抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应

目的：探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用，及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法：常规培养肝癌细胞SMMC-7721，流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化；MTT法检测细胞毒性作用；流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果：（1）mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡，在1.89μg／ml浓度下可杀伤36％的细胞，增加mDRA-6浓度，凋亡作用无明显增加；（2）SMMC-7721细胞对阿霉素敏感，存在浓度依赖性；（3）阿霉紊与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用，2μg／ml的mDRA-6与40ng/ml的阿霉素联合杀伤印％SMMC-7721，Hoechst 33258染色和AnnexinV／PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论：mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡，阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。     

人工高表达LAIR-1对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1,LAIR-1)对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,探讨LAIR-1的表达在肝癌中的作用。以LAIR-1慢病毒表达载体(LV-LAIR-1)转染SMMC-7721细胞,建立稳定高表达LAIR-1的细胞株LAIR-1+SMMC-7721。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、Western blotting、RT-PCR和激光扫描共聚焦显微技术(laser scanning confocal microscopy,LSCM)等方法鉴定LAIR-1分子在SMMC-7721细胞的表达水平;采用CCK-8试剂盒、FITC Annexin V凋亡试剂盒和Transwell侵袭实验分别检测LAIR-1对SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。检测结果显示,经LV-LAIR-1转染的SMMC-7721细胞高水平表达LAIR-1分子;功能实验结果显示,与实验组细胞相比,LAIR-1的表达对细胞增殖无明显影响(P>0.05),但是能够明显促进细胞凋亡(P<0.05),并能够显著抑制细胞的侵袭能力(P<0.05)。上述研究结果提示,LAIR-1分子的表达可能是影响肝癌细胞生物学特性的一个重要因素。     

TNF-α及IL-1β促进肝癌细胞系SMMC-7721乙酰肝素酶表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)对人肝癌细胞系乙酰肝素酶(HPA)表达的影响。方法将肝癌细胞系SMMC-7721分为对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞分别施加TNF-α、IL-1β干预,设浓度梯度和时间梯度。RT-PCR半定量法测定细胞HPAmRNA含量,Western blot法测定细胞胞质HPA蛋白含量。结果不同浓度的TNF-α和IL-1β作用不同时间后,SMMC-7721细胞HPAmRNA表达较对照组逐渐增高,且在TNF-α浓度为104~106U/L、IL-1β浓度为0.5~5.0μg/L范围内存在浓度依赖性(P<0.05),无时间依赖性。不同浓度的TNF-α、IL-1β作用不同时间对SMMC-7721细胞胞质HPA蛋白表达亦有促进作用,其随药物浓度变化的趋势与HPAmRNA的表达结果一致,且该促进作用存在时间性差异(P<0.05)。结论TNF-α及IL-1β能够在核酸和蛋白水平上促进肝癌细胞HPA的表达。     

NK细胞对不同人肝癌细胞株的杀伤作用

目的: 观察自然杀伤(NK)细胞对不同肝癌细胞株的体内外抑瘤作用,并检测肝癌细胞MHC-I类链相关蛋白(MIC蛋白)的表达。方法: 抽取志愿者外周血50 mL,分离单个核细胞,置入NK细胞试剂盒行孵化及逐级扩增。计算NK细胞对人白血病细胞株K562及人肝癌细胞株BEL7402、HepG2、SMMC7721的杀伤率。接种建立人肝癌细胞株裸鼠移植瘤,进行NK细胞瘤内及瘤周注射;计算各组裸鼠移植瘤的体积,绘制各组肿瘤生长曲线;处死裸鼠,称瘤重,计算NK细胞对各组肿瘤抑制率。检测人肝癌细胞表面 MIC蛋白表达。结果: NK细胞对K562细胞杀伤最强,BEL-7402次之,SMMC-7721细胞株杀伤敏感性最低。裸鼠抑瘤实验结果显示NK细胞对于BEL-7402细胞株的抑瘤效果最好,而对于SMMC-7721细胞株的抑瘤效果较差。BEL-7402及HepG2细胞株表面表达MIC,而SMMC-7721则很少表达。结论: NK细胞对于不同人肝癌细胞株体内外抑瘤作用不同,其差异可能和不同肝癌细胞株MIC的表达有关。     

