反应法（ＰＣＲ）对泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的检测结果，每份临床标本进行了ＰＣＲ法和荧光免疫法（ＤＦＡ）平行检测比较，检测临床标本９３例，ＰＣＲ法阳性率为２５．８％，ＤＦＡ法的阳性率为１７．２％（Ｐ〉０．０５），结果说明ＰＣＲ是一高度特异和敏感的检测方法。     

PCR诊断肾结核的价值

应用ＰＣＲ技术检测１９例疑为肾结核者尿结核杆菌，并与细菌学方法作比较。结果，ＰＣＲ检测检出阳性率比镜检细菌阳性率高２２％。ＰＣＲ（＋）者抗结核治疗有效。说明ＰＣＲ对确诊肾结核有价值。