急性肺损伤大鼠肺Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成的变化

目的:探讨急性肺损伤大鼠肺Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成的变化.方法:SD大鼠24只,随机分为正常对照组、潮气量(VT)8 ml/kg组(A组)和16ml/kg组(B组),每组8只.A、B两组分别机械通气4 h,通气结束后测定肺组织湿/干重(W/D)、肺泡灌洗液与血浆蛋白比值、Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达及其比值、Ⅰ型和Ⅲ型前胶原肽(PINP和PⅢNP)浓度.结果:①与正常对照组肺组织W/D比较,A组和B组均显著增加(P均＜0.05),B组又明显高于A组(P＜0.05);②正常对照组和A组肺泡灌洗液与血浆蛋白比值无显著差异,而B组显著高于前两组(P＜0.05);③Ⅰ型前胶原mRNA表达在正常对照组与A组之间无显著差异,而B组显著高于前两组(P均＜0.05);④Ⅲ型前胶原mRNA表达在正常对照组与A组之间无显著差异,B组显著高于前两组(P均＜0.05);⑤Ⅰ型前胶原与Ⅲ型前胶原mRNA比值3组间比较均无显著差异(P＞0.05);⑥PⅠ NP、PⅢNP表达3组间比较均无显著差异(P＞0.05).结论:高潮气量通气导致正常大鼠出现肺损伤,Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达增加,但4 h内并未出现Ⅰ型和Ⅲ型前胶原比值增加,胶原蛋白尚未增加.     

缬沙坦与U0126对大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40重构的影响

目的 探讨缬沙坦与U0126对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40( connexin 40,Cx40)重构的影响.方法 将32只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(A组)、盐酸异丙基肾上腺素( isopreterenol,ISO)+二甲基亚砜(DMSO)组(B组)、ISO+U0126组(C组,U0126溶于DMSO中)、ISO+缬沙坦+DMSO组(D组).给药28 d后处死大鼠取心肌组织,放射免疫法测Ang Ⅱ含量;HE和Masson染色法观察纤维化程度即胶原容积分数(CVF);免疫组化法测定磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(P-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2( P-ERK1/2)以及Cx40的表达.结果 B、C、D组中Ang Ⅱ含量较A组明显升高[分别为(368.243±6.283)ng/L、(357.175±5.944) ng/L、(359.908±2.496) ng/L比(250.380±4.261) ng/L,P＜0.01];A组CVF(9.025 ±0.456)％,显示无心房纤维化;C组和D组较B组心房纤维化程度明显减弱[CVF分别为(10.260±0.525)％、(10.238 ±0.524)％比(78.710±1.587)％,P＜0.01],C组和D组之间差异无统计学意义(P＞0.05);B组较A组中P-MEK1/2(0.311±0.007比0.203±0.009,P＜0.01)和P-ERK1/2含量明显增加(0.259±0.003比0.173±0.006,P＜0.01),而C组和D组中含量较B组明显减少(P-MEK1/2分别为0.212±0.004、0.213±0.005比0.311±0.007,P＜0.01;P-ERK1/2分别为0.178±0.004、0.175 ±0.007比0.259±0.003,P＜0.01),C组和D组之间差异无统计学意义(P＞0.05);B组较A组Cx40含量明显减少(0.199±0.007比0.241±0.004,P＜0.01)且分布紊乱,C组和D组中含量较B组减少程度明显减轻(分别为0.239±0.037、0.235±0.006比0.199±0.007,P＜0.01)且部分呈线性分布于闰盘,C组和D组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 心肌组织中Ang Ⅱ含量长期升高可能参与心房纤维化的形成和Cx40重构,缬沙坦与U0126通过抑制ERK通路的不同位点,在改善心房纤维化程度和Cx40重构方面发挥相似的作用.     

