PUMA基因转染对胰腺癌细胞生长的影响

目的 探讨PUMA基因转染抑制胰腺肿瘤生长的体内外效果.方法 利用脂质体转染法将表达PUMA的质粒转染导入胰腺癌细胞株PC-3中,G418筛选出阳性克隆,Western和RT-PCR法检测PUMA转染后PC-3 PUMA的表达,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率;分别将转染PUMA的PC-3细胞(实验组)和未转染的PC-3细胞移植到裸鼠体内,比较裸鼠移植肿瘤的大小和重量以及PUMA表达.结果 PUMA表达质粒转染的PC-3细胞(PC-3/PUMA)稳定表达PUMA,其细胞凋亡率为(5.50 ± 0.90)%,明显高于未转染组的(1.073 ± 0.248)%和空载体转染组的(1.08 ± 0.35)%(P ＜0.05);裸鼠接种4周后PC-3/PUMA细胞成瘤率为70%,PC-3细胞和空载体PC-3细胞成瘤率为100%(P ＞ 0.05),PC-3/PUMA细胞形成的肿瘤体积比PC-3细胞和空载体PC-3细胞明显减小(P ＜0.05),并且形成的肿瘤组织中PUMA高表达.结论 胰腺癌细胞中缺失PUMA基因表达,PUMA转染胰腺癌细胞后表达PUMA,并能促进细胞凋亡.     

沉默G250基因对肾癌786-0细胞体内成瘤及生长的影响

目的 观察沉默G250基因对肾癌786-0细胞体内增殖的影响.方法 构建靶向G250的siRNA表达质粒pshRNA-G250并转染肾癌786-0细胞,12只BALB/c裸鼠分为阴性对照组和干扰成瘤组,干扰成瘤组每只裸鼠皮下接种5 ×106个G250基因沉默后的肾癌786-0细胞(786-0/si-G250-b),以转染空质粒的细胞(786-0/si-G250-0)为对照.观察裸鼠成瘤增时间、成瘤率、肿瘤体积变化、绘制生长曲线.成瘤3周后,处死裸鼠,称重瘤块,计算抑瘤率.结果 5×106个细胞皮下接种BALB/c裸鼠均成瘤,实验和对照组肿瘤出现时间分别为(11±1.5)、(15±2.4)d(t=3.381,P =0.007).7个不同时间点肿瘤的生长体积具有统计学意义(F=84.836,P=0.000).成瘤3 w后,肿瘤重量分别为(22.224 +5.145) mg、( 37.353±9.332) mg,(t=3.475,P =0.006),干扰组肿瘤成瘤抑制率为40.50%.结论 G250基因表达沉默抑制了肾癌细胞的体内增殖能力.     

沉默畸胎瘤衍生生长因子-1基因对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响

目的 探讨TDGF-1基因沉默对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响.方法 设计并合成3个(S1、S2、S3)靶向TDGF-1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),筛选出沉默效果最好的siRNA.以该siRNA的不同浓度(3.125、6.25、12.5 nmol/L)转染PANC1细胞,并设对照组和脂质体组.采用实时定量PCR和Western blotting检测TDGF-1 mRNA和蛋白表达,以软琼脂集落培养试验和Boyden小室检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,并将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察癌细胞的体内侵袭.结果 siRNA转染组细胞的TDGF-1 mRNA和蛋白表达水平呈浓度和时间依赖性下降,且较脂质体组明显降低(P值均＜0.01).对照组细胞集落形成数和穿膜细胞数分别为19.8±2.2和49.8±2.6;siRNA组呈浓度依赖性明显减少,12.5 nmol/L转染组分别为5.6±1.2和8.1±1.1.对照组、脂质体组和12.5 nmol/L转染组接种4周后裸鼠种植瘤体积分别为(2.228±0.026)cm3、(2.186±0.028)cm3和(0.728±0.023)cm3.对照组和脂质体组种植瘤侵犯周围肌层组织,转染细胞组未见侵犯.结论 采用RNA干扰技术沉默PANC 1细胞的TDGF-1基因表达可抑制癌细胞的侵袭力.     

