胸腺肽纯化工艺的改进

目的 建立高效、快速、简便的纯化胸腺肽方法,以便提高胸腺素α1含量及活性,减少过敏反应。方法 采用 DEAE Sepharose FF、CM-Sephrose两种串联柱层析纯化。结果 纯化后的胸腺肽电泳结果出现明显的胸腺素α1带、玫瑰花结率可达33％(绝对值)以上,相对分子质量明显在3 100左右,无过敏反应。结论 建立了高效、规模化的胸腺肽纯化方法,提高了胸腺肽质量。     

卡介菌多糖核酸相对分子质量分布及其热稳定性

目的 测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,并观察其热稳定性。方法 采用高效液相分子筛凝胶色谱法测定相对分子质量,并用煮沸或高压强热处理。结果 用该法测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,有2个色谱峰,第1峰峰值相对分子质量为783 000,第 2峰为 3 200,面积分别为 21％和 79％。热处理后,其第 1峰相对分子质量大约有8％解聚合成第2峰。结论 卡介菌多糖核酸相对分子质量分布集中在3200,约占80％,对热较为稳定。     

聚醚多元醇低不饱和度的意义及分析检验

本文叙述了聚醚多元醇不饱和度的产生,低不饱和度聚醚多元醇的相对分子质量高、相对分子质量分布窄,聚醚多元醇不饱和度测定的意义及方法。     

流变学方法测定UHMWPE树脂的相对分子质量及其分布

相对分子质量及其分布是超高相对分子质量聚乙烯(UHMWPE)树脂的一个重要指标。采用流变学手段测定了UHMWPE树脂的重均相对分子质量(M_w)及其分布,并与凝胶渗透色谱(CPC)法测试结果进行对比。结果表明:利用傅里叶变换将应力松弛实验的时域信号数据转换为频域信号数据,再结合流变仪频率扫描的结果得到较为完整的流变学数据,然后将储能模量和损耗模量转换到松弛谱得到松弛模量,可以计算出UHMWPE树脂的M_w及其分布;流变学方法测定UHMWPE的M_w的变化趋势与GPC方法结果相同;采用流变学方法测定UHMWPE树脂的M_w及其分布,速度快、重复性高,且不需要溶剂来溶解UHMWPE树脂。     

聚丙烯粉料的分子质量及其分布测定方法

采用凝胶渗透色谱(GPC)测定聚丙烯粉料加入不同类型、不同浓度抗氧剂后相对分子质量及其分布,结果表明,未加入抗氧剂的聚丙烯粉料相对分子质量随着时间的增加不断降低,而加入抗氧剂的聚丙烯粉料能保持稳定,浓度为50mg/Kg的抗氧剂1010可以达到很好的防降解效果。建立GPC测定聚丙烯粉料的分子质量及其分布的方法,该方法适用于生产过程中的中控检测。     

激光光散射法测定三元乙丙橡胶相对分子质量及其分布

研究激光光散射仪(LLS)以及LLS-凝胶渗透色谱(GPC)联用测定三元乙丙橡胶(EPDM)的相对分子质量及其分布。确定LLS-GPC联机测试条件如下:流动相甲苯,进样体积100μL,试样溶液质量浓度4g·L-1,温度25℃,溶剂流速1mL·min-1。测定结果表明,LLS-GPC联机测定EPDM相对分子质量及其分布相对标准偏差小于5%,EPDM重均相对分子质量测定结果与LLS单机测定结果一致。     

激光光散射法测定PNIMMO的相对分子质量及其分布

介绍了火药用黏合剂PNIMMO(端羟基聚3–硝酸酯甲基–3–甲基氧杂环丁烷)的相对分子质量及其分布测定的激光光散射法。该法以四氢呋喃为流动相,通过MZ–gel SD plus凝胶色谱柱、示差折光检测器与多角激光光散射仪联用,获得了样品的相对分子质量及其分布,并对谱图进行分析讨论。结果显示,激光光散射法不依赖于标样,可直接测定PNIMMO的相对分子质量及其分布,快速简便,结果可靠,对于PNIMMO合成工艺的改进和后处理方法的选择具有指导意义。     

