紫杉醇联合放射线照射对肺腺癌细胞放射增敏作用的研究

目的 探讨化疗药紫杉醇是否对肺腺癌A973细胞有放射增敏作用.方法 取指数生长期的人肺腺癌细胞A973,采用成克隆分析法检测紫杉醇毒性,确定IC10、IC50和IC90剂量作为药物浓度.分析照射前后紫杉醇IC10、IC50和IC90浓度下作用24 h,照射剂最分别为0、1、2、4、6、8、10 Gy时的细胞存活分数,并用多靶单击模型拟合细胞存活曲线.采用流式细胞术分析不同浓度紫杉醇作用0、2、4、6、10、18、24 h,A973细胞周期分布变化.结果 紫杉醇对A973细胞的IC10、IC50和IC90剂量分别为0.5、2.6和8.7 nmol/L.IC10剂量紫杉醇照前给药增敏比为0.97(D0值比)、1.01(D0值比)、1.00(SF2值比),照后给药为0.97、1.02、1.02;IC50剂量照前给药为1.06、129.00、2.61,照后给药为0.94、129.00、2.14;IC90剂量照前给药为1.00、120.00、2.09,照后给药为0.98、120.00、2.09.IC10剂量紫杉醇对A973细胞无明显的G2+M期阻滞作用,而IC50和IC90剂量紫杉醇分别于2和18 h将A973细胞阻滞在G2+M期.结论 紫杉醇对肺腺癌细胞A973产生明显的放射增敏作用,且照射前后给药均有相似的增敏作用,中高浓度剂量联合小剂量X线照射增敏效果最好.     

长春瑞滨对人肺腺癌973细胞放射增敏作用的实验研究

目的:探讨长春瑞滨(NVB)对非小细胞肺癌细胞放射效应影响及其与放射的最佳结合序贯。方法:以指数生长期的人肺腺癌973细胞为研究对象,采用克隆形成分析法进行0.1nM及1nMNVB与放射不同结合序贯实验,研究NVB与放射结合效应,利用"多靶单击"数学模型(SF=1-(1-е-D/D0)N)进行曲线拟合,获得细胞存活曲线及平均致死剂量、准阈剂量、D0比和增敏比等参数,进行效应评估。结果:0.1nM及1nMNVB照前、照后给药组的增敏比(SER)分别为0.957和0.989,1.295和1.042;0.1nM及1nMNVB照前、照后给药组的D0比分别为1.073和1.099,1.374和1.106。表明0.1nMNVB照前、照后给药时均无放射增敏作用;1nMNVB照前、照后给药时均与放射效应具有较明显协同作用,且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。结论:0.1nMNVB不具有增强放射效应的作用,1nMNVB具有较明显放射效应增强作用,且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。     

UCN-01提高肺腺癌细胞放射敏感性的实验观察

目的：观察p53基因突变的人肺腺癌细胞系973照射后G2期阻滞以及药物7－Hydroxystaurosporine(UCN-01)是否能去除此阻滞并增加放射敏感性，探讨UCU－01增加放射敏感性的机制。方法：用细胞培养和流式细胞仪技术分析X射线照射对973细胞周期（特别是G2期阻滞）的影响，观察UCN－01对放射引起的G2期阻滞的影响。应用细胞克隆形成实验观察UCN－01对放射敏感性的影响。结果：照射明显导致973细胞G2期阻滞，未照射组（对照组）及2、4和6Gy组的G2期比例分别为14．8％、42．8％、55．9％和60．5％，G2期阻滞的程度与照射剂量呈正相关。UCN－01能够去除放射引起的973细胞G2期阻滞，50、100、200和400nmol/L UCN-01组G2期比例由对照组的35．4％分别降至23．5％、19．6％、16．3％和12．4％，UCN－01去除G2期阻滞的程度与药物浓度呈正相关。UCN－01能明显降低放射后973细胞的存活分数，200和400nmol/L UCN-01组的放射增敏比分别为1．13和1．31。结论：UCN－01对973细胞有放射增敏作用，机制可能与UCN－01去除放射引起的G2期阻滞有关。     