人胰腺癌细胞株PANC1裸鼠原位模型的建立及磁共振监测

目的 建立一种稳定的人胰腺癌裸小鼠原位移植瘤模型,并探讨无创的磁共振(MRI)对其监测的应用价值.方法 人胰腺癌细胞株PANC1体外常规传代后建立裸鼠皮下种植瘤模型,将皮下种植瘤制成细胞悬液,植入20只BALB/C-nn裸鼠的胰腺包膜下构建人胰腺癌原位移植模型;通过MRI检查监测模型的成瘤率、成瘤时间、肿瘤生长速度、肿瘤形态、信号变化等特征,于第7周末取肿瘤组织行病理学检查.结果 接种后15 d,7只(35%)荷瘤鼠在MRI上显示成瘤,至接种后27 d,成瘤率为100%.肿瘤信号与邻近组织相比,90%(18/20)病灶T1WI呈均匀稍低信号,10%(2/20)呈等信号;75%(15/20)在T2WI呈均匀高信号.移植后2、3、4、5、6、7周经MRI测量的移植瘤体积分别为(12.6±2.4)mm3、(94.3±11.2)mm3、(175.9±82.5)mm3、(395.8±126.6)mm3、(1290.2±167.2)mm3、(1583.4±87.4)mm3.病理学检查确诊为胰腺低分化腺癌,并保持原发瘤的生物学特征.结论 人胰腺癌细胞株PANC1移植瘤制成的细胞悬液种植裸小鼠胰腺包膜下制备胰腺癌模型符合人胰腺癌的特征,且易于无创监测,为临床研究提供了一个有效、稳定的体内实验体系.     

外源性PTEN对胰腺癌细胞ASPC-1增殖、侵袭及转移的影响

目的 研究第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)对胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、细胞增殖、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达、裸鼠成瘤及转移能力的影响.方法 将含PTEN基因的质粒pE-PTEN转染ASPC-1细胞,以空质粒pE转染为对照,分别获得ASPC-1-pE-PTEN (A-pE-P)细胞及ASPC-1-pE (A-pE)细胞.应用RT-PCR检测细胞PTEN mRNA表达;免疫细胞化学法检测PTEN、VEGF、EGFR蛋白表达;克隆形成实验观察克隆形成数;Transwell小室观察细胞侵袭能力;裸鼠皮下注射癌细胞法观察成瘤情况.结果 与ASPC-1细胞比较,A-pE-P细胞的PTEN mRNA表达增加179.3％,PTEN蛋白表达明显增加;VEGF蛋白表达明显减少;EGFR蛋白表达无明显变化;G2/M期细胞数明显增加[(31.5±1.76)％比(26.81±1.03)％,P＜0.05];克隆形成数降低[(24.0±3.9)比(33.3 ±3.4),F=4.283,P＜0.01],克隆形成率降低28％;穿膜细胞数明显减少[每高倍视野(46.3±6.6)比(63.8±7.5)个,F=2.476,P＜0.05];种植瘤体积明显缩小[(142.4±30.9)比(202.7±43.6)mm3,t=4.834,P＜0.01],抑瘤率达42.4％;远处转移灶明显减少[(2.0±0.7)比(5.0±1.3)个,t =0.451,P＜0.01].结论 PTEN基因转染后ASPC-1细胞VEGF表达减少,细胞生长被阻滞在G2/M期,增殖及转移被抑制.     