Toll样受体-2、核因子-κB在Aβ诱导的阿尔茨海默病中的作用

目的探讨Toll样受体2(TLR-2)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β与β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法将雄性Wistar大鼠50只,随机分为A、B、C、D、E组,每组10只;A组大鼠双侧海马CA1区注射5μl生理盐水,B~E组双侧海马注射5μl Aβ(分别含Aβ25~350.5、1、5、10μg);ELISA检测TNF-α、IL-1β含量;免疫组化(IHC)检测海马CA1区TLR-2表达;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测TLR-2、NF-κB基因的mRNA表达。结果 IHC检测TLR-2主要聚集在Aβ斑块周围,D组(0.036 6±0.007 3)、E组(0.044 8±0.010 8)TLR-2阳性表达明显高于A组(0.018 7±0.005 8)、B组(0.010 0±0.003 4)、C组(0.015 1±0.006 0)(P0.01);ELISA检测大鼠血清TNF-α含量D组(568.65±44.66)pg/ml、E组(685.06±29.92)pg/ml明显高于A组(426.87±55.91)pg/ml、B组(432.99±28.09)pg/ml、C组(488.14±39.04)pg/ml(P0.01),IL-1β含量D(104.60±9.32)pg/ml、E组(143.38±17.09)pg/ml明显高于A(49.13±8.46)pg/ml、B(60.89±14.71)pg/ml、C(79.81±9.94)pg/ml三组(P0.01);qRT-PCR检测大鼠海马组织内TLR-2 mRNA表达D组(2.185 9±0.381 4)、E组(2.977 7±0.390 7)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.178 5±0.106 6)、C组(1.463 3±0.127 3)(P0.01);NF-κB mRNA表达D组(1.747 0±0.125 6)、E组(2.271 9±0.533 2)明显高于A组(1.000 0±0.000 0)、B组(1.274 3±0.165 1)、C组(1.429 1±0.077 7)(P0.01)。结论随着Aβ剂量不断增加,TLR-2促进小胶质细胞吞噬和清除Aβ的能力不足使Aβ积聚体并激活NF-κB,促进更多的TNF-α、IL-1β释放,最终导致大鼠脑内神经元损伤。     

纳豆激酶对动脉粥样硬化家兔凝血和纤溶功能的影响

目的:观察家兔口服纳豆激酶(NK)对血液凝血和纤溶功能的影响.方法:32只新西兰白兔随机分为4组,每组8只,包括空白对照组(A组)、模型组(B组)、低剂量NK组(C组)和高剂量NK组(D组),常规高脂饮食构建动脉粥样硬化模型.采用凝固法测定血浆凝血酶原(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)和凝血因子Ⅰ(Fg)浓度;ELISA法测定血液纤溶酶原激活剂(tPA)和纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)浓度、RT-PCR法检测主动脉组织tPA和PAl-1 mRNA的表达、免疫组化法检测主动脉组织PAI-1蛋白表达.结果:与A组相比,B组的PT明显缩短,C、D组的APTT明显延长,Fg含量明显下降(P＜0.01),以D组更明显;D组的tPA浓度明显增加[(0.91±0.17):(1.25±0.23)μg/L,P＜0.05],B组的PAI-1显著增加[(2.00±0.45):(2.75±0.84)pg/L,P＜0.05];C、D组的tPA mRNA表达较B组明显增加(分别为1.22±0.23和1.33±0.16:0.64±0.10,P＜0.01),PAI-1 mRNA则显著减少(分别为1.34±0.17和1.31±0.09:1.90±0.18,P＜0.01);免疫组化染色显示A组、B组、C组和D组的单位面积动脉内膜及中膜PAI-1阳性染色标记物的平均A值分别为(155.86±28.19)、(190.49±19.80)、(148.52±9.86)和(138.80±3.13),P＜0.05或P＜0.01.结论:NK可明显提高血液纤溶活性、降低凝血活性,显著增加动脉硬化组织tPA mRNA的表达、减少PAI-1 mRNA和蛋白的表达.     

