发酵红参总皂苷对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转化的抑制作用及其机制

目的 探讨发酵红参总皂苷（FRGTS）对高糖诱导下肾小管上皮细胞发生上皮细胞-间充质转化（EMT）的抑制作用,并阐明其作用机制。 方法 将大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞分为正常对照组（5.5 mmol·L^－1 D-葡萄糖）、高糖组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖）、沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂EX527组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋10.0 μmol·L^－1.EX527）、FRGTS组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋25 mg·L^－1FRGTS）和EX527+FRGTS组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋10 μmol·L^－1 EX527＋25 mg·L^－1FRGTS）。采用免疫荧光法检测各组细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中E-cadherin、α-SMA和SIRT1 mRNA表达水平,ELISA法检测培养上清液中Ⅰ型胶原（ColⅠ）水平,Western blotting 法检测各组细胞中SIRT1、转化生长因子β1（TGF-β1）和Smad3 蛋白表达水平。 结果 高糖培养48 h后,与正常对照组比较,高糖组NRK-52E细胞中E-cadherin 蛋白表达水平和mRNA表达水平降低（P<0.01）,α-SMA 蛋白表达水平和mRNA表达水平升高（P<0.01）,NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高（P<0.01）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高（P<0.01）;与高糖组比较,FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平升高（P<0.01）,α-SMA mRNA表达水平降低（P<0.05）,NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平降低（P<0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05或P<0.01）,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）;与FRGTS组比较,EX527+FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,α-SMA mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高（P<0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。 结论 FRGTS可通过上调SIRT1表达,进而抑制TGF-β1/Smad信号通路,有效抑制肾小管上皮细胞发生EMT。     

北五味子多糖对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨北五味子多糖（SCP）对体外培养人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。 方法 体外培养人膀胱癌T24细胞,分为对照组和50、100及200 mg·L^－1 SCP组。不同剂量SCP干预24~48 h后,采用MTT法检测各组T24细胞增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色法检测各组T24细胞凋亡情况,Annexin Ⅴ-FITC/碘化丙啶（PI）双染法检测各组T24细胞凋亡率,流式细胞术检测各组T24细胞不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组T24细胞中磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,50、100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）;T24细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;50、100和200 mg·L^－1 SCP组 T24细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高（P<0.05或P<0.01）,100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞S期和G₂/M期细胞百分率明显降低（P<0.01）;50、100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞中PTEN蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,p-PI3K蛋白表达水平和p-Akt/Akt比值明显降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 SCP 能够抑制T24细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控PTEN和PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达有关。     

灵芝乙醇提取物对宫颈癌细胞生物学行为和JAK1/STAT3信号通路的影响

目的 探讨灵芝乙醇提取物（GLEE）对宫颈癌细胞生物学行为和Janus激酶1（JAK1）/信号传导和转录激活因子3（STAT3）信号通路的影响,并阐明其可能的作用机制。 方法 将人宫颈癌HeLa细胞随机分为对照组（给予完全培养液）和低、中及高剂量GLEE组（给予25、50、100 mg·L^－1 GLEE）。MTT法检测各组细胞增殖抑制率,平板克隆实验检测各组克隆形成率,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中JAK1、磷酸化JAK1（p-JAK1）、STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）、细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）和活化STAT蛋白抑制因子1（PIAS1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,低、中和高剂量GLEE组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率升高（P<0.05）,细胞克隆形成率、迁移细胞数和侵袭细胞数降低（P<0.05）,细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平降低（P<0.05）,细胞中p-JAK1和p-STAT3蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞中SOCS3和PIAS1蛋白表达水平升高（P<0.05）。与低剂量GLEE组比较,中和高剂量GLEE组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率升高（P<0.05）,细胞克隆形成率、迁移细胞数和侵袭细胞数降低（P<0.05）,细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平降低（P<0.05）,细胞中p-JAK1和p-STAT3蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞中SOCS3和PIAS1蛋白表达水平升高（P<0.05）。与中剂量GLEE组比较,高剂量GLEE组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率升高（P<0.05）,细胞克隆形成率、迁移细胞数和侵袭细胞数降低（P<0.05）,细胞中JAK1和STAT3 mRNA表达水平降低（P<0.05）,细胞中p-JAK1和p-STAT3蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞中SOCS3和PIAS1蛋白表达水平升高（P<0.05）。 结论 GLEE对宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭均有一定的抑制作用,其可能是通过上调细胞中SOCS3及PIAS1表达水平,进而影响JAK1/STAT3信号通路发挥作用。     

