耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制及呼吸机相关性感染的流行病学分析

目的: 探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia, CRKP）耐药机制及临床分离株与呼吸机分离株之间的遗传相关性。方法: 收集41株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌,其中28株为临床分离株,13株为呼吸机分离株。改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,亚胺培南/EDTA结合（DDTs）及协同（DDST）试验检测金属酶,双纸片增效试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,纸片扩散法检测药敏试验,E-test检测肺炎克雷伯菌对替加环素的MIC。PCR检测耐药基因,产物测序,确定其基因型。采用多位点序列分型（MLST）对CRKP进行分子遗传学分析。 结果: 所有菌株改良Hodge试验均阳性,基因检测均为blaKPC-2;只检测到一株菌产金属酶,基因型为blaNDM-1;未检测出blaGES、blaVIM、blaSPM、blaIMP及blaOXA等其它碳青霉烯酶基因。ESBLs检出率为 43.90%,但所有菌株均携带β-内酰胺酶基因,以blaCTX-M-24为主（92.68%, 38/41）,其次为blaSHV-12（78.05%, 32/41）。38株携带blaTEM中,其中35株为广谱blaTEM-1,只有3株为超广谱blaTEM-104。所有菌株均检测出外膜蛋白ompk35基因,95.12%的菌株有外膜蛋白ompk36基因。28株临床分离株大部分来自ICU病房（67.86%, 19/28）,其中有24例感染患者使用了呼吸机;41株CRKP对临床常用的18种抗菌药物中100%耐药的有9种,耐药率最低的为四环素类,分别为替加环素（2.44%, 1/41）,米诺环素（7.32%, 3/41）和四环素（14.63%,6/41）。MLST结果显示,所有呼吸机分离株均属ST11型,28株临床分离株有25株也属ST11型,2个新的ST型已被Pasteur MLST数据库确认收录并分别命名为ST1854和ST1855。结论: CRKP多重耐药情况非常严重,携带blaKPC-2基因是其碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因,存在ST11型肺炎克雷伯菌播散,且与呼吸机传播有关。     

肾脏内科住院患者感染病原菌分布及耐药性分析

目的:调查肾脏内科住院患者感染病原菌分布和耐药性,为临床治疗细菌感染的抗菌药物选择提供依据。方法:收集2016年1月至2019年6月期间入住皖南医学院弋矶山医院肾脏内科患者送检标本培养阳性病原菌数据。结果:共培养出286株细菌,以呼吸道感染和泌尿道感染为主。革兰阴性菌占比89.51%,革兰阳性菌占比10.49%。革兰阴性菌中,肠杆菌科细菌检出前三位细菌分别是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌,非发酵阴性菌检出前二位细菌分别是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌;其中产超广谱β内酰胺酶细菌（ESBLs）检出率为32.87%,以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主,对氨曲南和头孢曲松耐药率分别为83.8%和100%;碳青霉烯类耐药菌检出率为6.29%。在革兰阳性菌中金黄色葡萄球菌最常见,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为4.89%。结论:在本院肾脏内科住院患者细菌感染中,产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率高。     

产ESBLs 并高产AmpC 酶肺炎克雷伯氏杆菌中整合子的基因研究

目的:观察4 株从临床分离产超广谱内β 内酰胺酶(ESBLs) 及AmpC 酶肺炎克雷伯氏杆菌的多重耐药情况, 分析其中整合子的存在, 对整合子的特性进行研究, 探讨整合子基因盒表达对肺炎克雷伯杆菌耐药表型的影响。方法:采用微量稀释法测定复方新诺明等15 种抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度(MIC) 。PCR 技术检测整合子基因, DNA 测序研究整合子插入耐药基因盒情况。结果:这4 株菌对多种抗菌素耐药。其中1 株存在整合子(扩增片段2 000 bp 左右), 携有dhfrXII 和aadA2 基因。结论:4 株菌中仅1 株存在整合子结构, 尽管产ESBLs和AmpC 酶基因未位于整合子的基因盒上, 但整合子参与多重耐药的产生。     