长春瑞滨对人肺腺癌973细胞放射增敏作用的实验研究

目的：探讨长春瑞滨（NVB）对非小细胞肺癌细胞放射效应影响及其与放射的最佳结合序贯。方法：以指数生长期的人肺腺癌973细胞为研究对象，采用克隆形成分析法进行0．1nM及1nMNVB与放射不同结合序贯实验，研究NVB与放射结合效应，利用“多靶单击”数学模型（SF=1-（1-e^-D/D0）N）进行曲线拟合，获得细胞存活曲线及平均致死剂量、准阈剂量、D。比和增敏比等参数，进行效应评估。结果：0．1nM及1nMNVB照前、照后给药组的增敏比（SER）分别为0．957和0．989，1．295和1．042；0．1nM及1nMNVB照前、照后给药组的D0比分别为1．073和1．099，1．374和1．106。表明0．1nMNVB照前、照后给药时均无放射增敏作用；1nMNVB照前、照后给药时均与放射效应具有较明显协同作用，且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。结论：0．1nMNVB不具有增强放射效应的作用，1nMNVB具有较明显放射效应增强作用，且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。     

吉西他滨联合放射线照射对人胆管癌细胞放射增敏作用的实验研究

目的 研究和探讨吉西他滨联合放射线照射对胆管癌细胞的放射增敏作用.方法 取指数生长期的胆管癌细胞(QBC939),采用细胞克隆形成分析法检测吉西他滨单药毒性,确定IC10、IC50和IC90作为下一步实验的药物浓度.将QBC939细胞分为对照组、单纯药物组、单纯照射组及照射前、后吉西他滨IC10、IC50和IC90浓度下作用24 h组,X线照射剂量为0、1、2、4、6、8、10 Gy.采用多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线,分别用D0、Dq比计算放射增敏比(SERD0、SERD).结果 吉西他滨对QBC939细胞的Ic10、IC50和IC90值分别为0.1、11.0、21.5 nmol/L.吉西他滨低浓度(IC10)时只在照后给药且较低照射剂量区域(≤2 Gy)表现出放射增敏作用(SERDq=1.52);中浓度(IC50)时照前给药增敏作用最广泛(SERD0=1.27,SERDq=116.93),照后给药只在较低剂量区域(≤2 Gy)有放射增敏作用(SERDq=81.85);高浓度(IC90)时照射前后给药均具有一定放射增敏作用,但照前给药的作用明显强于照后给药.结论 吉西他滨与X线联合应用具有一定的放射增敏作用,但应注意药物浓度及给药顺序.     

人鼻咽癌耐顺铂细胞系的放射增敏实验

目的:了解人鼻咽低分化鳞癌细胞株HNE1及其耐药株HNE1/DDP的放射敏感性,探讨顺铂(DDP)对耐药株及其亲本细胞株放射增敏的差别,并初步研究吉西他滨对HNE1/DDP的放射增敏作用及其机制.方法:实验分为单纯照射组和照射加药组,应用克隆形成方法,观察单纯照射和照射加药物(DDP或吉西他滨)对细胞的杀伤作用,用Radiomed软件进行曲线拟合作图.免疫组织化学、末端脱氧核苷酰转移酶法(TUNEL法)和流式细胞法观察吉西他滨对耐药细胞株的影响.结果:DDP对HNE1和HNE1/DDP的放射增敏比分别为1.201 5和0.941 8,而吉西他滨对HNE1/DDP的放射增敏比为1.379 1.吉西他滨作用后耐药细胞凋亡增加,bax表达上调,p53没有明显变化,药物作用前后Bcl-2表达均呈阴性,并且使肿瘤细胞周期阻滞在G1期,而S期细胞比例则明显减少.结论:鼻咽低分化鳞癌细胞株HNE1对DDP和放射线没有交叉抵抗.DDP对HNE1具有放射增敏作用,但是对HNE1/DDP无放射增敏作用,而吉西他滨对HNE1/DDP有放射增敏作用,其增敏机制可能与吉西他滨使细胞周期阻滞在G1/S期,以及细胞p53、bax和Bcl-2基因表达变化导致凋亡增加有关.     

