稳定表达荧光素酶的产酸克雷伯菌在评估不同灭菌方法中的应用

目的构建稳定表达荧光素酶基因（lux）的产酸克雷伯菌,旨在更直观地观察产酸克雷伯菌（K. oxytoca）在宿主体内的分布以及评估不同杀菌方法的效果。 方法扩增pBAV1k-T5-Lux质粒的荧光素酶基因簇（Lux A/B/C/D/E）,构建含有Lux A/B/C/D/E基因簇的pBBR1质粒（pBBR1-lux）,并获得能够表达荧光素基因基团的大肠埃希菌（E. coli-pBBR1-lux）。将pBBR1-lux质粒电转化至产酸克雷伯菌感受态细胞,经荧光强度鉴定及菌株的3次传代,筛选能够稳定表达lux基因的产酸克雷伯菌（K. oxytoca-pBBR1-lux）。 结果连接成功的环状质粒产物命名为pBBR1-lux。与大肠埃希菌对照株相比,含E. coli-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值显著升高[15 345（14 676,18 654） vs. 63（60,82）],差异具有统计学意义（t = 21.14、P = 0.035）。K. oxytoca-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值[399 303（265 245,617 192）]显著高于产酸克雷伯菌对照菌株[83（63.5,86.75）],差异具有统计学意义（t = 7.07、P = 0.014）。E. coli-pBBR1-lux和K. oxytoca-pBBR1-lux均能够在Veritas微孔板光度计和小动物成像仪上检测到Luminesence荧光信号。将所得菌株按照1︰10稀释6个梯度,荧光值检测结果显示,Luminesence值随菌落浓度降低而下降。多次传代后pBBR1-lux能够在产酸克雷伯菌中稳定表达荧光素酶,不同理化杀菌方法对产酸克雷伯菌杀菌效果不同,紫外线和84消毒液（10%）是最有效的杀灭产酸克雷伯菌方法。 结论本研究获得了可被微孔板光度计和小动物成像仪检测到的稳定表达荧光素酶的K. oxytoca-pBBR1-lux。     

伤寒沙门菌株耐药性与vipR基因RFLP和PFGE分型研究

目的:监洲伤寒沙门菌株对青霉素和其他抗生素的耐药情况.分析多重PCR基因扩增产物图谱与青霉素耐药性的相关性,分析血清型青霉素耐药菌株的脉冲电场凝胶电泳(PFGE)图型,初步了解耐药菌株分子流行病学上的特点.方法:(1)抗生素药物敏感试验;(2)用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)结果发现23株多重耐药鼠伤寒沙门菌,其中耐4～5种抗生素的9株(40%),耐6～9种抗生素的8株(35.13%),耐10种抗生素的6株(26.10%);可分为16个PFGE型,其中5个PFGE型的菌株敷超过1株.结论:伤寒沙门菌分离株的多重耐药性严重,PFGE分型方法对鼠伤寒沙门菌的分型能力较好.     

肺炎克雷伯菌cAMP受体蛋白基因缺失株的构建及其在生物膜形成中的作用

目的：构建肺炎克雷伯菌cAMP受体蛋白基因（crp基因）缺失突变株与回补株，了解crp基因在肺炎克雷伯菌生物膜形成中的作用。方法设计位于crp基因（566 bp）上游698 bp片段及下游576 bp片段的两对引物，分别扩增出相应片段并通过融合PCR构建一个1274 bp片段的突变盒，利用双酶切克隆的方法将突变盒克隆至温度敏感性自杀载体pKO3-Km的NotⅠ位点间，电转化至肺炎克雷伯菌中构建肺炎克雷伯菌crp基因无痕缺失突变株（Δcrp）。扩增包含crp基因编码、启动子结合区及转录终止区的2063 bp基因片段并克隆至pGEM-T-easy质粒上，将此质粒电转至crp基因缺失突变株中构建crp基因回补株（C-crp）。采用RT-PCR方法检测crp基因在基因缺失株与回补株的表达情况，确定crp基因缺失突变株与回补株构建成功。利用结晶紫染色法检测crp基因对肺炎克雷伯菌生物膜形成的影响，并通过酵母凝集试验检测crp基因对肺炎克雷伯菌的菌毛形成影响。结果成功构建了肺炎克雷伯菌crp基因缺失突变株与回补株，RT-PCR结果显示，crp基因在缺失突变株中无表达，在回补株重新表达。体外试管静止培养48 h后，crp基因缺失株无明显生物膜形成，而在野生株及回补株的液体培养基表面形成宽厚生物膜。结晶紫染色定量发现，crp缺失突变株的生物膜相对形成量显著低于野生株（0.063±0.011 vs 1.020±0.056，P＜0.001）。酵母凝集试验发现在crp基因缺失突变株中细菌菌毛生成能力下降，提示crp基因影响肺炎克雷伯菌菌毛的生成。结论肺炎克雷伯菌crp基因可能通过调控肺炎克雷伯菌菌毛生成而正调控细菌生物膜的形成。     

