维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用及其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用细胞计数试剂盒检测不同浓度维A酸注射液对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,计算半数抑菌浓度(IC50)。建立裸鼠SMMC-7721移植瘤模型,分为阴性对照组(n=12)、阳性对照(顺铂1mg.kg-1)组和维A酸低、中、高剂量(7.5、15、30mg.kg-1)组,后4组各6只。腹腔给予相应药物,每周连续给药5d后停药2d,共给药4周,每周检测各组裸小鼠体重、肿瘤体积(TV)、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C),及末次给药2d后移植瘤组织中凋亡细胞阳性率和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果:维A酸注射液对SMMC-7721细胞的IC50为(15.14±0.46)μg.mL-1。小鼠给药19d(治疗疗效最佳时间)时,与阴性对照组比较,其余各组TV、RTV均明显下降(P<0.05或P<0.01),体重无明显变化,T/C均小于60%;末次给药2d后,与阴性对照组比较,维A酸3个剂量组凋亡细胞阳性率和Caspase-3表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:维A酸注射液能抑制SMMC-7721细胞的增殖及其裸小鼠移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡和Caspase-3表达有关。     

20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞体内外作用的研究

目的观察不同剂量的20(S)-原人参二醇(Protopanaxadiol,PPD)在体内外对人肝癌细胞株SMMC-7721抗肿瘤作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察20(S)-原人参二醇的肿瘤抑制作用。MTT比色法检测20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,Ho-echst33342核染色观察细胞凋亡形态学改变,采用FITC-An-nexinⅤ/PI双染流式细胞术分析凋亡情况,同时检测Caspase-3活性。结果在体内,PPD可抑制SMMC-7721细胞裸鼠异种移植瘤生长;在体外,PPD对SMMC-7721细胞的增殖具有明显的抑制及诱导其凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,Hoechst33342核染色可见凋亡小体,同时伴有Caspase-3活性的增加。结论20(S)-原人参二醇在体内外均可抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

EGCG对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及对缺氧反应的影响

目的探讨表没食子儿荼素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响以及对肿瘤细胞出现缺氧反应的相关作用机制及其作用。方法用不同浓度的EGCG处理SMMC-7721细胞,用倒置显微镜进行细胞形态观察并拍照记录;将0,20,50,100,200,400μg/mL的EGCG分别作用于体外培养的对数生长期的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;缺氧和EGCG双因素共同处理SMMC-7721细胞,Western-blot法检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(即VEGF)蛋白表达方式;并建立相应的裸鼠肝癌移植瘤模型,通过对其行EGCG试验性治疗后,对移植瘤的生长情况进行观察,Western-blot方法检测组织中HIF-1α和VEGF的蛋白表达。结果 SMMC-7721细胞随着EGCG处理浓度的增高,细胞的贴壁能力减弱,贴壁细胞数量减少,细胞体积缩小,核的颜色加深;MTT结果显示EGCG呈时间、剂量依赖性抑制SMMC-7721细胞生长(P<0.05);SMMC-7721细胞在不同浓度EGCG作用下,缺氧培养12h,HIF-1α和VEGF的蛋白表达呈剂量依赖性降低;在200μg/mLEGCG作用下,SMMC-7721细胞随缺氧时间的延长,HIF-1α和VEGF的蛋白表达呈时间依赖性下降;荷瘤裸鼠在行EGCG腹腔内注射试验性治疗后,其结果显示,高剂量EGCG组裸鼠的肿瘤重量和体积与低剂量组以及对照组存在明显差异,具有统计学意义(P<0.01),低剂量组裸鼠的肿瘤重量和体积与对照组存在明显差异,具有统计学意义(P<0.05);在本研究中,裸鼠移植瘤的标本Western-blot检测结果显示,EGCG可呈剂量依赖性抑制HIF-1α和VEGF的蛋白表达。结论 EGCG能在体内外抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖;EGCG能抑制肿瘤缺氧反应及血管生长的作用;其机制可能为降低HIF-1α和VEGF的表达,从而抑制肝癌细胞、肝癌组织的生长及血管生成。     

