丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞增殖的影响和机制

目的： 探讨丹参素(DSS)对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响和机制。方法： 采用反复贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养成功后,采用第3-10代细胞应用于实验。分4组：对照组,ox-LDL(50 mg/L)组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（50 mg/L）组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（100 mg/L）组;用单个核细胞直接细胞毒性测定(MTT)法检测吸光度(A值),观察DSS对ox-LDL致VSMCs增殖的影响;RT-PCR法观察丹参素对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）表达的影响。结果：丹参素可明显降低ox-LDL 引起的A值升高,丹参素可降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平的升高。结论：丹参素可对抗ox-LDL致血管平滑肌细胞的增殖,其可能通过降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平升高而发挥作用。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中CaN活性及增殖细胞核抗原表达水平的影响

目的：观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）中钙调神经磷酸酶（CaN）活性及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响。方法：建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型，应用免疫细胞化学法观察血管平滑肌细胞PCNA表达；并用酶促反应定磷法测定CaN活性。结果：AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖，VSMCs细胞数目和细胞增殖活度明显高于正常对照组（P＜0.01）；CaN活性和PCNA表达量（A值）显著高于正常对照组（P＜0.01）。同时加川芎嗪处理，各组CaN活性和PCNA表达水平均显著低于AngⅡ组（P＜0.01）。结论：川芎嗪对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用，其机制与抑制CaN介导的信号转导进而抑制PCNA的表达有关。     

串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响

目的观察串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响。方法分离并培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞．经Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定和常规处理后，随机分为对照组、bFGF组、缺氧组、缺氧＋bFGF组、PD98059组和串珠素阻断组，以[^3H]-TdR掺入法测定内皮细胞增殖反应。结果缺氧＋bFGF组内皮细胞[^3H]-TdR掺入率较对照组和bFGF组明显升高，是对照组的11．12倍（P〈0．05），bFGF组的4．05倍（P〈0．05），表明串珠素和bFGF联合作用可以明显刺激内皮细胞增殖，这种联合作用较单独的串珠素或bFGF作用明显；PD08059组内皮细胞[^3H]-TdR掺入率较缺氧＋bF-GF组下降了93．40％（P〈0．05），表明PD98059可以抑制串珠素与bFGF对内皮细胞的增殖作用。结论串珠素可以增强bFGF对心肌微血管内皮细胞的增殖作用，ERK介导了串珠素对bFGF的作用。     

磷酯酰肌醇3激酶抑制剂对碱性成纤维细胞生长因子诱导的平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的:研究磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin (WT)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移及磷酸化Akt蛋白表达的影响,为探讨bFGF诱导平滑肌细胞增殖和迁移的信号通路提供实验依据.方法:采用细胞计数、划痕损伤实验和免疫印迹法,观察Wortmannin对bFGF诱导的VSMCs增殖、迁移及磷酸化Akt表达的影响.结果:干预后24h, bFGF组VSMCs增殖、迁移较对照组明显增强,同时磷酸化Akt的表达平行增高.加用Wortmannin后,明显抑制了VSMCs的增殖、迁移和磷酸化Akt的表达.结论:bFGF诱导的VSMCs增殖和迁移可能是通过PI3K/Akt信号通路发挥作用.     

FOXO1参与高血压条件下异常张应变诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨高血压条件下异常升高的周期性张应变刺激对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖的影响,以及Forkhead转录因子1（FOXO1）在其中可能的作用。方法 构建腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,并以假手术组为对照,应用FX-4000T体外周期性张应变加载系统,分别对VSMCs施加5%的生理性张应变和15%的高血压病理性张应变。Western blot检测VSMCs的FOXO1及p-FOXO1表达水平,BrdU法检测VSMCs 增殖活性。RNA干扰技术抑制VSMCs的FOXO1表达,检测FOXO1、p-FOXO1表达以及VSMCs增殖活性变化。结果 腹主动脉缩窄术后 2和4周,大鼠血压较假手术大鼠明显增高。与假手术大鼠相比,高血压大鼠血管壁细胞增殖活性明显增高,同时 FOXO1及 p-FOXO1表达水平也显著性升高。细胞实验表明,与5%张应变组相比,15%张应变加载显著上调VSMCs的FOXO1、p-FOXO1表达水平,以及VSMCs增殖活性。静态条件下RNA干扰抑制VSMCs的FOXO1及p-FOXO1表达,VSMCs的增殖活性明显降低。结论 高血压病理条件下,异常增高的周期性张应变可能通过促进 FOXO1表达和磷酸化诱导VSMCs增殖。以动物模型观察现象,在细胞分子水平探讨机制,旨在明确FOXO1在高血压血管重建中的作用及其力学生物学机制,为阐明高血压血管重建的发病机理和药物治疗靶标的研究提供新的实验依据。     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌表型转化和增殖的影响

