白细胞介素23与小鼠支气管哮喘相关性研究

目的通过检测哮喘鼠血清中白细胞介素23(IL-23)在哮喘组和对照组中的水平及与IL-5,IFN-γ,IL-17之间的相关性,探讨其在哮喘病中的作用.方法将24只健康雌性BALB/C小鼠随机分为两组,卵白蛋白(OVA)致敏并激发的哮喘模型组(Asthma,简称A组)和正常对照组(Control,简称C组),每组12只,OVA致敏末次激发24 h后,各组小鼠眶静脉取血,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数并分类.ELISA法检测血清IgE,IL-5,IFN-γ,IL-17和IL-23的含量,取肺组织行组织病理学检测.结果 A组病理学改变、动物行为学改变、血清IgE水平增高均证明哮喘模型制备成功;IL-5显著增高,IFN-γ降低;A组小鼠血清中IL-23,IL-17水平高于C组,IL-23与IL-17含量成正相关关系(r=0.763,P0.05),与IL-5,IFN-γ无相关性.结论 IL-23与哮喘发病密切相关,其机制可能是通过调节IL-17的产生促使哮喘发病;IL-23对IFN-γ和IL-5无明显调节作用.     

温阳抗寒合剂治疗支气管哮喘小鼠作用机制实验研究

目的观察温阳抗寒合剂(WYKHM)对哮喘小鼠的治疗作用及机制.方法 60只Balb/c小鼠随机分为哮喘组(Ast)、氨茶碱组(Ami)、WYKHM高中低3个剂量组(200 mg/kg,100 mg/kg,50 mg/kg)和空白对照组(Con).卵清蛋白(OVA)使小鼠致敏,1周后灌胃给药,2周后OVA诱发哮喘,48 h后眶静脉取血,用D-Hank液灌洗支气管肺泡(BALF),测定BALF中白细胞分类计数、白介素-5(IL-5)、白介素-23(IL-23)含量、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平.结果 WYKHM能显著降低BALF中NO和NOS的含量,与哮喘组比较差异具有统计学意义(P0.05或P0.001);WYKHM和氨茶碱组BALF中IL-5,IL-23含量均低于哮喘组(P0.05或P0.01);治疗组BALF中SOD活性明显上升,MDA水平明显下降,与对照组和哮喘组比较差异具有统计学意义(P0.05或P0.01).结论 WYKHM可降低NOS活性,降低NO水平;WYKHM可降低IL-5和IL-23含量;WYKHM可提高SOD对氧自由基等毒性物质的清除能力,还可减少MDA水平.     

太子健II缓解期防治小儿哮喘作用机理的实验研究

运用鸡卵蛋白致敏和反复诱喘的哮喘豚鼠模型,将豚鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、高剂量和低剂量组5组,观察太子健II对其血及气道内嗜酸细胞浸润和血中白介素-5(IL-5)、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)含量的影响.结果表明太子健II可减少哮喘豚鼠血及气道内EOS浸润,降低血中白介素-5(IL-5)和ECP的水平.说明太子健II可以减轻气道慢性变应性炎症,具有一定的抗哮喘复发的作用.     

雪茶乙醇提取物缓解哮喘症状的作用机理

雪茶（Thamnolia vermicularia）为地茶科植物,生长于我国西南地区.为探究雪茶乙醇提取物（EETV）缓解哮喘症状的作用机理,首先使用不同离子通道激动剂和阻断剂作用于小鼠离体气管环,检测EETV对气管环张力的影响.其次建立了哮喘小鼠模型,检测IL-4、IL-13、TNF-α、Muc5ac、Muc5b及TRPC3的mRNA表达量.之后对哮喘小鼠的支气管及肺组织进行HE染色和PAS染色.最后通过肺功能仪检测Rrs值,以评估小鼠肺功能.实验结果表明：VDLCCs、NSCCs、NCX等离子通道参与EETV舒张气管环的过程;EETV可下调IL-4、IL-13、TNF-α、Muc5ac、Muc5b及TRPC3的mRNA表达量,进而改善气管和肺部炎症;EETV可缓解气管壁及平滑肌增厚;EETV可抑制ACh激发的Rrs升高,改善肺功能.     

吸入白细胞介素-5对支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞数及其活化状态的影响

随机选择8例哮喘患者雾化吸入人重组IL-5,分别吸入前、吸入后2 h、24 h和48 h进行外周血有核细胞计数和分类,以放射免疫法测定血清中嗜酸性阳离子蛋白(ECP)及总IgE水平.结果,吸入IL-5后嗜酸性粒细胞(EOS)占细胞总数的百分比、EOS绝对细胞数以及ECP水平均随时间而明显升高,至24 h达最高值,48 h后仍维持在较高水平;IL-5在整个实验过程中对血清总IgE水平无明显影响.表明,吸入IL-5不仅可以促使循环中EOS数明显增多,且还能招致其活化从而参与哮喘的发病过程.     