迷迭香酸通过激活Nrf2/HO-1通路对Aβ1-42所致星形胶质细胞损伤的保护作用

目的 探讨迷迭香酸（RA）对β淀粉样蛋白1-42（Aβ_1-42）引起的星形胶质细胞损伤的保护作用及炎症因子释放的抑制作用,并阐明其相关机制。 方法 原代培养星形胶质细胞,将细胞分为对照组,Aβ_1-42组（5 μmol?L^－1）,不同浓度（20,50和100 μmol?L^－1）RA+Aβ_1-42组,核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）组,ML385+RA+Aβ_1-42组。星形胶质细胞以不同浓度（20、50和100 μmol?L^－1）RA预处理24 h,再给予终浓度5 μmol?L^－1Aβ_1-42处理24 h,ML385组在加入RA前先加入终浓度10 μmol?L^－1 ML385预处理6 h。MTT法检测各组细胞活性,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞LDH释放率,酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Griess法检测各组细胞培养液中一氧化氮（NO）水平,免疫荧光法检测各组细胞中胶质原纤维酸蛋白（GFAP）和Nrf2表达情况,Western blotting法检测各组细胞中GFAP、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与Aβ_1-42组比较,不同浓度RA+Aβ_1-42组细胞活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显降低（P<0.01）,GFAP荧光强度明显减弱, Nrf2荧光强度明显增强,细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与RA（50 μmol?L^－1）+Aβ_1-42组比较,ML385+RA+Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 RA对Aβ_1-42诱导的星形胶质细胞炎症因子和NO释放有抑制作用,使星形胶质细胞免受损伤,该保护作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。     

丝胶对高糖所致足细胞损伤和JNK信号通路的影响

目的 探讨丝胶对高糖所致足细胞损伤时c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路相关蛋白的表达及足细胞凋亡的影响,阐明丝胶的保护作用及其可能机制。 方法 分化成熟的条件永生化小鼠足细胞随机分为正常对照组（含5.5 mmol·L^－1葡萄糖的培养基）、高渗对照组（含5.5 mmol·L^－1葡萄糖+24.5 mmol·L^－1甘露醇的培养基）、高糖组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖的培养基）、低浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+150.0 mg·L^－1丝胶的培养基）、中浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+300.0 mg·L^－1丝胶的培养基）和高浓度丝胶组（含30.0 mmol·L^－1葡萄糖+600.0 mg·L^－1丝胶的培养基）。采用光学倒置显微镜观察各组足细胞形态表现,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组足细胞中裂孔膜蛋白（Nephrin）、丝裂原活化蛋白激酶激酶1（MEKK1）、丝裂原活化蛋白激酶激酶4（MKK4）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和c-Jun mRNA表达水平,Western blotting法检测各组足细胞中Nephrin、MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun蛋白表达水平,AnnexinⅤ/PI双染法检测各组足细胞凋亡率。 结果 正常对照组足细胞胞体较大,并延伸生出树枝状突起;与正常对照组比较,高糖组足细胞胞体回缩变小,细胞间隔增大,脱落和悬浮的足细胞数目增多;与高糖组比较,不同浓度丝胶组足细胞形态逐渐趋于正常。高糖组足细胞中Nephrin mRNA和蛋白表达水平较正常对照组均明显降低（P<0.05）,表明高糖致足细胞损伤模型建立成功。高糖组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1、c-Jun mRNA和蛋白表达水平较正常对照组明显升高（P<0.05）;不同浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较高糖组明显降低（P<0.05）,且高浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较中浓度丝胶组明显降低（P<0.05）,中浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较低浓度丝胶组明显降低（P<0.05）。高糖组和高渗对照组足细胞凋亡率较正常对照组明显升高（P<0.05）;不同浓度丝胶组足细胞凋亡率较高糖组明显降低（P<0.05）,且高浓度丝胶组足细胞凋亡率较中浓度丝胶组明显降低（P<0.05）,中浓度丝胶组足细胞凋亡率较低浓度丝胶组明显降低（P<0.05）。 结论 丝胶对高糖所致足细胞损伤发挥保护作用,其机制可能与抑制JNK信号通路中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun的表达及抑制足细胞凋亡有关联。     

