口腔鳞癌中间隙连接蛋白43和E-钙粘素表达及相关性研究

目的：探讨间隙连接蛋白43（Cx43）和E-钙粘素（E-cad）在口腔鳞癌中的表达及其相关性：细胞分化诱导剂全反式维甲酸（ATRA）对人舌鳞癌细胞株（Tea8113）中Cx43和E-cad表达的影响。方法：应用免疫组织、细胞化学结合免疫印迹（western blot）技术，观察口腔鳞癌组织中及ATRA对Tca8113细胞株进行培养及分化诱导后Cx43和E-cad的变化。结果：正常口腔鳞状上皮中Cx43和E-cad主要表达于细胞膜：在鳞癌组织中，Cx43和E-cad细胞膜表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异（Cx43：x^2=7．42、12．43，p〈0．05、p〈0．01；E-cad：x^2=7．79、9．688，p〈0．05、p〈0．01）。在鳞癌组织同一标本中Cx43和E-cad表达具有正相关性和一致性（r=0．577，p〈0．0005）；舌鳞癌细胞经ATRA诱导后，Cx43和E-cad蛋白表达增加。结论：Cx43和E-cad在口腔鳞癌的发生和发展过程中具有协同作用；ATRA可以通过上调Cx43和E-cad的表达，实现对肿瘤生长的抑制。     

间隙连接蛋白43在口腔颌面部鳞癌组织及舌癌细胞株(Tca8113)中表达的研究

目的:探讨间隙连接蛋白43(Cx43)在口腔鳞癌组织(oscc)和舌鳞癌细胞株(Tca8113)中的表达及其生物学行为的关系;细胞分化诱导剂全反式维甲酸(ATRA)对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)中Cx43表达的影响。方法:应用免疫组织、细胞化学、免疫荧光及结合免疫印迹技术,观察OSCC组织中以及ATRA对Tca8113细胞株进行培养及分化诱导后Cx43在蛋白水平的变化。结果:Cx43在正常口腔鳞状上皮主要表达于相邻细胞间相互接触的细胞膜上,而在OSCC组织中,Cx43细胞膜表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异(Cx43:х2=7.42、12.43,P<0.05、P<0.01)。免疫细胞化学检测可见舌癌细胞中Cx43异常定位于细胞浆中和/或细胞膜不与邻近细胞接触的游离缘上。Tca8113经ATRA诱导后,Cx43蛋白表达增加。结论:Cx43表达的改变与OSCC的发生和发展有关。ATRA可以通过上调Cx43表达,实现对肿瘤生长的抑制     

Cx31.1蛋白在舌癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响

目的：探讨细胞缝隙连接蛋白（connexin)Cx31.1在人舌鳞癌细胞系Tca8113中的表达及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法：应用流式细胞仪及其Lucifer Yellow划痕荧光传输技术,研究六亚甲基二乙酰胺（HMBA）作用对Tca8113细胞Cx31.1蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用,结果：Tca8113细胞经HMBA处理后,流式细胞仪分析,C 31.1蛋白表达的阳性细胞计数率由1．7％上升至30．3％,Tca8113细胞生长明显受到抑制,推测细胞间隙连接通讯功能得到部分恢复,结论：HMBA可上调Cx31.1蛋白在Tca8113细胞中的表达,可能命名细胞间隙连接通讯功能得到恢复,并实现对舌癌恶性表型的逆转作用。     

全反式维甲酸提高HSV-TK/GCV系统治疗舌鳞癌旁观者效应的研究

目的：探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA)对单纯疱疹病毒胸苷酸激酶（herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)／丙氧鸟苷（ganciclovir,GCV)系统治疗舌鳞癌旁观者效应的增强作用及机制。方法：应用免疫细胞化学、流式细胞仪等技术，对ATRA诱导舌鳞癌细胞系（Tca8113)细胞间隙连接蛋白基因（Cx43的表达进行分析；采用析因分析法分析ATRA对HSV－TK／GCV系统旁观者效应的影响。结果：舌鳞癌细胞经10^-7mol/L-10^-5mol/L ATRA处理后Cx43蛋白的表达明显提高；阳性细胞计数率由处理前的5．17％上升至30．53％（10^-5mol/L ATRA)，经t检验处理组与非处理组间差异有显著性（P＜0．01）；舌鳞癌细胞经ATRA处理后增强了HSV－TK／GCV系统的旁观者效应，两者间存在交互作用（P＜0．05）。结论：ATRA可显著提高HSV－TK／GCV系统的旁观者效应，该作用可能通过诱导Cx43蛋白的表达而实现。     