乙型肝炎病毒对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白表达的影响

目的 探讨HBV对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)表达的影响.方法 收集我院感染科诊断为CHB合并肝脂肪变的患者55例,根据患者外周血清HBV DNA载量的不同分为3组:A组:HBV DNA≤103拷贝/ml的患者(15例);B组:103拷贝/ml＜HBV DNA＜105拷贝/ml的患者(18例); C组:HBV DNA≥105拷贝/ml的患者(22例).将C组抗病毒治疗后HBV DNA≤103拷贝/ml的10例患者分为C1组(治疗前)和C2组(治疗后);将C组抗病毒治疗后HBV DNA≥105拷贝/ml的12例患者分为C3组(治疗前)和C4组(治疗后).用油红O染色观察肝组织脂滴的变化;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c及SREBP-2 mRNA的表达;免疫组织化学法检测SREBP-1c及SREBP-2蛋白的表达.多组间比较用单因素方差分析及q检验,配对样本t检验进行抗病毒前后两组间数据的比较.结果 (1)A、B、C组脂滴表 达的红色积分吸光度值分别为1004.27±218.63、1937.01±401.47、4133.79±389.28,各组间油红O红染程度不同(F=385.69,P＜0.01);C1、C2、C3、C4组脂滴表达的红色积分吸光度值分别为4020.84±326.64、1012.02±244.89、4189.18±329.21、4121.76±304.09,与C1组比较,C2组油红O红染程度下调,t=22.55,P＜0.01,差异有统计学意义;C4组与C3组比较,差异无统计学意义.(2)与A组比较,B组与C组SREBP-1c mRNA分别上调(1.218±0.130)倍、(1.798±0.118)倍,A、B、C组SREBP-1c mRNA表达水平比较,F=297.47,P＜0.01,差异有统计学意义.与A组比较,B组与C组SREBP-2 mRNA分别下调95.6%±11.8%、97.2%±15.3%,A、B、C组间SREBP-2 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义.与C1组比较,C2组SREBP-1c mRNA表达水平下调71.4%±8.1%,t=11.224,P＜0.01,差异有统计学意义;与C1组比较,C2组SREBP-2 mRNA表达水平上调(1.034±0.155)倍,差异无统计学意义.与C3组比较,C4组SREBP-1c mRNA表达水平上调(1.012±0.206)倍,差异无统计学意义;与C3组比较,C4组SREBP-2 mRNA表达水平下调99.8%±18.3%,差异无统计学意义.(3)A、B、C组SREBP-1c蛋白表达量分别为36257.21±5709.79、50413.47±4989.28、71025.83±6047.13,3组SREBP-1c蛋白比较,F=178.26,P＜0.01,差异有统计学意义;A、B、C组SREBP-2蛋白表达量分别为32913.52±3951.21、32625.91±4025.06、34173.44±5316.25,3组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-1c蛋白表达量分别为69832.16±4941.36、48735.47±5471.41、70871.69±5083.14、68913.32±5343.22,C1组与C2组比较,t=10.260,P＜0.01,差异有统计学意义;C3与C4组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-2蛋白表达量分别为33980.21±4081.80、34011.50±3859.27、33610.12±4761.10、32915.66±5023.61,C1组与C2组比较,差异无统计学意义,C3组与C4组比较,差异无统计学意义.结论 HBV DNA可能通过干扰SREBP-1c的表达而参与了肝细胞脂肪变性的形成.     

白介素-10抑制肝星状细胞细胞间黏附分子-1的表达

目的探讨白介素-10(IL-10)对肝星状细胞(HSC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法来分离培养HSC,传代后的HSC随机分为4组对照组(A组)、肿瘤坏死因子α(TNFα)100U/ml组(B组)、TNFα100U/ml+IL-102ng/ml组(C组)及TNFα100U/ml+IL-1020ng/ml组(D组).加药后24h,采用细胞酶联免疫吸附分析(ELISA)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,检测HSCICAM-1蛋白及mRNA表达.结果B组的ICAM-1蛋白和mRNA表达量分别为1.400±0.077和1.301±0.095,明显高于A组的0.559-0.071(P＜0001)和0.666±0.023(P＜0.001);C组和D组的ICAM-1蛋白表达量分别为1.017±0066和0.919±0.039,mRNA表达量分别为1.116±0.017和0.979±0.067,均低于B组的ICAM-1蛋白和mRNA表达(P均＜005).结论IL-10通过抑制HSCICAM-1表达,在抑制肝脏炎症、肝纤维化中发挥作用.     

骨关节炎关节软骨及游离体中胶原Ⅰ Ⅱ Ⅲ型的表达

目的　进一步了解与骨关节炎相关的关节软骨及游离体软骨细胞表型改变。方法　通过组化和免疫组化方法,观察纤维性胶原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型在人正常和骨关节炎关节软骨及游离体中的表达。结果　在10例骨关节炎关节软骨标本中,有9例可在关节软骨的中层和深层的软骨细胞中显示强烈的Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白的阳性表达信号,而Ⅰ型胶原表达蛋白只在中下层及深层观察到,表达强度较Ⅲ型弱,表达区域部分与Ⅲ型重叠。在10例骨关节炎游离体标本中,均可在游离体内部软骨细胞及基质中显示强烈的Ⅲ型胶原蛋白阳性表达信号。相同标本中Ⅰ型胶原蛋白仅在游离体内部软骨细胞中有表达,表达的阳性信号相对较低,未见明显的Ⅱ型胶原表达。在正常关节软骨中,Ⅱ型胶原的表达的信号较弱,未见Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达信号。结论　在骨关节炎关节软骨及游离体中,一定区域内的软骨细胞表型发生了改变,表达合成了Ⅲ型胶原和Ⅰ型胶原,可能在骨关节炎发病机制中发挥重要作用。     

