痘苗病毒在疫苗释放中的应用

痘苗诱导人体产生免疫力的机理以及以前接触痘苗对非痘苗抗原免疫应答的影响方面资料的缺，阻碍了痘苗载体疫苗的构建。近来的研究讨论了该病毒在人体中诱导的免疫应答以及重组病毒诱导对不同感染途径的不同病原体的免疫力的能力。     

核酸疫苗——未来的疫苗

随着分子免疫学与基因治疗的进一步开展 ,新一代疫苗也随之涌现。这包括 :合成肽疫苗 ,重组病毒疫苗及核酸疫苗 ,其中核酸疫苗最为引人注目。核酸疫苗是指由编码能引起保护性免疫反应的病原体抗原的基因片段和载体质粒构成的重组质粒 ,直接导入动物细胞内 ,从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白 ,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答 ,达到免疫的目的。本文对核酸疫苗的构建、作用机制及应用前景作一简要的概述。1 核酸疫苗的构建　核酸疫苗的构建方法是将目的基因片段插入载体。用于构建核酸疫苗的载体主要有质粒和病毒。用质粒载体构建…     

含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒的构建及鉴定

目的 构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒疫苗,并初步评价其免疫效果.方法 将HIV-1gp120基因抗原决定簇插入到脊髓灰质炎病毒表达载体PSVA14中,构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒,通过脂质体介导法将重组脊髓灰质炎病毒转染入Hela细胞,通过PCR,酶切鉴定等方法对重组脊髓灰质炎病毒载体进行了表达鉴定,并通过氯仿-PEG/NaCl-氯仿三步法纯化重组脊髓灰质炎病毒,利用免疫酶法,Western blot方法对重组脊髓灰质炎病毒作了初步的免疫效果的研究.结果 构建的重组脊髓灰质炎病毒在Hela细胞内可以正确的表达gp120基因,并能感染293细胞而不产生细胞病变,并能随293细胞的传代被复制克隆.结论 重组脊髓灰质炎病毒能正确的表达gp120基因,并能感染人正常细胞,初步证实了其生物安全性.     

牛痘病毒在新疫苗发展中的作用

牛痘病毒是一种具有广泛宿主传染性和大容量DNA的有效表达载体。这个载体特别有利于鉴定体液和细胞介导免疫的靶抗原。随着基因表达水平的提高,获得了较强的牛痘启动子或通过将噬菌体T7 RNA多聚酶基因插入牛痘基因组,可在哺乳动物细胞中合成用作亚单位疫苗的蛋白质。为了制备重组活疫苗,人们正致力于通过产生毒力的基因失活或在牛痘基因组中引入人淋巴因子基因使牛痘病毒进一步减毒。     

基因免疫使用的腺相关病毒载体

基因免疫开创了疫苗研究的新纪元，这种免疫方法提供了稳定而且长期不断的蛋白抗原来源。DNA疫苗制备简单，没有明显的毒性或宿主免疫力并能有效诱导体液和细胞免疫。使用病毒载体的DNA疫苗在一些临床前实验模型中具有较高的基因转移效率和诱导保护性与治疗性免疫作用。本文论述了腺相关病毒在疫苗研制中的应用潜力。     

基因疫苗黏膜免疫及其机制的研究进展

基因疫苗是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的载体质粒上,然后将重组质粒直接导人人或动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答.以达到预防疾病的目的.现已证实基因疫苗的有效性及安全性,但存在人体不能对基因疫苗进行有效的吸收以及机体对抗原的免疫耐受等不足,使其在人体中的免疫效果不佳.近年来,对基因疫苗的免疫策略、免疫效果及作用机制已进行了大量的研究.肌肉注射法因外源基因在体内的表达水平较低,免疫效果不够理想.基因枪法、电穿孔等递送技术的发展均显著提高了基因疫苗的活体递送效率,使基因疫苗免疫具有较强的诱导免疫应答的能力[1-2].     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

本文介绍了近年来呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）疫苗的研究状况。重组亚单位疫苗安全，但免疫原性有待提高；减毒活疫苗能诱导全面免疫应答，若合理减毒，似可成为有希望的候选疫苗。     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)可引起严重下呼吸道感染疾病, 是婴幼儿、老年人及免疫功能低下人群感染呼吸道疾病的主要病原体, 在全球范围内造成严重的社会负担。自20世纪50年代发现至今已有60多年, 虽然进入临床试验的疫苗很多, 但仍未有上市的疫苗, 迫切需要开发一种安全有效的RSV疫苗。此文将从RSV减毒活疫苗、病毒载体疫苗、重组蛋白疫苗以及核酸疫苗等方面进行论述。     

重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用

目的 研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4-1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus-16,HPV16)蛋白疫苗(HPV16蛋白疫苗)免疫效果的影响.方法 对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点定向插入pET28a表达载体.将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达.用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构.用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响.同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响.结果 密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在.可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构.纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖.与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021).结论 r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力.     