维甲酸受体-β基因联合维甲酸对Tca8113细胞的凋亡诱导作用

目的　研究已证实维甲酸受体 -β( Retinoic acid receptor-beta,RARβ)对某些类型的恶性肿瘤细胞有诱导分化和凋亡作用。现观察转导 RARβ基因联合全反式维甲酸 ( all trans retinoic acid,ATRA)对 Tca8113细胞的凋亡作用。方法　先应用脂质体将 RARβ基因导入 Tca8113细胞中 ,然后采用活细胞计数、透射电镜、流式细胞仪等方法观察 ATRA对转基因细胞的凋亡影响和生长抑制作用。结果　转 RARβ基因 Tca8113细胞在 1μmol/LATRA作用 10天后 ,细胞生长抑制率达 90 .2 % ;光镜和透射电镜下观察都可见到典型形态变化的凋亡细胞 ;FCM测定结果表明 ,细胞凋亡率高达 80 .7%。而母本细胞 Tca8113凋亡率小于 2 0 %。结论　 RARβ基因可能是 ATRA诱导 Tca8113细胞产生显著凋亡作用的“靶分子”。 RARβ基因联合维甲酸治疗某些口腔鳞癌将是有效和可行的。     

全反式维甲酸联合干扰素-γ对Tca8113细胞维甲酸受体基因表达的影响

目的　研究已证实,全反式维甲酸(Alltransretinoicacid,ATRA)联合γ干扰素(Interferonγ,γIFN)对舌鳞癌细胞系(Tca8113)细胞有协同抗增殖和诱导调亡作用?维甲酸受体β(Retinoicacidreceptorsβ,RARβ)是介导维甲酸对鳞癌细胞起作用的关键基因。为了明确ATRA联合IFNγ对Tca8113细胞协同抗增殖作用机理,我们对RARβmRNA表达进行了研究。方法　在该研究中采用了RTPCR半定量检测方法检测RARβ表达水平;活细胞计数法用来进行观察细胞生长抑制情况。结果　1μmolL全反式维甲酸和1000μmlIFNγ单独应用时对Tca8113细胞生长抑制率分别为39.2%和44.4%。该两种药物联合应用时产生明显协同抗增殖作用(86.7%),并且发现IFNγ与低于有效药物浓度的ATRA(0.1μmolL)共同作用时亦能产生协同抗增殖效果。ATRA(1μmolL)、FINγ(1000μml)分别处理Tca8113细胞后其RARβ转录水平分别提高4倍和3倍,以上浓度的ATRA和IFNγ共同处理后,细胞RARβ转录水平增高12倍。结论　研究结果表明,IFNγ与ATRA联合应用能显著提高其对Tca8113细胞的抗增殖作用,而且证明IFNγ协同ATRA上调RARβ基因转录表达是其对Tca8113细胞产生协同抗增殖作用的关键机理所在。     

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株侵袭特性的影响

目的 采用重建基底膜细胞侵袭实验,研究直接分离自舌癌组织旁的癌相关成纤维细胞（CAFs）对舌癌细胞株侵袭特性的影响,探讨CAFs在口腔鳞癌发展中的作用。方法 以Matrigel模拟重建基底膜,采用Transwell小室建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型,观测CAFs对Tca8113侵袭特性的影响。结果 与正常成纤维细胞（NFs）相比,CAFs能促使更多的Tca8113细胞穿透Matrigel（P<0.05）。结论 口腔CAFs能促进舌癌细胞株Tca8113
的侵袭,在口腔鳞癌发展中起重要作用。     

Downregulation of Notch1 and its potential correlation with epidermal growth factor receptor signalling in tongue squamous cell carcinoma