5—氟脲嘧啶,顺铂不同时相给药对放疗效果的影响

5－FU、DDP既是有效的化疗药物又对辐射有增敏作用。作为增敏药物在其与放射合用时要达到最大的增敏效果，必然有最佳的放化时间顺序。为探讨此问题，我们采用离体细胞克隆培养技术，观察了5-Fu DDP联合放射，在放射前、中、后不同时相给药5小时，对人肺腺癌Anip973细胞的影响。结果，3个放化结合组DEF值均大于1，细胞存活率比单照和单纯给药明显减低；先药后照组细胞杀灭倍数为4.57，大于给药中间照射组和先照后药组；DEF值以先药后照组为最高（2．2）；细胞平均存活率，先药后照组低于其它两组，分别为0．096，0．125，0．115.本实验结果显示，5－Fu＋DDP联合放射的增敏作用，在放射前给药并保持一定的药物作用时间，效果最好。     

拓扑替康对鼻咽癌放射增敏机制的研究

目的:研究拓扑替康(TPT)对人鼻咽癌裸鼠移植瘤放射增敏的机制。方法:把放射增敏实验各组[RT TPT组(增敏组),TPT组(药物组),RT组(放射组),生理盐水组(对照组) ]肿瘤标本制备成单细胞悬液,用流式细胞仪分析细胞周期,凋亡指数以及凋亡相关基因p53、bcl 2、bax的表达。结果:增敏组增殖指数 ( 19. 3±1. 7 )%降低,凋亡指数增加,和药物组(25. 2±0. 3)%,放射组 (26. 1±0. 3)%,对照组 (35. 7±2. 5)%比较有统计学意义;p53,bcl 2,bax的表达,各处理组与对照组比较,差异均没有统计学意义。结论:改变细胞周期,促进凋亡可能是拓扑替康增敏作用在细胞水平的重要机制,但诱导凋亡可能不依赖p53,bcl 2,bax基因。     

UCN-01增加鼻咽癌细胞株放射敏感性的研究

背景与目的：应用药物提高肿瘤组织的放射敏感性,是改善放疗疗效的主要研究方向之一。本研究通过观察已知p53基因突变的鼻咽癌CNE-1细胞照射后G2期阻滞的情况,以及药物7-hydroxystaurosporine(UCN-01)是否能够去除此G2期阻滞并增加放射敏感性,探讨UCN-01增加放射敏感性的机制。方法：用细胞培养和流式细胞仪（FCM）技术分析X线照射对CNE-1细胞周期（特别是G2期阻滞）的影响,观察UCN-01对放射引起的G2期阻滞的影响。应用细胞克隆形成实验观察UCN-01去除G2期阻滞对放射敏感性的影响。结果：照射明显导致CNE-1细胞G2期阻滞,未照射组（对照组）及照射2Gy、4Gy和6Gy组的细胞G2期比例分别为18.4％、43.6％、77.4％和86.4％,G2期阻滞的程度与照射剂量正相关。UCN-01能够去除放射引起的CNE-1细胞G2期阻滞,50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L和400nmol/L UCN-01组细胞的G2比例由对照组的63.5％分别降至28.5％、25.0％、16.1％和13.7％,UCN-01去除G2期阻滞的程度与药物浓度正相关。UCN-01能明显降低放射后CNE-1细胞的克隆形成率,100nmol/L和200nmol/LUCN-01组的放射增敏比分别为2.60和3.09。结论：UCN-01对CNE-1细胞有放射增敏作用,其机制可能与UCN-01去除放射引起的G2期阻滞有关。     