白介素-10与血小板衍生生长因子-BB对肝星状细胞表达细胞间黏附分子-1 mRNA的影响

目的 :探讨白介素 10 (IL 10 )、血小板衍生生长因子 BB (PDGF BB)对体外活化的培养大鼠肝星状细胞(HSC)表达细胞间黏附分子 1(ICAM 1)mRNA的影响。方法 :体外培养激活的HSC (细胞系rHSC 99)随机分为 4组 :对照组 (A组 )、IL 10 2 0ng/ml干预组 (B组 )、PDGF BB 2 0ng/ml干预组 (C组 )及IL 10 2 0ng/ml PDGF BB2 0ng/ml共干预组 (D组 )。加药后 2 4小时 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR )方法 ,检测各组ICAM 1mRNA表达情况。结果 :B组ICAM 1mRNA的表达较A组明显降低 (P <0 0 1) ;C组ICAM 1mRNA的表达较A组明显增强 (P <0 0 1) ;D组ICAM 1mRNA的表达较A组与C组均降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,但与B组相比较其ICAM 1mRNA的表达则增强 (P <0 0 1)。结论 :PDGF BB促进肝纤维化与其引起HSC表达ICAM 1增强有关 ,IL 10通过下调HSCICAM 1表达 ,可在抑制肝纤维化中发挥作用。     

益肝煎剂对实验性肝纤维化大鼠I,Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨益肝煎剂对实验性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法采用400mL@L-1四氯化碳(CCl4)sc制备大鼠实验性肝纤维化模型,将80只(雌雄各半)Wistar大鼠随机分成正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、秋水仙碱组(C组)和益肝煎剂组(D组)各20只.后两组于造模的同时开始给药,观察10 wk.采用苦味酸-天狼星红(Picric acid-Sirius red)染色显示Ⅰ,Ⅲ型胶原.偏振光显微镜下区分Ⅰ,Ⅲ型胶原.用半定量评分方法判断细胞变性程度和纤维化程度.结果益肝煎剂组大鼠肝组织的脂肪变性程度较模型组明显减轻,脂肪变性积分分别为2.00±1.36和3.17±0.75(P＜0.01);Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白含量明显少于模型组,纤维化程度积分分别为1.32±0.57和2.33±0.82(P＜0.01).结论益肝煎剂对大鼠实验性肝纤维化的形成有明显抑制作用.     

有氧运动对大鼠急性心肌梗死后心脏功能的改善性研究

目的观察有氧运动对大鼠急性心肌梗死后心脏功能的改善性研究。方法实验大鼠24只,随机分为假手术组,梗死模型组、有氧运动组,每组8只。各组大鼠10周后进行血流动力学指标检测,左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室压力最大下降速率(-dp/dtmax),左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、白细胞介素6(IL-6)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达。结果与假手术组比较,梗死模型组和有氧运动组大鼠LVEDP、AngⅡ、IL-6明显升高,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax明显降低(P0.05,P0.01)。与梗死模型组比较,有氧运动组大鼠+dp/dtmax、-dp/dtmax明显升高,LVEDP、AngⅡ、IL-6明显降低[(20.5±3.5)mm Hg vs(25.8±4.0)mm Hg,P0.05,1 mm Hg=0.133kPa;(1176.7±140.9)ng/L vs(1436.7±230.2)ng/L,P0.05;(123.0±28.7)ng/L vs(161.8±14.3)ng/L,P0.01]。与假手术组比较,梗死模型组MMP-2、MMP-9、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达明显增加(P0.01)。与梗死模型组比较,有氧运动组MMP-2、MMP-9、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达明显降低(P0.01)。结论有氧运动可以通过抑制血中AngⅡ、IL-6水平的增加以及抑制MMP-2、MMP-9、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达改善心肌梗死大鼠的心脏功能。     

