对比组织悬液法及组织块法建立兔VX2皮下肿瘤模型的差异

文题释义：彩色多普勒血流显像(Color Doppler Flow Imaging，CDFI)：是利用红细胞与超声波之间的多普勒原理进行血流显像的技术，根据血流的方向和速度大小，进行伪彩色编码，后经彩色显示器显示，从而完成彩色多普勒血流显像。 VX2肿瘤(VX2 Tumor)：来源于Shope病毒，属于鳞状细胞癌的一种，可使乳头瘤恶变成鳞状上皮细胞癌的恶性肿瘤。因具有与人类肿瘤相似的形态学及生物学特性，目前主要用于动物模型的实验研究，尤其是兔VX2各组织器官肿瘤的影像学及肿瘤治疗的动物模型研究。背景：目前建立VX2皮下肿瘤模型的方法有多种，但建模方法各有优劣，能优质高效建立动物肿瘤模型的方法方可满足动物肿瘤实验的需求。 目的：对比观察不同方法建立兔VX2皮下肿瘤模型，探索更简单高效的建模方式，为兔VX2皮下肿瘤实验提供大批量高质量的动物模型奠定基础。方法：雄性新西兰大白兔66只。取2只制备VX2荷瘤种兔，再取荷瘤兔肿瘤组织分别制备瘤组织块及肿瘤组织悬液备用。实验分为2组：瘤组织悬液组20只，麻醉后于双侧后肢内侧面注射组织悬液0.15 mL；瘤组织块组20只，麻醉后于双侧后肢内侧面皮下植入瘤组织块。2组分别采用相应接种方式种植2只荷瘤种兔，各传5代。记录并比较2组肿瘤种植时间，采用二维及彩色多普勒超声观察肿瘤形态大小及生长情况，比较2组肿瘤成瘤率及传代情况。实验方案经中国人民解放军第三军医大学动物实验伦理委员会批准(批准号为AMUWE2020016)。 结果与结论：①组织悬液法肿瘤种植时间(75.70±11.16) s较组织块法肿瘤种植时间(100.80±9.21) s明显缩短(P=0.00)；②组织悬液法成瘤率95%显著高于组织块法成瘤率60%(P < 0.05)，肿瘤体积显著大于组织块法(P < 0.05)；③组织悬液法传代成功率95%显著高于组织块法传代成功率65%(P < 0.05)；④结果说明，组织悬液法建立兔VX2皮下肿瘤模型与瘤块法相比，更简单高效。 ORCID: 0000-0002-1281-4437(刘娅) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

移植性鳞癌兔模型的建立及生物学特征

背景：兔VX2荷瘤目前已广泛应用于全身多个器官肿瘤动物模型的建立,但在耳郭建立鳞癌动物模型至今少有报道。 目的：采用2种不同移植瘤方法建立稳定的兔耳VX2移植瘤模型,并对所建肿瘤模型的生物学特性进行观察和比较。 方法：将新西兰大白兔分别用瘤细胞悬液注入法和瘤组织块切开植入法移植于兔耳皮下,观察和比较 2种方法所建立的模型的肿瘤生长状况、成瘤率和自发转移发生率。 结果与结论：瘤细胞悬液注入组和瘤组织块植入组的成瘤率分别为73.3%和50%,差异有显著性意义(P < 0.05)。局部淋巴结转移率分别为75%和86%。两种方法建立的兔VX2鳞癌移植瘤模型中,组织呈浸润性生长,瘤细胞核深染,分裂相多见,并呈癌巢排列的符合鳞状细胞癌特征。证实,瘤细胞悬液注入法和瘤组织块切开植入法建立的移植瘤模型均较接近人鳞癌自然生长过程。瘤细胞悬液注入法建立的动物模型,因成瘤率和转移率高,更适合于鳞癌研究。     