C2基因对人胃癌细胞成瘤性的影响

目的　探索新克隆的编码人蛋白翻译起始因子的全长基因 (C2基因 )对人胃癌细胞体内、体外成瘤性的影响。方法　将已构建的C2基因真核表达载体 ,与阴性对照的空载体扩增纯化并同时转染人胃癌细胞系SGC790 1细胞 ,获得稳定高表达C2蛋白的人胃癌细胞株 ,应用平板克隆形成实验检测转化细胞的体外成瘤性 ,并在裸鼠体内进行肿瘤细胞体内成瘤性实验 ,了解C2基因转染对人胃癌细胞体内、体外成瘤性的影响。结果　经WesternBlot法和流式细胞术证实 ,C2基因转化细胞稳定高表达C2蛋白。平板克隆形成实验提示 :转染了C2基因和空载体的两种SGC790 1细胞的克隆形成率分别为4 3.8%和 76 .9% (P <0 .0 5 )。裸鼠体内成瘤性实验提示 :转染了C2基因的SGC790 1细胞在裸鼠皮下形成肉眼可见的肿瘤结节所需时间较转染了空载体的SGC790 1细胞长 ,分别为 1周和 2周 ,在相同时间内在裸鼠皮下形成的瘤结节的体积明显小于转染了空载体的细胞在裸鼠皮下形成的瘤结节的体积 ,分别平均为 1.2 0和 5 .5 8cm3 (P <0 .0 1)。结论　C2基因在体内和体外均可抑制人胃癌细胞的成瘤性 ,在肿瘤形成速度和体积方面抑制了SGC790 1细胞的恶性行为 ,提示C2基因可能通过确保蛋白翻译过程的准确性而阻止细胞无限生长 ,因此可能是一个具有抑制细胞增殖功     

锌α2糖蛋白对实验性大鼠肝癌的抑制作用

目的探讨锌α2糖蛋白(AZhGP1)与肝细胞癌(HCC)发生、发展和转移的关系。方法二乙基亚硝胺(DEN)构建肝硬化和HCC大鼠模型,以过表达AZGP1基因干扰的HepG2细胞液构建裸鼠皮下成瘤和肝原位移植模型。免疫组织化学、蛋白免疫和PCR检测AZGP1和TGFβ1的表达。结果AZGP1 mRNA在正常肝组织、肝硬化和肝癌中的表达分别为(0.98±0.02)、(0.52±0.03)、(0.20±0.02);而TGFβ1的基因和蛋白表达在肝硬化和肝癌组织中呈现显著上调。AZGP1过表达的HepG2细胞接种裸鼠构建皮下肿瘤(HepG2-AZGP1组)。与对照组(HepG2-GFP组)比较,肿瘤大小无差异。裸鼠肝内移植术6周后,HepG2-GFP组57%和HepG2-AZGP1组14%发生肺转移(P=0.0157)。与HepG2-GFP组比较,HepG2-AZGP1组肝脏原发灶和肺转移灶结节数目明显减少,癌细胞异型性明显较轻。结论肝硬化进展至肝癌过程中抑癌基因.AZGP1发生缺失,伴随着失去阻抑TGFβ1作用。恢复AZGP1功能可能是一种新的有前途的治疗肝癌方法。     

环氧化酶抑制剂吲哚美辛对胰腺癌新生血管生成的抑制作用

目的通过观察环氧化酶(COX)抑制剂吲哚美辛对胰腺癌血管内皮生长因子(VEGF)表达及对体内外血管生成的的影响,探讨其对胰腺癌生长抑制的作用机制。方法用RT-PCR方法检测不同浓度吲哚美辛对BxPC3细胞VEGFmRNA表达的调节作用;应用小管形成实验研究吲哚美辛对ECV304细胞体外血管生成的影响;建立裸鼠胰腺癌BxPC3细胞种植瘤模型,应用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃(3mg.kg-1.d-1体重,共4周),观察其对种植瘤生长曲线、瘤重及种植瘤组织VEGFmRNA表达的影响;采用Ⅷ因子免疫组化染色评估瘤组织中微血管密度(MVD)。结果(1)小管形成实验中,吲哚美辛组ECV304细胞数较少,细胞排列差,偶可见条索状细胞链,中空闭合管状结构缺如。(2)吲哚美辛呈剂量依赖性抑制BxPC3细胞VEGFmRNA表达。(3)应用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃4周后,平均瘤重(0.495±0.31)g,显著小于对照组瘤重(1.57±1.06)g,抑瘤率为67%。吲哚美辛显著下调种植瘤VEGFmRNA表达。(4)对照组MVD为5.98±1.27,吲哚美辛组为2.02±0.28,差异有显著性(P<0.01)。结论COX抑制剂吲哚美辛可下调VEGFmRNA的表达,抑制胰腺癌体内、体外血管的生成,抑制裸鼠种植瘤新生血管的生成,这可能是其抑制胰腺癌裸鼠种植瘤生长的重要原因。     