白藜芦醇对实验性兔骨关节炎软骨细胞凋亡及bcl-2 bax表达的影响

目的 研究白藜芦醇对兔实验性骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡及凋亡调控基因bcl-2、bax表达的影响,探讨其治疗OA的机制.方法 30只新西兰大白兔随机平分为5组,A组(健康对照组)、B组(模型对照组)、C组(白藜芦醇高剂量干预组)、D组(白藜芦醇中剂量干预组)、E组(白藜芦醇低剂量干预组).除A组外,其他各组均以Hulth法复制膝OA模型.术后第4周开始,A组、B组每天以5 ml含0.1%二甲基亚砜的蒸馏水灌胃;白藜芦醇干预各组每天以相应剂量白藜芦醇溶液(浓度为60 mg/ml)灌胃,C、D、E组日剂量分别为120、60、30mg·kg-1·d-1,连续6周.第10周处死大白兔,取右膝关节股骨内髁内侧软骨,软骨组织切片用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察软骨细胞凋亡,免疫组织化学法观察软骨细胞bcl-2和bax的表达.结果 ①模型对照组关节软骨细胞凋亡率明显高于健康对照组;白藜芦醇干预各组可不同程度地降低OA软骨细胞凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05),且呈剂量依赖性.②与健康对照组相比,模型对照组关节软骨细胞bcl-2和bax阳性率均升高(P＜0.01),bcl-2/bax的比值降低;白藜芦醇干预后,bcl-2阳性率升高更为明显(P＜0.01);而bax阳性率有不同程度降低(P＜0.01);bcl-2/bax的比值均不同程度提高(P＜0.01).结论 白藜芦醇通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,提高bcl-2/bax的比值,以抑制兔实验性OA中软骨细胞的过度凋亡,达到保护软骨,防治OA的目的 .     

螺内酯对大鼠肝纤维化α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA表达的影响

目的 探讨醛固酮受体拮抗剂螺内酯对大鼠α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA表达的影响,评价螺内酯的抗纤维化作用.方法 雄性SD大鼠50只,随机分为(1)肝硬化模型组(A、B组各10只)体积分数40%的四氯化碳(CCl4,用精制橄榄油配制),皮下注射,3 ml/kg,每周2次,其中A组注射10周,B组注射13周;(2)螺内酯组(C、D组各10只)CCl4注射的同时给予螺内酯20 mg/(kg·d)灌胃,其中C组灌胃10周,D组灌胃13周;正常对照组(10只)正常饮食、饮水.分别于第10周末处死A、C组大鼠,13周末处死B、D组及对照组大鼠.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠肝脏组织中α1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA的表达.结果 第10周末时,螺内酯组d1(Ⅰ)、α1(Ⅲ)前胶原mRNA表达显著低于肝纤维化模型组(P＜0.05).第13周末时,螺内酯组与肝纤维化模型组相比差异无显著性意义.结论 螺内酯对肝纤维化有一定的抑制作用.     

长期应用塞来昔布、布洛芬、吲哚美辛对大鼠骨关节炎关节软骨胶原代谢的影响

目的探讨长期应用塞来昔布、布洛芬、吲哚美辛对大鼠骨关节炎关节软骨胶原代谢的影响。方法采用左侧跟腱切除术诱发Wistar大鼠同侧膝关节骨关节炎(OA),分为4组,每日给赛来昔布24 mg/kg(CE组)、布洛芬72 mg/kg(IBP组)、吲哚美辛9 mg/kg(IN组)及生理盐水(NS组)。观察3、6、9个月后关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表达的变化。结果(1)CE对OA软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的表达无明显影响;(2)IBP可促进OA软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的表达,胶原合成量增加;(3)IN可抑制Ⅱ型胶原的表达,促进OA软骨细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结论长期应用CE对关节软骨胶原代谢无明显影响;IBP不仅促进软骨细胞Ⅱ胶原的表达,亦促进软骨细胞异型胶原的表达;IN可能会加剧关节软骨胶原代谢的损害。     