儿童乙型肝炎病毒携带者分子流行病学特征

目的 探索江苏省和浙江省部分地区儿童乙型肝炎病毒（HBV）携带者的病毒分子流行病学特征.方法 采用酶免疫法（EIA）和Abbott公司微粒子酶免疫（MEIA）法筛选乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性儿童;采崩荧光定量PCR法检测HBV DNA载量;采用巢式-聚合酶链反应扩增乙型肝炎病毒表面抗原基因（HBV S基因）,采用DNASTAR软件进行序列分析,用VMD1.8.6软件展示HBV表面蛋白的立体结构,用SPSS 12.0软件进行数据处理.结果 共筛选出64例HBsAg阳性患儿,扩增后获得41株HBV S基因全序列.64例HBsAg阳性患儿的血清HBV DNA平均载量为（4.15±0.79）×10~7拷贝/mL.41株HBV S基因全序列中,C基因型34株（82.93%）,B基因型5株（12.19%）,B＋C型2株（4.88%）;血清型主要为adr型（34/39,87.18%）、adw型（4/39,10.24%）和ayr型（1/39,2.56%）,2株未分型.HBV表面抗原＂a＂决定簇常见的变异位点是第129位点的Q→F（谷氨酰胺→苯丙氨酸）、第145位点的G→R（甘氨酸→精氨酸）、第131位点的S→N（丝氨酸→天冬酰胺）和第144位点的C→A（半胱氨酸→丙氨酸）,变异频率分别为12.20%（5/41）、4.88%（2/41）、2.27%（1/41）和2.27%（1/41）,总变异频率为21.95%（9/41）.常见变异株第129位点＂Q→F＂和第145位点＂G→R＂S蛋白的＂a＂抗原决定簇空间结构与野生株完全不同.结论 江苏省和浙江省部分地区儿童HBV携带者体内的HBV呈高复制状态.感染以C/adr型的野生株为主,目前的乙型肝炎疫苗仍然有效.     

天津市耐甲氧西林葡萄球菌的耐药状况和基因分型

目的 分析耐甲氧西林葡萄球菌的耐药状况及耐药基因,了解目前葡萄球菌耐药的流行病学特征.方法 对临床分离的138株葡萄球菌进行耐药性检测,用聚合酶链反应（PCR）检测mecA耐药基因,并结合两种多重PCR方法对mecA阳性菌株进行葡萄球菌染色体mec盒基因（SCCmec）分型.结果 138株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌65株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）7株,阳性率为10.8%;凝固酶阴性葡萄球菌73株,其中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（methicillin-resistant coagulase negative Staphylococcus,MRCNS）44株,阳性率为60.3%,二者差异具有统计学意义（x2=37.05,P＜0.01）.所有菌株对万古霉素和呋哺妥因均敏感.经PCR检测52株葡萄球菌mecA基因阳性,阳性率为37.7%（52/138）,SCCmec分型发现Ⅰ型16株,Ⅱ型1株,Ⅲ型13株,Ⅳ型9株,Ⅴ型4株.结论 耐甲氧西林葡萄球菌的耐药情况日益严重,临床上MRCNS比MRSA更常见,SCCmec Ⅰ型和Ⅲ型菌株为主要流行菌株.     

肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药物的基因型研究

目的：探讨肺炎克雷伯菌（Kpn）耐碳青霉烯类药物的耐药基因型。方法收集2011年1月至12月本院分离到的肺炎克雷伯菌,用K-B法进行药敏实验,筛选出6株耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌（CRKP）,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶,用乙二胺四乙酸（EDTA）纸片法检测金属酶表型,聚合酶链式反应（PCR）鉴定肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯酶（KPC）基因及其他β-内酰胺酶基因。结果6株CRKP对头孢噻肟、头孢他啶、头孢呋辛、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、复方新诺明、哌拉西林/三唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、氨曲南、美罗培南、亚胺培南均耐药,对多黏菌素、米诺环素、磷霉素、阿米卡星等敏感,改良Hodge试验提示6株CRKP均产碳青霉烯酶,EDTA纸片法检测显示不产金属酶;PCR鉴定出该6株CRKP均携带blaKPC-2型基因,部分菌株携带blaSHV及blaTEM型广谱β-内酰胺酶耐药基因。结论 BlaKPC-2耐药基因为Kpn对碳青霉烯类药物耐药的主要原因。     

感染相关性噬血细胞综合征患者干扰素γ、IP-10和CXCR3的表达及临床意义

目的 探讨细胞因子干扰素γ（IFNγ）、干扰素诱导蛋白10（IP-10）及受体CXCR3在感染相关性噬血细胞综合征（infection-associated hemophagocytic syndrome,IAHPS）患者中的表达及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测43例IAHPS患者血清IFNγ和IP-10的表达,以流式细胞术检测外周血CD_4~＋和CD_8~＋T淋巴细胞表面CXCR3的表达,并以无HPS感染组（35例）和健康体检者（20名）作为对照.采用SPSS 13.0软件分析数据,组间比较采用独立样本t检验.结果 IAHPS组血清IFNγ和IP-10水平分别为（608±135）pmol/L和（939±141）pmol/L,明显高于无HPS感染组[（154±45）pmol/L、（385±119）pmol/L,t值分别为4.97和4.02,P值均〈0.05]和健康对照组[（56±18）pmol/L、（248±98）pmol/L,t值分别为5.27和4.77,P值均〈0.05].IAHPS组的CD4＋和CD8＋T淋巴细胞表面CXCR3的表达分别为（35±11）%和（23±8）%,明显高于无HPS感染组[（24±7）%、（16±7）%,t值分别为3.12和3.62,P值均〈0.05]和健康对照组[（20±6）%、（12±5）%,t值分别为4.46和4.93,P值均〈0.05].结论 IAHPS患者外周血IFNγ和IP-10表达明显升高,CD_4~＋和CD_8~＋T淋巴细胞上的受体CXCR3表达也增强,这些趋化因子的异常表达可能与HPS的发病机制相关.     

多药耐药鲍曼不动杆菌对氯霉素、四环素、利福平和复方磺胺甲恶唑耐药相关基因分析

目的 探讨多药耐药鲍曼不动杆菌（multi-drug resistant Acinetobacter baumannii,MDR-ABA）对氯霉素、利福平、四环素和复方磺胺甲恶唑等广谱抗菌药物的耐药性,并进行耐药相关基因分析.方法 临床分离62株MDR-ABA,采用K-B纸片扩散法测定它们对22种抗菌药物的敏感性,并用PCR及序列分析法检测氯霉素耐药相关基因catB、cmlA.利福平耐药相关基因arr-2/3,四环素耐药相关基因tetA、tetB,复方磺胺甲恶唑耐药相关基因sul1、dfrA1、dfrA5、dfrA7/17、dfrA12和dfrB5,抗菌化合物外排泵蛋白基因tehA、emrB、emrD、emrE、smr-2和其他广谱的抗菌药物外排泵mafA基因等17种基因.结果 62株MDR-ABA对氯霉素、利福平、四环素和复方磺胺甲恶唑的耐药率分别为100.0%（62/62）、100.0%（62/62）、90.3%（56/62）和82.3%（51/62）,mafA、tetB、sull和tehA基因阳性株数和阳性率分别为62株（100.0%）、46株（74.2%）、36株（58.1%）和8株（12.9%）,其余13种基因均为阴性.任选2株tetB、sull、tehA和mdfA基因阳性菌株进行DNA测序,并作BLASTn比对,与已登录于美国GenBank的序列一致.结论 MDR-ABA临床分离株对氯霉素、利福平、四环素和复方磺胺甲恶唑等广谱抗菌药物的耐药性很高,其多药耐药表型与携带mayA基因密切相关.     

