原位分子杂交检测厩真厉螨经叮刺传播姬鼠型和家鼠型H …

目的 用分子生物学方法进一步证明革螨在传播两型ＨＦＲＳ中的作用。方法 将叮刺感染姬鼠型（７６－１１８株）ＨＦＲＳ Ｖ乳鼠后第１０天厩真厉螨２７０只和家鼠型（ＵＲ株）ＨＦＲＳ Ｖ后第１０天厩真厉螨２００余只，分别制成组织悬液接种正常乳鼠，用Ｄｉｇ标记ＨＦＲＳＶ ｃＤＮＡ探针原位分子杂交检测接种后第９天鼠肺；将叮刺感染乳鼠后螨在适宜条件下饲养至１００天以上，分别叮刺４￣５日龄正常乳鼠，于第３天取鼠肺冰     

原位分子杂交检测上海真厉螨与柏氏禽刺螨体内肾综合症出血热病毒的研究

目的：提供革螨传播肾综合征出血热病毒（HFRSV）的分子生物学证据。方法：用上海真厉螨与柏氏禽刺螨叮咬HFRSV接种乳小鼠，取叮咬后d10及d100以上的上海真厉螨与柏氏禽刺螨冰冻切片，用地高辛标记HFRSVcDNA核酸探针原位分子杂交检测其体内病毒RNA。结果：叮咬野鼠型（76－118株）接种乳小鼠后d10上海真厉螨检出病毒RNA，在细胞浆、细胞核中及核膜上呈细密颗粒状或全浆阳性，见于生殖器官细胞、胃及支囊上皮细胞及脑皮质细胞；叮咬家鼠型（UR株）病毒接种乳小鼠后d12螨亦检出病毒RNA，病毒的细胞组织分布与野鼠型相同；分别检测野鼠型螨31 只和家鼠型23 只, 其中阳性分别为17 只和10 只; 叮咬野鼠型病毒接种乳小鼠后d132, 家鼠型d102螨仍能检出病毒RNA。柏氏禽刺螨叮咬野鼠型病毒接种乳小鼠d10, 检测螨20只, 其中阳性12 只, 病毒RNA 主要分布于生殖器官细胞内。结论: 上海真厉螨与柏氏禽刺螨均可经叮咬获得HFRSV , 上海真厉螨可分别感染野鼠型和家鼠型HFRSV , 野鼠型在螨群体内至少可维持132 d, 家鼠型102 d, 具有贮存两型病毒的作用, 是HFRSV 的适宜媒介和贮存宿主, 在动物宿主间交叉传播两型HFRSV 中起重要作用。     

柏氏禽刺螨传播家鼠型汉坦病毒的研究

目的：研究柏氏禽刺螨在传播家鼠型肾综合征出血热病毒中的作用。方法：每罐放柏氏禽刺螨100只，于室温为23±1℃环境下饥饿4d，分别叮刺感染汉坦病毒（Hantaanvirus）或浙45株（Z45）大鼠乳小鼠2只或感染汉城病毒（Seoulvirus）UR株大鼠乳小鼠2只各12h，为感染螨，用感染后d15的螨叮刺正常大鼠乳小鼠9只，d30取感染鼠的肺和血清，用间接免疫荧光测试。于d15和d23取感染螨用聚合酶链反应测试其体内病毒RNA。结果：柏氏禽刺螨分别叮刺感染汉坦病毒Z45株和感染汉城病毒UR株大鼠乳小鼠后, 再分别叮刺正常大鼠乳小鼠5 只和4 只。IFAT 检测结果汉坦病毒Z45 株组的鼠全部阳性, 汉城病毒UR 株组的4 只鼠中3 只阳性, 其抗体滴度, 前者为10- 40, 后者为20- 40, 病毒在螨体内可保存22 d 以上。阻断试验显示, 病毒免疫血清1∶20 作用肺切片标本后, 部分阻断荧光抗体反应, 与未经稀释的血清作用后全部阻断特异性荧光反应。对照组正常鼠肺片和血清经IFA T 检测均阴性。结论: 柏氏禽刺螨可作为家鼠型肾综合征出血热的传播媒介和贮存宿主。     