干扰素α对Ⅰ型胶原及转化生长因子β1基因表达的影响

目的 观察干扰素α(IFN α)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF β1)基因表达的影响,探讨IFN α抗肝纤维化的可能机制.方法 体外培养大鼠HSC系rHSC-99,分别用0、0.0125、0.0250、0.0500,0.1000、0.2000,0.4000 ng/ml IFN α,PDGF-BB干预和两者共同干预,用四甲基偶氮唑盐实验观察各组对HSC细胞活力的影响,采用逆转录聚合酶链反应方法测定各组对HSC细胞Ⅰ型胶原mRNA和TGF β1 mRNA表达的影响.结果 (1)HSC细胞活力(A值)PDGF-BB干预组为1.35±0.22,空白对照组为0.89±0.12,两组比较,F=16.311,P＜0.05,差异有统计学意义,说明PDGF-BB可提高HSC细胞活力.0.025,0.050、0.100、0.2000,0.400ng/ml IFN α加PDGF-BB共干预组,A值分别为0.84±0.18.0.45±0.15、0.26±0.01、0.33±0.07,0.30±0.06,较空白对照组明显降低,F=7.430,P＜0.05,差异有统计学意义,说明IFN α与PDGF-BB共同作用可抑制HSC细胞活力,且在0.025-0.100 ng/ml范围内随着IFN α浓度的增加其抑制作用越明显.(2)0.050、0.100、0.200ng/ml IFN α加PDGF-BB共干预各组Ⅰ型胶原mRNA相对表达值分别为0.94±0.19、0.61±0.12,0.52±0.02,空白对照组为1.41±0.01,共干预各组比空白对照组均明显降低,F=127.921,P＜0.05,差异有统计学意义.0.050、0.100,0.200ng/mlIFN α加PDGF-BB共干预组各组TGFβ1 mRNA相对表达值分别为1.18±0.06、1.15±0.10、1.39±0.04,空白对照组为1.62±0.12,共干预各组比空白对照组均明显降低,F=82.115,P＜0.05,差异有统计学意义,说明IFN α与PDGF-BB共同作用对HSC细胞Ⅰ型胶原、TGFβ1基因的表达有抑制作用,且随着浓度的增加其抑制作用越明显.结论 IFN α对PDGF-BB诱导的HSC细胞活力及Ⅰ型胶原、TGF β1基因的表达有抑制作用,且随着浓度的增加其抑制作用越明显.这可能是IFN α发挥抗肝纤维化作用的途径之一.     

屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽对过敏性哮喘小鼠的免疫治疗效果

目的探讨以屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)1类变应原T细胞表位融合肽(TAT-Ih CDPTCE)为疫苗,评价其对过敏性哮喘小鼠特异性免疫治疗的效果。方法 120只SPF级BALB/c小鼠随机均分为PBS组(阴性对照,A组)、Pro Der p 1变应原致敏组(B组)、Pro Der p 1变应原免疫治疗组(C组)、DPTCE蛋白免疫治疗组(D组)、TAT-DPTCE蛋白免疫治疗组(E组)和TAT-Ih C-DPTCE蛋白免疫治疗组(F组),每组20只。分别于第0、7、14天,A组小鼠腹腔注射PBS,B~F组小鼠均腹腔注射屋尘螨变应原提取液10μg。第21天起,A组小鼠雾化吸入PBS,B~F组小鼠均吸入0.5μg/ml屋尘螨变应原提取液,1次/d×30 min,连续7 d。C~F组小鼠于第25~27天雾化前30 min分别腹腔注射100μg/ml Pro Der p 1、DPTCE、TAT-DPTCE和TAT-Ih CDPTCE溶液各200μl,进行特异性免疫治疗,A、B组小鼠分别注射200μl PBS。最后1次雾化后24 h,处死各组小鼠。HE染色观察小鼠肺组织病理变化。分别收集各组20只小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素13(IL-13)、IL-10和β转化生长因子(TGF-β)的水平,并计数嗜酸粒细胞数量(EOS)。分别取各组5只小鼠眼眶血,ELISA检测血清中变应原特异性Ig E、Ig G_1和IgG_(2a)的抗体水平。结果 HE染色镜检结果显示,与B组比较,F组小鼠支气管周围嗜酸粒细胞增多、上皮细胞脱落和支气管上皮细胞肥大等肺部炎症明显减轻。小鼠BALF中,F组的IFN-γ水平为(298.75±26.09)pg/ml,高于B组(158.71±20.89)pg/ml、C组(210.38±18.92)pg/ml、D组(229.44±13.00)pg/ml和E组(233.24±20.39)pg/ml(P0.01);IL-10和TGF-β水平与IFN-γ相似,F组IL-10和TGF-β水平分别为(105.32±7.24)和(119±9.33)pg/ml,均高于B组(23.29±3.18)和(41.19±4.63)pg/ml、C组(43.54±4.28)和(60.19±6.47)pg/ml、D组(51.33±6.19)和(69.34±8.27)pg/ml、E组(52.78±7.83)和(71.22±7.94)pg/ml(P0.01);而C、D、E和F组的IL-13水平分别为(47.35±4.71)、(41.90±4.28)、(41.05±6.50)和(18.53±5.67)pg/ml,均低于B组(66.68±6.63)pg/ml(P0.01),其中F组IL-13水平最低。B组小鼠BALF中的EOS数量为(5.65±0.91)×10~5/ml,高于A组(0.45±0.39)×10~5/ml(P0.01),而C、D、E和F组的嗜酸粒细胞数量均显著下降,分别为(4.00±0.59)×10~5/ml、(3.39±0.63)×10~5/ml、(3.24±0.69)×10~5/ml和(1.42±0.49)×10~5/ml(P0.01)。血清中抗体水平的ELISA检测结果显示,F组小鼠血清Ig E水平为(5.26±1.72)ng/ml,低于B组(32.81±2.98)ng/ml、C组(20.06±3.17)ng/ml、D组(17.06±3.18)ng/ml和E组(16.23±3.61)ng/ml(P0.01);F组中血清Ig G_1水平为(9.85±1.42)ng/ml,亦低于B组(43.72±3.05)ng/ml、C组(31.54±4.25)ng/ml、D组(25.20±2.91)ng/ml和E组(23.96±4.12)ng/ml(P0.01或P0.05);F组中血清Ig G_2a水平为(43.10±1.34)ng/ml,高于B组(12.61±1.87)ng/ml、C组(23.37±2.67)ng/ml、D组(25.60±2.10)ng/ml和E组(25.91±1.33)ng/ml(P0.01)。结论通过TAT-Ih C-DPTCE免疫治疗小鼠哮喘,可有效改善小鼠变态反应性气道及肺部炎症。     