凝胶渗透色谱法测定PBT叠氮聚醚的M_r及其分布

采用凝胶渗透色谱法(GPC测定3,3双(叠氮甲基)环氧丁烷四氢呋喃叠氮聚醚(简称PBT叠氮聚醚)的相对分子质量(M)及其分布,用沉淀分级法制备PBT叠氮聚醚不同相对分子质量的窄分布标样。自装交联聚苯乙烯色谱柱(GPCPS23与日本进口GPC80M色谱柱串联,组成柱组,能较好地适应PBT叠氮聚醚相对分子质量及其分布的测定方法。该方法与蒸气压渗透仪(VPO法的测试结果相近。     

凝胶渗透色谱法测定聚羧酸盐分散剂的相对分子质量及其分布

采用凝胶渗透色谱法测定了聚羧酸盐分散剂GY-D1256的相对分子质量及其分布。通过对流动相、溶解时间、流速的筛选,确定了较佳的测试条件。实验结果表明,采用通用校正法测得GY-D1256的数均相对分子质量M_n为23 234,重均相对分子质量M_w为40 359,相对分子质量分布M_w/M_n为1.665。     

溶胶-凝胶法合成星形聚甲基丙烯酸甲酯

以巯基丙基三甲氧基硅烷为链转移剂经调聚反应合成了三甲氧基硅单封端的聚甲基丙烯酸甲酯,并以其为原料进行溶胶-凝胶水解。用^1H-NMR,FTIR和GPC等方法对调聚物及水解产物进行了表征,测定了水解产物的溶解性和相对分子质量及分布的变化。结果表明,相对分子质量较小的调聚物的水解产物的相对分子质量基本上是水解前的倍数增长,生成了以二氧化硅微凝胶为核的星形聚合物,相对分子质量分布明显增加。水解产物的玻璃化转变温度增大。     

梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达

目的克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684,为研制早期诊断试剂盒提供依据。方法PCR法扩增TP0684编码基因。T-A克隆后构建表达质粒pET-22b(+)-TP0684,经酶切鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定。结果PCR法扩增出了1212bp的目的片段,原核表达质粒pET-22b(+)-TP0684酶切鉴定正确,测序结果与GenBank上公布的该基因的CDS序列完全一致。转化E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的蛋白表达率为25%,SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约43000,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TP0684重组蛋白具有良好的免疫反应性,为进一步研究梅毒血清学诊断试剂奠定了基础。     

b型流感嗜血杆菌结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性

目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性。方法制备的Hib结合物经SepharoseCL4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性。结果1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经高压液相分析,这3部分的相对分子质量均在1400000以上,免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答。第4部分高分子结合物含量在70%左右,相对分子质量约在670000,免疫小鼠后也能产生较好的免疫应答。第5部分高分子结合物含量为23.7%,相对分子质量在50000左右,基本是以游离状态存在的多糖和载体蛋白,免疫小鼠后仅能产生很低的免疫应答。结论1、2和3部分是Hib结合物纯化中需收集的部分,第4部分虽也以结合状态存在,但相对分子质量相对较低,第5部分主要是游离的多糖和蛋白质。     

人血浆蛋白C的纯化与鉴定

目的　建立人血浆蛋白C的纯化与鉴定方法。方法　利用DEAE SephadexA 5 0代替氯化钡 ,对血浆进行预处理 ,再经DEAE SepharoseFF离子交换和肝素 SepharoseCL 6B亲和层析进行分离纯化 ,用活化的部分凝血活酶时间 (APTT)测定组分活性 ,非还原型SDS PAGE测定其相对分子质量 ,Westernblot鉴定其特异性。结果获得相对分子质量为 6 2 0 0 0的蛋白条带 ,此条带可与人蛋白C单克隆抗体发生特异性反应。结论　已成功地从血浆中分离到蛋白C ,为其规模化生产奠定了基础。     