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和增殖的影响以及它们之间的关系.方法 取大鼠主动脉先体外培养8d后再贴块培养(VSMCs);对照组直接用贴块法培养细胞.实验分为CGRP作用组和无CGRP作用组.用5-BrdU标记平滑肌细胞增殖变化;RT-PCR检测HRG-1和SM22α表达变化.结果 血管经体外培养8d后再贴壁培养的平滑肌细胞可见大量棕黄色标记增殖的细胞核,HRG-1和SM22α mRNA表达明显减少;而CGRP作用组标记的血管平滑肌增殖细胞明显减少,HRG-1和SM22α mRNA表达明显上调.结论 CGRP对VSMCs增殖有抑制作用并同时可使VSMCs从合成型向收缩型转化.     

活化激酶C受体1在切应力调控血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 探讨活化激酶C受体1（receptor for actived C kinase 1, RACK1）在内皮细胞（endothelial cells, ECs）感受切应力刺激调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用及其机制。方法 应用平行平板流动腔系统,对联合培养的大鼠ECs和VSMCs施加1.5 Pa正常切应力（normal shear stress, NSS）和0.5 Pa低切应力（low shear stress,LowSS）,应用BrdU ELISA方法检测VSMCs增殖水平,对蛋白质组学研究发现的力学响应分子RACK1表达以及Akt磷酸化,应用Western blot技术进行检测。静态条件下,应用RNA干扰技术特异性抑制VSMCs的RACK1表达,检测其对细胞增殖和Akt磷酸化的作用。应用ECs与VSMCs隔开培养和联合培养模型,检测ECs对VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化水平的影响。结果 血管差异蛋白质组学的结果发现,与NSS组相比,RACK1在LowSS组血管组织的表达水平明显升高。细胞实验结果显示,LowSS诱导了与ECs联合培养的VSMCs增殖,上调VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化。静态条件下,特异性抑制VSMCs的RACK1表达后,VSMCs的增殖水平和Akt磷酸化水平均显著下降。与ECs联合培养VSMCs,其RACK1表达和Akt磷酸化水平较隔开培养组均上调。结论 VSMCs的RACK1表达受细胞接触与切应力的影响,并可能通过PI3K/Akt信号通路参与LowSS诱导的VSMCs增殖的调控。探讨VSMCs增殖功能变化及其力学生物学机制对于认识动脉粥样硬化等疾病发病机理和疾病防治有重要意义。     

CGRP修饰大鼠MSCs对血管平滑肌细胞增殖及表型转化的影响

 目的：探讨降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）修饰的大鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）在体外对大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖和表型转化的影响及其机制。方法：分离、培养及鉴定大鼠MSCs和VSMCs。CGRP重组慢病毒（Lv-CGRP-EGFP）转染MSCs后,real-time PCR和ELISA法检测MSCs中CGRP的表达。MSCs-CGRP与VSMCs共培养后MTT、台盼蓝染色及划痕实验评价VSMCs增殖、迁移能力及细胞存活率。Western blotting法检测VSMCs中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)和骨桥蛋白(osteopontin, OPN)的表达水平。结果：与MSCs组和空载病毒转染组（MSCs-EGFP）比较,CGRP修饰的MSCs（MSCs-CGRP组）中CGRP的mRNA和蛋白表达水平增高（均P<0.01）。MTT法和划痕实验显示,与MSCs组和MSCs-EGFP组比较,MSCs-CGRP组中VSMCs的增殖和迁移能力明显减弱（P<0.05）,而且台盼蓝染色显示,各组细胞存活率均大于90%。Western blotting结果显示,与MSCs-CGRP共培养的VSMCs中α-SMA较MSCs组和MSCs-EGFP组表达增加,OPN的表达减少（均P<0.05）。结论：CGRP修饰的MSCs能分泌CGRP蛋白,并且能抑制VSMCs的增殖和迁移,其机制可能通过抑制VSMCs的表型从收缩表型向合成表型转化有关。     