VCC－1真核表达载体的构建及肝癌细胞SMMC7721稳定转染株的建立及鉴定

目的:构建pcDNA3.1(一)/VCC-1真核表达载体并将其稳定转染到肝癌细胞系SMMC-7721中.方法:以SMMC7721细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增VCC-1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段与pMD19-T载体连接后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(一)中.重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导人到人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用RTPCR及Western blot检测转染前后该细胞株VCC-1基因的表达.结果:pcDNA3.1(一)/VCC-1经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经RT-PCR及Westcm blot检测,重组质粒转染株的VCC-1基因的表达水平高于对照组,证实VCC-1基因稳定转染到SMMC-7721细胞中并得到表达.结论:成功地建立了人基因VCC-1的肝癌细胞SMMC-7721稳定转染株,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础.     

MYH9在人肝癌组织中的表达及其对肝细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨非肌肉肌球蛋白重链(MYH9)在肝癌组织中的表达及通过沉默MYH9基因对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及凋亡的影响。方法收集50组人肝癌组织及癌旁组织,选用人肝癌细胞系SMMC-7721和Hep G2及人正常肝细胞系LO2,免疫组织化学方法及Western blot检测肝癌组织及癌旁组织中MYH9蛋白的表达,Western blot检测SMMC-7721、Hep G2及LO2中MYH9蛋白的表达;将MYH9 siRNA转染SMMC-7721,CKK8法及流式细胞术检测沉默MYH9对肝癌细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果 MYH9蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁(P0.05);MYH9蛋白在SMMC-7721及Hep G2中的表达均明显高于LO2(P0.05);沉默MYH9基因可抑制细胞增殖(P0.001),促进细胞凋亡(P0.05)。结论 MYH9蛋白在肝癌组织的表达显著高于癌旁组织;MYH9低表达能有效抑制肝癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

TAZ/WWTR1影响肝癌细胞SMMC-7721的侵袭、迁移能力

目的 探讨转录共激活子TAZ/WWTR1对肝癌细胞株SMMC-7721侵袭、迁移的影响,为寻找原发性肝细胞癌的防治提供理论基础.方法 TAZ基因靶向干扰RNA的设计合成:从TAZ的信使RNA(mRNA)中挑选出合适的siRNA靶点序列作为候选,序列通过基因BLAST,得出三对siRNA;TAZ过表达质粒的构建:从SMMC-7721细胞中提取TAZ基因,使用pCMV5-HA为载体构建人TAZ过表达质粒;细胞转染:以LipofectaminTM2000为载体,将TAZ siRNAs转入SMMC-7721细胞中,应用实时RT-PCR和Western blotting检测TAZ的表达情况,筛选出于扰效果最佳的siRNA,并进一步比较转染了TAZ siRNA组与转染了阴性对照组的SMMC-7721细胞侵袭、迁移能力的变化;构建稳定过表达TAZ基因的人肝癌细胞(SMMC-7721)系:用LipofectaminTM2000将TAZ过表达质粒转染入SMMC-7721细胞中,使用G418筛选出稳定高表达TAZ的细胞系,应用Transwell侵袭实验观测TAZ稳定过表达的SMMC-7721细胞的侵袭、迁移能力.结果 三对siRNA均可使TAZ表达下调,其中siRNA-1效果最佳;与阴性对照组相比,转染了TAZ siRNA-1的SMMC-7721细胞的侵袭、迁移能力下降;经过鉴定确定为稳定过表达TAZ的SMMC-7721细胞的侵袭、迁移能力相比于阴性对照组显著升高.结论 本研究通过靶向干扰和稳定过表达TAZ基因的方法证实TAZ能够影响人肝癌细胞株SMMC-7721的侵袭、迁移能力,为揭示原发性肝癌恶性转移的发病甚至启动机制提供一个崭新思路.     