白细胞介素23基因沉默对支气管哮喘小鼠的影响

目的观察白细胞介素23(IL-23)基因沉默对肺组织IL-23蛋白表达、哮喘鼠气道炎症和支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-5(IL-5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的影响.方法构建siRNA IL-23表达载体并通过脂质体转染获得高浓度的含有siRNA IL-23的浓缩液,RT-PCR和WB法检测IL-23mRNA及IL-23蛋白表达水平,确定转染成功.通过滴鼻方式吸入到卵蛋白(OVA)致敏的小鼠体内,观察其对BALF中炎症细胞的影响;ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子IFN-γ,IL-5,TNF-α,ICAM-1的变化;HE染色观察肺组织病理学改变;WB法检测肺组织中IL-23蛋白表达.结果与对照组相比,模型组及空质粒组BALF中IL-5,TNF-α,ICAM-1水平升高,IFN-γ水平下降,肺组织中IL-23蛋白表达量升高(P0.01),沉默组上述各项指标明显下降,IFN-γ水平升高(P0.01);病理学检测结果表明:与对照组相比,模型组和空质粒组气道内有大量炎性细胞浸润,沉默组炎症受到抑制(P0.01).结论 IL-23在哮喘发病中起重要作用,阻断其基因表达可以明显改变哮喘症状.     

趋化素对肥胖哮喘小鼠气道IL-17表达的影响

为了研究趋化素（chemerin）对肥胖哮喘小鼠气道中IL-17表达的影响。通过酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学染色等方法研究了小鼠体内chemerin和IL-17的表达,选取了36只雄性C57BL/C小鼠随机分至6组,每组6只,分别为正常对照组,肥胖对照组,哮喘模型组,肥胖哮喘组,二甲双胍哮喘组,二甲双胍肥胖哮喘组。造模完毕后,收集各组小鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）、肺组织,检测血清及BALF中chemerin及IL-17浓度,进行BALF细胞计数与分类以及肺组织免疫组化染色。结果表明：与正常对照组、肥胖对照组及哮喘模型组相比,肥胖哮喘组小鼠血清及BALF中chemerin、IL-17浓度明显升高,BALF中嗜酸性粒细胞及中性粒细胞计数增多;经二甲双胍干预后,二甲双胍肥胖哮喘组小鼠chemerin及IL-17浓度较肥胖哮喘组小鼠降低,且各分类细胞计数减少。可见随着chemerin表达的减少,肥胖哮喘小鼠气道IL-17水平降低,chemerin可能参与了肥胖哮喘小鼠气道IL-17的表达。     

五味子木脂素对哮喘模型小鼠Th2相关炎症因子的影响

目的观察五味子总木脂素对哮喘模型小鼠的干预作用,并分析其对Th2相关炎症因子的影响.方法将雄性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为对照组、哮喘模型组和五味子木脂素组,其中,模型组和五味子木脂素组运用卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝建立小鼠的哮喘动物模型,五味子木脂素组灌胃给予五味子木脂素30 m g/kg,1次/d,连续8 d,其余组以蒸馏水作为对照,运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中卵清蛋白特异性抗体Ig E和肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)的水平,并观察肺组织病理学变化.结果与模型组比较,五味子木脂素组小鼠的哮喘症状得到明显改善,肺组织的炎性损伤明显减轻,体内IL-4、IL-5和Ig E的水平也显著下降.结论五味子木脂素具有良好的治疗哮喘的生物活性.     

哮喘患者IL-4基因单核苷酸多态性的病例对照研究

目的分析过敏性哮喘(简称哮喘)患者IL-4的表达及IL-4基因单核苷酸多态性(SNP)与哮喘遗传易感性的关系。方法应用ELISA法检测67例过敏性哮喘患者和85例对照组的血清中IL-4的表达情况,采用测序的方法检测两组中IL-4基因单核苷酸多态性(SNP)rs2227284、rs2070874、rs4986964、rs2243250位点的基因分型情况,并进行统计学分析。结果实验组患者血清IL-4的表达增高,P0.05;4个SNP各基因型在实验组和对照组中没有明显差异,P0.05。结论患者血清中IL-4的表达增高,rs2227284、rs2070874、rs4986964、rs2243250多态性与IL-4的表达增高没有明显关联。     