氟伐他汀调节SHR大鼠血管平滑肌细胞钙泵的表达对血管重构的影响及作用机制

目的探讨氟伐他汀（fluvastatin,Flu）对小牛血清（CS）干预的高血压大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及血管重构的影响并初步探讨其可能的机制。方法CS、Flu和甲羟戊酸（mevalonic acid,Meva）处理血管平滑肌细胞4d,将细胞分为SHR组、SHR＋20％CS组、SHR＋20％CS＋Flu组和SHR＋20％CS＋Flu＋Meva组,采用MTT检测细胞的增殖能力,Transwell检测细胞的迁移能力,体外管样实验、天狼星红染色以及免疫荧光的方法分别检测细胞的管样结构的生成能力、胶原纤维以及F-actin的表达,Western印迹检测PMCA、SERCA和LTCC的表达。结果Flu能够抑制CS促进的VSMCs增殖效应、迁移能力,管样结构生成,胶原蛋白表达,以及骨架蛋白的聚合,并下调VSMCs中PMCA的表达,上调SERCA和LTCC的表达,而Meva则对Flu的作用进行逆转。结论氟伐他汀对CS诱导的VSMCs增殖及血管重构产生抑制,该过程可能是通过调节钙泵的表达实现的,而Meva代谢途径可能在其中发挥了重要的作用。     

高压力对血管平滑肌细胞的形态、α—肌动蛋白和增殖细胞核抗原表达的影响——一种新的颈动脉在体受力模型研究

为了研究机械应力在动脉重建中的作用和机制。本文建立了以压力改变为启动因子导致动脉重建的大鼠颈总动脉在体受力模型，并观察了高压力对血管平滑肌细胞（VSMCs）形态、α－肌动蛋白（α-actin）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。以高压力（160mmgHg）和正常压力（80mmHg）灌流大鼠颈总动脉6h、组织学和免疫组织化学方法观察VSMCs的形态、α-actin和PCNA表达的变化。结果表明，大鼠颈总动脉在体受力模型在压力，脉压差和频率方面有较好的可控制性及稳定性；高压力使VSMCs核常染色质增加，α-actin染色较正常压力组浅谈，表明α-actin含量减少；PCNA表达阳性。大鼠颈总动脉在体受力模型的成功建立，为研究机械应力对动脉重建的作用提供了一种新的手段，高压力可诱导VSMCs向合成型转换，细胞趋于增殖。     

缝隙连接在TGF-β1 诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨缝隙连接是否参与转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法: 原代培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组:对照组、TGF-β₁组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸(18α-GA)组和TGF-β₁+18α-GA组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,免疫荧光技术观察细胞中缝隙连接蛋白(Cx)43和Cx40蛋白表达及定位,Western blotting法检测细胞中Cx43和Cx40蛋白表达, 染料示踪分子传递法(划痕标记染料传输法)检测细胞的缝隙连接功能。结果: (1)与对照组相比,TGF-β₁组MTT法测得A值及细胞周期S期比例增高 (P<0.05),细胞增殖活性增强。18α-GA组降低(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+ 18α-GA组A值及S值比例均降低(P<0.05),细胞增殖活性减弱。(2)免疫荧光技术检测细胞中Cx43与Cx40蛋白表达呈阳性,两者共定位于胞浆。(3)与对照组相比,TGF-β₁组Cx43蛋白表达增强(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05),18α-GA组Cx43和Cx40表达均减弱(P<0.05),与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组Cx43表达减弱(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05)。(4)与对照组相比,TGF-β₁组缝隙连接功能明显增强(P<0.05);18α-GA组缝隙连接功能明显减弱(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组缝隙连接功能显著降低(P<0.05)。结论: TGF-β₁主要通过上调SHR血管平滑肌细胞Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能增强,从而促进了SHR血管平滑肌细胞的增殖,而Cx40蛋白表达可能不起主要作用。     

