鲟鱼软骨中II型胶原蛋白的提取及其结构鉴定

目的 从鲟鱼软骨中提取II型胶原蛋白,并对其进行结构鉴定。方法 选取鲟鱼软骨为提取对象,采用碱洗、酸泡去除非胶原成分、矿物质、多糖等物质,再用胃蛋白酶进行酶解提取、氯化钠盐析、去离子水透析、冷冻干燥等方法提取纯化II型胶原蛋白;采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE）、氨基酸分析、紫外吸收光谱、红外光谱和圆二色色谱对提取的II型胶原蛋白进行鉴定。结果表明 SDS-PAGE电泳结果显示所得提取物至少由两条链组成(α和β);氨基酸组成分析结果显示,甘氨酸、丙氨酸和脯氨酸大量存在,而酪氨酸、半胱氨酸和组氨酸的含量较低;紫外吸收光谱显示鲟鱼软骨提取物最大吸收峰与蓝鲨软骨和鱿鱼软骨II型胶原蛋白最大吸收峰相近,此吸收峰是胶原三螺旋结构的典型紫外吸收图谱特点;红外光谱和圆二色谱测定结果表明,所得提取物具有良好的三螺旋结构,具备典型II型胶原蛋白吸收特征。结论 从鲟鱼软骨中提取的胶原蛋白为II型胶原蛋白,且纯度较高。     

羊肩胛软骨中Ⅱ型胶原蛋白的提取、鉴定及溶解度分析

选择羊肩胛软骨为原料,经脱脂、脱钙后,用盐酸胍去除蛋白多糖,经酶法溶提、盐析、透析、冻干等步骤提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,再采用SDS-凝胶电泳、紫外色谱等方法对其进行鉴定。对所提Ⅱ型胶原蛋白的溶解度进行温度、pH影响因素分析。结果表明:SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的蛋白与Sigma公司的Ⅱ型胶原蛋白基本一致。Ⅱ型胶原蛋白紫外最大吸收峰为220nm。所提取的II型胶原性质符合文献报导的II型胶原的特征,为较高纯度的II型胶原。     

猪Ⅱ型胶原及胶原肽抗关节炎的研究

本实验以猪鼻骨为原料,采用盐析法提取天然Ⅱ型胶原蛋白,采用碱性蛋白酶酶解制备胶原肽,并测定胶原蛋白的纯度,分析胶原蛋白及胶原肽的理化性质。通过构建小鼠CIA动物模型,研究Ⅱ型胶原蛋白及胶原肽对类风湿性关节炎的作用效果。结果表明,提取所得蛋白的胶原蛋白含量为82.86%,在紫外波长230 nm下有最大吸收峰,280 nm处几乎无吸收峰,分子量大于300 KD,具备天然Ⅱ型胶原蛋白特征;酶解得胶原肽不含Ⅱ型胶原蛋白,分子量小于20 KD;Ⅱ型胶原蛋白能够降低小鼠关节指数、降低关节变形率,明显降低小鼠血清中IL-17、MMP-3和TNF-α水平(p0.05),并能显著提高T细胞刺激指数(P0.05),对B细胞刺激指数无明显效果(p0.05);组织病理学显示Ⅱ型胶原蛋白能够减轻关节破坏程度,抑制软骨退化;而胶原肽不具有以上作用。     

正交试验优化羊肌腱中Ⅰ型胶原蛋白提取工艺

以羊肌腱为实验材料,经脱脂、脱钙、除杂蛋白后,用盐酸胍去除蛋白多糖,经胃蛋白酶酶解、氯化钠盐析、透析后对其进行提取工艺的研究与鉴定。结果表明,单因素试验及正交试验确定最佳工艺条件为酶解时间60 h、酶添加量4%、0.1 mol/L柠檬酸溶液添加量5 mL/g进行羊肌腱提取。紫外光谱分析结果显示:所提胶原最大吸收峰220 nm,证明提取物为胶原蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明:羊肌腱中存在的蛋白主要是Ⅰ型胶原蛋白。经红外光谱分析,进一步证明提取的胶原蛋白为Ⅰ型胶原蛋白且结构完整。     

真海鞘中胶原的提取及理化性质研究

为推动海洋生物质资源可持续开发，并探索陆生胶原蛋白的可替代来源，以野生真海鞘为原料，采用酸酶结合法提取胶原蛋白，并与以牛跟腱为原料提取的胶原进行对比，分析探讨海洋生物源胶原的应用潜力。通过凝胶电泳、紫外吸收光谱、氨基酸组成分析、Zeta电位测试、差示扫描量热分析、红外吸收光谱和扫描电镜观察等手段对其结构进行系统研究。结果表明，所提取的真海鞘胶原在120 ku左右有2条α链(α1和α2)，在200 ku左右有一条β链，紫外吸收峰在230 nm处，符合Ⅰ型胶原特征且胶原三螺旋结构保留完整。真海鞘胶原与牛跟腱胶原相比含有更多的谷氨酸等呈味氨基酸，约占氨基酸总量的43.07%。真海鞘胶原等电点约为5.9，热变性温度为28.08℃。扫描电镜结果显示真海鞘胶原海绵内部呈多层聚集、疏松多孔、表面光滑的片状交织结构，与牛跟腱胶原类似。真海鞘胶原有望成为陆生胶原的特色替代来源，在食品、医药及化妆品领域有良好的应用潜力。     

