肝富集的转录因子与细胞色素P450基因的表达调控

细胞色素P450(cytochromeP450,CYP)是含血红素酶家族,广泛存在于从细菌到哺乳动物中,参与氧化或还原代谢多种内源和外源化合物。如内源性甾体激素、维生素和脂肪酸衍生物的合成与分解,外源性药物、杀虫剂、环境污染物和致癌物的代谢[1]。CYP1-4家族主要代谢外源化合物,它们表现     

中国肾移植患者中细胞色素P450 3A4的新突变位点

背景：环孢素A在人体内主要经过细胞色素P450 3A4代谢。已有研究表明细胞色素P450 3A4基因多态性影响环孢素A的药代动力学,而且环孢素A慢性肾毒性主要是由于环孢素A在体内的长期蓄积。因此推测细胞色素P450 3A4基因多态性可能是肾移植移植后环孢素A 慢性肾毒性的主要原因之一。 目的：分析细胞色素P450 3A4基因多态性与肾移植移植后环孢素A 慢性肾毒性的相关性。 方法：纳入200例服用环孢素A的肾移植患者参加此项研究,其中105例经肾活检和(或)血肌酐值的变化诊断为环孢素A 慢性肾毒性,其他95例未发生肾毒性)。采集受试者外周静脉血并提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应和直接测序法检测细胞色素P450 3A4基因外显子5,7,9和12的点突变。 结果与结论：中国肾移植患者中发现3个细胞色素P450 3A4新突变位点,即336 A>G,837 G>A 和406 A>C。其中 3例肾移植患者可检测出336 A>G,8例肾移植患者可检测出837 G>A。新突变点406 A>C仅发现于3例环孢素A慢性肾毒性患者,在非肾毒性患者中未发现新突变位点,且406 A>C可导致细胞色素P450 3A4保守区136位苏氨酸(Thr)转变为苯丙氨酸(Phe)。文章未发现已报道的中国人群细胞色素P450 3A4基因在外显子5,7,9和12的多态性。结果证实,文章在中国肾移植患者中发现了3个细胞色素P450 3A4的新突变位点336 A>G,837 G>A 和406 A>C,其中406 A>C可能引起细胞色素P450 3A4酶活性的改变。     

健康汉族人细胞色素P450 2Cl9基因的检测

目的了解广东地区汉族人细胞色素(P450 2C19)基因的分布情况. 方法应用PCR技术对正常人细胞色素(P450 2C19)基因进行扩增以SmaI进行限制性酶切图谱分析. 结果广东地区汉族人P450 2C19基因中,野生型纯合子(wt/wt) 频率是0.4454;CYP2Cl9杂合子(mt/ml) 频率是0.4091;CYP2Cl9 突变型纯合子(ml/ml)频率是0.1455.P450 2C19基因ml频率是0.3500,基因wt频率是0.6500. 结论广东地区汉族人的细胞色素CYP2C19基因频率与其它地区人群相接近.     

子宫内膜异位症与细胞色素P450 1A1基因A4889G突变的相关性

目的探讨细胞色素P450 1A1(cytochrome P450 1A1,CYP1A1)基因A4889G突变与子宫内膜异位症(endometriosis,EM)的遗传易感性的关系.方法采用等位基因特异性聚合酶链反应的方法,研究了76例EM患者和80名正常对照CYP1A1基因A4889G位点碱基突变.两组均为广东籍汉族妇女.结果 CYP1A1基因A4889G位点等位基因A、G在EM组和对照组分布的差异有显著性(χ2=7.498,P<0.01),其中等位基因G使患EM的相对危险度提高了1.957倍.CYP1A1基因A4889G位点各基因型分布在两组间差异有显著性(χ2=6.915,P<0.05),GG基因型与AA基因型相比患EM的危险度高3.437倍(χ2=5.430,P<0.05).结论 CYP1A1基因A4889G突变等位基因与EM有一定的关联,突变基因型增加了EM的发病风险.     