We investigated the expression of Notch1 in human oral squamous cell carcinoma (SCC) and explored its potential correlation with epidermal growth factor receptor (EGFR) signalling in oral SCC. Paraffin sections of primary SCC of the tongue and normal mucosa were screened immunohistochemically for Notch1 and EGFR proteins. Human SCC of the tongue Tca8113 cells were treated with AG1478 to block EGFR signalling, and were transfected with the vector that encodes the specific short hairpin RNA (shRNA) that targets EGFR. In SCC of the tongue expression of Notch1 was cancelled except in sites of squamous metaplasia where it was raised, while expression of EGFR was found in the peripheral cells of carcinomas, but not in sites of squamous metaplasia. In normal tongue mucosa, Notch1 was expressed mainly in the stratum corneum, but not in the stratum basale, while EGFR was expressed mainly in the stratum basale, but not in the stratum granulosum or stratum corneum. The blocking of EGFR signalling or the silencing of the EGFR gene resulted in upregulation of Notch1 at mRNA and protein levels in Tca8113 cells. These observations suggest that downregulation of Notch1 in oral SCC may be associated with upregulation of EGFR signalling.     

共培养体系下血管内皮细胞中破骨细胞相关因子的表达

目的 检测血管内皮细胞和口腔鳞状细胞癌经体外共培养后内皮细胞细胞核因子κB受体活化因子配体( receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达,了解肿瘤性骨破坏中肿瘤细胞、内皮细胞和破骨细胞之间的关系.方法 选取3对细胞系,即:小鼠鳞状细胞癌和血管内皮瘤细胞系、人口腔鳞状细胞癌和人脐静脉血管内皮细胞系、人鳞状细胞癌手术标本细胞与人脐带所得内皮细胞,3对细胞共培养.分别对培养前、后的内皮细胞进行RANKL的免疫组化染色观察.结果 共培养前,3种血管内皮细胞RANKL免疫组化染色阴性;经共培养后,内皮细胞出现RANKL的阳性表达.结论 血管内皮细胞和鳞状细胞癌细胞可成功共培养;共培养后血管内皮细胞在鳞状细胞癌细胞诱导下可以有RANKL的表达,为其分化活化提供条件.     

Expression of extracellular matrix metalloproteinase inducer and enhancement of the production of matrix metalloproteinase-1 in tongue squamous cell carcinoma

Recent studies have found that in addition to promoting cellular invasion, overexpression of metalloproteinase -1 (MMP-1) is associated with the initial stages of cancer development. Extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN), a transmembrane glycoprotein, has been reported to be highly expressed in tumor cells and induce production of MMPs from peritumor fibroblasts (PTFs) adjacent to the tumor cells. The expression of EMMPRIN in tongue squamous cell carcinoma (SCC) was investigated in this study. It was found that EMMPRIN was expressed at the cell membrane throughout the entire lesion in tongue SCC. Immunofluorescence staining localized EMMPRIN to the cell membrane in a highly invasive tongue SCC cell line (Tca 8113). EMMPRIN mRNA was expressed at a high level in Tca 8113, whereas MMP-1 mRNA was expressed in PTF but harder to be detected in Tca 8113. Co-culture of Tca 8113 with PTF stimulated production of MMP-1. EMMPRIN was highly expressed in tongue SCC, and could induce local production of MMP-1. These data indicate that EMMPRIN might play an important role in tongue SCC progression and invasion.     

顺铂诱导Tca8113细胞凋亡及周期特异性

目的探化疗药物顺铂（ＣＤＤＰ）对口腔鳞癌细胞凋亡及细胞周期特异性的诱导作用。方法选用人舌鳞状细胞癌细胞系Ｔｃａ８１１３为研究对象,应用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法进行观察。结果ＣＤＤＰ作用Ｔｃａ８１１３细胞后,细胞增殖变慢,增殖指数下降,细胞变小,变圆,失去贴壁性,从附着处脱落。ＤＮＡ染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈现橙红色,半月形,不规则块状等凋亡形态变化。透射电镜观察,细     

人巨噬细胞与Tca8113细胞融合瘤苗的制备及体外抗肿瘤效应

目的 探讨巨噬细胞融合瘤苗在舌癌免疫治疗中的应用。方法 利用人巨噬细胞与Tca8113细胞融合，通过磁微珠筛选出融合细胞(FC)并扩大培养，观察Fc的生物学特性及其体外诱导抗肿瘤特异性免疫的能力。结果 FC瘤苗的生长低于其亲本Tca8113细胞，流式细胞仪检测融合细胞的主要组织相容性抗原(MHC)Ⅰ、Ⅱ类分子的表达高于Tca8113，能有效刺激混合淋巴细胞反应(MLR)，并能在体外诱导淋巴细胞抑制肿瘤细胞Tca8113的生长。结论 融合细胞瘤苗能显著提高亲源舌癌细胞Tca8113的免疫原性，提示融合细胞瘤苗是一种新的抗肿瘤免疫治疗方法，可作为个体化肿瘤疫苗的新方案。     