Spatial and temporal expression of perlecan in the early chick embryo

Perlecan is a major heparan sulfate proteoglycan that binds growth factors and interacts with various extracellular matrix proteins and cell surface molecules. The expression and spatiotemporal distribution of perlecan was studied by RT-PCR, immunoprecipitation and immunofluorescence in the chick embryo from stages X (morula) to HH17 (29 somites). Combined RT-PCR and immunohistochemistry demonstrated the expression of perlecan as early as stage X and its presence may be fundamental to the first basement membrane assembly on the epiblast ventral surface at stage XIII (blastula). Perlecan fluorescence was intense in the cells ingressing through the primitive streak and was strong lining the epiblast ventral surface lateral to the streak at stage HH3-4 (gastrula). At stage HH5-6 (neurula), perlecan fluorescence was low in the neuroepithelium and stronger in the apical surface of the neural plate. At stage HH10-11 (12 somites), perlecan fluorescence was intense in the neuroepithelium and was then essentially nondetectable in the neuroepithelium, and the intensity had shifted to the basement membranes of encephalic vesicles by stage HH17. Perlecan immunofluorescence was intense in neural crest cells, strong in pharyngeal arches, intense in thymus and lung rudiments, intense in aortic arches and in dorsal aorta, strong in lens and retina and intense in intraretinal space and in optic stalk, strong in the dorsal mesocardium, myocardium and endocardium, strong in dermomyotome, low in sclerotome in somites, intense in mesonephric duct and tubule rudiments, intense in the lining of the gut luminal surface. Inhibition of the function of perlecan by blocking antibodies showed that perlecan is crucial for maintaining basement membrane integrity which mediates the epithelialization, adhesive separation and maintenance of neuroepithelium in brain, somite epithelialization, and tissue architecture during morphogenesis of the heart tube, dorsal aorta and gut. An intriguing possibility is that perlecan, as a signaling molecule that modulates the activity of growth factors and cytokines, participates in the signaling pathways that guide gastrulation movements and neural crest cell migration, proliferation and survival, cardiac cell proliferation and paraxial mesoderm (somitic) cell proliferation and segmentation.     

碱性成纤维细胞因子对人肾成纤维细胞的影响

目的:研究碱性成纤维细胞因子(bFGF)对人肾成纤维细胞(KFB)增殖、分泌I型胶原、表达整合素β₁的影响。方法:体外培养KFB, 分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、ELISA法、流式细胞仪检测KFB增殖、I型胶原分泌及整合素β₁表达水平。结果:25-50μg/L的bFGF可明显促进KFB细胞增殖(P<0.05vs对照)及分泌I型胶原(P<0.05vs对照), 同时显著增加KFB整和素β₁的表达(P<0.05vs对照).结论:bFGF可通过对整合素β₁表达的上调来促进KFB增殖及分泌I型胶原, 这可能是bFGF致肾间质纤维化的作用机制。     