吉非替尼不同加药时间肺癌A549细胞放射增敏研究

目的 探讨吉非替尼不同加药时间对离体培养肺癌细胞系A549的放射增敏效应的影响.方法 实验分吉非替尼照前24 h加药组、照后即刻加药组、照后24 h加药组.用克隆形成法检测细胞存活分数,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布,蛋白免疫印迹检测p21、Cdc25e、Bcl-2、Bax、Rad51和phospho-DNA-PK蛋白表达.结果 吉非替尼照前组、照射即刻加药和照后加药组的放射增敏比(D_0值比)分别为2.23、1.51和1.30.照前加药组观察到更高的凋亡率和G_2+M期阻滞.p21、Cdc25c、Bcl-2、Bax、Rad51和phospho-DNA-PK蛋白表达的改变也较其他组明显.结论 吉非替尼照前加药、照射即刻加药和照后加药对肺癌细胞系A549均有放射增敏效应,但照前加药的效应最强.     

紫杉醇对不同p53基因型肺癌细胞作用的研究

目的:观察紫杉醇对3种不同p53基因型肺癌细胞的作用。方法:以不同浓度紫杉醇(0.1、1.0、10、100、1 000nmol/L)分别作用肺癌细胞A549、H322、H1299不同时间(4、12、24、48、96 h),实验同时设阴性对照组(不加紫杉醇)和空白对照组(只加细胞培养液)。采用MTT、流式细胞术、Western blotting检测细胞的生长及细胞周期、凋亡、乙酰化微管蛋白、p53蛋白等指标变化。结果:紫杉醇对3株肺癌细胞的生长抑制作用均随着作用时间的延长而增强(P0.05);不同浓度紫杉醇对3株细胞生长的影响也存在差异(P0.05)。3株细胞中A549细胞半数抑制浓度相对较低,但3株细胞间对紫杉醇敏感性的差异无统计学意义(P0.05)。紫杉醇10 nmol/L作用时,3株细胞G2/M期变化趋势基本一致,1 000 nmol/L作用时,A549细胞G2/M期比例与作用时间呈正相关(P0.05),H322和H1299的G2/M细胞于24 h达高峰,作用后期H1299出现异常多倍体;同浓度紫杉醇作用的各株肺癌细胞的凋亡呈时间依赖性,但1 000 nmol/L组诱导的细胞凋亡比10 nmol/L组更晚出现。浓度依赖性实验中,10 nmol/L诱导凋亡比例最高;紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2/M期比例随浓度增加而增高(P0.05);紫杉醇浓度≥100 nmol/L时,各肺癌细胞株G2/M期比例间的差异无统计学意义。凋亡和G2/M期阻滞无相关性(P0.05)。紫杉醇作用后,A549细胞p53蛋白呈浓度和时间依赖性增加,H322细胞p53蛋白无明显变化。3株细胞乙酰化微管蛋白均较对照组显著上升(P0.05)。结论:紫杉醇对不同p53基因型肺癌细胞生长的抑制作用呈时间依赖性。紫杉醇可增加野生型p53蛋白表达,诱导p53依赖和非p53依赖的两种凋亡途径,p53基因型影响了高浓度紫杉醇对肺癌细胞的周期阻滞作用,但对紫杉醇化疗敏感性无显著影响。     