皖南地区1831例中老年糖尿病合并尿路感染病原菌分布、耐药情况及治疗对策

目的: 分析中老年糖尿病合并尿路感染患者病原菌分布和耐药情况,为临床用药提供参考。方法: 对2012年1月-2016年5月本地区5 429例中段尿培养及药敏标本数据进行汇总,分析病原菌株分布,根据病原菌谱,分析各类菌株耐药情况。利用Cochran-Armitage趋势检验分析产ESBL菌（ESBL+）及主要病原菌分布的年度变化趋势。结果: 送检中段尿标本5 429例次,分离出病原菌1 977株,分离率36.41%。 检出主要革兰氏阴性（G-）菌,依次为大肠埃希菌（653株,占总菌株数33.03%）、肺炎克雷伯菌肺炎亚种（105,5.31%）、奇异变形杆菌（36,1.82%）、铜绿假单胞菌（35,1.77%）、弗氏柠檬酸杆菌（26,1.32%）;药敏提示,前两种主要病菌株对复方新诺明、喹诺酮类抗菌药、头孢菌素均呈现不同程度耐药。主要革兰氏阳性（G+）菌,依次为粪肠球菌（379,19.17%）、屎肠球菌（183,9.25%）、表皮葡萄球菌（136,6.87%）、溶血葡萄球菌（97,4.91%）、金黄色葡萄球菌（31,1.57%）;药敏提示前两菌株对左氧氟沙星、阿奇霉素不同程度耐药。真菌主要为白色假丝酵母菌（56,2.83%）、光滑假丝酵母菌（55,2.78%）。ESBL+大肠埃希菌和ESBL+肺炎克雷伯菌检出率分别为55.89%及36.19%。ESBL+大肠埃希菌检出率从2012到2016年,呈现逐渐下降趋势（P<0.05）。G+菌中,除屎肠球菌、表皮葡萄球菌分布表现出逐年下降趋势外（P<0.05）,其余三种G+菌株及主要G-菌无明显年度变化趋势（P均>0.05）。结论: 中老年糖尿病合并尿路感染患者主要病原菌依次为大肠埃希菌、粪肠球菌、屎肠球菌、表皮葡萄球菌和肺炎克雷伯菌,病原菌耐药菌谱广,耐药率高,合理选用抗菌药物至关重要。     

老年支气管扩张合并急性感染的病原菌及其耐药性研究

目的: 了解老年支气管扩张患者急性感染的病原学分布及药敏情况, 指导临床抗菌药物的使用。方法: 对2000—2012 年本院呼吸科104份老年支气管扩张急性感染患者的痰标本进行细菌培养及药敏试验。结果: 150 例痰标本分离出致病菌107 株, 其中革兰氏阴性菌 87 株, 占81%, 排在前 3 位的致病菌分别是铜绿假单胞菌( 35%),肺炎克雷伯菌( 14% ),鲍曼不动杆菌(11%)。革兰氏阳性球菌8株(7%),真菌12株(11%)。药敏实验显示所分离出的革兰氏阴性杆菌对哌拉西林-他唑巴坦, 第 3、4 代头孢菌素及碳青霉烯类、多粘菌素等抗菌药物敏感性较高。结论: 老年支气管扩张急性感染的病原菌分布以革兰氏阴性杆菌为主, 铜绿假单胞菌排在首位,经验治疗时建议选用哌拉西林/他唑巴坦、头孢三代、四代或碳青霉烯类药物。     

siHybrids分子对耐药肺炎克雷伯菌kpc-2抑制作用研究

目的: 本研究采用RNA干扰技术和合成小分子抑制剂的方法,研究siHybrids分子对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯杆菌耐药性的影响。方法: 通过对临床分离的48株肺炎克雷伯杆菌进行药敏实验,初步筛选并收集了耐碳青霉烯类抗生素的菌株;进一步利用PCR检测,筛选出携带碳青霉烯酶基因kpc-2的耐药株。利用siHybrids技术,针对kpc-2设计合成siHybrids 杂合分子,对肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因kpc-2进行特异性沉默后,通过荧光定量PCR实验检测siHybrids沉默靶基因kpc-2的体外表达水平,并通过联合抑菌实验验证siHybrids分子提高抗生素抗菌活性乃至逆转细菌耐药性的效果。结果: 合成的小分子siHybrids可以使耐药肺炎克雷伯杆菌kpc-2基因的表达下调,并且与碳青霉烯类抗生素亚胺培南、美罗培南、厄他培南分别联合使用,可使肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南、美罗培南、厄他培南由耐药转为敏感。结论: siHybrids可以特异地抑制耐药肺炎克雷伯杆菌kpc-2基因的表达,通过干扰产碳青霉烯酶基因kpc-2造成肺炎克雷伯杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药性的逆转。     

2012年我院临床分离病原菌及耐药性监测分析

目的: 了解医院感染病人病原菌的分布及其耐药情况,指导临床合理使用抗菌药物。方法: 收集2012年1~6月份医院分离出的所有病原菌,采用VITEK-2对其进行鉴定及药物敏感试验,WHONET5.5软件进行数据分析。结果: 共分离出病原菌2791株,以大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌最多见,分别占 18.99%、15.84%、11.03%、8.53%、7.45%;肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的耐药率较高,其中鲍曼不动杆菌的耐药最严重。结论: 医院感染病原菌的分离率和耐药性逐年增加,为控制多重耐药菌的蔓延,必须加强抗菌药物的合理使用。     