Mucin-4在百里醌抑制肝癌生长中的作用

目的 探讨百里醌对体内外肝癌生长的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 不同浓度百里醌作用人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测其对细胞生长的抑制作用;Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;RT-PCR检测Mucin-4 mRNA在SMMC-7721细胞中的表达;Western blot-ting检测肝癌细胞中Mucin-4蛋白表达;建立裸鼠肝癌皮下移植模型,完全随机法分为对照组和低（10 μmol/L）、中（20 μmol/L）、高剂量（40 μmol/L）百里醌组,观察不同剂量百里醌对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结果 不同浓度（10、20、40 μmol/L）百里醌作用人肝癌SMMC-7721 24 h后,细胞存活率分别为（80.14±9.84）％、（71.68±6.51）％和（64.58±5.24）％;百里醌作用后,SMMC-7721细胞出现典型凋亡形态学改变;百里醌干预后SMMC-7721细胞中Mucin-4蛋白和mRNA的表达均明显下调,呈浓度依赖性;实验结束后,对照组和低、中、高剂量百里醌组肿瘤体积分别为（1056.3±236.3）、（672.3±178.8）、（529.4±165.7）、（473.1±141.5） mm2,各百里醌组肿瘤体积明显低于对照组（P＜0.05）,低、中、高剂量百里醌组抑瘤率分别为36.5％ 、49.9％和30.3％;百里醌可明显降低肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结论 百里醌可显著抑制体内外肝癌生长,该作用可能通过抑制Mucin-4的表达而实现.     

复尔康注射液抗血管生成的体外实验研究

目的研究复尔康注射液在体外对血管生成的抑制作用及对肿瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)、细胞刮痕法(cell wounding healing assay)和小管形成试验(tube formation assay)等检测复尔康注射液对人微血管内皮细胞株(human microvascular endothelial cells,HMECs)增殖、迁移和小管形成的影响;采用CCK8、免疫组化SABC法检测复尔康注射液对HepG2细胞增殖和VEGF表达的影响。结果复尔康注射液明显抑制HMEC细胞的增殖,IC50为(11.44±3.97)mg.L-1;复尔康注射液质量浓度在3.125 mg.L-1时,表现出抑制HMEC细胞迁移和小管形成的作用,且随着质量浓度的增加,抑制作用愈明显,呈现出较好的剂量依赖关系;复尔康注射液还能明显抑制HepG2细胞的增殖,减弱VEGF的分泌表达。结论抗血管生成作用可能是复尔康注射液抗肿瘤作用的机制之一。     

苦参碱抗肝癌药理作用及临床应用的研究进展

苦参碱能防治二乙基亚硝胺诱发大鼠原发性肝癌和小鼠肝癌H22细胞移植瘤在小鼠体内的生长。体外实验发现苦参碱能浓度相关地抑制肝癌H22细胞、SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞、BEL-7404细胞、Hep3B细胞、QGY细胞、QGY/CDDP细胞、97H细胞、CRBH-7919细胞、CRBH-7919/mdr1细胞增殖、黏附、迁移、侵袭并诱导凋亡,也能诱导人肝癌SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞、BEL-7404细胞、化学品诱发肝癌大鼠体内的低分化肝卵圆细胞分化,也能提高荷瘤机体的免疫调节功能。临床上苦参碱注射液正在试用于肝癌的治疗和复发的预防。     

裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型。方法BLBA/c裸鼠颈背部皮下注射人肝癌SMMC-7721细胞悬液5×106个.0.2m l-1.只-1,观察肿瘤生长情况,45d处死。瘤组织作病理及电镜检查;取裸鼠周围血作甲胎蛋白(AFP)的检测;用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)。结果该模型具有类似人原发性肝癌的形态学特征。结论成功建立了人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。     

肝乐康抗肿瘤作用的研究

目的 研究肝乐康对肝癌细胞株BeL-7402增殖的抑制作用和对S180实体瘤型小鼠的抗肿瘤作用.方法 以MTT法测定含药复方肝乐康血清对肝癌细胞株BBL-7402的增殖情况;将小鼠接种S180实体瘤后检测肝乐康对小鼠S180实体瘤生长的抑制作用以及对荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响.结果 不同剂量的肝乐康显著抑制肝癌细胞株BBL-7402的增殖,对S180实体瘤的抑瘤率分别为33.72%、41.36%、54.21%.结论 肝乐康具有较强的抗肿瘤作用.     