原位肝移植术后乙型肝炎病毒再感染的相关因素分析

目的 分析原位肝移植（OLT）术后HBV再感染的相关因素,评价联合应用乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）和核苷（酸）类似物预防HBV再感染的疗效.方法 收集2003年10月-2007年8月在中山大学附属第三医院行OLT治疗的160例HBV相关性终末期肝病患者,117例患者术前服用核苷（酸）类似物.所有患者术后长期肌肉注射HBIG,并联合服用核苷（酸）类似物,采用回顾性调查方法分析患者术前资料,并前瞻性长期随访OLT术后HBV再感染情况.正态分布计量资料2组间的比较采用独立样本t检验;组间率的比较采用Fisher＇s精确概率检验,P〈0.05表示差异具有统计学意义.结果 160例患者中,19例患者出现HBV再感染,再感染率为11.88%（19/160）.患者术前HBV DNA载量、HBeAg状态及抗病毒治疗时间与OLT术后HBV再感染之间无显著相关性（r值分别为0.108、0.127和0.033,P值均〉0.05）.19例HBV再感染患者中有17例是长期使用拉米夫定治疗的患者,其中8例酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸（YMDD）变异株阳性,其HBV DNA载量为（7.0±2.0）log拷贝/mL,而YMDD变异阴性组为（3.2±2.5）log拷贝/mL,2组比较差异有统计学意义（t=3.531,P=0.003）.17例长期服用拉米夫定治疗的患者中,12例加用阿德福韦酯,3例改用恩替卡韦,均获得满意疗效.结论 OLT术后长期小剂量肌肉注射HBIG,并联合核苷（酸）类似物可有效预防HBV再感染.OLT术后使用拉米夫定易出现YMDD变异,而YMDD变异是HBV再感染的重要因素,临床上要予以重视.     

藤黄酸逆转人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的探讨藤黄酸对多药耐药人结肠癌细胞株SW480/L—OHP的耐药逆转及其对多药耐药基因（MDR1）和P-糖蛋白（P—gP）表达的影响。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株SW480/L—OHP。噻唑蓝（MTT）法测定SW480/L-OHP细胞株的耐药指数和藤黄酸在无细胞毒浓度下对结肠癌细胞耐受奥沙利铂的逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,RT—PCR检测各组细胞MDRlmRNA表达水平,Westernblot检测各组细胞P—gP蛋白的表达水平。结果藤黄酸对结肠癌SW480及SW480/LOHP细胞增殖均具有抑制作用,且呈量效关系。奥沙利铂与低毒剂量藤黄酸共同作用SW480/L-OHP细胞,其Ic50显著降低（P〈0．05）,耐药逆转倍数为3．72。与奥沙利铂单药组相比,加入低毒剂量藤黄酸后,细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。藤黄酸作用后MDRlmRNA转录水平降低,同时下调了P—gp蛋白表达。结论藤黄酸部分逆转SW480/L—OHP细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制与增加细胞内奥沙利铂的蓄积,抑制MDRl基因的表达及降低P—gp的表达有关。     