汉黄芩素提高人CD3AK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究和机理探讨

目的:观察汉黄芩素对人CD3AK细胞增殖及对肝癌细胞SMMC-7721杀伤活性的影响,并探讨其发生的机制。方法:分离健康者外周血PBMC;在体外用多种细胞因子联合诱导培养CD3AK细胞。收集培养第7天的CD3AK细胞给予不同浓度汉黄芩素诱导48 h:CCK-8法检测人CD3AK细胞增殖率;MTT法检测汉黄芩素对SMMC-7721细胞生长的影响;流式细胞术(FCM)检测汉黄芩素作用前后CD3AK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gr B)、CD107a的表达;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定汉黄芩素对CD3AK细胞杀伤肝癌细胞SMMC-7721活性;Western blot检测药物诱导前后CD3AK细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白表达。用transwell chambers小室进行药物诱导前后肝癌细胞SMMC-7721迁移率检测。划痕愈合实验观察药物诱导后肝癌细胞SMMC-7721生长融合情况。结果:汉黄芩素能明显促进CD3AK细胞增殖,汉黄芩素浓度为3.2 mg/L时,细胞增殖率比对照组(0 mg/L)高23%,两者比较有统计学差异(P0.05)。在汉黄芩素为3.2 mg/L时诱导的CD3AK细胞对靶细胞SMMC-7721杀伤活性最高(60.4%),与对照组(42.7%)比较差异有统计学意义(P0.05)。经汉黄芩素诱导后的CD3AK细胞PFP、Gr B、CD107a表达显著高于对照组(P0.05)。汉黄芩素作用48h后的CD3AK细胞其ERK1/2蛋白表达较对照组均有所上调,浓度在12.5~0.8 mg/L时,ERK1/2蛋白表达高于对照组(P0.05)。经浓度为50、12.5、3.2、0.8、0.2mg/L汉黄芩诱导48 h后,肝癌细胞SMMC-7721通过transwell小孔细胞数以汉黄芩浓度为12.5 mg/L时最低、肝癌细胞SMMC-7721的融合率以3.2 mg/L时最低,与对照组比较有统计学意义(P0.05)。结论:汉黄芩素在一定浓度范围内能够促进CD3AK细胞增殖,增强其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤活性,抑制SMMC-7721细胞生长、迁移和细胞的融合。汉黄芩素促进CD3AK细胞增殖和功能改变可能与活化细胞ERK1/2蛋白,上调CD3AK细胞表面PFP、Gr B、CD107a的表达有关。     

CD80分子共刺激T细胞联合苯乙酸钠抗肿瘤的实验研究

目的:研究分化诱导剂苯乙酸钠处理肝癌细胞后,其对CD80(B7-1)分子活化的T细胞杀伤敏感性的变化。方法:将CD80共刺激的人T淋巴细胞与苯乙酸钠处理的肝癌细胞共同培养,用噻唑蓝法(MTT)检测T细胞粘附肿瘤细胞和杀伤肿瘤细胞活性,取上清测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果:苯乙酸钠处理肝癌细胞BEL-7402和SMMC-7721后,T细胞对其杀伤敏感性明显增加(P＜0.01),明显增加T细胞与肿瘤细胞之间的粘附性(P＜0.05)和T细胞产生TNF-α的能力(P＜0.05)。结论:苯乙酸钠处理肝癌细胞能增加T细胞对其杀伤活性。     

IL-37抑制体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨白细胞介素37(IL-37)对SMMC-7721肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 SMMC-7721肝癌细胞分为重组人IL-37(rh IL-37)处理组和对照组,处理组给予(50、100、200、500)ng/m L rh IL-37,对照组给予等体积培养液。CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,TranswellTM实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测信号转导子与转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的水平。结果 CCK-8实验结果显示rh IL-37可抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖;划痕实验结果证明rh IL-37抑制SMMC-7721肝癌细胞的迁移;TranswellTM实验结果显示,rh IL-37可抑制SMMC-7721细胞的侵袭。Western blot结果表明,rh IL-37处理可下调SMMC-7721细胞p-STAT3、MMP-2的水平。结论 IL-37可抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖、侵袭、迁移,可能与下调p-STAT3、MMP-2表达有关。     