生物被膜肺炎克雷伯杆菌AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶的检测

目的: 探讨生物被膜(BF)菌的耐药机制,为临床合理应用抗生素提供理论依据。方法: 应用改进的平板培养法建立肺炎克雷伯杆菌BF模型,用银染法和扫描电镜观察鉴定。采用改良三维试验法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)及AmpC酶。结果: 浮游肺炎克雷伯杆菌单产AmpC酶,单产ESBLs酶及同时产ESBLs和AmpC酶的菌株分别为2.5%(1/40)、20.0%(8/40)、2.5%(1/40);BF肺炎克雷伯杆菌单产AmpC酶,单产ESBLs及同时产ESBIs和AmpC酶的菌株分别为20.0%(8/40)、45.0%(18/40)、22.5%(9/40)。对浮游组和BF组的检出率两两分别进行x²检验,BF组各酶的检出率均明显高于普通浮游组各酶的检出率(P<0.05)。产酶BF肺炎克雷伯杆菌对8种抗生素(除亚胺培南全部敏感外)的耐药率均较高。结论: BF的形成和产生ESBL及AmpC酶的协同作用是肺炎克雷伯杆菌耐药的主要原因之一。     

氨溴索联合左氧氟沙星对肺炎克雷伯菌生物膜抑制和清除能力的研究

目的：研究氨溴索联合左氧氟沙星对肺炎克雷伯菌生物被膜的抑制和清除作用,旨在为临床提供拮抗肺炎克雷伯菌生物膜形成和治疗的新策略。方法：收集不同耐药性肺炎克雷伯菌各15株,将其分为敏感组（野生菌组）、超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum β-Lactamases, ESBLs）组、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP）组,采用结晶紫染色法进行生物被膜半定量检测,再从各组中选取3株生物被膜产量相近的菌株,采用微量肉汤稀释法测定氨溴索和左氧氟沙星对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）;棋盘稀释法测定不同浓度氨溴索对左氧氟沙星MIC的影响以及通过计算部分抑菌浓度指数（FIC）判断联合效果和选择最佳协同浓度;采用结晶紫法联合激光扫描共聚焦荧光显微镜研究不同浓度药物对肺炎克雷伯菌生物被膜的形成抑制试验和清除试验。结果：3组细菌生物被膜均在第5天达到成熟,两两比较发现敏感组较ESBLs组和CRKP组更易形成且产量更多（F=3.725,P=0.032）;棋盘稀释法显示,随着氨溴索浓度的增加,3组细菌左氧氟沙星MIC值的几何均数均明显下降,呈显著的负相关,且联合药敏结果显示,两药组合均呈现协同作用;在生物被膜形成抑制试验中,随着氨溴索浓度的增加,其抑制率均达到了75%以上,但其生物被膜清除率却未达到70%。 结论：氨溴索联合左氧氟沙星对临床早期抑制肺炎克雷伯菌生物被膜形成具有指导意义,且其最佳协同浓度为0.49 mg/mL氨溴索+4 μg/mL左氧氟沙星。     

鲍曼不动杆菌的耐药性及产ESBL和碳青霉烯酶分析

目的: 分析我院鲍曼不动杆菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和产碳青霉烯酶情况。方法: K-B法进行药物敏感试验, 运用表型确证试验检测ESBL, 改良Hodge试验检测碳青霉烯酶。结果: 135株鲍曼不动杆菌中,对亚胺培南和美罗培南的耐药率高达 72.6%,对阿米卡星、头孢噻肟等10种抗菌药物耐药率为 61.5%~100.0%,对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低为 34.8%,其次是左氧氟沙星耐药率为 54.1%。其中有22株检出ESBL占 16.3%;46株检出碳青霉烯酶占 34.1%。结论: 我院鲍曼不动杆菌耐药率高,应加强细菌检测和药敏试验,指导临床合理应用抗菌药物。对于临床经验用药建议选用头孢哌酮/舒巴坦;鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药可能与产ESBL和碳青霉烯酶有关。     

临床分离鲍曼不动杆菌耐药表型和质粒介导喹诺酮类耐药基因研究

目的: 对医院分离出的鲍曼不动杆菌耐药谱进行调查,探求鲍曼不动杆菌质粒介导对喹诺酮类药物耐药基因（PMQR）携带情况,给临床感染性疾病治疗提供参考。方法: 采用VITEKT-2 compact全自动细菌鉴定及药敏系统对菌株进行鉴定和药敏检查,采用PCR法检测细菌是否携带PMQR基金（qnrA、B、C、D、S、aac(6’)-Ib和qepA）,随机选取每种耐药基因的PCR产物进行测序分析。病原菌的药敏结果采用 WHONET 5.6软件分析。结果: 近两年来从临床标本中一共检出152株鲍曼不动杆菌,药敏结果显示鲍曼不动杆菌对喹诺酮类和其他抗菌药物的耐药性有逐年递增之势。PCR检测结果显示29.6%（45/152）菌株携带aac(6’)-Ib,1.3%（2/152）菌株携带qnrB,质粒上的qnrA、C、D、S和外排泵qepA基因产物并未检测出。结论: 本地区鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性强,PMQR携带率较低。     

