粉煤灰固定化碱性蛋白酶特性的研究

以经甲烷磺酸活化和γ-氨丙基三乙氧基硅烷偶连的粉煤灰为载体,戊二醛为交联剂,采用载体交联法制备固定化碱性蛋白酶,同时对固定化条件进行了研究。实验结果表明,碱性蛋白酶的最佳固定化条件为:给酶量4mL,戊二醛浓度0.2%,固定化温度25℃、交联3h。在此条件下得到的固定化碱性蛋白酶活回收率可达63.8%。该固定化碱性蛋白酶的稳定性较理想,连续使用6次后,其剩余酶活仍保持在29.4%。     

巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)HN7 β-半乳糖苷酶的耦合固定化及其性质研究

采用壳聚糖为载体,以戊二醛为交联剂,通过包埋-交联耦合固定化方法,固定巨大芽孢杆菌(Bacillusm egaterium)HN7β-半乳糖苷酶,研究固定化条件和固定化酶酶学性质。和游离酶相比,以壳聚糖为载体的固定化酶,热稳定性和酸碱稳定性提高。连续催化9批次后,固定化酶酶活仍能达到最初酶活的79%,固定化酶操作稳定性较好。     

琼脂包埋法固定化酪氨酸酶的研究

在海藻酸钠、明胶等5种固定化载体筛选的基础上,研究了以琼脂作为载体材料,采用包埋法固定化酪氨酸酶,优化固定条件,并对固定化酶特性进行了研究。结果表明,最适固定化条件为3%的琼脂、固定化时间为2h。固定化酶的最适pH为7·0、最适温度为30℃、最适底物浓度为0·01mol/L。同时具有较好的反应稳定性和贮存稳定性,重复使用7次后其活力回收率仍达到68·3%,12d后该固定化酶的残余活力保留原酶活的75·4%左右。     

壳聚糖固定化海藻糖合酶

利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40 ℃,最适反应pH为6.0,酶活回收率为40.17%,重复使用9次后,固定化酶酶活残留率为64.64%,重复使用性良好。在4~60 ℃范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于87%,与游离酶相比温度稳定性没有明显变化。在pH3.5~8.5范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于60%,酸碱稳定性优于游离酶。反应进程试验结果表明,2 h时海藻糖得率达最大,为61.4%。     

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。     

改性磁性壳聚糖微球固定化乳糖酶

通过反相悬浮聚合法,以甲基丙烯酸2-羟乙酯(HE-MA)与甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,过硫酸铵为引发剂制备得到改性磁性壳聚糖微球。进一步以改性磁性壳聚糖微球为载体,通过吸附、共价结合以及戊二醛交联反应三方协同作用固定乳糖酶。对影响固定化的各种因素进行优化,确定固定化乳糖酶最适条件为:载体在0.1 mol/L、pH 7.0的磷酸缓冲液中充分溶胀后,按2.0 U/mg载体的添加量加入乳糖酶,4℃吸附3 h,再添加0.1%戊二醛交联4 h;最终所得的固定化乳糖酶活为685 U/g载体,酶活回收率为34.3%。固定化后的乳糖酶的pH稳定性和热稳定性都较游离酶有明显提高;连续操作10次后,固定化酶活仍保持在70%以上,具有良好的操作稳定性。     

磁性壳聚糖微球固定化β-呋喃果糖苷酶的研究

以磁性壳聚糖微球为载体,采用戊二醛交联法固定化β-呋喃果糖苷酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究.结果表明:固定化β-呋喃果糖苷酶与游离酶相比,具有较强的耐碱性,在温度低于70℃范围内有良好的热稳定性;固定化酶在4℃下保存15d后,剩余酶活力为80%左右,具有良好的储存稳定性,连续10次操作使用后保持50%的酶活,具有良好的操作性,固定化酶回收率为26%.     