大承气汤对支气管哮喘及肺肠合病Treg/TH17免疫机制的作用

目的 从“肺与大肠相表里”理论出发，以大承气汤通肠利肺作用为切入点，观察支气管哮喘（简称哮喘）及肺肠合病大鼠动物模型及在大承气汤方药干预下，肺与大肠之间共同免疫物质TH17/Treg的变化，探讨“肺与大肠相表里”的免疫机制.方法 建立哮喘组、肺肠合病组、大承气汤组哮喘干预组与肺肠合病干预组动物模型，检测各组大鼠外周血淋巴细胞中Th17/Treg亚群分布表达,及血清中 IL-17，IL-6，IL-2的水平.结果 与正常对照组比较，哮喘组及肺肠合病组大鼠外周血中Th17细胞比例升高，Treg细胞比例降低，血清中IL-6，IL-17水平升高，IL-2水平降低，有差异具有统计学意义（P＜0.005）；肺肠合病组大鼠组更明显（P＜0.005）.在大承气汤干预下，与哮喘组比较，哮喘干预组与肺肠合病干预组Th17细胞比例降低，Treg细胞比例升高，血清IL-6，IL-17水平下降，IL-2水平升高，差异有统计学意义（P＜0.005）.结论 哮喘发病时肠道功能的变化可能导致肺、肠TH17/Treg的免疫失衡，免疫反应向呼吸道粘膜等部位迁移，加重哮喘的发病.大承气汤是可以通过调节肠道TH17/Treg免疫，提高黏膜屏障功能，降低淋巴细胞的“归巢”作用，减轻哮喘发病.     

支气管哮喘患者吸入白细胞介素-5所致细胞间粘附因子增高的研究

采用随机、双盲及设置对照组的办法进行研究。在吸入ＩＬ５之前，对８例不吸烟的哮喘患者及６例非哮喘过敏性疾病患者测定其痰及血清的ｓＩＣＡＭ１；吸入ＩＬ５后，于２ｈ、２４ｈ、４８ｈ及７２ｈ取上述标本分别测定其ｓＩＣＡＭ１的水平。结果示对照组患者的ｓＩＣＡＭ１在整个研究过程中都没有明显的改变。但吸入ＩＬ５后支气管哮喘患者于痰中ｓＩＣＡＭ１出现明显的增高，于４８ｈ达最高峰，但持续不超过７２ｈ。同样的结果亦出现在血清中。研究表明ＩＬ５可能是导致支气管哮喘患者痰及血的ｓＩＣＡＭ１增高的原因，对非哮喘过敏疾病患者则无此作用。     

IL-12在哮喘动物模型BALF中的动态变化及意义

目的观察哮喘动物模型支气管肺泡灌洗液（branchoalveolar lavage fluids，BLAF）中白介素-12（interleukine-12，IL-12）的动态变化及对嗜酸性细胞（eosinophile，EOS）凋亡指数的影响。方法将62只Wistar大鼠喂养7d后，随机分为正常对照组（6只）、哮喘组（56只），哮喘组又随机各取8只分为7个不同的时相组。哮喘各时相组于第1天及第7天用蛋白粉（ovalbumin，OVA）10mg、氢氧化铝20mg和生理盐水制成的2ml悬液腹腔注射致敏，对照组用生理盐水2ml腹腔注射；哮喘各时相组第15d开始均用1％OVA悬液雾化吸入激发，1次／d，1h／次，共7d，正常对照组用生理盐水代替1％OVA悬液，余同哮喘组。末次激发后，对照组1h麻醉，哮喘组分别于1h、8h、24h、48h、96h,7d和14d麻醉，各组麻醉后行支气管肺泡灌洗（branchoalveolar lavage，BAL），用流式细胞仪测定BLAF中EOS凋亡指数，用酶联免疫吸附法（enzynle linked immunosorbent assay，ELISA）测定IL-12浓度。结果哮喘各时相组BALF中，IL-12浓度的动态变化呈双峰，1h上升，8～24h迅速回落到低峰，48h再次上升，96h达到高峰，此后下降，14d降至对照组水平；而EOS凋亡指数的动态变化呈双峰，1h上升，而8h下降，24h降至低峰，48～96h快速上升，达到高峰，随后下降，14d降至对照组水平；IL-12与EOS凋亡指数呈同步变化，两者作直线相关分析呈正相关。结论在哮喘大鼠气道中，IL-12可能通过调节EOS凋亡指数，从而调节气道的炎症反应。     

Helper T cells regulate type-2 innate immunity in vivo

Type-2 immunity requires orchestration of innate and adaptive immune responses to protect mucosal sites from pathogens. Dysregulated type-2 responses result in allergy or asthma. T helper 2 (T(H)2) cells elaborate cytokines, such as interleukin (IL)-4, IL-5, IL-9 and IL-13, which work with toxic mediators of innate immune cells to establish environments that are inhospitable to helminth or arthropod invaders. The importance of T(H)2 cells in coordinating innate immune cells at sites of inflammation is not known. Here we show that polarized type-2 immune responses are initiated independently of adaptive immunity. In the absence of B and T cells, IL-4-expressing eosinophils were recruited to tissues of mice infected with the helminth Nippostrongylus brasiliensis, but eosinophils failed to degranulate. Reconstitution with CD4 T cells promoted accumulation of degranulated IL-4-expressing cells, but only if T cells were stimulated with cognate antigen. Degranulation correlated with tissue destruction, which was attenuated if eosinophils were depleted. Helper T cells confer antigen specificity on eosinophil cytotoxicity, but not cytokine responses, so defining a novel mechanism that focuses tissue injury at sites of immune challenge.     