当归红芪超滤物对X射线引起人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的 探讨当归红芪超滤物（UFE-AH）对X射线引起人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用,阐明其可能的机制。 方法 体外培养 HUVECs,采用不同剂量（0、2、4、6、8和10 Gy）X射线辐射,筛选出最佳辐射剂量（6 Gy）;用不同浓度（0、50、100、200、400、600、800和1 000 μg·L^－1）UFE-AH干预HUVECs,筛选出最佳促增殖浓度（100、200和400 μg·L^－1）。实验分为空白组、模型组（6 Gy X射线）、低剂量UFE-AH组（6 Gy X射线+100 μg·L^－1 UFE-AH）、中剂量UFE-AH组（6 Gy X射线+200 μg·L^－1 UFE-AH）和高剂量UFE-AH组（6 Gy X射线+400 μg·L^－1 UFE-AH）。CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察各组细胞超微结构,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、血管内皮生长因子（VEGF）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）蛋白表达水平。 结果 CCK-8法检测,与0 Gy比较,当辐射剂量大于2 Gy时,辐射后48和72 h X射线对HUVECs的抑制率随辐射剂量增加而升高（P<0.05或P<0.01）,6 Gy及6 Gy以上辐射剂量细胞抑制率升高更明显（P<0.01）。与0 μg·L^－1 UFE-AH比较,100、200、400和600 μg·L^－1UFE-AH作用时细胞存活率升高（P<0.05或P<0.01）,且100、200和400 μg·L^－1UFE-AH作用24、48和72 h时细胞存活率明显升高（P<0.01）。与空白组比较,模型组细胞存活率明显降低（P<0.01）;与模型组比较,中和高剂量UFE-AH 组细胞存活率明显升高（P<0.01）。流式细胞术检测,与空白组比较,模型组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）;与模型组比较,低、中和高剂量UFE-AH组细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）。透射电子显微镜观察,空白组细胞膜完整,胞质较均匀,线粒体呈卵圆形,未见明显肿胀,胞内可见少量溶酶体;与空白组比较,模型组细胞重度肿胀,细胞膜多处破损,胞质稀松且出现多个空泡区,细胞核呈轻度不规则形,线粒体数量明显减少,呈轻度或中度肿胀,基质变浅且不均,线粒体少部分嵴局部断裂、变短,胞内可见较大量自噬溶酶体（ASS）;与模型组比较,低、中和高剂量UFE-AH组细胞肿胀减轻,胞内细胞器空泡逐渐减少,线粒体肿胀减轻,数量增多,胞内可见一定量ASS,但仍未恢复正常。Western blotting 法检测,与空白组比较,模型组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.01）;与模型组比较,中和高剂量 UFE-AH组细胞中PI3K、p-Akt、Bcl-2和VEGF蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Bax和caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值明显降低（P<0.01）。 结论 一定剂量的UFE-AH对X射线引起的HUVECs 损伤具有保护作用,其机制可能与UFE-AH影响HUVECs中PI3K、Akt、p-Akt、VEGF、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达有关。     