HMGB1对HPV16型重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响及机制研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分子与人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7重组腺病毒载体疫苗免疫效果的关系及机制。方法 通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV重组腺病毒载体疫苗的同时,给与HMGB1特异性拮抗剂HMGB1 A box注射,开展肿瘤抑制试验、小鼠免疫状态观察、肿瘤相关信号检测等研究。结果 A box蛋白与疫苗联用,即可显著降低模型小鼠HMGB1血清水平,抑制肿瘤组织中NF-kB的mRNA高表达,提高疫苗的抗肿瘤活性。同时,它还可减少IL-4、促进IFN-g产生,使体内免疫平衡由Th2向Th1偏移。虽然A box对于Bax的影响并不显著,但在接种疫苗并注射A box蛋白后,由肿瘤引起的NF-kB、Bcl-2、c-IAP2、VEGF、MMP-9的表达提高、Bax表达降低均得到显著扭转。结论 HMGB1分子可以削弱HPV重组腺病毒载体疫苗的免疫效果,其机制可能是HMGB1在调节免疫平衡状态及控制肿瘤细胞的凋亡、浸润、转移等多层面均能参与并发挥重要作用。     

疫苗0～2 ℃储存挑战性实验

目的  探讨冻干制剂乙型脑炎减毒活疫苗和液体制剂23价肺炎球菌多糖疫苗0～2 ℃条件下存放对其效价的影响。方法  将冻干制剂乙型脑炎减毒活疫苗和液体制剂23价肺炎球菌多糖疫苗存放于0～2 ℃条件下一定时间后,与存放于2～8 ℃规定条件的制品进行疫苗效价的比较。结果  1人份和5人份乙型脑炎减毒活疫苗在0～2 ℃条件下分别存放17 h 20 min和18 h 55 min,病毒滴度均符合5.7～7.1 lgPFU/ml的质量标准,且与存放于2～8 ℃规定条件的同批次疫苗比较,t值分别为0.26和0.28,P值均大于0.05,差异无统计学意义;23价肺炎球菌多糖疫苗在0～2 ℃条件下存放21 h 50 min,23个型别的多糖含量均符合35～65 μg/ml的质量标准,且与存放于2～8 ℃规定条件的同批次疫苗比较,t值为0.01~2.25,P值均大于0.05,差异无统计学意义。结论  冻干制剂乙型脑炎减毒活疫苗和液体制剂23价肺炎球菌多糖疫苗存放在0～2 ℃条件下的一定时间内,疫苗效价仍符合质量标准。     

基于杆状病毒表达系统的流感病毒样颗粒疫苗研究进展

流感疫苗是目前应对流感最有效的措施,传统疫苗包括全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和减毒活疫苗,近年来逐渐成为研发趋势的有重组亚单位疫苗、核酸疫苗、活病毒载体疫苗等。病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗作为特殊形式的亚单位疫苗,具有生产迅速、安全性高、免疫原性较高等优势。VLP可以高效地诱发体液免疫与细胞免疫,且可经多种途径接种。目前已有多种表达系统用于制备VLP,其中应用最为广泛的是杆状病毒表达系统。此文综述了流感病毒VLP的类型、组装、抗原选择、免疫途径以及流感病毒VLP疫苗在杆状病毒表达系统中的研究进展。     

腺病毒载体在病毒性疫苗中的研究进展

基于腺病毒载体安全性好、诱导体液和细胞免疫效率高、容纳外源基因片段大、易于大规模培养等优点,其为构建新型疫苗提供了新的思路与手段.此文简要综述了腺病毒的生物学特性、腺病毒载体的构建策略、以腺病毒为载体构建病毒性疫苗的研究现状和目前存在的问题等,重点介绍了已经进入临床试验的腺病毒载体病毒性疫苗的研究进展.     