小剂量盐酸水苏碱对过氧化氢所致肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的：益母草作为一种传统中药常用作多种药剂的组方,其具有抗氧化作用。盐酸水苏碱是益母草的有效成分,本研究旨在探讨盐酸水苏碱对过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤的作用。方法：0.4mmol/L H2O2加入培养的肾小管上皮细胞（NRK52E）,同时观察不同剂量的盐酸水苏碱（14.04mg/L,28.08mg/L,42.12mg/L）对过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤的作用。HE染色观察细胞凋亡与细胞有丝分裂指数及细胞总数。Western blot检测各组细胞Bcl-2、PCNA、HO-1蛋白表达水平。结果：H2O2组细胞其凋亡指数较小剂量盐酸水苏碱＋H2O2组及正常对照组明显升高[（9.57±0.59）vs（5.97±0.68）,P〈0.001;（9.57±0.59）vs（2.6±0.72）,P〈0.001）。H2O2组细胞总数较小剂量盐酸水苏碱＋H2O2组及正常对照组明显减少[（714.33±6）mm^2 vs（929±34.66）mm^2,P〈0.01;（714.33±67）mm^2 vs（978.83±15.89）mm^2,P〈0.01。小剂量盐酸水苏碱对HO-1无影响,中、大剂量盐酸水苏碱可使HO-1表达减少;小剂量盐酸水苏碱可使Bcl-2表达增加。各组PCNA表达及有丝分裂指数无差异。结论：小剂量盐酸水苏碱通过上调Bcl-2蛋白表达保护过氧化氢所致肾小管上皮细胞损伤,减少肾小管上皮细胞凋亡,并非通过减轻氧化应激途径;中大剂量盐酸水苏碱可加重过氧化氢所致的氧化应激状态。     

载脂蛋白B基因Xba I和EcoR I位点稀有等位基因与胆石症的关系

目的探讨载脂蛋白B基因XbaI、EcoRI位点稀有等位基因与内蒙古中西部地区汉族和蒙古族胆石症人群的相关性。方法收集2010年4—10月包头医学院第一附属医院100例胆石症患者（结石组）及同期行健康体检的115例正常人（对照组）的临床资料,采用病例对照研究方法和聚合酶链反应一限制性片断长度多态性（PCR—RFLP）技术,检测和分析内蒙古中西部地区的汉族和蒙古族结石组和对照组血样的载脂蛋白B基因XbaI、EcoRI多态性,包括XbaI位点的x±x±、x±X-、X—X一基因型及等位基因x-、x±（稀有等位基因）;EcoRI位点的E±E±、E±E-、E—E一基因型及等位基因E±、E-（稀有等位基因）。检测各组的血脂水平,包括TG、TC、HDL和LDL。计数资料行疋。检验,计量资料行t检验。结果汉族人群与蒙古族人群均无X±x±基因型,且蒙古族人群中亦未发现稀有等位基因X±和E-的存在。在汉族人群中,结石组LDL为（2．8±0．9）mmol／L,显著高于对照组的（1．9±0．8）mmol／L（t=2．800,P〈0．05）;蒙古族人群中,结石组HDL、LDL分别为（1．74-0．3）mmol／L、（3．5±0．8）mmol／L,显著高于对照组的（1．2±0．3）mmol／L、（2．8±0．9）mmol／L（t：7．596,2．549,P〈0．05）。蒙古族人群中,结石组TG、TC、HDL、LDL分别为（3．1±1．6）mmol／L、（5．6±1．0）mmol／L、（1．7±0．3）mmol／L、（3．5±0．8）mmol／L,均显著高于汉族结石组的（1．2±0．6）mmol／L、（4．4±1．2）mmol／L、（1．3±0．3）mmol／L、（2．8±0．9）mmol／L（t=5．501,3．667,4．448,3．430,P〈0．05）。蒙古族对照组TG、TC、LDL分别为（2．6±1．7）mmol／L、（5．1±1．1）mmol／L、（2．8±0．9）mmol／L,均显著高于汉族对照组的（1．3±0．7）mmol／L、（3．9±0．9）mmol／L、（1．9±0．8）mmol／L（t=4．298,4．772,3．888,P〈0．05）,而HDL则在汉族对照组中较高（t=1．997,P〈0．05）。汉族结石组x±x-、x-x-基因型LDL水平分别为（2．7±0．1）mmol／L和（2．6±1．0）mmol／L,E±E±、E±E-／E—E-分别为（2．6±1．0）mmol／L和（2．5±0．4）mmol／L,组内比较,差异无统计学意义（t=0．225,0．124。P〉0．05）。结论在内蒙古中西部地区,蒙古族人群可能比汉族人群容易患胆石症,但载脂蛋白B基因XbaI和EeoRI位点稀有等位基因x±和E一与血脂水平增高未见关联,可能与胆石症发生无关。     