旋毛虫成虫与肌幼虫排泄分泌抗原蛋白组分的比较分析

目的比较大理猪源旋毛虫(Trichinela spiralis)成虫与肌幼虫排泄分泌抗原(Excretory-secretory antigens,ES)的蛋白组分差异,并进一步分析其反应原性,为分离筛选出免疫原性和反应原性强的旋毛虫抗原成分奠定基础。方法分别收集和纯化旋毛虫成虫、肌幼虫虫体,制备ES,采用SDS-PAGE分析成虫和肌幼虫ES蛋白成分,Western blot分析其反应原性。结果经SDS-PAGE分析,旋毛虫成虫ES显示17条蛋白条带,相对分子质量范围在120000～14000之间,其中主带6条,相对分子质量分别为120000、64000、43000、40000、35000、33000;旋毛虫肌幼虫ES显示20条蛋白条带,相对分子质量范围在112000～10000之间,其中主带11条,相对分子质量分别为112000、66000、56000、55000、53000、49000、45000、43000、25000、21000、10000。Westernblot分析表明,旋毛虫成虫ES抗原显示7条反应带,相对分子质量分别为43000、40000、35000、27000、19000、18000、14000,其中相对分子质量43000、40000、27000、18000的条带着色明显;旋毛虫肌幼虫ES抗原显示14条反应带,相对分子质量范围在74000～12000之间,其中相对分子质量53000、49000、45000、43000、35000、27000、18000、12000的条带显色明显。结论旋毛虫成虫和肌幼虫ES抗原蛋白组分均复杂,有共同组分,也有不同组分,旋毛虫ES抗原具有较强的反应原性,是旋毛虫病研究的重要候选抗原。     

pICln蛋白在不同细胞中的分布

目的检测pICln蛋白在不同细胞中的分布。方法制备抗pICln蛋白的合成肽血清,并用Western blot对E1等细胞pICln蛋白的表达及猪和大鼠肾脏细胞中pICln蛋白的分布进行检测。结果E1等8种细胞均在相对分子质量约40000的位置出现免疫反应带。猪肾脏pICln主要分布在可溶性胞质中,大鼠肾脏pICln蛋白主要分布在不溶性的膜结构中。结论pICln蛋白在组织、细胞中普遍表达,为其实施某种功能作用奠定基础。     

截断型人可溶性CD40L的表达与纯化

目的　表达相对分子质量 180 0 0的截断型人可溶性CD4 0L。方法　针对人CD4 0L(Glu10 8 Leu2 6 1)设计引物 ,以全长人CD4 0L为模板 ,扩增目的基因 ,经pGEM T中间载体进一步连接到pQE 4 0载体 ,构建pQE sCD4 0L表达载体。转化E .coliM15后经IPTG诱导表达 ,分离、洗涤包涵体 ,并利用Ni NTA亲和层析纯化目的蛋白 ,经复性后检测对骨髓瘤细胞SP2 0细胞株的抑制作用。结果　克隆的目的基因为 4 80bp ,经测序与文献报道一致 ,所构建的菌株 (M15 pQE sCD4 0L)经诱导表达目的蛋白量为 2 6 7% ,相对分子质量为 180 0 0 ,纯化后蛋白纯度为96 5 % ,对SP2 0细胞有生长抑制作用。结论　原核表达的截断型人可溶性CD4 0L具有抑制肿瘤细胞生长作用。     