仙客来皂苷对肝癌细胞体外增殖和凋亡的选择性作用及其机制

目的：探讨紫金牛科植物紫金牛仙客来皂苷对肝癌细胞体外增殖和凋亡的选择性作用,并阐明作用靶点及其相关机制。方法：按照不同处理方式将人肝癌细胞HepG2或人正常肝细胞HL-7702分为仙客来皂苷组（加入0、2.5、5.0和10.0 μmol·L^-1仙客来皂苷）、胆固醇干预组（仙客来皂苷+20.0 mg·L^-1胆固醇）和对照组（0.5% DMSO）,MTT法检测各组细胞存活率,Filipin标记法检测细胞中胆固醇水平,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞LDH释放水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中Fas、FADD和caspase-8蛋白表达情况。结果：5.0和10.0 μmol·L^-1仙客来皂苷组HepG2细胞存活率明显低于HL-7702细胞（P<0.05）。Filipin标记后HepG2细胞中胆固醇水平明显高于HL-7702细胞（P<0.05）。仙客来皂苷组HepG2细胞LDH释放水平高于HL-7702细胞（P<0.05）。与5.0μmol·L^-1仙客来皂苷组比较,胆固醇干预组（5.0μmol·L^-1仙客来皂苷+20.0mg·L^-1胆固醇） LDH释放水平和细胞凋亡率均明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,仙客来皂苷组HepG2细胞中Fas和PADD蛋白和caspase-8蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与仙客来皂苷组比较,胆固醇干预组HepG2细胞中Fas、FADD和caspase-8蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：仙客来皂苷对肝癌细胞有选择性增殖抑制作用,其分子机制可能与通过肝癌细胞膜上胆固醇成分改变细胞膜通透性、进而以配体非依赖的方式激活凋亡相关Fas信号通路有关。     

MST1R抑制剂BMS-777607对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制和凋亡诱导作用

目的：探讨巨噬细胞刺激1受体（MST1R）抑制剂BMS-777607对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：采用不同浓度BMS-777607处理乳腺癌MCF-7细胞,将细胞分为对照组（0 μmol·L^-1 BMS-777607组）和0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0及20.0 μmol·L^-1 BMS-777607组。采用MTT法检测各组MCF-7细胞增殖率,克隆形成实验检测各组MCF-7细胞存活率,EDU成像和EDU流式细胞术检测各组MCF-7细胞增殖率,Hoechst33342染色法检测各组MCF-7细胞凋亡形态表现,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Western blotting法检测各组MCF-7细胞中ERK、p-ERK、Akt、p-Akt、PARP、Cleaved PARP、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,5和10 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞增殖率升高（P<0.05或P<0.01）。克隆形成实验,与对照组比较,5和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞存活率升高（P<0.05或P<0.01）。EDU掺入法检测,与对照组比较,10和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞增殖率升高（P<0.05或P<0.01）。Hoechst33342荧光染色,对照组MCF-7细胞核淡染,10μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞核少部分浓染、明亮,20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞核大部分浓染,细胞核染色质固缩、明亮。双染流式细胞术检测,与对照组比较,10和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞凋亡率降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,10、15和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞中p-ERK和p-Akt蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,PARP、CleavedPARP、Bax、CleavedCaspase-3及CleavedCaspase-9蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：MST1R抑制剂BMS-777607能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与抑制p-ERK和p-Akt表达和促进CleavedPARP、Bax、CleavedCaspase-9及CleavedCaspase-3表达有关。     

樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为对照组和不浓度樟脑哑嗪组,分别以浓度为0、0.5、1.0、5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪处理,24 h后MTT法检测各组HeLa细胞存活率和增殖抑制率。人宫颈癌HeLa细胞分为0、0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组,12 h后倒置显微镜下观察各组HeLa细胞形态表现,Hoechst 33258染色检测各组HeLa细胞凋亡形态表现,Western blotting法检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2相对表达水平。结果：MTT法检测,与对照组（0 μmol·L^-1）比较,0.5,1.0,5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,增殖抑制率升高（P<0.05或P<0.01）;樟脑磺哑嗪对HeLa细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.6 μmol·L^-1。对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）细胞生长状态良好,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞的体积明显缩小,细胞间连接消失;Hoechst 33258染色,樟脑磺哑嗪处理的细胞出现明显的染色增加。Western blotting法检测,与对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）比较,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞中Bcl-2蛋白相对表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Bax蛋白相对表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：樟脑磺哑嗪可有效抑制体外培养的宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞凋亡。     