腹腔镜技术获取活体供肾的基础研究

目的探讨建立小猪腹腔镜活体供肾切取和原位肾移植模型的可行性以及CO2气腹对小猪移植肾功能恢复及组织形态的影响。方法 40头滇南小耳猪经配型分为CO2气腹腹腔镜活体供肾切取组（LDN组,n=20）和开放活体供肾切取组（ODN组,n=20）,每组供、受体均为10头;两组分别采用腹腔镜和开放手术经腹膜后入路切取供肾后行原位肾移植。术后监测尿量、血清肌酐（SCr）及血尿素氮（BUN）;术后30d切取移植肾组织制作石蜡切片用于组织病理检查。结果 LDN组和ODN组均成功建立6例小猪原位肾移植模型,移植成功率均为60%（6/10）。LDN组和ODN组热缺血时间分别为（89±6）s和（30±11）s,差异有统计学意义（t=11.53,P〈0.05）。术后第3天LDN组和ODN组SCr分别为（152±16）μmol/L和（126±8）μmol/L,BUN分别为（7.26±0.99）mmol/L和（2.87±0.39）mmol/L,差异均有统计学意义（F=11.003,P〈0.05;F=6.303,P〈0.05）;术后第7天LDN组和ODN组SCr分别为（121±5）μmol/L和（89±10）μmol/L,BUN分别为（2.87±0.39）mmol/L和（1.63±0.38）mmol/L,差异均有统计学意义（F=48.301,P〈0.05;F=31.719,P〈0.05）。移植肾组织病理检查结果：HE染色显示LDN组移植肾肾小管上皮细胞损伤、肾间质水肿及炎性细胞浸润较ODN组稍重,但差异无统计学意义（P〉0.05）;过碘酸-Schiff染色及Masson染色显示两组移植肾病理改变无特异性。结论腹腔镜活体供肾切取术可影响移植肾的早期恢复,但对术后晚期移植肾功能及病理改变的影响与开放活体供肾切取术比较无差异。建立小猪经腹膜后入路腹腔镜活体供肾切取和原位肾移植模型具有可行性。     

胆囊胆固醇息肉与胆固醇结石的胆汁成分比较

目的分析胆囊胆固醇结石与胆固醇息肉病人的胆囊胆汁成分,探讨胆固醇结石和胆固醇息肉形成中各种成分的差异。方法测定20例胆囊胆固醇息肉（息肉组）、20例胆囊胆固醇结石（结石组）和10例非肝胆疾病（对照组）的胆囊胆汁成分。采用HITACHI-7060全自动生化分析仪测定总胆汁酸（TBA）、磷脂（PL）和总胆固醇（TC）;氨基己糖比色法测定糖蛋白;ORION-720A型数字离子酸度计测定游离Ca^2＋浓度及pH值;Agilent-1100高效液相色谱分析仪测定8种结合胆汁酸的含量。结果息肉组和结石组TC[（14.0±0.5）mmol/L,（18.6±1.2）mmol/L]、CSI（1.217±0.039,1.565±0.087）、三羟/二羟胆汁酸比值（0.702±0.084,0.763±0.060）均显著高于对照组TC（9.1±0.8）mmol/L、CSI（0.812±0.075）、三羟/二羟胆汁酸比值（0.585±0.067）（P〈0.05）,而且上述指标结石组显著高于息肉组（P〈0.05）。2组TBA含量分别为（110.7±14.8）mmol/L、（105.8±16.5）mmol/L,显著低于对照组（137.6±33.1）mmol/L（P〈0.05）。结石组糖蛋白（1.8±0.2）mmol/L、游离Ca^2＋（2.2±0.3）mmol/L及pH值（7.9±0.3）显著高于息肉组和对照组糖蛋白（0.6±0.1）mmol/L,（0.7±0.1）mmol/L、游离Ca^2＋（1.2±0.2）mmol/L,（1.1±0.1）mmol/L、pH值（7.0±0.1）,（6.9±0.2）（P〈0.05）。结石组甘氨胆酸（G）/牛磺胆酸（T）比值（2.777±0.217）显著低于息肉组（3.624±0.465）和对照组（3.960±0.377）（P〈0.05）;结石组和息肉组PL/TBA（0.311±0.044,0.292±0.036）显著高于对照组（0.241±0.082）（P〈0.05）。结论胆囊胆汁中总胆汁酸含量的降低和总胆固醇浓度的升高,是形成胆固醇结石和胆固醇息肉的共同因素。结合胆汁酸构成比例、pH值、糖蛋白及游离钙离子浓度在胆囊胆固醇息肉及结石的胆汁中存在差别。     