超声引导下经皮穿刺两种兔VX2肝肿瘤模型的建立及超声观察

目的 比较两种不同的兔VX2肝肿瘤模型的建立方法,评价超声在监测肿瘤生长的价值.方法 使用VX2瘤组织悬液及瘤组织块在超声引导下分别对两组共30只新西兰兔进行接种,比较不同植瘤方式肿瘤的生长特点.常规超声监测肿瘤生长并与病理检查进行相关性分析.结果 超声引导下经皮穿刺瘤组织块种植组与混悬液注射组成瘤率分别为66.7%(16/30)和26.7%(8/30).两组兔子原位成瘤共28个;肿瘤多为等回声,比较清楚,部分可见声晕;超声检查诊断符合率为85.7%(24/28).超声对肿瘤平均径线的测值与病理测值相关性高,能准确地反映肿瘤的生长状态.结论 使用超声引导下经皮穿刺瘤块接种法比组织混悬液注射法模型制作成瘤率高、模型更稳定.超声能准确监测种植肿瘤的生长,可为临床利用该模型来评价诊治肝癌的新疗法的疗效提供有效监测方法.     

以改良方法建立兔VX2肝癌模型

背景：兔VX2肝癌模型肿瘤呈膨胀性浸润性生长,血供丰富,具有与人类肝细胞癌极为相似的病理学及影像学特征,是较理想的用于影像实验研究的肝癌模型。 目的：建立VX2兔肝癌模型,比较开腹建立兔VX2肝癌模型的两种不同方法的优劣。 方法：将30只新西兰白兔随机分为 2 组,传统开腹法组开腹直接包埋肿瘤颗粒,改良开腹包埋法组开腹穿刺注入肿瘤颗粒。比较两种不同植瘤方式肿瘤的生长特点,用超声监测肿瘤生长。 结果与结论：两组接种成瘤率均为100%;单发率分别为50%、90%;异位种植率分别为50%、10%,均差异有显著性意义(P < 0 .05)。建模后2周内死亡率分别为33%、0,差异有显著性意义(P < 0.05)。结果证实,改良开腹包埋法对肝组织的损伤小,手术时间短,重复性好、模型性质稳定,是可推荐的建立兔肝癌模型方法。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

采用组织块移植法快速建立裸鼠原位骨肉瘤模型

背景：骨肉瘤细胞起源于间叶组织这一特点使得骨肉瘤动物模型的构建存在较多困难,进展缓慢的问题。 目的：采用组织块移植法建立裸鼠原位骨肉瘤模型,并观察和评价其生物学特性。 方法：选用SPF 级 6 周龄裸鼠15只,将制备好的MG-63 骨肉瘤细胞悬液注射到裸鼠右前肢腋下,成瘤后连续传 3 代,待肿瘤生长稳定后将瘤块组织移植到裸鼠下肢胫骨髓腔内,评价其生物学特性,采用X射线观察裸鼠成瘤率和成瘤特点。并以正常裸鼠5只做对照。 结果与结论：15只裸鼠造模过程顺利,造模后通过观察1只成瘤失败,成瘤率为93%;造模后观察发现采用组织块移植法三四周可见裸鼠下肢局部肿瘤状组织形成,四五周后X射线观察可见裸鼠胫骨中上段出现不明显的溶骨以及瘤样骨形成;骨肉瘤模型组碱性磷酸酶的表达水平明显高于正常对照组(P < 0.01)。数据表明采用组织块移植法进行裸鼠原位骨肉瘤造模,其造模方法简单,成瘤率高,瘤体生长速度快,对骨皮质及周围软组织的破坏力较强,接近临床骨肉瘤患者的实际情况。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程      

超声波联合电场治疗肿瘤的研究

目的：研究低强度、频率可调的电场对兔肝VX2肿瘤细胞增殖的效应及低电场辐照对HIFU疗效的影响。方法：新西兰大白兔100只随机分为5组，一组为对照，其余四组为治疗组；兔肝VX2肿瘤细胞株活化、培养、传代后接种于兔肝脏。结果：治疗组的肝肿瘤生长速度明显地低于对照组，治疗组的肝肿瘤经超声治疗的时间缩短，其存活时间均长于对照组。结论：一定强度的低频电场能够有效地抑制肿瘤细胞的生长，并能提高肿瘤细胞对超声的敏感性.     