PDECGF特异性RNA抑制片段诱导裸鼠膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 利用RNA干扰技术在裸鼠膀胱癌动物模型中通过抑制靶向沉默血小板源性内皮生长因子基因(PDECGF)的表达,探讨其在活体动物肿瘤组织中的作用.方法 将psiPDECGF-1及-2稳定转染的阳性T24细胞株及其他对照组直接接种于裸鼠皮下,观察肿瘤细胞生长及成瘤情况、测定肿瘤体积的变化;免疫组化检查PDECGF蛋白表达;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 裸鼠体内成瘤实验发现siRNA2组第21天时成瘤率只有50%,而其他各组成瘤率为100%.siRNA2组生长速度明显慢于其他3组,siRNA2组不仅成瘤延迟,且生长速度明显慢于其他3组(P＜0.01).免疫组化证实siRNA2组肿瘤组织PDECGF 蛋白表达最低; TUNEL检测siRNA2组细胞凋亡数明显多于其他3组 (P＜0.05).结论 PDECGF siRNA载体稳定转染细胞株体内实验可见膀胱癌细胞成瘤率降低,成瘤延迟及肿瘤生长速度减慢,癌细胞凋亡增多.PDECGF siRNA在裸鼠体内依然对膀胱癌细胞有明显抑制作用.     

环氧化酶抑制剂吲哚美辛对胰腺癌新生血管生成的抑制作用

目的 通过观察环氧化酶(COX)抑制剂吲哚美辛对胰腺癌血管内皮生长因子(VEGF)表达及对体内外血管生成的的影响,探讨其对胰腺癌生长抑制的作用机制.方法 用RT-PCR方法检测不同浓度吲哚美辛对BxPC3细胞VEGF mRNA表达的调节作用;应用小管形成实验研究吲哚美辛对ECV304细胞体外血管生成的影响;建立裸鼠胰腺癌BxPC3细胞种植瘤模型,应用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃(3 mg·kg-1·d-1体重,共4周),观察其对种植瘤生长曲线、瘤重及种植瘤组织VEGF mRNA表达的影响;采用Ⅷ因子免疫组化染色评估瘤组织中微血管密度(MVD).结果 (1)小管形成实验中,吲哚美辛组ECV304细胞数较少,细胞排列差,偶可见条索状细胞链,中空闭合管状结构缺如.(2)吲哚美辛呈剂量依赖性抑制BxPC3细胞VEGF mRNA表达.(3)应用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃4周后,平均瘤重(0.495±0.31)g,显著小于对照组瘤重(1.57±1.06)g,抑瘤率为67%.吲哚美辛显著下调种植瘤VEGF mRNA表达.(4)对照组MVD为5.98±1.27,吲哚美辛组为2.02±0.28,差异有显著性(P＜0.01).结论 COX抑制剂吲哚美辛可下调VEGF mRNA的表达,抑制胰腺癌体内、体外血管的生成,抑制裸鼠种植瘤新生血管的生成,这可能是其抑制胰腺癌裸鼠种植瘤生长的重要原因.     