原位RT-PCR检测革螨体内HFRSV的实验研究

目的　确定肾综合征出血热病毒 (HFRSV)在革螨体内分布和定位 ,进一步证明革螨作为HFRS传播媒介的意义。方法　采用原位RT -PCR分子杂交技术检测鼠肺组织细胞内和革螨体内的HFRSV -RNA。结果　阳性信号呈弥散分布 ,多见于鼠肺吞噬细胞、血管内皮细胞等组织细胞内 ;革螨体内的阳性信号主要分布于卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞中 ,前体组织细胞较少。结论　地高辛素标记的核酸探针原位RT -PCR分子杂交的阳性信号具有HFRS病毒特异性和RNA特异性     

革螨、恙螨感染汉坦病毒最小感染阈值及增长的动态观察

目的　研究螨 (革螨、恙螨 )感染汉坦病毒 (HantavirusHV)阈值和潜伏期。方法　采用革螨、恙螨叮刺不同感染剂量HV的乳鼠 ;用组织培养半数感染剂量 (5 0 %tissuecultureinfectivedose,TCID50 )测定、计算螨最小感染HV阈值 ;并动态观察HV在螨体内增殖 ,计算HV在螨体内的潜伏期。结果　在测定的 8组中革螨除 1 5LD5 0未感染外 ,其余 7组均能使革螨感染 ,HV在革螨体内开始增殖时间约在叮刺后第 2 5～ 30d。恙螨在测定的 8组中除 1 5和 5LD5 0未感染外 ,其余 6组均能使革螨感染 ,HV在恙螨增殖时间约在叮刺后第 30～ 4 0d。原位分子杂交检测发现HV阳性信号多见于螨的中肠细胞内 ,卵巢、卵细胞较少。结论　革螨感染HV的最小阈值为 5TCID50 ,HV在革螨体内潜伏期约 2 5～ 30d。恙螨感染HV最小阈值为10TCID50 ,HV在恙螨体内潜伏期为 30～ 4 0d。     

山东部分地区鼠体外寄生螨种类调查

目的调查山东地区鼠体外寄生虫分布及种类组成情况。方法在山东省的济南、济宁、泰安、枣庄、菏泽等5地市采用笼日法捕鼠,分离鼠体外寄生螨并分类。结果共捕获鼠类186只,采获鼠体外寄生螨723只,分属5科7属11种。其中恙螨451只,占62.38%,分属l科3属5种;革螨272只,占37.62%,分属4科4属6种。恙螨的优势种为小盾纤恙螨(258只)和居中纤恙螨(77只);革螨的优势种为柏氏禽刺螨(132只)和厩真厉螨(41只)。黑线姬鼠体外的优势种为小盾纤恙螨、须纤恙螨和柏氏禽刺螨、厩真厉螨;东方田鼠体外主要为小盾纤恙螨;小家鼠和大仓鼠体外以柏氏禽刺螨和居中纤恙螨为主;褐家鼠体外以柏氏禽刺螨和格氏血厉螨为主。结论通过本次对山东部分地区鼠体外寄生虫分布及种类组成调查;为该地区进一步研究鼠类传染病提供了依据。     

HFRSV在革螨、恙螨体内生存空间和时间的研究

目的　检测肾综合征出血热病毒 (HFRSV)在革螨、恙螨体内生存空间与时间。方法　采集自然界鼠窝革螨饲养繁殖的子代革螨和鼠体恙螨幼虫、小黑板采集的游离恙螨幼虫及饲养孵化的若虫 ,进行石腊包埋切片 ,接种Vero E6细胞培养 ,应用IFAT检测分别观察HFRSV在螨体内分布和测定不同时期HFRSV的滴度。结果　发现HFRSV多分布于螨体的腹部组织即消化器官 ,前体部分较少 ,个别螨的前足和中足亦可检测到 ;经TCID50 /ml滴度测定以 10 0天为最高 (10 5～ 6)。结论　表明HFRSV在螨体内存在时间较长 ,并可经期传递 ;可作为HFRSV的传播媒介     

用原位RT-PCR分子杂交定位检测螨(革螨、恙螨)原代培养细胞内HV-RNA的研究(Ⅱ)