VX2肿瘤种植于肾静脉上下建立的兔下腔静脉模型*

背景：目前,临床上对恶性肿瘤侵犯肾静脉以上、以下的下腔静脉处理原则及方式还有争议,而类似的动物模型尚少见文献报道。 目的：分别建立VX2肿瘤侵犯肾静脉以上、以下的下腔静脉的动物模型,观察并对比分析其生长,以及对下腔静脉和腹主动脉的影响。 方法：将24只实验兔随机摸球法均分为肾静脉以上组和肾静脉以下组,分别将VX2肿瘤组织块种植在兔肾静脉以上、以下的下腔静脉附近软组织内,每周在超声下观察肿瘤的大小,下腔静脉和腹主动脉管径大小,对周围组织的侵犯情况。 结果与结论：所有肿瘤均种植成功。两组肿瘤大小与生长时间均呈显著正相关(r1=0.894,r2=0.879),下腔静脉管径及腹主动脉管径与肿瘤大小均显著负相关(r3=-0.663,r4=-0.834;r5=-0.826,r6=-0.870)。两组肿瘤大小变化差异无显著性意义    (P=0.293> 0.05)。在观察期末,肾静脉以上组下腔静脉管狭窄不到50%,肾静脉以下组下腔静脉管已完全闭塞,且有效避免了对腹主动脉的压迫(狭窄不到50%),结果说明VX2肿瘤种植于肾静脉以下可以得到较理想的动物模型。 关键词：下腔静脉;VX2瘤;兔;肿瘤大小;动物模型 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.023     

兔VX2肿瘤细胞系的建立及其生物学特性的观察

目的建立兔VX2肿瘤细胞系,观察其生物学特性。方法采用小块法对兔VX2肿瘤进行原代培养,体外传代观察,传代40次以上对培养细胞进行形态学观察、组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、兔及裸鼠移植。结果新建立的兔VX2肿瘤细胞,呈多角形、短梭形,电镜下细胞内可见张力纤维、细胞间可见桥粒,细胞角蛋白阳性,体外连续培养10个月,传代70次以上,细胞倍增时间为34．5h,细胞周期测定G,期为69．3％,G：期为5．6％,S期为25．1％。染色体为亚三倍体核型,众数为58～62条。同种移植成瘤率100％,裸鼠移植成瘤率100％,无支原体污染。结论兔VX2肿瘤细胞系来源于兔鳞状细胞癌,可用于兔（较大动物）的肿瘤实验研究。     

碳包铁纳米晶的制备及其结合表阿霉素的相关实验研究

目的： 制备碳包铁纳米晶（CCIN），并检测其物理、化学性质，考察其在兔肝脏移植肿瘤内的分布，同时研究其吸附EADM的性能及载药CCIN对肝癌细胞株（HepG-2）的抑制作用。方法： 采用碳弧法制备CCIN，通过透射及扫描电镜和X 射线衍射了解其形貌、结构及成分性质；经皮B超引导以及经肝动脉插管分别将CCIN注入兔VX2肝肿瘤模型，取注药肝肿瘤组织做组织病理并做细胞电镜观察CCIN的分布；观察CCIN对EADM的吸附；并用MTT法检测载EADM的CCIN对HepG-2细胞的毒性。结果： CCIN平均粒径达到20-100 nm，石墨碳层中完全包裹入铁纳米颗粒、粒子不含铁的碳化物和氧化物；CCIN可被VX2肿瘤细胞以及肿瘤间质细胞吞噬；CCIN吸附EADM符合langmuir等温吸附曲线，饱和度为160 mg/g；MTT示CCIN与EADM混悬液对HepG-2细胞的抑制作用于72 h内比相应单纯的EADM抑制作用低，且随CCIN的比例升高抑制作用相应下降。结论： CCIN物理、化学性质稳定，可吸附较大量的EADM，能被肿瘤细胞及间质网状内皮系统吞噬，CCIN潜在的对EADM的缓释作用可能有利于EADM长期持续作用于肿瘤细胞，并减低可能引起的全身毒性。     