隐蔽性高血压患者血管活性物质的变化

目的 探讨隐蔽性高血压患者血浆中血栓素A2(TXA2)、前列环素(PGI2)、神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平变化并评价其对隐蔽性高血压患者血压水平的影响.方法 78例研究对象分为健康对照组(A组,n=30),隐蔽性高血压组(B组,n=18)及原发性高血压组(C组,n=30).检测各组血浆中TXA2、PGI2、NPY、CGRP水平并作比较.结果 B组患者血浆中TXA2(1151.0±144.0)ng/L和NPY(138.1±16.1)ng/L水平高于A组[TXA2:(940.5±172.5)ng/L;NPY:(99.6±19.7)ng/L;P均＜0.01],但是低于C组患者[TXA2:(1416.6±145.2)ng/L;NPY(169.8±26.2)ng/L;P均＜0.01];而B组患者血浆中PGI2和CGRP水平低于A组[PGI2:(171.4±44.0) vs A组:(244.4±51.2)ng/L;CGRP:(56.2±15.6) vs A组:(79.8±17.9)ng/L;P均＜0.01],高于C组患者[PGI2:(171.4±44.0) vs C组:(108.3±41.9)ng/L;CGRP:(56.2±15.6) vs C组:(39.2±16.6)ng/L;P＜0.05或P＜0.01].经多元线性回归分析:B组患者白昼SBP水平与TXA2、NPY水平直线相关(P均＜0.01);白昼DBP水平与TXA2、CGRP水平直线相关(P＜0.05～0.01).结论 隐蔽性高血压病人血管活性物质如TXA2、PGI2、NPY、CGRP较正常血压的人不同,表现为收缩性血管活性因子增多,舒张性血管因子减少,提示这些血管活性物质可能参与了隐蔽性高血压的发病.     

血管紧张素Ⅱ对人肝细胞白蛋白和胶原合成的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人正常肝细胞白蛋白表达及Ⅰ型胶原合成的影响.方法 常规培养人正常肝细胞系HL-7702细胞并分为对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ十依贝沙坦组(共刺激组).采用免疫荧光法和Western印迹法检测各组肝细胞中白蛋白及胶原改变;免疫荧光法观察各组肝细胞中是否有胶原合成;实时定量PCR法定量检测各组肝细胞中Ⅰ型胶原mR-NA表达水平的变化.结果 与对照组相比,经AngⅡ(10-7mol/L)处理72 h后,AngⅡ刺激组肝细胞中白蛋白表达减少(1.41±0.23比0.85±0.11,P=0.000),Ⅰ型胶原mRNA的表达明显升高(1.00±0.08比3.72±0.19,P=0.000),Ⅰ型胶原蛋白合成增加,而经依贝沙坦预处理后,共刺激组肝细胞白蛋白表达较AngⅡ刺激组明显增多(0.85±0.11比1.38±0.32,P=0.000),肝细胞Ⅰ型胶原mRNA表达较AngⅡ刺激组显著下降(3.72±0.19比2.86±0.13,P=0.000),Ⅰ型胶原蛋白合成减少.结论 AngⅡ经Ⅰ型受体诱导人肝细胞表达白蛋白减少,胶原合成增加.     