全反式维甲酸和三氧化二砷对人口腔鳞癌细胞系KB细胞周期的影响

目的研究全反式维甲酸（all-trans retinoi cacid,ATRA）和三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导分化对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞周期的影响及意义。方法采用流式细胞技术观察人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞经不同浓度ATRA和As2O3诱导分化后96h时的细胞周期的变化。结果ATRA作用于KB细胞后,加药组与对照组相比,被阻断在G1期的细胞比率轻度升高,S期比率下降,抑制率随浓度增高无明显升高的趋势。As2O3三个不同浓度作用KB细胞96h时,没有明显改变各细胞周期所占的比例。抑制率随作用浓度的增加而升高。结论ATRA和低浓度As2O3对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞具有诱导分化作用,ATRA诱导KB细胞分化可能与G1、G0期阻滞有关。     

长链非编码RNA AFAP1-AS1在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) 肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在口腔鳞癌及癌旁组织中的表达及其临床意义。方法:利用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测75例口腔鳞癌组织及其配对癌旁正常组织中lncRNA AFAP1-AS1的表达情况,并分析其与口腔鳞癌临床病理学特征之间的联系;应用小干扰RNA(siRNA)干扰lncRNA AFAP1-AS1表达,CCK-8实验检测lncRNA AFAP1-AS1对口腔鳞癌细胞株Tca8113细胞增殖能力的影响。结果:RT-qPCR检测结果显示lncRNA AFAP1-AS1在癌组织中的相对表达水平是癌旁组织的5.16倍,差异有统计学意义(P＜0.01)。lncRNA AFAP1-AS1的表达与临床分期、分化程度及淋巴结转移显著相关(P＜0.05)。CCK-8实验结果显示,转染48 h、72 h实验组A₄₅₀值较对照组显著降低(P＜0.01),表明siRNA沉默AFAP1-AS1表达后,抑制了Tca8113细胞的增殖。结论:lncRNA AFAP1-AS1在口腔鳞癌中的表达上调可能与口腔鳞癌的发生发展有关。     

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。     

RNA干扰XBP1基因表达对口腔鳞状细胞癌生物学特性的影响研究

目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中X盒结合蛋白1(XBP1)的表达及观察抑制其表达后对人口腔鳞状细胞癌Tca8113增殖凋亡的影响,并探讨其机制。方法:RT-PCR检测42例口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中XBP1基因的mRNA表达;NC-siRNA和XBP1-siRNA转染至Tca8113细胞内,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,CCK8实验、流式细胞仪分别检测XBP1基因转染对细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达的变化。结果:口腔鳞状细胞癌中XBP1基因的mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.01);转染XBP1-siRNA能够显著降低XBP1的蛋白表达,降低细胞的存活率,促进细胞的凋亡,上调Cleaved caspase3蛋白表达,下调β-catenin、Cyclin D1蛋白表达(P<0.01)。结论:RNA干扰沉默XBP1基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低Tca8113增殖及诱导细胞凋亡。     

8-Br-cAMP提高HSV-TK/GCV自杀基因系统旁观者效应的研究

目的 探讨8-Br-cAMP对单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）/丙氧鸟苷（GCV）系统旁观者效应的增强作用及机理。方法 应用FCM、透射电镜检测8-Br-cAMP对口腔鳞癌细胞（Tca8113）、间隙连接蛋白43（Cx43）及间隙连接的诱导分化作用;采用析因分析法分析8-Br-cAMP对HSV-TK/GCV系统旁观者效应的影响。结果 口腔鳞癌细胞经 10-4mol/L 8-Br-CAMP处理后:FCM检测显示 Cx43表达阳性的细胞由治疗前的（4.8 ± 0.26）％上升到（21.3±0.65）％,两组比较P<0.001;透射电镜显示细胞超微结构出现分化,细胞间出现间隙连接;MTT检测显示增强了HSV-TK/GCV系统治疗时的旁观者效应,两者间存在协同关系。结论8-Br-cAMP可诱导分化口腔鳞癌细胞并显著提高HSV-TK/GCV系统治疗时的旁观者效应。     