己酮可可碱对(E)-(2')-脱氧-氟亚甲基胞苷的放射增敏和细胞周期的影响

目的 观察己酮可可碱（PTX）在体外对（E）－（2’）－脱氧－氟亚甲基胞苷（FMdC)的放射增敏作用和放射引起细胞周期再分布的影响。方法 在人结肠癌细胞系WiDr进行克隆形成分析检测放射增敏效应。常规照射剂量2Gy时的放射增敏比（SERSF2）定义为2Gy时对照组存活分数（SF）和药物处理组SF之比。流式细胞仪应用于分析照射、FMdC和PTX对细胞周期分布的影响。结果 照射前用30mmol/L FMdC处理WiDr细胞48h或照射后立即单用0．5－1．0mmol/L PTX 14d均能观察到各自的放射增敏作用。30mmol/L FMdC和0．25－1．0mmol/L PTX的SERSF2分别为1．09和1．02－1．24。30nmol/L FMdC和0．5mmol/L或1．0mmol/L PTX联合应用时,SERSF2分别增加至1．50和1．66。PTX增强FMdC的放射敏感性。流式细胞仪分析表明,在非同步化WiDr细胞,放射引起G2期阻滞和剂量有关。G2＋M期阻滞在照射后6h可检测,12h达高峰。照射前应用30nmol/L FMdC能够使放射引起的G2＋M期阻滞增多,但PTX能显著去除G2期阻滞。结论 己酮可可增强FMdC放射增敏作用和G2期阻滞去除有关。     

乏氧状态下外源性野生型p53基因对肺癌细胞照射敏感性的影响

目的 将重组人外源性野生型p53(wtp53)基因的腺病毒转染人肺腺癌细胞系(A549),在乏氧状态下舰察wtp53基因对A549细胞照射后存活的影响.方法 实验分为有氧状态下单纯照射组、照射+wtp53基因转染组,乏氧状态下单纯照射组、照射+wtp53基因转染组.给予9MeV电子束照射0、2、4、6、8、10 Gy,测定克隆形成率,用多靶单击模型拟和生存曲线,计算D0、Dq值和氧增强比(OER)、p53基因照射增敏比(SER).流式细胞仪检测4个组细胞凋亡率.结果 单纯照射时OER=1.75,转染wtp53后OER=0.81.有氧状态下wtp53的SER=1.77,乏氧状态下wtp53的SER=3.84.细胞凋亡率:未转染p53基因时,乏氧照射低于有氧照射组(F=7.92,P=0.048);有氧照射时单纯照射低于照射+wtp53基因转染组(F=52.44,P=0.001),乏氧照射时单纯照射低于照射+wtp53基因转染组(F=82.50,p=0.001);有氧照射+wtp53基因转染组和乏氧照射+wtp53基因转染组的凋亡率相似(t=2.04,P=0.111).结论 乏氧能够增加肺癌细胞埘照射的抗拒性.wtp53基因可以促进乏氧状态下的A549细胞的凋亡和提高放射敏感性.     

甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响

目的 探讨甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性的影响及其可能机制。方法 采用Western blot检测磷酸甘露糖异构酶在6个肺癌细胞系中的表达。利用MTT法观察甘露糖对肺癌细胞系的增殖抑制作用;分别给予对照组、甘露糖组0、2、4、6、8、10Gy照射,采用平板克隆形成实验检测甘露糖对6个肺癌细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测对照组、甘露糖组、照射组及联合组细胞的凋亡情况。结果 6个肺癌细胞系中磷酸甘露糖异构酶表达量各不相同,其中A549细胞表达量最高,H460细胞表达量最低。11.1mmol/L甘露糖对A549、H460细胞系抑制作用相同,随着甘露糖浓度增加,对H460细胞系抑制作用更显著。采用11.1mmol/L的甘露糖可明显增加H460细胞系放射敏感性及细胞凋亡率,而对A549细胞系放射敏感性和凋亡率影响不大。结论 在磷酸甘露糖异构酶高表达的6个肺癌细胞系中,甘露糖可增强部分肿瘤细胞的放射敏感性。     

Glycerol restores p53-dependent radiosensitivity of human head and neck cancer cells bearing mutant p53