miR-15a-5p抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖与迁移

目的:观察高表达的miR-15a-5p对人肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响。方法:化学合成加入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的miR-15a-5p寡聚核苷酸,并进行测序确认;利用pcDNA6.2-GW/EmGFP质粒构建miR-15a-5p真核表达载体,瞬时转染SMMC-7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR-15a-5p的表达;CCK-8法和台盼蓝染色活细胞计数检测SMMC-7721细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:设计的miR-15a-5p序列与寡核苷酸测序结果匹配达100%;真核表达质粒瞬转后人肝癌SMMC-7721细胞miR-15a-5p的表达量与对照组相比显著增加(P0.05);miR-15a-5p高表达SMMC-7721细胞的增殖能力与对照组相比均显著下降(P0.05);miR-15a-5p高表达组细胞迁移速度低于对照组。结论:高表达的miR-15a-5p可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和迁移能力。     

miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响

 目的: 研究微小RNA-141(miR-141)在人肝癌细胞和正常胎肝细胞中的表达,同时分析miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响。方法: 分别提取人肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702的总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141的表达。采用脂质体介导的转染方法分别将miR-141 mimic转染SMMC-7721细胞,将miR-141 inhibitor转染HL-7702细胞;MTS试剂盒和BrdU-ELISA检测细胞增殖能力,流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡率的变化。Transwell实验检测miR-141表达变化对细胞体外迁移能力的影响。结果: miR-141在SMMC-7721细胞中的表达较HL-7702细胞明显下降。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染25 nmol/L miR-141 mimic的SMMC-7721细胞中,细胞增殖速度减慢,S期细胞比例降低,凋亡细胞比例上升,细胞体外迁移能力下降;转染50 nmol/L miR-141 inhibitor的HL-7702细胞中,细胞增殖速度加快,S期细胞比例上升,凋亡细胞比例下降,细胞体外迁移能力增强。结论: miR-141在人肝癌细胞中表达下降,上调miR-141表达可抑制肝癌细胞体外增殖活性和迁移能力,影响细胞周期和凋亡。在肝癌发病进程中,miR-141可能扮演抑癌基因的角色。     

Grp78表达对人肝细胞癌细胞外信号调节激酶1/2活性和表达的影响

目的 通过检测葡萄糖调节蛋白78(Grp78)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2在肝细胞癌手术切除组织中的表达,并在SMMC-7721细胞中干预Grp78的表达,探讨Grp78对ERK1/2激酶的调控作用。 方法 应用免疫组织化学方法（IHC）和免疫印迹法检测47例肝细胞癌手术切除组织样本中Grp78,ERK1/2的表达和ERK1/2磷酸化水平;在高表达Grp78的肝细胞癌细胞系SMMC-7721中,通过用小RNA干扰Grp78的表达来探讨Grp78表达水平,改变对ERK1/2活性及表达的影响。 结果 在肝细胞癌组织样本中,Grp78的表达情况与ERK1/2和磷酸化ERK1/2的表达明显呈正相关。在SMMC-7721细胞中Grp78高表达促进ERK1/2的磷酸化,应用RNA干扰特异性下调Grp78高表达细胞中Grp78水平可以抑制ERK1/2的磷酸化。 结论 Grp78参与调解ERK1/2信号通路,并且在肝细胞癌临床治疗方面可能成为潜在的治疗靶点。     

The role of RIP1 and RIP3 in the development of aplastic anemia induced by cyclophosphamide and busulphan in mice