固定化脂肪酶的制备及其酶学性质的研究

以大孔树脂为载体进行脂肪酶的固定化,通过优化固定化条件得到高活性固定化脂肪酶并对其酶学性质进行研究。结果表明:弱碱性大孔阴离子交换树脂D301R是最佳的固定化载体;最优固定化条件为加酶量10%(以大孔树脂质量计),加水量30%(以大孔树脂质量计),4℃下在异辛烷中固定5 h。与游离脂肪酶相比,固定化脂肪酶具有良好的热稳定性、储存稳定性、吸附稳定性和对有机溶剂的抗逆性,循环使用6次,水解橄榄油的酶活回收率仍可达到50%。     

聚苯乙烯微球固定化海洋脂肪酶YS2071及其性能研究

采用6种不同孔径和亲疏水性的聚苯乙烯微球,通过吸附法固定化脂肪酶YS2071,筛选得到最佳载体,对固定化条件进行了优化并对其性能进行了研究。结果表明:粒径范围0. 6～1μm的氨基聚苯乙烯微球B具有最佳的固定化效果,在酶质量浓度5 mg/m L、p H 10、固定化温度20℃、振荡转速250 r/min、吸附时间6 h条件下,酶活回收率达到42. 82%;与YS2071脂肪酶游离酶相比,经固定化后的载体脂肪酶的温度稳定性、金属离子稳定性、有机溶剂稳定性、pH稳定性均明显增强; 25℃存储30 d后,固定化酶酶活保留率比游离酶酶活保留率提高了15. 09个百分点;固定化酶重复使用5次后,酶活保留率为63. 77%。     

蔗糖异构酶PalI包埋和交联固定化方法比较

采用海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法两种固定化方法,对来源于Klebsiella sp. LX3的蔗糖异构酶PalI的稳定性和可重复利用性进行研究。结果发现,海藻酸钠包埋法在海藻酸钠、CaCl_2质量分数为1.5%、2%时,所得固定化酶的酶活最高,其最适反应温度为40℃,最适pH值为6;戊二醛交联法在(NH_4)_2SO_4质量分数为90%,戊二醛体积分数为2. 5%时得到的固定酶酶活最高,交联酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为5,通过对酶的稳定性比较,两种方法酶稳定性都优于游离酶。4℃保存20 d后游离酶的酶活降低到30%,而戊二醛交联酶活性在95%以上,海藻酸钠固定化酶残余酶活仍在60%左右。戊二醛交联法固定酶活性优于海藻酸钠固定化酶,重复利用12次戊二醛交联酶,其残余酶活仍为80%。     

磁性复合粒子固定化葡萄糖氧化酶的制备

采用化学共沉淀法,制备了Fe3O4粒子,并将带正电荷的PDDA吸附在其表面,形成PDDA-Fe3O4磁性复合体。为提高葡萄糖氧化酶的稳定性和重复利用率,以自制的PDDA-Fe3O4磁性复合体为载体,通过静电引力来固定葡萄糖氧化酶。研究结果表明,PDDA-Fe3O4磁性载体表面的Zeta电位为47.6mV,载体平均粒径为275d.nm。葡萄糖氧化酶固定化最佳条件为：温度15℃,pH=6,酶与载体质量比为15mg/g。固定化酶的热稳定性、pH稳定性及重复使用性能都有很大的提高。     

交联剂固定化假丝酵母脂肪酶及其催化反应研究

以价格低廉的无纺布为固定化载体,添加聚丙烯酸酯作为交联剂,生产固定化脂肪酶。这种固定化方法对脂肪酶的纯度等性质要求不高,制备工艺操作简单。交联剂对酶液的活力没有影响,且具有一定的成膜特性,能够为脂肪酶分子催化提供良好的微环境。固定化脂肪酶酶活损失较少,在25%以内。制备的固定化脂肪酶在棕榈酸异辛酯酯化反应体系可以重复催化达到47批次,酯化率在80%以上;在酯交换生产脂肪酸甲酯反应体系可以连续反应25批次,转酯化率在90%以上。     

壳聚糖涂层法固定化脂肪酶的研究

研究了壳聚糖涂层在纤维素滤纸上成膜后再固定化猪胰脂肪酶的最佳条件。结果表明,当戊二醛浓度为５％,活化１２ｈ,与ｐＨ７．６的酶的磷酸盐缓冲溶液于室温（１５℃）交联１２ｈ,获得的固定化酶活最高,为０．２６Ｕ／ｃｍ２。固定化酶最适温度４０℃,比游离酶提高了５℃;最适ｐＨ８．５,与游离酶相比,向碱性偏移了０．５个ｐＨ     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