目的　研究革螨、恙螨在传播肾综合征出血热病毒 (Hemorrhagicfeverwithrenalsyndromevirus,HFRSV)中的媒介作用。方法　采用革螨、恙螨饲养繁殖的子代幼虫、若虫和成虫 ,消化后作螨细胞原代培养制螨细胞片 ,用原位RT -PCR分子杂交法检测HV -RNA在螨组织细胞内分布和定位。结果　HV -RNA多分布于螨消化系统的上皮细胞 ,卵巢组织细胞内 ;革螨子 4代、子 3代和恙螨若虫组织细胞内HV阳性颗粒较革螨子 2代、子 1代和恙螨幼虫多且密集。结论　革螨、恙螨作为HFRS的生物学媒介有细胞分子水平的直接证据。     

纳塔尔多乳鼠(GRA株)对人体亚周期型马来丝虫的敏感性

作者研究了纳塔尔多乳鼠GRA株对亚周期型马来丝虫的敏感性、感染期幼虫接种方式和对性别的选择。实验1,用8周龄的雄性(100只)和雌性(60只)纳塔尔多乳鼠,每鼠一次接种100条感染期幼虫;实验2,13只雄性同龄鼠,每只鼠接种2次,每次间隔7天,1次接种50条感染期幼虫,共接种100条;实验3,93只雄鼠每隔2至3天以阳性蚊叮咬2次。观察微丝蚴血症发生过程和持续时间。开始接种感染期幼虫后90天采血,以后每周从阳性鼠尾采血制成厚涂片,晾干,脱去血红蛋白后用利什曼液染色。解剖阳性鼠,取出心、肺、睾丸     

2007年云南省汉坦病毒宿主动物及其基因分型研究

目的掌握云南省肾综合征出血热（HFRS）流行病学特点、汉坦病毒（HV）宿主动物及基因型分布,为防治提供科学依据。方法收集2007年全省HFRS疫情资料;居民区采用笼夜法捕鼠,野外采用夹夜法捕鼠;鼠肺组织标本用直接免疫荧光法检测HV抗原,用RT-PCR法检测HV核酸及分型。结果2007年全省共报告HFRS病例14例,死亡1例,年发病率为0.02/10万,病死率为7.14%。主要发病地区为大理和楚雄州。2007年在泸西、五华、祥云、玉龙、古城、河口、麻栗坡、泸水和隆阳区（县）捕获鼠类21种1 390只,其中居民区以黄胸鼠和褐家鼠为优势鼠种,野外以大绒鼠、中华姬鼠为优势鼠种。鼠间HV总带病毒率为4.17%,阳性鼠种为大林姬鼠、褐家鼠、大绒鼠、高山姬鼠、黄胸鼠、中华姬鼠和卡氏小鼠,带病毒率依次为9.09%（1/11）,7.52%（10/133）,7.35%（23/313）,5.71%（2/35）,2.57%（13/505）,2.38%（2/84）,2.22%（2/9）;用RT-PCR法检测HV抗原阳性鼠肺标本58份,阳性29份,其中汉城型阳性16份,汉滩型阳性13份;汉城型主要带毒鼠种为褐家鼠和黄胸鼠,汉滩型带毒鼠种主要为大绒鼠、高山姬鼠和中华姬鼠。结论调查地区广泛存在以褐家鼠为主要传染源的家鼠型HFRS疫源地,也存在以大绒鼠为主要传染源的野鼠型HFRS疫源地;存在汉城型和汉滩型病毒的流行,汉滩型病毒具有多种宿主动物的特点,在国内具有特殊性。     

Balb/C乳鼠实验性感染汉坦病毒与脑神经细胞凋亡

目的　应用原位末端标记技术对Balb/C乳鼠脑组织的凋亡细胞进行检测 ,并对脑组织中汉坦病毒 (HV)感染和细胞凋亡的关系进行初步探讨。方法　HV陈株经腹腔接种Balb/C乳鼠 ,感染后分别在 1、2、4、8、10和 14d取脑组织 ,4%多聚甲醛固定 ,常规制备 5 μm石蜡切片 ,应用原位杂交对乳鼠石蜡切片的病毒定位 ,用原位末端标记显示乳鼠脑组织中存在着凋亡细胞。结果　原位杂交检测结果显示 ,病毒主要累及大脑皮层、海马等部位 ,阳性信号主要分布于胞浆、紧靠核膜 ,原位末端标记的阳性细胞存在于神经细胞核内 ,在感染乳鼠脑组织中许多细胞被原位末端标记 ,呈胞核深染 ,弥漫分布于皮层、海马、白质等部位。结论　乳鼠脑组织中存在着凋亡细胞 ,该病变可能与病毒感染有关     