细胞色素P4501A1基因多态性及其与肿瘤易感性研究进展

细胞色素P450(Cytochrome P ,CYP) 1A1是一种重要的P450系氧化代谢酶,广泛分布于肝外组织，催化多种前致癌剂的活化并且在雌激素代谢中起作用。目前发现四种重要的多态性位点，即 3801 T→C 、Ile462Val 、3205T→C、Thr461→Asp，CYP1A1基因多态性与多种肿瘤的易感性相关。     

CYP1A1基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症相关性研究

目的 探讨参与雌激素代谢的细胞色素P4501A1(cytochrome P450 1A1,CYPlA1)基因多态性与成都地区妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)的关系.方法 分别应用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性技术和等位基因特异性PCR技术,对100例ICP患者和100名正常对照孕妇CYP1A1基因Msp I位点和Ile/Val位点多态性进行分析.结果 Msp I位点多态性在ICP组和对照组中的分布差异无统计学意义(P》0.05),而ICP组含Val等位基因的Ile/Val和Val/Val基因型增加ICP的发病风险(P=0.047,OR=1.768).结论 CYP1A1基因第7外显子的Ile/Val基因多态性可能与成都地区ICP易感性有关;而Msp I位点多态性与ICP的发生无相关性.     

细胞代谢解毒酶CYP1A1、GSTM1基因多态性与吸烟对男性肺鳞癌发病的影响

 目的 探讨细胞代谢解毒酶细胞色素P450酶1A1（CYP1A1）、谷胱甘肽S-转硫酶M1（GSTM1）基因多态性和吸烟因素对男性肺鳞癌发病的影响。方法 采用基因芯片技术对125例男性肺鳞癌患者和125例男性健康对照者CYP1A1、GSTM1基因多态性进行检测。结果 CYP1A1 m2位点GG基因型和GSTM1缺失基因型在肺鳞癌组与健康对照者间存在显著性差异(P<0.05 )。吸烟者携带CYP1A1 m2位点至少一个变异G等位基因或携带GSTM1缺失型者患肺鳞癌的危险性进一步显著增加,OR值分别为4.50和3.81(P<0.01)。结论 吸烟与CYP1A1、GSTM1基因多态性与男性肺鳞癌的发生有关。     

炎症状态对CYP2B6活性改变及其作用机制的研究进展

肝脏细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)氧化酶又称混合功能氧化酶和单加氧酶,广泛存在于动物、植物、微生物的各种组织中,是负责大多数临床药物、环境致癌物、外源毒物及内源活性物质生物转化的主要酶系统,具有重要的药理、生理及病理学意义。CYP450是一类亚铁血红素-硫醇盐蛋白的基因超家族,由不同的基因家族和亚家族组成,其中与药物代谢关系最为密切的主要有CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1及CYP3A4等。     

我国汉族人CYP2C9新基因型的克隆及其在大肠杆菌中的表达

本研究采用RT-PCR方法成功的扩增到了细胞色素P450 2C9基因。测序分析结果表明,除编码区第190位核苷酸发生G→T的突变外,其它核苷酸序列与GenBank中登录发表的人P450 2C9基因(NM_017460)完全相同。SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,经连接到pET-28a(+)原核表达载体后,CYP2C9基因在BL21(DE3)大肠杆菌中进行了成功表达,这为建立我国不同种族人群特有药物代谢酶药物评价体系打下了基础。     

健康汉族人细胞色素P450 2C19基因的检测

目的：了解广东地区汉族人细胞色素（P450 2C19）基因的分布情况。方法：应用PCR技术对正常人细胞色素（P450 2C19）基因进行扩增以SmaI进行限制性酶切图谱分析。结果：广东地区汉族人P450 2C19基因中，野生型纯合子（wt/wt）频率是0.4454；CYP2C19杂合子（mt/ml）频率是0.4091；CYP2C19突变型纯合子（ml/ml）频率是0.1455。P450 2C19基因ml频率是0.3500，基因wt频率是0.6500。结论：广东地区汉族人的细胞色素CYP2C19基因频率与其它地区人群相接近。     

CYP1A1、CYP2D6基因多态性对白血病发生的影响

目的 分析细胞色素P450 CYP1A1和CYP2D6的多态性基因型在湖南地区白血病患者和健康人群中的分布及其对白血病发生的影响.方法 采用PCR及PCR-RFLP技术分析多态性基因型频率.结果 CYP1A1和CYP2D6基因的野生型、杂合突变型及纯合突变型的分布频率在急性淋巴细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病患者组与健康对照组之间无显著性差异;携带一个突变等位基因型的个体患白血病的风险与相应野生型携带者比较均无显著性差异;急性非淋巴细胞性白血病患者组的CYP1A1杂合突变型与CYP2D6杂合突变型的联合基因型频率高于健康对照组.结论 单独的CYP1A1或CYP2D6基因的多态性变异与白血病易感性不相关;CYP1A1杂合突变与CYP2D6杂合突变的联合基因型增加患急性非淋巴细胞性白血病的风险.     