This study aimed to investigate the role of RIP1 and RIP3 in the pathogenesis of aplastic anemia (AA) induced by cyclophosphamide and busulphan in mice. Animals were randomly divided into three groups: the control group, the AA group, and the Nec-1 group. Mouse AA model was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamide (40 mg/kg/d) and busulfan (20 mg/kg/d) for 12 days. The Nec-1 group mice received intraperitoneal injection of Nec-1 (2 mg/kg/d) for 12 days prior to intraperitoneal injection of cyclophosphamide (40 mg/kg/d) and busulfan (20 mg/kg/d) for 12 days. The control mice received intraperitoneal injection of equal volume of saline. At 12 h after the last intraperitoneal injection, blood and bone marrow tissues were collected from mice. Peripheral blood cells were analyzed using hematology analyzer and the histological changes of bone marrow tissues were examined using scanning electron microscopy (SEM). The levels of RIP3 and RIP3 in bone marrow were measured using Western blot analysis and the interaction of RIP1 and RIP3 proteins was investigated on the basis of immunoprecipitation analysis. ELISA was used to measure the levels of IL-6, TNF-α, and FLT-3L in bone marrow tissue supernatant. Apoptosis and necrosis of bone marrow cells were analyzed using flow cytometry. Western blot showed that the expression of RIP1 and RIP3 was significantly increases in AA mice compared to the normal controls. Immunoprecipitation detected the pro-necrotic RIP1-RIP3 complex, suggesting that RIP1 and RIP3 mediated necroptosis may involved in the damage of bone marrow cells. Compared to the AA mice, Nec-1 group mice exhibited significantly increase of peripheral blood cells and mononuclear cells in bone marrow tissues and decrease of the apoptosis/necrosis of bone marrow cells. In addition, we observed significant decrease of IL-6, TNF-α, and FLT-3L in bone marrow tissue supernatant in the Nec-1 group mice compared to AA mice. Our results suggest that Nec-1 can prevent the development of AA by inhibiting bone marrow cells necrosis and the production of inflammatory mediators. RIP1 and RIP3-mediated necroptosis may involve in the pathogenesis of AA induced by cyclophosphamide and busulfan in mice.     

机械刺激对肝癌细胞形态及增殖周期的影响

本研究采用“四点弯曲梁加载装置” ,对培养的人肝癌细胞株SMMC 772 1施以拉伸刺激 ,通过显微计算机图像处理系统了解其形态变化 ,流式细胞仪了解其增殖行为 ,结果发现 (1)加载 2 4h后SMMC 772 1G2 -M期 8.6 3% ,对照组 15 .92 %。 (2 )加载 72h后SMMC 772 1铺展投影面积缩小。 (3)加载 2 4h后SMMC 772 1分裂指数 0 .4 6 ,对照组 0 .5 5。加载可部分抑制SMMC 772 1的生长。     

人肾小管上皮细胞necroptosis模型的构建

 目的：以体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）为靶细胞,构建肾小管上皮细胞凋亡样坏死（necroptosis）的模型。方法：采用肿瘤坏死因子 α (tumor nercosis factor α, TNF-α)诱导细胞凋亡,同时采用抗霉素A (antimycin A)耗竭ATP,构建肾小管上皮细胞凋亡的模型,并以caspase-8抑制剂苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮(benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone, zVAD-fmk) 阻断凋亡,用necroptosis的特异性抑制剂necrostatin-1（Nec-1）阻断necroptosis,观察细胞在不同的处理下形态学的变化,同时检测细胞存活率及标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）在TNF-α+zVAD- fmk+antimycin A处理1 h时细胞及细胞器膨胀,电镜下细胞膜碎裂,线粒体变圆、肿胀,嵴逐渐模糊,胞浆中出现大量自噬小体,而Nec-1预处理后细胞的坏死程度较对照组明显改善。（2）在TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A 1 h实验组,Nec-1预处理后细胞的存活率显著增加（P<0.05）。（3）TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A干预1 h实验组在Nec-1预处理后LC3-Ⅱ的表达量明显下降（P<0.05）。结论：凋亡环境中阻断凋亡可以诱导肾小管上皮细胞necroptosis,抑制剂Nec-1能特异性阻断肾小管上皮细胞发生坏死。     

RNAi沉默Beclin 1基因对维生素K3损伤人肝癌细胞SMMC-7721的影响

目的： 探讨应用RNAi技术沉默Beclin 1基因对维生素 (vitamin K3,Vit K3)引起的人肝癌SMMC-7721细胞损伤的影响。方法: 应用真核细胞转染技术将Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人肝癌SMMC-7721细胞,同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于48 h后收集细胞,分别提取细胞总RNA及总蛋白,通过RT-PCR和Western blotting检测Beclin 1基因表达。应用40 μmol/L Vit K3作用Beclin 1-siRNA细胞株,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率。结果: 与对照组相比,siRNA重组质粒明显降低Beclin 1 mRNA水平,抑制其蛋白表达。40 μmol/L Vit K3作用人肝癌SMMC-7721细胞Beclin 1 mRNA表达明显高于对照组,细胞凋亡率增加(P<0.01）;而Beclin 1-siRNA细胞株,Beclin 1 mRNA表达显著低于对照组,与40 μmol/L Vit K3作用组相比细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论: Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1转染人肝癌SMMC-7721细胞后,可有效抑制Beclin-1 mRNA和蛋白的表达,抑制Vit K3引起的Beclin 1依赖性细胞自噬信号通路的激活,促进细胞凋亡。     