环状RNA hsa_circ_0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化（EMT）、迁移、细胞周期和自噬的影响。 方法 取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa_circ_0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa_circ_0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa_circ_0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa_circ_0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度（0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^－1）雷帕霉素组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胃癌组织和细胞中hsa_circ_0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平。 结果 PCR产物经测序发现存在环化位点,与hsa_circ_0009735序列匹配。与癌旁组织比较,胃癌组织中hsa_circ_0009735表达水平升高（P<0.05）;与GES-1细胞比较, MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平升高（P<0.05）。与空白组比较,0.25和0.50 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞形态无明显改变,1.00 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞中颗粒增多,边界不清;2.00 mg·L^－1雷帕霉素组死亡MGC-803细胞较多。激光共聚焦显微镜下1.00 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞中自噬小体数与2.00 mg·L^－1雷帕霉素组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白组比较,不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P<0.05）,hsa_circ_0009735表达水平降低（P<0.01）。与阴性对照组比较,si-hsa_circ_0009735组MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平降低（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P<0.01）,迁移细胞数减少（P<0.01）,G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期细胞百分率降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率降低（P<0.05）,细胞中Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均降低（P<0.05）;与对照质粒组比较,OE-hsa_circ-0009735组HGC-27细胞中hsa_circ_0009735表达水平明显升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P<0.01）,迁移细胞数减少（P<0.01）,G₁期细胞百分率降低（P<0.01）,S期细胞百分率升高（P<0.05）,G₂期细胞百分率升高（P<0.05）,E-钙黏蛋白表达水平降低（P<0.05）,Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均升高（P<0.05）。 结论 胃癌细胞中高表达hsa_circ_0009735可能促进EMT进程,影响细胞迁移和细胞周期,并抑制细胞自噬过程。     

Ghrelin对脂肪间充质干细胞神经分化的影响

目的 探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞（ADSCs）神经分化的影响,并阐明其作用机制。 方法 倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组（不进行干预）、LY294002组［给予40 μmol·L^－1磷酸酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路特异抑制剂LY294002］、Ghrelin组（给予0.1 μmol·L^－1 Ghrelin）、Ghrelin+LY294002组（给予40 μmol·L^－1 LY294002+0.1 μmol·L^－1 Ghrelin）。倒置相差显微镜下观察各组ADSCs神经分化后的形态表现,免疫荧光染色法检测各组ADSCs中神经元特异性烯醇化酶（NSE）、巢蛋白（Nestin）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞百分率,Western blotting法检测各组ADSCs中 PI3K/Akt通路蛋白表达水平,并计算磷酸化PI3K（p-PI3K）/PI3K和磷酸化Akt（p-Akt）/Akt比值。 结果 ADSCs表面抗体CD90和CD13高表达,CD34、CD45和CD106低表达。与对照组比较,LY294002组仅部分细胞由长梭形转变为类圆形胞体,突起较短、数量减少,而Ghrelin组细胞由长梭形转变为类圆形胞体速度增快;与LY294002组比较,Ghrelin+ LY294002组细胞由长梭形转变为类圆形胞体速度增快,且突起数量增加。与对照组比较,LY294002组ADSCs中NSE和Nestin阳性细胞百分率及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显降低（P<0.05）,Ghrelin组ADSCs中NSE和Nestin阳性细胞百分率及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值升高（P<0.05）;与LY294002组比较,Ghrelin+LY294002组ADSCs中NSE和Nestin阳性细胞百分率及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值升高（P<0.05）;各组ADSCs中GFAP阳性细胞百分率比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 Ghrelin通过激活PI3K/Akt通路促进ADSCs神经分化。     