梅毒螺旋体特异性抗原TP17、TP0453的表达及以其作为诊断抗原的间接ELISA方法的建立

目的表达、纯化梅毒螺旋体特异性外膜蛋白TP17和TP0453,并以其作为包被抗原,建立新型梅毒酶联免疫诊断方法。方法 PCR扩增TP17和TP0453基因,分别克隆入pET-22b(+)和pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化后进行Western blot鉴定。以纯化的重组TP17和TP0453蛋白作为诊断抗原,建立间接ELISA方法,并对该方法进行验证。结果 PCR分别扩增出500和800bp的TP17和TP0453基因片段,测序结果与GenBank中登录的CDS序列完全一致。重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453经双酶切鉴定正确;重组TP17和TP0453蛋白的相对分子质量分别约为18000和29000。表达量分别约占菌体总蛋白的18%和24%,纯化的重组TP17和TP0453蛋白的纯度分别>95%和>90%。两种重组蛋白均能与梅毒标准血清发生特异性反应。检测70份梅毒参考血清和定值质控血清的批内变异系数(CV)≤4.35%,批间CV≤6.69%,表明精密性良好;对国家标准血清盘的检测灵敏度为94.4%,特异性为97.1%,符合率为95.7%,最低检出限为0.25NCU/ml。结论表达和纯化的重组TP17和TP0453蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于梅毒血清学诊断。     

Optimization of glutamine Peptide production from soybean meal and analysis of molecular weight distribution of hydrolysates

The process parameters of enzymatic hydrolysis and molecular weight distribution of glutamine (Gln) peptides from soybean meal were investigated. The Protamex^® hydrolysis pH of 6.10, temperature of 56.78 °C, enzyme to substrate ratio (E/S) of 1.90 and hydrolysis time of 10.72 h were found to be the optimal conditions by response surface methodology (RSM) for a maximal degree of hydrolysis (DH) value of 16.63% and Gln peptides content at 5.95 mmol/L. The soybean meal was hydrolyzed by a combination of Protamex^® and trypsinase so that DH and Gln peptides would reach 22.02% and 6.05 mmol/mL, respectively. The results of size exclusion chromatography indicated that the relative proportion of the molecular weight <1000 Da fraction increased with DH values from 6.76%, 11.13%, 17.89% to 22.02%, most notably the 132–500 Da fractions of hydrolysates were 42.14%, 46.57%, 58.44% and 69.65%. High DH values did not lead to high Gln peptides content of the hydrolysate but to the low molecular weight Gln peptides.     

Processed vs. Non-Processed Biowastes for Agriculture: Effects of Post-Harvest Tomato Plants and Biochar on Radish Growth,Chlorophyll Content and Protein Production

The aim of this work was to address the issue of processed vs. non-processed biowastes for agriculture, by comparing materials widely differing for the amount of process energy consumption. Thus, residual post harvest tomato plants (TP), the TP hydrolysates obtained at pH 13 and 60 °C, and two known biochar products obtained by 650 °C pyrolysis were prepared. All products were characterized and used in a cultivation of radish plants. The chemical composition and molecular nature of the materials was investigated by solid state ¹³C NMR spectrometry, elemental analysis and potentiometric titration. The plants were analysed for growth and content of chlorophyll, carotenoids and soluble proteins. The results show that the TP and the alkaline hydrolysates contain lignin, hemicellulose, protein, peptide and/or amino acids moieties, and several mineral elements. The biochar samples contain also similar mineral elements, but the organic fraction is characterized mainly by fused aromatic rings. All materials had a positive effect on radish growth, mainly on the diameter of roots. The best performances in terms of plant growth were given by miscanthus originated biochar and TP. The most significant effect was the enhancement of soluble protein content in the plants treated with the lowest energy consumption non processed TP. The significance of these findings for agriculture and the environment is discussed.     

HIV-1C亚型调控蛋白Nef在大肠杆菌中的表达

目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型调控蛋白Nef,为研制HIV疫苗寻找新的途径。方法通过PCR扩增,获得HIV-1C亚型Nef基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。结果表达产物是相对分子质量为50000的GST融合蛋白,且能与p27单克隆抗体发生特异性反应。结论重组Nef蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达。