胶原蛋白的提取及其纳米纤维的制备与表征

为提高羊皮中胶原蛋白的提取率和利用率，采用酸酶复合法提取羊皮胶原蛋白，再利用静电纺技术制备胶原基纳米纤维。以羊皮胶原蛋白提取率为评价指标，考察料液比、乙酸浓度、胃蛋白酶浓度和酶解时间四个因素对羊皮胶原蛋白提取效果的影响，确定单因素最优水平；在此基础上，采用正交试验设计对羊皮胶原蛋白提取的工艺条件进行优化，并通过紫外光谱扫描、红外光谱扫描、SDS-PAGE图谱和扫描电镜等生化技术探讨酶解过程对胶原蛋白结构性质的影响；然后将胶原蛋白和聚乳酸复合静电纺丝，制备得到胶原基纳米纤维。结果表明，酸酶复合法提取羊皮胶原蛋白最佳工艺为：料液比1:25 g/mL、乙酸浓度1.2 mol/L、胃蛋白酶用量1.0%、酶解时间72 h，在此条件下羊皮胶原蛋白提取率为38.42%±0.49%；紫外光谱扫描显示羊皮胶原蛋白于230 nm附近出现最大紫外吸收峰；红外光谱扫描、SDS-PAGE图谱分析表明羊皮胶原蛋白主要有α₁、α₂、β三种亚基成分组成，属于Ⅰ型胶原蛋白，且胶原蛋白的空间结构保留完整；扫描电镜直观表明了羊皮胶原蛋白的纤维网络结构保留较完整；静电纺丝得到的胶原...     

基于胶原蛋白的发泡剂的制备及表征

采用含铬废弃皮屑提取的工业胶原蛋白与月桂酰氯反应制备胶原蛋白发泡剂,以该发泡剂的泡沫高度、半衰期以及胶原蛋白的氨基转化率为评价指标,考察反应温度、反应时间、月桂酰氯用量和胶原蛋白粉用量对发泡剂性能的影响。并通过GPC、IR对胶原蛋白发泡剂结构进行表征。结果表明:胶原蛋白发泡剂最优的制备条件为反应时间4.5 h,反应温度75℃,胶原蛋白粉与月桂酰氯的质量比为12.5∶1。在此条件下反应生成的胶原蛋白类发泡剂氨基转化率为45.83%,泡沫高度为143.7 mL,半衰期为30 min。GPC和IR说明产物具有预期的结构。     

牛骨I型胶原蛋白提取及结构表征

针对牛骨胶原蛋白提取的工艺(脱脂、脱钙、提取介质)和结构表征进行研究。结果表明：最佳的提取工艺条件：采用乙醚低温回流脱脂,0.48% 盐酸脱钙,骨粒径为5mm × 10mm,以1% 柠檬酸和1% 胃蛋白酶复合为提取介质。纯化后的牛骨胶原蛋白通过紫外扫描分析、FT-IR、DSC 热收缩温度和SDS-PAGE 凝胶电泳的测定,并与标准牛腱Ⅰ型胶原蛋白比较,确定所提蛋白为典型的Ⅰ型胶原蛋白,达到了电泳纯,且较好地保持了Ⅰ型胶原的3 股螺旋结构。     

明胶和水解胶原多肽的差异性研究

胶原蛋白是一类重要的蛋白质,本文主要阐述了胶原蛋白的基本结构及提取方法,同时介绍了由其衍生出的两种产物——明胶和水解胶原多肽间的区别,并分别对二者在工业中的应用进行了介绍与展望。     

大鲵肉肌基质蛋白中胶原蛋白肽和弹性蛋白肽特性

对大鲵肉肌基质蛋白中提取的胶原蛋白肽和弹性蛋白肽特性进行研究。以大鲵肉肌基质蛋白为原料,分别采用胶原蛋白酶和弹性蛋白酶进行酶解,测定酶解产物光谱特性、氨基酸组成、分子质量、物理特性及体外抗氧化能力。结果表明：胶原蛋白肽和弹性蛋白肽提取率分别为45.11%和37.36%;紫外光谱结果表明,胶原蛋白肽和弹性蛋白肽最大吸收峰分别位于210～230、200～220 nm;红外光谱结果表明,在酰胺A、B、Ⅱ带胶原蛋白肽和弹性蛋白肽均有吸收峰,在酰胺Ⅲ带仅胶原蛋白肽有吸收峰;氨基酸含量测定结果表明,胶原蛋白肽和弹性蛋白肽含有人体7 种必需氨基酸,疏水性氨基酸含量较高,芳香族氨基酸含量较低;在分子质量13～150 kDa的Marker标记范围内,观察不到胶原蛋白肽和弹性蛋白肽的电泳条带;黏度测定表明,胶原蛋白肽和弹性蛋白肽具有一定黏性;扫描电子显微镜结果表明,胶原蛋白肽结构呈海绵状,片状较大,弹性蛋白肽结构呈大小不一的碎片状,结构松散,均有一定的抗氧化能力,且抗氧化能力与多肽质量浓度呈正相关。