1,25(OH)2D3联合黄芪多糖对体外骨骼肌细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制

目的 探讨骨化三醇［1,25（OH）₂D₃］联合黄芪多糖（APS）对骨骼肌细胞胰岛素抵抗（IR）的改善作用及其作用机制,为采用1,25（OH）₂D₃和APS缓解IR提供依据。 方法 采用CCK-8法和己糖激酶法确定棕榈酸（PA）溶液（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L^－1）的最佳作用剂量和最佳作用时间、APS（25、50、100和200 mg·L^－1）最佳作用剂量及1,25（OH）₂D₃（1、10、100和1 000 nmol·L^－1）最佳作用剂量。将骨骼肌细胞分为对照组（不进行任何处理）、PA组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h）、PA+APS组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS作用24 h）、PA＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］、PA＋APS＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS和100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组细胞中胰岛素受体（InsR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、磷酸化胰岛素受体底物1（p-IRS-1）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、P65、磷酸化P65（p-P65）、P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,PA组骨骼肌细胞中ROS、IL-6、TNF-α、MCP-1水平和P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均升高（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均降低（P<0.05）;与PA组比较,PA+APS、PA+1,25（OH）₂D₃和PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS、IL-6、MCP-1和TNF-α水平及P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均降低（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均升高（P<0.05）。PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS水平、p-P65和p38MAPK蛋白表达水平均低于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）,InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达水平均高于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）。 结论 1,25（OH）₂D₃联合APS可有效减轻IR,其机制可能是通过抑制氧化应激通路以及炎性因子的释放来实现的,且联合应用效果优于单独应用。     

川芎嗪对肾结石模型大鼠肾组织氧化损伤的改善作用

目的 探讨川芎嗪（TMP）对肾结石模型大鼠肾组织氧化损伤的改善作用,阐明其可能的作用机制。 方法 健康雄性SD大鼠40只,随机分为对照组、模型组、TMP组和阳性对照组,经预实验后,除对照组外其余各组大鼠采用乙醛酸盐原液80 mg·kg^－1腹腔注射构建肾结石大鼠模型,同时TMP组大鼠采用盐酸TMP注射液100 mg·kg^－1腹腔注射,阳性对照组大鼠采用肾石通颗粒3.12 g·kg^－1灌胃,对照组大鼠采用0.9%氯化钠注射液2.5 mL·kg^－1腹腔注射,连续用药10 d。取各组大鼠肾组织切片,Von Kossa染色和HE染色观察各组大鼠肾组织中钙盐沉积情况和病理形态表现,检测各组大鼠肾组织中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。Western blotting法检测各组大鼠肾组织中核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素氧合酶1（HO-1）及NAD（P）H醌：氧化还原酶1（NQO1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,模型组大鼠肾组织Von Kossa染色可见明显的钙盐沉积,结晶量化分级评分明显升高（P<0.01）,HE染色可见肾组织细胞出现明显的病理损伤,肾组织中MDA水平明显升高（P<0.01）,SOD和GSH-Px活性明显降低（P<0.01）,肾组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与模型组比较,TMP组和阳性对照组大鼠肾组织Von Kossa染色可见钙盐沉积,结晶量化分级评分明显降低（P<0.05）,HE染色可见肾组织细胞病理损伤减轻,肾组织中MDA水平明显降低（P<0.01）,SOD和GSH-Px活性明显升高（P<0.05）,肾组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 肾结石可引起大鼠肾组织氧化应激损伤,导致肾组织中氧化应激指标改变和Nrf2/抗氧化反应原件（ARE）信号通路蛋白表达水平变化,TMP干预处理后可激活该信号通路,从而发挥对肾组织氧化应激损伤的改善作用。     

黄芪甲苷对脂多糖诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的：探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对脂多糖(LPS)诱导的成骨细胞前体细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用,阐明其相关机制。方法：将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和不同浓度(10、25、50及100 mg·L^-1)AS-Ⅳ组,采用CCK-8法检测各组细胞活性。将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+LY294002 [磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂]组,采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用相关试剂盒检测各组细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中血红素加氧酶1 (HO-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中HO-1、 PI3K、磷酸化Akt (p-Akt)、核因E2相关因子2(Nrf2)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果：CCK-8法检测,与对照组比较,LPS组细胞活性明显降低(P...