带cuff导管血液透析患者微炎症状态、氧化应激与颈动脉硬化的关系

目的探讨带cuff导管的维持性血液透析（MHD）患者微炎症状态、氧化应激对颈动脉内中膜厚度（IMT）的影响。方法选择MHD患者54例,其中带cuff导管血液透析患者24例为导管组,内瘘透析患者30例为内瘘组,另设健康志愿者30名为对照组。测定所有患者C反应蛋白（CRP）、血浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、血沉、血红蛋白（Hb）、血白细胞（WBC）及生化等指标。采用多元逐步回归法分析IMT与各指标间,CRP与血浆丙二醛（MDA）、SOD、血浆谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PxD）间的相关性。结果导管组CRP、MDA、SOD、GSH-Px、IMT与内瘘组差异非常显著（P〈0．01）。回归分析CRP与SOD（t：一2．299,P〈0．026）、MDA（t=4．055,P〈0．001）、GSH-Px（t=一2．887,P〈0．006）相关。IMT与CRP相关（t=7．353,Pd0．001）。结论导管组存在明显炎症、氧化应激,炎症与氧化应激相关,CRP与颈动脉硬化相关。     

还原型谷胱甘肽对维持性血液透析患者抗氧化能力的影响

目的通过观察静脉注射还原型谷胱甘肽对维持性血液透析（MHD）患者氧化应激状态的影响,探讨还原型谷胱甘肽对MHD患者抗氧化能力的作用。方法选择透析龄≥3个月的MHD患者68例,已排除急性感染及其他活动性疾病,按照血液透析治疗的时间分为两组：患者治疗组（38例）,每次透析结束后,静脉注射还原型谷胱甘肽1．2g,3次／周,连续用药8周;患者对照组（30例）,不用还原型谷胱甘肽。分别检测患者治疗前后的血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总同型半胱氨酸（tHcy）等。另选健康对照组30例。结果治疗前,患者治疗组和患者对照组的GSHPx、SOD水平[（583．74±217．05）、（578．82±311．94）μmol／L与（349．23±80．12）、（349．56±75．22）kU／L]显著低于健康对照组[（769．06±302．46）μmol／L与（428．34±15．23）kU／L]（P〈0．01）,MDA、tHcy水平[（4．88±1．13）、（4．79±1．42）nmol／L与（29．65±9．24）、（28．76±9．45）μmol／L]显著高于健康对照组[（3．56±0．46）nmol／L与（24．11±4．45）μmol／L]（P〈0．01或〈0．05）;治疗8周后与治疗前比较,患者治疗组的GSHPx、SOD水平均明显升高（P〈0．05或〈0．01）;MDA水平明显下降（P〈0．01）,tHcy水平也下降,但差异无统计学意义;患者对照组以上各项指标治疗前后均无明显变化,治疗8周后患者治疗组与患者对照组GSHPx、SOD、MDA水平比较差异有统计学意义（P〈0．01或〈0．05）。治疗8周后患者治疗组与健康对照组GSHPx、SOD、MDA、tHcy水平比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论MHD患者普遍存在氧化应激状态,静脉注射还原型谷胱甘肽可明显改善患者的抗氧化能力,从而提高机体对氧化应激的防御功能。     