白芍总苷对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测TGP对SMMC-7721增殖的影响;应用荧光显微镜观察药物作用后的细胞的形态。结果白芍总苷(0.5~2.5g.L-1)能抑制SMMC-7721细胞生长,且呈浓度依赖性;TGP(1.0、1.5 g.L-1)分别作用72 h后,SMMC-7721细胞出现体积缩小,荧光染色增强,胞核或胞质中可见致密浓染的块状或颗粒状黄绿色荧光染色。结论白芍总苷在体外能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并能诱导细胞凋亡。     

沙苑子黄酮抗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究

目的观察沙苑子黄酮(ACF)对人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤生长的影响。方法30只裸小鼠建立人肝癌SMMC7721细胞皮下移植瘤模型后随机分为模型组、环磷酰胺(CTX,25mg·kg-1)组、ACF-1(400mg·kg-1)、ACF-2(200mg·kg-1)和ACF-3(100mg·kg-1)5组,给予相应药物,观察肿瘤生长曲线和移植瘤重量,计算肿瘤抑制率;免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)在肿瘤组织中的表达;光镜和电镜观察肿瘤组织病理变化。结果ACF-1组和ACF-2组裸鼠肿瘤体积和重量明显降低,ACF各给药组平均抑瘤率分别为68.20%、41.19%、26.79%;ACF-1组和ACF-2组肿瘤组织PCNA表达率明显减少(P<0.01,P<0.05);病理学观察结果,ACF可引起SMMC7721细胞坏死,诱导SMMC7721细胞凋亡。结论ACF可抑制SMMC7721裸鼠移植瘤的生长,其作用可能与下调肿瘤组织PCNA表达和诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

General gambogic acids inhibited growth of human hepatoma SMMC-7721 cells in vitro and in nude mice

AIM: To study the inhibitory effect of general gambogic acids (GGA) on transplantation tumor SMMC-7721 in experimental animal model and SMMC-7721 cells in vitro. METHODS: Anti-tumor activity of GGA in the experimental transplantation tumor SMMC-7721 was evaluated by relative tumor growth ratio. Cell morphology was observed with inverted microscope and electron microscope. Cell proliferation was measured by MTT assay and the telomerase activity was determined by PCR. RESULTS: In vivo study indicated that GGA (2, 4, and 8 mg/kg, iv, 3 times per week for 3 weeks) displayed an inhibitory effect on the growth of transplantation tumor SMMC-7721 in nude mice compared with the normal saline group (P<0.01). At the concentrations of 0.625-5.0 mg/L, GGA remarkably inhibited the proliferation of SMMC-7721 cells in vitro. GGA 2 mg/L dramatically changed morphology of SMMC-7721 cells and inhibited the telomerase activity in SMMC-7721 cells. CONCLUSION: GGA had inhibitory effect on the growth of SMMC-7721, which might be related to its inhibition of telomerase activity.     

裂解型腺病毒Ad-E1A的构建以及体外对肝癌细胞的作用

目的 构建Ad-E1A裂解型腺病毒载体,研究其对肝癌细胞的裂解作用.方法 以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,用特异性引物PCR法扩增E1A基因,酶切后连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,用PmeI酶对pAdTrack-CMy-E1A线性化后,与pAdEasy-1共转化在BJ5183大肠杆菌中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A;再用PacI酶切对重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-E1A腺病毒子.在QBI-293A细胞中多轮感染后获得高效价的病毒.将Ad-EIA腺病毒感染SMMC-7721,并用MTT和流式细胞仪检测Ad-E1A对人肝癌细胞生长和细胞周期的影响.结果 获得高滴度的重组裂解型腺病毒Ad-E1A.Ad-E1A感染SMMC-7721后,出现明显的细胞病变.Ad-E1A对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显抑制,48 h后效果明显.Ad-E1A可直接诱导SMMC-7721细胞的凋亡.结论 裂解型腺病毒Ad-E1A构建成功并可以显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并在肝癌细胞中复制造成细胞裂解,诱导肝癌细胞的凋亡.     

氟尿嘧啶磁性丝心蛋白-壳聚糖微球体外对癌细胞的毒性作用

采用改良的MTT比色法测定不同培育时间和浓度下,氟尿嘧啶(1)磁性丝心蛋白-壳聚糖微球(magnetic fibroinchitosan microspheres,MFCMs)在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721和人肺腺癌细胞株A549生长的抑制作用.结果表明,1 MFCMs对SMMC-7721的抑制表现为明显的时效和量效特征;对A549的抑制主要呈时效关系.由半数有效浓度(IC50)可知,1 MFCMs对A549比SMMC-7721更敏感.1 MFCMs与1注射剂对两种癌细胞的抑制率有显著差异(P＜0.05).     