Oral cancer cells with different potential of lymphatic metastasis displayed distinct biologic behaviors and gene expression profiles

J Oral Pathol Med (2010) 39 168–175 Objective: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) often spreads from the primary tumor to regional lymph nodes in the early stage. Better understanding of the biology of lymphatic spread of oral cancer cells is important for improving the survival rate of cancer patients. Methods: We established the cell line LNMTca8113 by repeated injections in foot pads of nude mice, which had a much higher lymphatic metastasis rate than its parental cell line Tca8113. Then, we compared the biologic behaviors of cancer cells between them. Moreover, microarray‐based expression profiles between them were also compared, and a panel of differential genes was validated using real‐time‐PCR. Results: In contrast to Tca8113 cells, LNMTca8113 cells were more proliferative and resistant to apoptosis in the absence of serum, and had enhanced ability of inducing capillary‐like structures. Moreover, microarray‐based expression profiles between them identified 1341 genes involved in cell cycle, cell adhesion, lymphangiogenesis, regulation of apoptosis, and so on. Some genes dedicating to the metastatic potential, including JAM2, TNC, CTSC, LAMB1, VEGFC, HAPLN1, ACPP, GDF9 and FGF11, were upregulated in LNMTca8113 cells. Conclusion: These results suggested that LNMTca8113 and Tca8113 cells were proper models for lymphatic metastasis study because there were differences in biologic behaviors and metastasis‐related genes between them. Additionally, the differentially expressed gene profiles in cancer progression may be helpful in exploring therapeutic targets and provide the foundation for further functional validation of these specific candidate genes for OSCC.     

半导体量子点对舌鳞状细胞癌Tca8113系生物学行为影响的研究

目的：研究新型发光纳米材料半导体量子点（semiconductor quantumdots，QD）对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113生物学行为的影响。方法：用不同浓度最大发射波长为605nm的QD与Tca8113共培养，观察QD对Tca8113细胞生长的影响。用QD标记Tca8113细胞（Tca8113-QD），利用transwell小室法和冲刷实验，观察Tca8113-QD细胞侵袭、黏附和趋化运动能力的变化。结果：Tca8113细胞与不同浓度QD共培养后，其细胞的生长曲线基本一致，差异无统计学意义。Tca8113-QD细胞和Tca8113细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力差异无统计学意义。结论：用QD标记Tca8113细胞后，不影响肿瘤细胞生长、侵袭和转移能力，为半导体量子点在活体生理条件下用于肿瘤细胞和细胞内分子成像及示踪研究提供了科学依据。     

姜黄素和乳香酸对口腔鳞癌细胞系Tea8113抑制作用的研究

目的观察姜黄素和乳香酸对人口腔鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及对炎症代谢通路中Cox-2、5-Lox的作用。方法培养人口腔鳞癌细胞系Tca8113,采用不同浓度的姜黄素和乳香酸及二者联合处理Tca8115细胞24、48、72h。MTY方法检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC／PI染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,RT—PCR及Western—blotting法检测对Cox-2、5-Lox表达的影响。结果姜黄素和乳香酸均能抑制Tca8113细胞增殖,呈现一定的浓度和时间依赖关系。姜黄素和乳：香酸均能促进TcaSll3细胞凋亡,呈现一定的浓度依赖关系。两种药物联合应用抑制细胞增殖和促进凋亡的作用明显强于单独作用。姜黄素能抑制炎症代谢通路中限速酶Cox-2、5-Lox的表达,乳香酸可以抑制5-Lox表达,且有一定的剂量相关性,两者联合应用时对Cox-2、5．Lox的表达均有抑制作用,尤其是对5-Lox通路的抑制,联合应用较单独应用作用显著增强。结论姜黄素和乳香酸均能抑制口腔鳞癌细胞TcaS113的增殖,促进凋亡。姜黄素能抑制炎症代谢通路中Cox-2和5-Lox的表达。乳香酸能抑制5-Lox表达,天然植物药姜黄素和乳香酸可能通过抑制花生四烯酸代谢通路发挥口腔癌的化学预防作用。