细胞色素P450基因多态性与药物代谢

细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)在众多外源性和内源性物质的代谢中具有重要作用.CYP家族1-3中编码P450的基因均存在多态性,特别是CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A5.超过一半的临床药物是由多态性P450介导代谢,CYP基因的多态性是造成药物反应个体差异的主要原因.近几年,许多与P450酶活性和CYP基因表达相关的等位基因已被鉴定,因此通过分型CYP基因的功能性或标签(Tag)的遗传变异,就可以获得个体的代谢表型,有助于医生及时找到正确的用药方案,有效地提高药物疗效和降低毒副作用,特别是那些治疗指数窄的药物.显然,了解CYP基因的遗传变异对于临床药物治疗和药物开发是必不可少的.基因芯片技术具有高多重水平和高通量的特点,使同时分型大量CYP基因遗传变异成为可能,是实现个性化医疗的重要技术保障.然而,DNA制备制约了预测性CYP基因分型芯片的发展,其在临床上的广泛应用尚需时日.     

细胞色素P450 2A6的多态性研究

细胞色素P450 2A6(cytochrome P450 2A6，CYP2A6)是主要的尼古丁C-氧化酶和香豆素7-羟化酶。对已发现的CYP2A6的等位基因及其对CYP2A6活性的影响，CYP2A6的多态性和个体吸烟行为及肺癌、食管癌的易感性的关联进行综述。     

基于细胞薄膜技术构建可长期维持细胞色素P450活性的体外人类三维肝脏模型EI北大核心CSCD

体外人类肝脏模型常用于药物筛选,而人原代肝细胞(PHH)是体外人类肝脏模型的金标准。细胞色素P450(CYP450)是PHH进行药物代谢的关键酶,其活性在PHH体外培养过程中迅速下降。本研究通过温度敏感型培养皿探究小鼠胚胎成纤维细胞3T3-J2形成细胞薄膜的条件,并基于细胞薄膜技术构建3T3-J2细胞薄膜/PHH/胶原凝胶“三明治”式三维(3D)共培养体系。通过苏木素-伊红染色和免疫荧光染色观察模型切面的组织结构和蛋白表达。以非那西丁和安非他酮为反应底物测定CYP450的活性,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定模型中白蛋白和尿素含量。结果显示,在细胞接种密度为1.5×10^(6)个/皿(35 mm培养皿)且低温孵育时间为60 min的条件下,可以获得完整的3T3-J2细胞薄膜。通过细胞薄膜叠层,开发了一种体外三维肝脏模型。与二维模型相比,三维模型中的细胞—细胞、细胞—基质间连接紧密,CYP450超家族中的CYP1A2和CYP2B6活性显著提高,白蛋白和尿素分泌水平提高,均可稳定维持21 d。因此,细胞薄膜叠层有助于提高三维肝脏模型的肝功能水平,该模型有望在临床前用于预测低清除率药物的代谢情况,对药物评估等研究具有重要意义。     

细胞色素P4503A4基因多态性与癫痫耐药的关系

目的 研究细胞色素P4503A4(CYP3A4)基因中3个下调CYP3A4酶活力的多态性位点的分布特点,探讨CYP3A4基因多态性与中国南方汉族人群的癫痫耐药之间的关系.方法 应用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测CYP3A4*4、CYP3A4*5和CYP3A4*6 3个多态性位点在112例耐药性癫痫患者(耐药组)和136例健康人(健康组)中的分布,分析两组之间CYP3A4基因型的差异.结果 所有受检者的CYP3A4*4和CYP3A4*6基因型均为野生型.而健康组中CYP3A4*5的基因型均为野生型,耐药组中则有4例为杂合子基因型,108例为野生型.两组的差异有统计学意义[136:0比108:4,OR(95%CI)=1.037(1.001～1.075),P=0.040].结论 CYP3A4*5的多态性位点可能和癫痫耐药性有关.     