紫杉醇对人肝癌细胞SMMC-7721黏附及侵袭转移潜能的影响

目的探讨紫杉醇对人肝癌细胞株SMMC-7721的黏附及侵袭转移潜能的影响及机制。方法应用体外细胞．基质黏附实验检测不同浓度紫杉醇对SMMC-7721与Matrigel胶（人工基底膜胶）黏附性的影响：Transwell小室模型测定紫杉醇对细胞侵袭和迁移能力的影响;蛋白免疫印迹检测紫杉醇对细胞内黏着斑激酶（FAK）蛋白表达量的影响。结果不同浓度紫衫醇（10、20、40nmol／L）作用SMMC-7721细胞60min后,细胞与Matrigel胶黏附性下降;紫杉醇干预24h后,细胞的侵袭能力及迁移能力随紫杉醇浓度提高而明显减弱;细胞内FAK蛋白的表达量也随紫杉醇浓度增高而明显下降。结论紫杉醇能抑制肝癌细胞SMMC-7721的黏附及侵袭转移,其机制可能与其抑制肝癌细胞内FAK的表达相关。     

联用莪术油和丝裂霉素对肝肿瘤细胞株SMMC-7721的作用研究

目的探讨复方莪术油微球对肝癌细胞株的抑制作用及其作用机制。方法采用莪术油和丝裂霉素微球制备方法联用莪术油和丝裂霉素;采用MTT法检测莪术油和丝裂霉素单用和联用对肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制作用,并用流式细胞仪检测两药单用和联用对肝癌细胞增殖周期和凋亡的影响。结果MTT结果表明,单用和联用莪术油和丝裂霉素均可抑制肝癌细胞株SMMC-7721的生长,但联用莪术油和丝裂霉素采用减半剂量抑瘤率仍明显高于单用莪术油和丝裂霉素;流式细胞仪检测结果表明,莪术油和丝裂霉素合用可增强对肿瘤细胞增殖的抑制和促进凋亡的发生,较单用莪术油和丝裂霉素有增效作用。结论联用莪术油和丝裂霉素对肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制有增效作用,而诱导凋亡和阻滞细胞周期可能是其增效的重要机制。     

An investigation of the effect of sorafenib on tumour growth and recurrence after liver cancer resection in nude mice independent of phosphorylated extracellular signal-regulated kinase levels

Objective: The goal of this study is to investigate the effects of sorafenib on tumor growth, recurrence and metastasis after curative resection of liver cancer. Research methods: SMMC-7721 and HCCLM3 liver tumors, each with different metastatic potential and basal phosphorylated extracellular signal-regulated kinase (pERK) levels, were orthotopically implanted into 56 nude mice. Mice were divided into a treatment sub study and a prevention sub study. Results: In the treatment sub study, tumor volumes in the high pERK-expressing HCCLM3 model were 2.58 ? 0.83 and 0.38 ? 0.09 cm(3) without and with sorafenib, respectively (p < 0.001). The corresponding volumes in the low pERK-expressing SMMC-7721 model were 1.36 ? 0.24 and 0.24 ? 0.14 cm(3) (p < 0.001), respectively. Sorafenib inhibited HCCLM3 cell proliferation and decreased tumor angiogenesis, but did not inhibit proliferation in the SMMC-7721 model. In the prevention sub study, intrahepatic recurrent tumor volumes were 1.96 ? 0.45 and 0.18 ? 0.24 cm(3) (p < 0.001); lung metastasis frequencies were 100 and 0% (p = 0.005); and lifespans were 36 ? 3 and 46 ? 5 days (p = 0.002) in the control and sorafenib subgroups, respectively. Conclusions: Sorafenib inhibits tumor growth and prevents metastatic recurrence after resection of hepatocellular carcinoma in nude mice. The effect of sorafenib does not exclusively depend on high levels of pERK in tumors.     

美洲大蠊多肽提取物对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：研究美洲大蠊多肽提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制。方法：采用不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物作用于SMMC-7721,以Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞抑制率;Hoechst33342/PI与Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,呈一定的量效关系;Western Blot法显示Bax表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论：美洲大蠊多肽提取物可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值有关。