内皮祖细胞在膀胱细胞外基质上的生长及分化

背景：传统的组织工程膀胱支架材料本身无血管结构,植入体内后面临血管化不足的问题。 目的：观察内皮祖细胞与膀胱细胞外基质的生物相容性。 方法：分离培养兔内皮祖细胞,种植于兔膀胱细胞外基质上与其复合培养。将复合生长材料植入兔背部皮下检测其组织相容性。 结果与结论：兔内皮祖细胞能够在膀胱细胞外基质表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好。内皮祖细胞-膀胱细胞外基质植入兔体内后1周时,可见材料周围炎症反应明显,粘连严重,出血较多;苏木精-伊红染色可见组织中较多炎性细胞浸润,胶原及弹性纤维排列松散。植入后8周时可见材料已降解成碎细丝状,与周围组织融合生长在一起,但质地略脆,易出血;苏木精-伊红染色可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应,胶原及弹性纤维排列紧密并且有新生血管长入其中。结果表明内皮祖细胞与膀胱细胞外基质具有良好的相容性,复合培养物与体内组织具有良好的相容性。     

Androgen receptor expression in archival human breast tumors

Hormone receptors play a major role in growth and hormonal therapy of breast and prostate tumors. Quantitative results from the ligand binding assays cannot determine heterogeneity in receptor expression nor can they discriminate between expression of the stromal and the tumor cells. Availability of antibodies to hormone receptors has led to the development of immunohistochemistry as a standard method for monitoring of hormone receptor expression under a microscope. However, this method is based on examination of a small number of cells. Laser flow cytometry has been extensively used for monitoring of receptor expression in human liquid tumors. As most of the hormone receptor expression is nuclear, we have developed methods for flow cytometric analysis of receptor expression in nuclei isolated from enzyme treated paraffin sections. The present report based on gated analysis of androgen receptor expression in nuclei isolated from archival formalin fixed/paraffin embedded breast tumors shows that receptor expression in aneuploid sub-populations is greater than that of the diploid cells.     

Correlation of two argyrophilic nucleolar organizer region counting methods with the Ki-67 labeling index in uterine smooth muscle cell tumors

The argyrophilic nucleolar organizer regions (AgNOR) are silver stained granules that are thought to correlate with cell proliferation activity. Two AgNOR counting methods: the mean AgNOR count (mAgNOR, the mean number of AgNOR granules in 100 cells) and the AgNOR proliferative index (pAgNOR, the percentage of cells exhibiting five or more AgNOR granules per nuclei) have been proposed. In this study, the two counting methods were applied to 58 cases of normal uterine corpus and uterine corpus tumors and were compared with the Ki-67 labeling index (Ki-67 LI) using MIB-1 monoclonal antibody and other histopathological criteria. Notable differences in the number of AgNOR and the Ki-67 LI were observed between benign and malignant smooth muscle tissue. Histopathologic features are well correlated to the proliferative activity of tumors. Although the most reliable method of predicting malignant potential cannot be determined, the methods outlined by this study are thought to be highly useful in assessing proliferative activities.     

实体瘤间期细胞制备技术对荧光原位杂交效果的影响

目的将改进的实体瘤间期细胞制备方法应用于荧光原位杂交,为实体瘤间期细胞的制备建立技术平台。方法采用随机引物法标记3号染色体着丝粒探针,分析实体瘤不同间期细胞制备技术对荧光原位杂交效果的影响。结果6种制片方法各具特点,根据其在应用方面有不同侧重,可采用不同制片方法。胶原酶法制片的荧光原位杂交效果最佳。对于冰冻组织或较小的组织,可采用印片法制片。结论适当的制片方法,结合荧光原位杂交,为实体瘤的染色体研究和诊断应用奠定了技术基础。     

TUNEL法与MTT法比较分析检测肿瘤细胞药敏

本文用细胞凋亡法 (TUNEL法 )和MTT法在体外对白血病细胞株细胞、肝癌腹水中肿瘤细胞及实体瘤中分离出的肿瘤细胞对 8种化疗药物的敏感性进行了检测。对白血病细胞株 (HL 6 0与Molt4) ,TUNEL法和MTT法所测得的结果高度一致 ;对肝癌腹水中肿瘤细胞的药敏结果表明两法所得结果基本一致 ,而对实体瘤中分离出的肿瘤细胞同时用两法检测药敏的实验结果有较大差异 ,统计分析表明TUNEL法优于MTT法。提示在细胞高度均一时 (如白血病细胞株细胞 )TUNEL法和MTT法均可准确反映药敏情况 ,而随着所分离的肿瘤细胞纯度降低 ,MTT法难以准确反映药敏实验结果。表明TUNEL法由于可直接在荧光显微镜下观察发生凋亡的肿瘤细胞 ,因此可减少混杂的组织细胞对结果的干扰。     