2H3R3E3Z3/4H3R3方案引起的药物性肝炎及其对抗结核效果的影响

目的　观察和研究2H₃R₃E₃Z₃/4H₃R₃治疗初治涂阳病人药物性肝炎的发生率和药物性肝炎对抗结核效果的影响。方法 对肝功正常、应用2H₃R₃E₃Z₃/4H₃R₃治疗的初治涂阳病人每月复查1次肝功,复查出现ALT升高的每周复查1次肝功,疗程完成后考核疗效。结果 （1）药物性肝炎发生率为23.1%,其中有基础性肝病患者药物性肝炎发生率为66.3%;（2）抗结核过程中肝功检查第1次发现ALT在50 U/L～100 U/L,且无明显肝损症状和胆红素增高者,有51.2%的患者属于一过性转氨酶升高;（3）73.2%的药物性肝炎发生在抗结核治疗的前2个月,26.8%的药物性肝炎发生在抗结核治疗的后4个月;（4）无因药物性肝炎而死亡的病例,药物性肝炎患者停用抗结核药物并行护肝等治疗后肝功恢复时间平均为2.3周,其中,有基础性肝病者肝功恢复时间平均为3.9周,无基础性肝病者肝功恢复时间平均为1.8周;（5）总的肺结核治愈率为94.6%,未发生药物性肝炎患者肺结核治愈率为97.0%,发生药物性肝炎患者肺结核治愈率为86.6%,有基础性肝病患者肺结核治愈率为78.6%。结论 （1）药物性肝炎是影响肺结核,尤其是影响有基础性肝病患者肺结核治疗效果的重要因素,2H₃R₃E₃Z₃/4H₃R₃不宜广泛应用于HBsAg（+）等有基础性肝病的初治涂阳肺结核病人;（2）抗结核过程中肝功检查第1次发现ALT在50 U/L～100 U/L,且无明显肝损症状和胆红素增高者,有51.2%的病例属于一过性转氨酶升高,只要加强护肝治疗,可以不停抗结核药物,但应密切观察患者反应和肝功变化;（3）药物性肝炎虽然全疗程中均可出现,但主要发生在强化期,故应注重强化期的护肝治疗和肝功监测。     

2H3R3Z3S3(E3)/4H3R3方案治疗对乙肝病毒标志物阳性患者肝功能的影响

目的 探讨2H₃R₃Z₃S₃(E₃)/4H₃R₃方案治疗对合并乙型肝炎病毒标习物HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)肺结核患者肝功能的影响。方法 回顾性分析1994年12月至1998年12月采用2H₃R₃Z₃S₃(E₃)/4H₃R₃方案治疗的初治涂阳并乙肝标志物HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAg(+)肺结核患者肝功能的情况。以同期采用同样方案治疗的乙肝标志物五项阴性肺结核患者为对照。结果 乙肝阳性组肝损率 (15.6%)高于乙肝阴性组 (12.0%)。两组经统计学处理无显著性差异。 (P＞0.05)。结论2H₃R₃Z₃S₃(E₃)/4H₃R₃方案治疗对合并乙肝病毒标志物HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAg(+)肺结核患者肝功能损害小,值得推广。     

The Frequency of Kappa and Lambda Chains in Pathologic Serum γG, γA, γD and γμ Immunoglobulins

Light chain typing of M-components of non-macroglobulin nature from 500 sera gave a κ/γ quotient of 1.5. All the M-components contained either κ or γ chains. Irrespective of the electrophoretic charge the quotient in γG-M-components was 2, and in γA-M-components 0.9 and Bence-Jones proteinaemias 1.3. One serum contained a γGL- and a γAK-M-component, both in a concentration above 3 g per 100 ml.     

3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA-lyase deficiency

Journal of Inherited Metabolic Disease -     

ΠPOTEYΣ

In this issue, Proteus examines the merits and dismerits of an uncommonly voiced debate: the retention of the foreskin in preventing transmission of infectious diseases, as well as progress in Neisseria meningitidis research which is developing energy akin to the disease process itself.     

HB F-Yamaguchi (γ75THR, γ80ASN, γ136ALA) is associated with Gγ-thalassemia

Restriction endonuclease analyses of DNA from a known Hb F-Yamaguchi heterozygote and three of his relatives have shown a deletion of about 5 kb, which includes one of the γ genes. This abnormality is similar to the ^Gγ-thalassemia described recently [4] and is probably caused by an unequal crossing over between -^Gγ- and -^Aγ^T-genes. The abnormal -^Gγ^Aγ^T-X- (X = Asp→Asn at γ80) hybrid gene produces the γ-Yamaguchi chain at a level usually seen for ^Gγ chains only.