碱性成纤维细胞生长因子对动脉粥样硬化大鼠脑基底动脉血管内皮功能与结构的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠脑基底动脉血管内皮功能与结构的影响。方法将48只雄性Wistar大鼠随机平均分成正常对照组、AS组与bFGF治疗组。除正常对照组外,在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D3(6×105IU/kg)加高脂配方饲料喂养,6周后bFGF治疗组采用腹腔注射bFGF(9.5μg/kg,2次/d)治疗,连续2周后处死。观察不同组离体基底动脉对不同浓度乙酰胆碱(Ach)的舒张反应率;光镜观察血管形态结构的变化;ELISA与比色法分别测定血管壁一氧化氮(NO)与血清血管内皮生长因子(VEGF)含量变化;MTT法测体外培养内皮细胞的增殖活性;鬼笔环肽染色观察培养平滑肌细胞骨架微丝的变化。结果高脂饲料饲养6周后早期动脉粥样硬化形成;与AS组相比,经bFGF治疗2周后基底动脉对不同浓度Ach舒张反应百分率、动脉管壁NO与血清VEGF含量明显升高(P0.05);血管内皮细胞增殖活性也显著增强(P0.05);平滑肌细胞骨架微丝损伤明显改善。结论 AS对基底动脉血管内皮造成了损伤,而bFGF参与了损伤动脉血管结构与内皮功能的调节,这些变化提示bFGF对脑血管具有明显的保护作用。     

载脂蛋白（a）对血管平滑肌细胞增殖及其信号通路的影响

目的： 探讨载脂蛋白（a）［apo（a）］对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法：原代培养血管平滑肌细胞并给予传代以进行实验，并采用α-actin抗体进行免疫组化细胞鉴定；分别给予apo（a）、apo（a）+整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609及单独LM609干预细胞，采用细胞计数和MTT实验观察细胞增殖情况，采用Western blotting分析相关信号蛋白的变化。结果：所用实验细胞经鉴定均为血管平滑肌细胞；apo（a）能促进血管平滑肌细胞增殖，但这一作用能被整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609所对抗，单独的LM609干预对细胞生长并无影响；Western blotting显示apo（a）能促进黏附斑激酶（FAK）磷酸化，并使总的转化生长因子β1（TGF-β1）及其磷酸化形式均表达减少，而LM609能对抗apo（a）的这些作用。结论：Apo（a）促进血管平滑肌细胞增殖的作用是通过整合素αⅤβ3介导的， 以致FAK活化，进而TGF-β1表达及磷酸化均减少。     

基底膜蛋白多糖抗体可抑制体外培养成骨细胞合成及分泌转化生长因子β1

背景：到目前为止,基底膜蛋白多糖在骨折愈合的作用机制、调节转化生长因子β1对成骨细胞增殖的作用尚少见报道。 目的：观察基底膜蛋白多糖对胎鼠颅骨成骨细胞合成分泌转化生长因子β1的影响。 方法：分离并培养SD胎鼠颅盖骨成骨样细胞,采用碱性磷酸酶染色法及茜素红染色法鉴定细胞后,随即分对照组、基底膜蛋白多糖阻断组,应用免疫组化和酶联免疫吸附试验检测基底膜蛋白多糖对成骨细胞分泌转化生长因子β1的情况。 结果与结论：与对照组比较,基底膜蛋白多糖阻断组转化生长因子β1浓度降低,差异有显著性意义(P < 0.05)。说明基底膜蛋白多糖抗体能消除其促进成骨细胞分泌合成转化生长因子β1的作用,使转化生长因子β1浓度降低。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

基底膜蛋白多糖的功能多样：血管发生与软骨形成及软骨骨化

背景：基底膜蛋白多糖功能多样,在调节血管生物学行为和损伤修复中具有重要作用。 目的：探讨基底膜蛋白多糖在组织发育、血管发生、软骨形成中的调节机制。 方法：应用计算机检索Sciencedirect和中国生物医学文献数据库(2000-01/2010-12),检索词分别为“perlecan, angiogenesis, cartilage, heparan sulfate, vascular endothelial growth facto”和“基底膜蛋白多糖,血管,软骨,硫酸乙酰肝素,血管内皮生长因子”。纳入与基底膜蛋白多糖的表达、功能密切相关,同一领域选择近期发表或在权威杂志发表的文章。排除重复性研究或Meta分析类文章。 结果与结论：检索到129篇文献,按纳入及排除标准筛选后,共纳入35篇符合标准的文献。经分析得出以下结论：基底膜蛋白多糖在机体发育过程必不可少,其具体作用机制受细胞微环境的影响。基底膜蛋白多糖功能强大,在与生长因子、成形素、基质蛋白交互作用下,可用相同的机制来调节每一个程序。