C/C复合材料航空刹车副表面防氧化涂料的研制

以磷酸,磷酸盐,ＳｉＣ,ＳｉＯ２,Ｂ４Ｃ和含硼化合物等为原料研制了以硅、硼化合物为主的多组分陶瓷混合物涂料。采用该涂料以刷涂的方式制备的Ｃ／Ｃ复合材料复合涂层具有显著的防氧化效果。研究表明,涂覆有涂层的Ｃ／Ｃ复合材料试样在９００℃氧化１０ｈ后,其氧化损失率为１０．３７％;试样在空气中９００℃,３ｍｉｎ＝室温,２ｍｉｎ急冷急热,如此在１０ｈ内循环１００次后,氧化损失率为８．４１％,涂层与基体结合牢固     

Fracture toughness test for flux cored wire welded joint

Abstract

Test techniques using unloading compliance single specimens to determine crack opening displacement (COD) resistance curves for flux cored arc welded joints were investigated in detail. Computer based methods for data acquisition and processing were incorporated in the test procedure. The causes of the shorter calculated crack length in comparison with the length measured according to unloading compliance single specimen techniques were studied, and the counter measures used to correct the crack length were analysed. The COD resistance curves for YJ657 basic flux cored wire (FCW) weld metal and joint line regions were then obtained using these techniques. The correlation coefficient using the least squares method to fit the curves was greater than 0.99. The results showed that the present test system and computer based data acquisition and processing techniques offered advantages such as flexibility of operation, stability of performance, and high accuracy when they were used to measure the COD resistance curves for FCW welded joints. The test results also indicated that the characteristic value of fracture toughness (extrapolated COD at zero crack length) for the YJ657 basic FCW weld metal and joint lines at 253 K was greater than 0.1 mm, indicating high toughness. This was because the weld metal microstructure consisted of a large proportion of acicular ferrite plates which were in different orientations and therefore able to deflect propagating cleavage cracks.     

中药单体白花丹醌对鲍曼不动杆菌的耐药逆转作用

目的: 探索中药单体白花丹醌对临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性的逆转作用。方法: 取临床分离的鲍曼不动杆菌53株,检测其对临床常用的14种抗菌药物的敏感性。观察中药单体白花丹醌对标准菌株的直接作用。在确定白花丹醌以及羰基氰化氯苯腙(CCCP)的工作浓度以后,观察对比白花丹醌与阳性药CCCP的外排抑制试验结果。结果: 临床分离的53株鲍曼不动杆菌对临床常用的14种抗菌药物耐药率较高,其中氨苄西林、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢西丁耐药率最高,分别为100%、100%、98.1%、98.1%。其余药物耐药率也均在50%以上。白花丹醌对标准质控菌的直接抗菌作用较弱。而白花丹醌与CCCP均显示了对庆大霉素、诺氟沙星、米诺环素和氯霉素的增敏作用,其外排阳性率分别达 11.3%和 18.9%,3.8%和 7.5%,13.2%和 17.0%,28.3%和 20.8%,两组之间无统计学差异(P>0.05)。结论: 鲍曼不动杆菌临床耐药情况严重,而白花丹醌作为一种中药单体可能具有一定的耐药逆转作用。     

High level arsenic resistance in bacteria present in biooxidation tanks used to treat gold-bearing arsenopyrite concentrates:A review

The microbial consortium used in continuous-flow, stirred tank processes to treat gold-bearing arsenopyrite concentrates became adapted to high concentrations of arsenic over a number of years. The dominant microorganisms, Acidithiobacillus caldus and Leptospirillum ferriphilum, were found to contain two sets of arsenic resistance genes. One set of ars genes was present in all isolates of a species irrespective of whether they were highly arsenic resistant or not. A second set of ars genes was present on Tn21-like transposons and was found in all strains tested that had been adapted to high concentrations of arsenic. The arsenic resistance transposons present in At. caldus and L. ferriphilum were closely related, but sufficiently different for them to have been acquired independently rather than having been passed from one bacterium to the other. The transposons were transpositionally active in Escherchia coli and were shown to confer higher levels of arsenic resistance than the chromosomally-located ars genes where it was possible to test this. Transposons containing arsenic resistance genes that were identical or closely related to the transposon from L. ferriphilum, originally found in South Africa, were also found in both L. ferrooxidans and L. ferriphilum isolates from South America and Europe. An arsB gene knockout of At. caldus was produced by homologous recombination that demonstrated both the ability of the chromosomal ars genes to confer low levels of arsenic resistance in At. caldus and the development of a genetic system for the creation of knock-out mutants.