用基因芯片技术研究乙醇对肝星状细胞增殖及其CYP450亚型表达的影响

乙醇可经细胞色素P450 2El(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)代谢为乙醛,并产生脂质过氧化产物,引起肝损伤,并可通过肝细胞中过量表达的CYP2E1激活肝纤维化发生的关键细胞--肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)[1].但乙醇能否直接激活HSCs及其可能的机制报道甚少.     

中国广东人CYP2F1基因遗传多态性研究

目的检测广东地区正常人群和鼻咽癌患者中细胞色素P450酶系CYP2F1基因的多态性，并分析该基因遗传多态性与鼻咽癌易感性的关联。方法采用直接测序法检测40例鼻咽癌患者全血标本中CYP2F1基因全部10个外显子的多态性变化。对于等位基因频率较高的多态性位点，进一步采用错配聚合酶链反应．限制性片段长度多态性检测368例鼻咽癌患者和344名正常对照人群中该位点的等位基因频率。结果在40例鼻咽癌样本中，共检测到CYP2F1基因的35个单核苷酸多态性。其中，10个单核甘酸引起编码的氨基酸改变，1个移码突变，15～16bp之间插入C引起移码突变（15-16ins C），该等位基因频率为25％。但病例-对照分析却未能显示该位点突变与鼻咽癌易感的相关性（P〉0．05）。结论中国广东人的CYP2F1基因遗传多态性位点较多，但暂未发现与鼻咽癌的易感性关联的单一多态位点，多个多态性位点或不同基因多态性位点的协同互补作用可能才是鼻咽癌发生发展的关键影响因素。     

白纹伊蚊细胞色素P450CYP6N3基因分子进化机制初探

为了初步探讨白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族新基因分子进化机理,根据已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P450CYP6基因cDNA片段,设计反向引物,进行5‘-cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE);以正向引物进行3‘-RACE。然后分别进行克隆,测序和鉴定。根据获得白纹伊蚊CYP6家族新成员全长cDNA序列,运用PC/CENE软件分析其5‘-UTP区DNA序列相似性及编码区氨基酸残基相似性,构建系谱树。结果获得的3个全长序列中5‘-UTP区DNA序列安全相同;编码区氨基酸残基相似性为3/497或4/497个氨基酸差异。而且此种差异均位于蛋白质功能非保守的基础区域;构建的系谱树显示CYP6N3基因与冈比亚按蚊CYP6N1-2亲缘关系最近,而与致倦库蚊的CYP6E1,CYP6F1亲缘关系较远。说明白纹伊蚊CYP6N3基因较致倦库蚊的CYP6E1,CYP6F1基因更为古老;白纹伊蚊CYP6N3各等位基因变异体是通过整个CYP6N3基因座的新近复制而产生。     

中国苗族、布依族、土族和独龙族群体中细胞色素P450 2C19基因座遗传多态性分析

目的 研究细胞色素P450 2C19（cytochrome P450 2C19,CYP2C19）在中国4个民族群体中的基因型和基因频率。方法 采用聚合酶链反应与限制性片段长度多态性技术，分析了无血缘关系的苗族、布依族、土 和独龙族人群的基因型。结果 CYP2C19＊2突变基因在苗族、布依族、土圹和独龙族人群中的频率分别为0.292、0.329、0.315和0.349。4个群体经检验均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。结论 中国苗族、布族、土族和独龙族人群的CYP2C19＊2突变基因频率与欧洲、非洲人群差异较大，而与亚洲人群相近。     

细胞色素P450 3A4抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定

目的：制备兔抗人细胞色素P450 3A4（CYP3A4）抗体及其特性鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP3A4蛋白的序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列,合成CYP3A4多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素（KLH）偶联,免疫日本大耳白兔制备抗CYP3A4抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体,间接ELISA测定抗体的效价及相对亲和力常数,Western blot鉴定其特异性,免疫组化进行定位。结果：获得针对小分子CYP3A4的抗体。该抗体效价为1∶16000;相对亲和力常数在10^5～10^6M^-1,具有实用价值;可与CYP3A4合成肽及天然CYP3A4出现特异性反应;可识别正常人肝脏组织CYP3A4;Western blot的结果显示,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量（Mr）为46000。结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP3A4合成肽抗体可应用于ELISA、Western blot和免疫组化实验。