探讨透析液钙浓度对血液透析患者血压及血清钙磷变化的影响

目的观察不同钙离子浓度的透析液对血液透析患者血压及血清钙磷代谢的影响,为血液透析患者的高血压及高钙血症的防治提供参考。方法选取我院血液净化中心维持性血液透析患者15例,采取自身对照的方法,先后应用钙浓度为1．75mmol／L（dCa2＋1．75）及1．50mmol／L（dCa2＋ 1．5）的透析液各连续进行35次透析,记录每次透析上机前、1h、2h、3h及透析结束后的血压,并分别于第1次及第35次透析前后观察一般临床指标及血清总钙、磷、钙磷乘积、甲状旁腺素及碱性磷酸酶的变化。结果两种透析液一般指标差异无显著性（P〉O．05）。与采用dCa2＋ 1．75相比,采用dCa2＋ 1．5进行透析,患者的血压降低,尤其在透析3h及透析结束后,差异有显著性（P〈0．05或P〈0．01）,透析后磷升高,差异有统计学意义（P〈0．05）,其他指标变化无显著性（P〉0．05）。结论透析液钙离子浓度与血液透析患者血压呈正相关,低钙透析液透析有助于维持性血液透析患者高血压的控制,但本研究未观察到其对血清钙浓度的影响。     

DAZL基因对人类生殖细胞分化和性腺发育影响的研究进展

DAZL（deleted in azoospermia—like）基因是DAZ（deleted in azoospermia）基因家族的成员之一,位于常染色体上3q24,与DAZ基因高度同源。研究表明DAZL基因在人类睾丸和卵巢均有表达,在生殖细胞分化和性腺发育形成过程中扮演重要的角色。本文阐述了DAZL基因的缺失、多态性、突变及甲基化改变在人类生殖中的影响,并对其在辅助生殖技术中的价值作简要的讨论。     

维生素E对人精子冻融氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨水溶性维生素E(Trolox)对冻融人精子氧化应激损伤的可能保护作用及机制。方法:选取16份健康生育男性的精液标本,分析精液常规参数及动力学参数后,将每份精液一式4份,1∶1加入冷冻保护液后混匀,不含水溶性维生素E者设为阴性对照组(G0),而G1、G2、G3实验组混合液中分别含有50、100、200μmol/L浓度的水溶性维生素E,冷冻复苏精液常规分析,检测复苏后精液中活性氧(ROS)水平,采用硫巴比妥酸法(TBA)检测精子中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)浓度。结果:冻融后各组精子运动参数较新鲜精液参数均明显下降(P0.01),G2组前向运动精子百分率[(53.33±5.63)%]较对照组[(47.85±5.09)%]明显改善(P0.05),精子VCL和VAP高于阴性对照组(P0.05)。G2组与G3组的ROS及MDA均低于阴性对照组(P0.05)。结论:在精液冷冻保护液中添加一定浓度的水溶性维生素E可以减少精子冻融过程中产生的过量ROS,减轻ROS对精子质膜的氧化应激性损伤,从而提高冻融后的精子活力。     

脂联素对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨脂联素（adiponectin,ADPN）对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）血管内皮生长因子（vascular endothelialgrowthfactor,VEGF）表达的影响。方法用含不同浓度葡萄糖的DMEM培养基体外培养NRK-52E细胞,随机分6组（每组5个样本,重复5次）：A组,含5．5mmol／L葡萄糖培养基对照组;B组,含5．5mmol／L葡萄糖＋甘露醇19．5mmol／L培养基组;C组,含25mmol／L葡萄糖培养基组;D组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素1mg／L组：E组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素2．5mg／L组;F组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素5mc／L组,培养24h。以逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测VEGF的表达,免疫荧光检测不同浓度干预组VEGF蛋白的表达影响。结果A组细胞VEGFmRNA表达量为（0．367±0．028）;B组为（0．346±0．045）,与A组比较无统计学差异（P〉0．05）;C组为（0．692±0．053）,显著高于A组（P〈0．01）;D组为（0．562±0．049）,低于C组（P〈0．05）。E组为（0．381±0．035）,与A组相近,但无统计学差异（P〉0．05）;F组为（0．295±0．031）,低于A组（P〈0．01）。不同浓度脂联素各组间比较,有统计学差异（P〈0．05）。免疫荧光检测VEGF表达情况;B组与A组无差异;C组显著高于A组（P〈0．01）;D组低于C组（P〈0．05）。E组与A组相近,但无统计学差异（P〉0．05）;F组低于A组（P〈0．05）。不同浓度脂联素各组间比较有统计学差异（P〈0．05）。结论ADPN能通过减少肾小管上皮细胞VEGF的表达对肾小管间质起保护作用。