Mutation or inactivation of p53 is known to be present in approximately 50% of human cancers. We propose here a novel strategy for overcoming this problem in mutant p53-targeting cancer therapies. We examined the restoration of radiation-induced p53-dependent apoptosis by a chemical chaperone (glycerol) in human head and neck cancer cells (SAS cells, showing wild-type p53 phenotype). SAS cells transfected with mutant p53 (SAS/m p53) showed radioresistance compared with SAS cells (SAS/ neo) transfected with neo vector as a control, but became radiosensitive when pre-treated with glycerol before X-ray irradiation. Apoptosis in the SAS/m p53 cells was induced by X-rays with glycerol pre-treatment, but not without glycerol pre-treatment, whereas apoptosis in the SAS/ neo cells was induced in both cases. Gel mobility-shift assays showed that after X-ray irradiation combined with glycerol pre-treatment, mp53 was able to bind to the sequence-specific region upstream of the bax gene regulating apoptosis. These results suggest that glycerol is effective in inducing a conformational change of p53 and restoring normal function to mp53, leading to enhanced radiosensitivity through the induction of apoptosis. This novel tool for enhancement of radiosensitivity in cancer cells bearing mp53 may be useful for p53-targeted radiotherapy.     

纳米金对SPC-A1肺癌细胞体外放射增敏作用的研究

目的 研究纳米金联合兆伏级射线对肺腺癌SPC-A1细胞的体外放射增敏作用,并从细胞周期、细胞凋亡角度探讨纳米金的放射增敏机制。方法 选用肺腺癌SPC-A1细胞进行体外培养,采用CCK-8法检测不同浓度纳米金（0、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol／L）处理SPC-A1细胞24、48、72 h后的细胞毒性,确定纳米金溶液的实验浓度;经纳米金溶液培养的SPC-A1细胞株分别给予6 MV X线和4 MeV电子线照射0、1、2、4、6、8 Gy后,体外细胞培养克隆法研究纳米金的放射增敏作用,计算存活分数。使用单击多靶模型公式拟合,计算出Dq、D0等放射生物学参数和放射增敏比（SER）;流式细胞仪检测纳米金处理SPC-A1细胞24 h后各组的细胞凋亡和细胞周期的变化。结果 不同浓度纳米金处理不同时间后,对SPC-A1细胞的增殖无明显抑制,确定以纳米金溶液初始浓度（0.25 mmol／L）作为实验浓度。直径25 nm、0.25 mmol／L的纳米金粒子联合6 MV X线和4 MeV 电子线照射SPC-A1细胞的SER分别是1.111和1.214。流式细胞仪检测显示,纳米金不增加细胞的凋亡,但能明显增加射线对细胞的凋亡作用。细胞周期显示纳米金能加速细胞的G0／G1期,使细胞周期阻滞在G2／M期。结论 纳米金联合6 MV X线或4 MeV 电子线对SPC-A1细胞有放射增敏作用,其机制可能与增加射线对细胞的凋亡和细胞周期同步化有关。     

Radiosensitization in sarcoma cell lines with a p53 missense mutation correlates with prevention of irradiation G2/M arrest but not with induction of apoptosis

We analysed the effects of caffeine and taxol on the radiobiological behaviour of two human sarcoma cell lines (RD, SK-LMS-1) each with a p53 missense mutation. Treatment with 2 mM caffeine resulted in an inhibition of the irradiation induced G2/M arrest in both cell lines. This effect was coupled with a radiosensitization in cell line SK-LMS-1 after an irradiation with 6 Gy (enhancement factor of 5.0). However, the effect of radiosensitization was not correlated with an induction of apoptosis. Incubation with 20 nM taxol increased the irradiation induced apoptosis almost 3-fold in cell line SK-LMS-1, but not in cell line RD. However, taxol had no effect on the irradiation induced G2/M arrest or radiosensitivity in either cell line. The results support the hypothesis that the prevention of irradiation induced G2/M arrest but not the induction of apoptosis plays a critical role in determining radiosensitivity in sarcoma cell lines with p53 mutations.