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微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型。以烟曲霉(A.fumigatus)为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列。该基因与玫瑰色热微菌(Ther-momicrobium roseum)DSM 5159的kstD一致性为51%。构建pET28a(+)-kstDF表达载体,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(λDE3),获得高表达重组子菌株。经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析,发现高温(37℃)有利于KstDF蛋白表达,低温(20℃)有利于酶活的保持。该重组菌显示出良好的甾体转化能力,在12 h内完全转化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,为构建高效转化3-酮基-4-烯类固醇的基因工程菌奠定了基础。 相似文献
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微生物降解甾醇侧链得到的产物雄甾4-烯-3,20-二酮(AD)和雄甾1,4-二烯-3,17-二酮(ADD),是多数甾类药物的中间体,有着广阔的发展前景.本文在500 L发酵罐的中试规模上,对分枝杆茵降解(Mycobacterium SP MB 3683)大豆甾醇侧链至AD的种子pH、移种时机及发酵过程pH控制进行了初步研究,结果表明:在投料浓度2%,转化时间96 h的条件下,AD的含量达1.153%,转化率为57.6%. 相似文献
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