维生素D3受体mRNA在肝细胞增殖和肝癌发展中的作用

目的：探讨维生素D3受体mRNA在肝细胞增生和肝癌发展中的作用。方法：体外培养肝癌细胞株SMMC－7721和HCC－T细胞，培养时添加1000nmol/L、100nmol/L、10nmol/L 1，25-(OH)2D3作用1、3、6天后，用四唑盐比色试验（MTT）检测细胞的存活和生长；用反转录PCR（RT－PCR）检测维生素D3受体mRNA的表达。结果：1.25-(OH)2D3可以抑制维生素D3受体mRNA表达阳性的SMMC－7721细胞增生并且有剂量效应关系；对维生素D3受体mRNA表达阴性的HCC－T细胞没有抑制作用。9例肝癌组织标本维生素D3受体mRNA表达均为阳性。结论：1，25－（OH）2D3对于人肝癌细胞株SMMC－7721的增殖具有显著的抑制作用，其机械可能是通过维生素D3受体来实现的。     

TNF-α诱导MLO-Y4细胞发生RIP3介导的程序性坏死

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)能否诱导小鼠长骨骨样细胞株MLO-Y4发生程序性坏死及其发生机制。方法:将MLO-Y4细胞分为正常对照(control)组、TNF-α处理组、TNF-α+necrostatin-1(Nec-1)处理组、TNF-α+Z-VAD处理组和TNF-α+受体相互作用蛋白3(RIP3)-siRNA组。用流式细胞术检测各组细胞凋亡或坏死率,透射电镜鉴定细胞形态学变化,用Western blot法测定RIP1、RIP3和cleaved caspase-3的蛋白水平,应用激光共聚焦显微镜观察RIP1和RIP3蛋白的共表达,应用荧光标记法检测各组细胞活性氧(ROS)水平。结果:TNF-α诱导MLO-Y4细胞24 h,凋亡和坏死率明显高于control组(P0.01)。与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD和RIP3-siRNA均能降低细胞的凋亡或坏死率(P0.01)。在TNF-α组可见大量坏死样细胞,在Z-VAD组仍可见到坏死样细胞,而在Nec-1和RIP3-siRNA组未见到坏死样细胞。Western blot实验结果显示Nec-1可有效抑制RIP1蛋白表达,而Z-VAD对RIP1和RIP3蛋白表达无影响,RIP3-siRNA可有效降低RIP3蛋白表达(P0.01)。与TNF-α组比较,Nec-1可有效降低RIP1-RIP3蛋白共表达阳性细胞百分率(P0.01),而Z-VAD对其无影响。与control组相比,TNF-α组的ROS水平明显增高(P0.01);与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD及RIP3-siRNA均能有效抑制ROS水平(P0.01)。结论:TNF-α能诱导MLO-Y4细胞发生RIP3介导的程序性坏死;ROS可能是MLO-Y4细胞程序性坏死的执行者。     

人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达

目的:初步分析人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达。方法:常规RT-PCR法分析hLRH-1v1和hLRH-1在肝癌等多种肿瘤组织和HepG2等肿瘤细胞系中的表达情况，实时定量PCR法分析hLRH-1v1，hLRH-1和hOct4在HepG2，SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系的表达水平。结果:hLRH-1v1的表达见于所有检测的12种类型肿瘤和8种恶性肿瘤细胞系，hLRH-1的表达则仅在12种类型肿瘤中的6种肿瘤组织中可检测到，但8种恶性肿瘤细胞系均为hLRH-1阳性表达；在HepG2，SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系中hLRH-1v1和hOct4的表达呈正相关。结论:hLRH-1v1在肿瘤中广泛表达，可能在维持肿瘤干细胞的自我更新中发挥重要作用。