DNA vaccines against cytomegalovirus: current progress

The development of a vaccine for the prevention of primary cytomegalovirus (CMV) infection is a major public health priority. Live attenuated virus, recombinant viral vector, recombinant protein and peptide vaccines have been studied as potential vaccine candidates. In recent years, DNA vaccination strategies have been developed for many pathogens, including CMV. This review aims to bring together many aspects of this relatively new vaccine technology as applied to current research into the development of vaccines against CMV.     

mRNA疫苗作用机制的研究进展

信使RNA（messenger RNA,mRNA）疫苗属于第三代疫苗,即核酸疫苗,具有细胞内表达速度快、有效性和安全性高、反应速度快、易规模化扩大和极具成本效益比等特点,在近30年中取得了突飞猛进的发展,越来越多的证据表明可以用合理的方法来提高这类现代疫苗的有效性和安全性。2020年暴发的由新型冠状病毒引起的新型冠状病毒肺炎大流行给全世界带来了巨大的灾难,导致了过亿例感染和数百万例死亡,疫苗被认为是阻断传播和控制疾病的唯一希望。在所有的疫苗种类中,mRNA疫苗极快的研发速度和有效性引起了广泛的关注。此综述就mRNA疫苗的体内摄取和抗原表达、固有免疫的作用、适应性免疫的激活、mRNA疫苗递送系统以及注射途径的效应等角度进行阐述,以期为mRNA疫苗的设计提供有价值的参考。     

病毒类生物制品的滴度检测方法研究进展

病毒类生物制品包括病毒性疫苗以及用于基因治疗和肿瘤治疗的各种病毒载体药物,其研发和生产过程需要建立准确而快速的检测方法,用于评价工艺效果。滴度的测定是检测病毒类生物制品活  性和效力的直接数据佐证,也是评价生物制品质量的关键指标之一。本文主要对噬斑法、半数感染剂量测定法、荧光定量PCR技术、病变灶免疫化学法、报告基因法等病毒滴度检测方法的原理、特点及研究进展进行综述。     

The Science is There: Key Considerations for Stabilizing Viral Vector-Based Covid-19 Vaccines

Once Covid-19 vaccines become available, 5–10 billion vaccine doses should be globally distributed, stored and administered. In this commentary, we discuss how this enormous challenge could be addressed for viral vector-based Covid-19 vaccines by learning from the wealth of formulation development experience gained over the years on stability issues related to live attenuated virus vaccines and viral vector vaccines for other diseases. This experience has led –over time– to major improvements on storage temperature, shelf-life and in-use stability requirements. First, we will cover work on ‘classical’ live attenuated virus vaccines as well as replication competent viral vector vaccines. Subsequently, we address replication deficient viral vector vaccines. Freeze drying and storage at 2–8 °C with a shelf life of years has become the norm. In the case of pandemics with incredibly high and urgent product demands, however, the desire for rapid and convenient distribution chains combined with short end-user storage times require that liquid formulations with shelf lives of months stored at 2–8 °C be considered. In confronting this “perfect storm” of Covid-19 vaccine stability challenges, understanding the many lessons learned from decades of development and manufacturing of live virus-based vaccines is the shortest path for finding promising and rapid solutions.     

基于神经氨酸酶的流感疫苗研究进展

当前广泛使用的季节性流感疫苗的主要抗原成分包括2个重要的流感病毒表面糖蛋白,血凝素和神经氨酸酶(neuraminidase,NA).研究表明NA抑制性抗体虽然不能防止流感病毒感染,但能有效抑制病毒扩散,因此基于NA设计的疫苗开始受到重视.NA的相对保守性也使此类疫苗有潜力成为广谱流感疫苗.目前基于NA的多种形式流感疫苗,包括DNA疫苗、病毒样颗粒疫苗、重组载体疫苗、重组亚单位疫苗以及联合其他流感病毒蛋白的疫苗等,在动物模型中均表现出诱导交叉保护的能力.此文综述了近年来发表的有关基于NA的流感病毒疫苗的研究.     

流感病毒神经氨酸酶及其抑制抗体检测方法的研究进展

流感病毒表面含有丰富的神经氨酸酶(neuraminidase,NA),其以多种方式参与病毒复制,并促进病毒颗粒从受感染的细胞中释放和传播。NA与流感疫苗的免疫效果有关,NA抑制（NA inhibition,NI）抗体在免疫应答中也起到重要的作用。由于目前生产工艺、疫苗类型等原因,疫苗中的NA含量/活性存在差异,如何准确检测疫苗中的NA含量/活性是现在亟待解决的问题。相关检测方法的开发更加有利于全面分析流感疫苗的有效成分,为评估流感疫苗保护效果提供更多的手段。此文就最新的流感病毒NA含量/活性和NI抗体的检测方法进行综述。     

结核病疫苗研究进展

目前结核病疫情非常严峻,而唯一可用的疫苗卡介苗效果并不理想.因此,需要研发更安全有效和实用价廉的新型疫苗.此文综述了目前正在研发的新型结核病疫苗的研究进展,这些疫苗包括重组卡介苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗和病毒载体疫苗.