高碘酸钠氧化法固定化磷脂酶A1的研究

研究了高碘酸钠氧化法在纤维素滤纸膜载体上固定化磷脂酶A₁的最佳条件。结果表明,以固定化酶活力为指标,当高碘酸钠浓度为0.15mol/L,活化80min,与浓度为0.05g/mL酶的磷酸盐缓冲溶液（pH为5.8）于戊二醛浓度0.4%、温度4℃交联4h,获得的固定化磷脂酶A₁酶活最高为4.8U/cm²。固定化酶膜的酶学性质为:最适温度35℃;最适pH为9.0。与游离酶相比,pH向碱性偏移1.0;经7次重复使用后,固定化酶膜活力为原酶活的65%以上。SEM结果显示,经高碘酸钠氧化后的纤维素滤纸膜能较好地固定磷脂酶A₁。     

脂肪酶膜固定化方法的研究

研究了以纤维素滤纸膜为载体的猪胰脂肪酶的四种固定方法,优化了固定化条件。结果表明,在适宜条件下,高磺酸钠氧化法获得的固定化酶活最高,达０．５２ｕ／ｃｍ＾２,酶活回收率为２０％。     

新型交联剂三羟甲基磷固定化脂肪酶的研究

本试验研究了一种新型交联剂三羟甲基磷（THP）用于以纯棉浴巾载体、聚乙烯亚胺（PEI）为吸附剂的固定化脂肪酶制备新方法。通过单因子实验获得了固定化条件为：0.2 g浴巾使用0.5 mLPEI（浓度3.37 mg/mL,pH 7.0）、2 mLTHP（浓度为0.10%,V/V）、固定化温度为40℃、交联时间为20 min。制备的固定化脂肪酶催化正丁酸乙烯酯与戊醇酯交换反应,1 h底物转化率达92.1%,酶比活力达到15.80 U/g固定化酶。与戊二醛（GA）交联法制备的固定化酶相比,本固定化酶具有良好的重复使用稳定性、温度稳定性和高比活力,本试验采用的方法是一种低成本、实用性强的脂肪酶固定化新方法。     

磁性淀粉微球固定化脂肪酶的研究

磁性淀粉微球为载体,采用戊二醛交联法固定化脂肪酶。磁性淀粉微球的主要组成是淀粉和磁粉。结果得到,磁性固定化脂肪酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率、最适温度和最适pH值分别为4897.15U/g、50.59mg/g、98.58U/mg、72.73%、45℃和8.0。Ca2+、Na+和Mg2+对固定化脂肪酶和自由酶有激活作用,作用大小顺序为Ca2+>Mg2+>Na+。Cu2+和Fe2+对固定化脂肪酶和自由酶有抑制作用,Cu2+的作用尤其明显。脂肪酶被固定化后其热稳定性(在水介质和正己烷中)、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶明显提高。固定化脂肪酶和自由酶在4℃下,pH8的PBS和正己烷中保存34d后,其相对活力分别是78.3%和98.8%。     

戊二醛交联法固定扩展青霉脂肪酶的研究

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂,采用交联吸附法固定扩展青霉脂肪酶。通过单因素试验和正交试验考察固定化主要因素对固定化酶活力的影响,优化固定化条件。结果表明,海藻酸钠浓度为3%、氯化钙为1%、戊二醛浓度为2.5%的条件下,酶浓度为0.03g/mL,pH为10.0,固定温度为40℃,固定时间为30min,该条件下固定化酶活最高为22895u/g,酶活回收率达到67.57%。在有机体系中,固定化脂肪酶的酯化能力明显高于游离态脂肪酶。在重复利用9次后,固定化脂肪酶的酶活降为初始状态的50%。     

Preparation and Properties of Rhizopus oryzae Lipase Immobilized Using an Adsorption-Crosslinking Method

The aim was to develop an enzyme immobilization method for Rhizopus oryzae lipase to improve its acidolysis activity and stability. Lipase was adsorbed into NKA-9 resin and then crosslinked with glutaraldehyde as a crosslinker. The optimum conditions obtained using the response surface methodology were as follows: 34.6 mg lipase/100 mg support, 4.1 h of adsorption time, 45°C, pH 6.8, 0.5% glutaraldehyde concentration, and 2.5 h of crosslinking time. The acidolysis activity of the immobilized lipase was 31.78%, the free lipase activity was only 11.02%. The immobilized lipase showed better performance, such as higher acidolysis activity, better pH tolerance and temperature stability, enhanced storage stability, and improved reusability.