HFRS不同血清型毒株交叉免疫小鼠抗体介导早死的研究

目的　感染ＨＦＲＳ病毒小鼠被动免疫不同型免疫血清,对抗体介导小鼠早死的研究。方法　用７６－ １１８、Ｒ２２ 、Ｒ２８３株病毒分别免疫小鼠,制备免疫血清。结果　７６－ １１８、Ｒ２２ 毒株免疫血清被动免疫同型毒株感染的小鼠抗体介导早死。用混合型毒株免疫血清被动免疫Ｈａｎｔａａｎ 型和Ｓｅｏｕｌ型毒株感染的小鼠抗体均介导早死。７６－ １１８ 与Ｒ２２ 交叉免疫无早死现象。结论　感染ＨＦＲＳ病毒小鼠输入免疫血清,抗体介导的早死具有ＨＦＲＳ病毒型特异性,与病毒表面抗原决定簇相关,与免疫血清剂量有关     

Belgrade virus: a new hantavirus causing severe hemorrhagic fever with renal syndrome in Yugoslavia.

Two biologically and genetically distinct hantaviruses were isolated from blood and urine specimens collected from four Yugoslavian patients with clinically severe hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS). Viral isolates from three patients, designated strains Belgrade 1-3, were distinct from Hantaan, Seoul, Puumala, and Prospect Hill viruses as determined by plaque-reduction neutralization tests and restriction analysis of enzymatically amplified M-segment fragments. The fourth isolate, called Kraljevo, was indistinguishable from Hantaan virus. Strains Belgrade 1 and 2, like the Kraljevo strain, caused a fatal meningoencephalitis in newborn mice inoculated with 100 pfu of virus intracerebrally and intraperitoneally. Strain Belgrade 3 was much less neurovirulent, requiring 30,000 pfu of virus to cause fatal disease in mice. These data indicate that two distinct hantaviruses, one of which constitutes a new serotype, cause clinically severe HFRS in Yugoslavia.     

大鼠单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用观察

用肾综合征出血热病毒陈株(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Virus,HFRSV Strain Chen)感染乳鼠,检测11株大鼠单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明,其中4株McAb被动使用后对感染乳鼠有较高的保护作用。McAb保护力的大小与使用抗体中和活性有无、使用时间的早晚有密切的关系。同时发现多种McAb混合使用保护效果优于单一运用的保护作用。本文亦分析了McAb在活体内的保护作用与其它抗病毒保护机制的关系。     

三种ELISA法检测大鼠血清肾综合征出血热病毒特异性抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属引起的自然疫源性疾病。本病的传染源除黑线姬鼠、褐家鼠、欧洲棕背外,能作为家鼠型或实验动物型HFRS传染源的动物,还有实验大白鼠。近十年来世界各地相继暴发了由实验大鼠引起的HFRS流行,日益引起了人们的高度重视,迫切需要一些快速、简便、敏感、特异的检测手段以用于野生及实验动物的HFRS病毒流行病学监测及检疫,以预防野鼠型、家鼠型及实验室型HFRS的发生。虽然间接免疫荧光试验(IFA)一直是主要可靠的血清学诊断手段,但由于需用昂贵的仪器,并且判定结果有一定的主观性,降低了它的应用价值。我们建立了三种检测实验大鼠体内HFRS病毒抗体的ELISA方法,并对这些方法的敏感性。 (一)取代试验:1.用相应包被液或稀释液代替反应系统中一种或二种成分,结果均为阴性(见表1)。2.以JEV抗原和抗体,HSV抗原和抗体分别取代HFRS病毒抗原和A35McAb、Mark-1 McAb及免抗HFRS病毒免疫血清r-G。以酶标免抗人IgG取代酶标Mark-l,酶标H7 McAb和PAP复合物,羊抗人IgG取代桥抗免抗大鼠血清,结果均为阴性(见表2)。