大黄酸对肿瘤坏死因子-α诱导的脐静脉内皮细胞黏附作用影响的观察

目的 观察不同剂量的大黄酸(Rhein)对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)黏附作用的影响. 方法 将HUVECs分为单纯HUVECs组、单纯TNF-α 40 ng/ml(TNF-α)组、Rhein100 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein100)组、Rhein 50 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein50)组、Rhein 10 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml (Rhein10)组.采用Western blot和RT-PCR检测HUVECs细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的蛋白和mRNA的水平.采用人单核细胞株(THP-1)和HUVECs的黏附性实验检测内皮细胞的黏附功能. 结果 与TNF-α组比较,Rhein100、Rhein50、Rhein10组ICAM-1蛋白相对表达量下降[(2.88±0.04)vs(1.27±0.32),(1.28±0.17),(1.32±0.25),P＜0.05或P＜ 0.01];Rhein100和Rhein50组ICAM-1 mRNA的水平下降[(2.12±0.24)vs(1.19±0.17),(1.26±0.23),P＜0.05或P＜0.01];在黏附性实验中,Rhein100组HUVECs所黏附的单核细胞数目下降[(1.28±0.07)vs(1.07±0.14),P＜0.01]. 结论 Rhein能抑制TNF-α所诱导的HUVECs的ICAM-1的过度表达,可能是Rhein对HUVECs的保护机制之一.     

SB203580对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨SB203580对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法:将32只♀SD大鼠分为4组:正常组(N组)8只、肝纤维化组(HF组)8只、DMSO溶剂干预组(D组)8只、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB组)8只.采用四氯化碳复合因素法复制肝纤维化模型,肝纤维化模型制作结束后,D组给予2‰DMSO溶液3 mL/(kg?d),SB组给予SB203580溶液10 mg/(kg?d),N组、HF组给予同等剂量0.9%生理盐水3 mL/(kg?d)腹腔注射,连续注射4 d.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏,行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,行Masson染色观察胶原纤维沉积情况,采用SP免疫组织化学法检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,应用逆转录PCR法检测肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达.结果:正常对照组(N组)、肝纤维化组(H F组)、S B203580溶剂组(D M S O组)和P38MAPK通路特异性抑制剂组(SB203580组)的肝纤维化分期平均秩分别为4.50、22.50、24.00和15.00;SSS评分分别为2.750±0.707、15.875±0.835、16.000±0.926和11.625±0.9 1 6;Ⅰ型胶原显色指数分别为1.5 7 5±0.249、7.650±0.621、7.725±0.501和4.625±0.495;Ⅲ型胶原显色指数分别为2.375±0.518、4.025±0.446、4.075±0.544和3.375±0.167;Ⅰ型胶原mRNA表达分别为0.020±0.003、0.012±0.002、0.009±0.002和0.016±0.005;Ⅲ型胶原mRNA表达分别为0.412±0.772、0.773±0.137、0.799±0.116和0.572±0.862.HF组与N组相比,Ⅰ、Ⅲ型胶原及其mRNA表达升高(均P<0.001),与肝纤维化分期结果一致(P<0.001);D组与HF组无明显差异(均P>0.05);SB组与HF组相比,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达降低(Ⅰ型胶原显色指数P<0.001,Ⅲ型胶原显色指数P=0.041);Ⅰ型胶原mRNA表达降低(P=0.005),同时Ⅲ型胶原mRNA表达亦降低(P=0.005),肝纤维化分期下降(P=0.015).结论:P38MAPK抑制剂SB203580阻断P38MAPK通路具有降低肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用,能够延缓肝纤维化的发生发展.     

降钙素对兔膝骨性关节炎Ⅱ型胶原和基质蛋白酶-1的影响

目的探讨降钙素(CT)对兔膝骨性关节炎(KOA)关节软骨、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶(MMP)-1的影响。方法将36只健康大耳白兔随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、CT治疗组(C组),B、C两组采用改良Hulth法复制KOA模型,A组除切开皮肤和关节腔外,不做其他处理,从术后第6周开始C组每天皮下注射CT 5 U/kg,A、B组给予等量生理盐水皮下注射,连续注射20 d后处死动物。观察关节软骨病理形态、软骨基质Ⅱ型胶原及MMP-1的变化。结果与A组相比较,B组JP和Mankin评分明显升高,关节软骨损伤明显加重,Ⅱ型胶原表达减少而MMP-1表达增高(P<0.05);与B组比较,C组JP评分和Mankin评分明显降低,软骨损伤明显减轻,Ⅱ型胶原表达明显增多,而MMP-1表达则明显减少(P<0.05)。结论 CT可通过下调MMP-1表达,抑制Ⅱ型胶原降解,减少软骨基质破坏,从而减轻KOA软骨的损伤。