In vitro validation of an ultra‐sensitive scanning fluorescence microscope for analysis of Circulating Tumor Cells

Analysis of circulating tumor cells (CTC) holds promise of providing liquid biopsies from patients with cancer. However, current methods include enrichment procedures. We present a method (CytoTrack^®), where CTC from 7.5 mL of blood is stained, analyzed and counted by a scanning fluorescence microscope. The method was validated by breast cancer cells (MCF‐7) spiked in blood from healthy donors. The number of cells spiked in each blood sample was exactly determined by cell sorter and performed in three series of three samples spiked with 10, 33 or 100 cells in addition with three control samples for each series. The recovery rate of 10, 33 and 100 tumor cells in a blood sample was 55%, 70% and 78%, percent coefficient of variation (CV%) for samples was 59%, 32% and 18%, respectively. None of the control samples contained CTC. In conclusion, the method has been validated to highly sensitively detect breast cancer cells in spiking experiments and should be tested on blood samples from breast cancer patients. The method could benefit from automation that could reduce the CV%, and further optimization of the procedure to increase the recovery.     

乳腺肿瘤超声图像中感兴趣区域的自动检测

由于斑点噪声、伪影以及病灶形状多变的影响,乳腺肿瘤超声图像中肿瘤区域的自动检测以及病灶的边缘提取比较困难,已有的方法主要是由医生先手工提取感兴趣区域(ROI)。本研究提出一种乳腺肿瘤超声图像中感兴趣区域自动检测的方法,选用超声图像的局部纹理、局部灰度共生矩阵以及位置信息作为特征,采用自组织映射神经网络进行分类,自动识别乳腺肿瘤区域。对包含168幅乳腺肿瘤超声图像的数据库进行识别的结果表明:该方法自动识别ROI的准确率达到86.9%,可辅助医生提取肿瘤的实际边缘以及进一步诊断。     

基于模糊数的乳腺肿瘤超声图像边缘快速提取方法

乳腺肿瘤边缘的准确提取在临床上对肿瘤良恶性的判别有重要的意义。本文利用三角模糊数的概念，采用重叠式窗口从图像中得到与不同隶属度对应的模糊数，从而建立以步进方格（marching square）为基本单元的模糊数平面；通过区间阈值得到步进方格上的映射区间，根据步进方格算法将对应映射区间着色绘制出肿瘤的边界。分别对恶性和良性肿瘤超声图像进行边缘提取。结果显示，本文方法相比一般提取边缘的算法具有快速准确提取乳腺肿瘤边缘的特点。实验证明本方法可以有效用于乳腺肿瘤超声图像边缘提取。     

基于纳米材料与纳米技术的肿瘤靶向治疗

结合多学科的力量、特别是借助新技术的发展对肿瘤进行有效治疗,是目前肿瘤治疗研究方面的一个重要趋势。本文在肿瘤靶向治疗的定义和对主要几类方法说明的基础上,重点介绍和分析纳米材料和纳米技术的被动靶向、场致靶向和分子靶向等方面的最新研究进展,并讨论存在的一些问题和今后可能的努力方向。     

Importance of orthotopic implantation for human tumors as model systems: relevance to metastasis and invasion

Transplantation of human tumors into immunodeficient athymic nude mice has become an important experimental approach to study the biology and the treatment of human cancer. Most human tumor xenograft experiments have employed subcutaneous injection procedures, but the main limit of this technique is the lack of metastasis from the subcutaneous site. The possibility of producing experimental metastasis by intravenous injection of cells in the animals has been known for a long time, and it has been recently reported that tumorigenic properties and metastatic ability of human cancer can be altered by transplantation of the tumor into its organ or tissue of origin in the recipient animals (orthotopic transplantation). In this paper we review (1) the principal techniques of orthotopic injection of most solid tumors, (2) the most recent techniques to achieve experimental metastases, and (3) the methods for preparing tumor cell suspensions from human surgical specimens suitable for transplantation into animals. These animal models should be used for a more appropriate evaluation of new antitumor treatments including the ones targeted to inhibit metastatic spread.