星状神经节阻滞治疗支气管哮喘临床观察

目的：探讨星状神经节阻滞治疗支气管哮喘的疗效．方法：对近5年来接诊的23例支气管哮喘慢性持续期或急性发作的患者,用星状神经节阻滞的方法治疗．结果：23例支气管哮喘慢性持续期或急性发作的患者,用星状神经节阻滞的方法治疗,能迅速终止支气管哮喘的慢性持续期或急生发作,而经常发作的患者发作频率减小而症状也减轻,甚至不发作．结论：支气管哮喘的慢性持续期或急生发作的患者用星状神经节阻滞的方法治疗效果好．     

基于德尔菲专家咨询法对哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟、清除标准的研究

 为建立哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟、清除标准,采用改良德尔菲专家咨询法进行两个阶段的专家咨询研究.第一阶段,编制哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟、清除的入选指标专家咨询问卷,并向全疆30位维吾尔医学专家发送,通过频数计算筛选出精神气色逐步好转,小便色清、量多,脉象呈粗和(或)波浪状等频率大于70%的11个哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟的证侯特征;睡眠质量明显提高,舌苔滋润,恢复原气质时的状态,大便颜色略黑呈铁锈色,随后变成淡黄色或土黄色等频率大于70%的10个哮喘异常黑胆质病证异常体液清除的证侯特征,共进行一轮.第二阶段,根据筛选结果再次编制咨询表,并进行对哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟、清除证侯特征权重系数的研究,共进行两轮咨询.每轮回收有效问卷均30份,回收率均100%.专家平均权威系数为0.87,提示专家权威度高.经分析各证侯特征权重系数,得出判断哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟的主症为6个,次症为5个;判断哮喘异常黑胆质病证异常体液清除的主症为5个,次症为5个.专家集中程度和协调程度均高,各证侯特征变异系数均小于0.3,哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟证侯特征一致性系数为χ²=0.275,P=0.000,两轮相等;哮喘异常黑胆质型异常体液清除证侯特征一致性系数为χ²=0.270,P=0.000,两轮相等.由此得出,通过改良德尔菲法建立的哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟、清除标准,为哮喘异常黑胆质病证异常体液成熟、清除的正确诊断、规范用药、提高疗效提供客观量化依据.     

紫外光固化中阻蚀胶薄膜应力分析及成膜控制

针对压印光刻工艺实现图章保真复型对阻蚀胶薄膜的均匀度和应力分布的要求，对匀胶过程中的时间、转速和加速度等参数进行了分析，并采用基片曲率法的Stoney公式及其近似计算公式，对不同参数环境下的薄膜应力及应力梯度分布作了计算分析．通过对比几组试验参数的应力分析结果，验证了薄膜应力的大小和应力梯度的分布主要与匀胶时间和速度有关，而与加速度的关系较小．因此，当选用匀胶转速为5000r／min、时间为30s时，薄膜应力分布最优，成膜质量最佳，能够满足压印光刻工艺中300nm级图型的保真复型需求．     

PM2.5暴露对哮喘大鼠气道形态及FOXP3基因DNA启动子区甲基化影响的实验研究

目的探讨PM2. 5暴露对哮喘大鼠气道形态及FOXP3基因DNA启动子区甲基化的影响。方法选择50只SD大鼠,随机选择10只作为空白对照组,40只采用卵清蛋白激发、致敏构建哮喘模型,并根据PM2. 5干预剂量的不同,进一步分为单纯哮喘组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,比较不同剂量PM2. 5对哮喘大鼠的病程进展影响。结果 1)与对照组及单纯哮喘组相比,所有PM2. 5干预组大鼠的体质量均明显较低(P 0. 05)。(2)与对照组相比,哮喘组肺泡灌洗液内细胞总数升高最显著,低、中剂量干预组也明显升高,但高剂量干预组无明显变化(P> 0. 05)。与对照组及哮喘组比较,随着PM2. 5干预剂量的升高,大鼠BALF内的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞计数也呈逐渐上升趋势,巨噬细胞呈逐渐下降趋势,差异均具有统计学意义(P <0. 05)。(3)对照组、哮喘组、低剂量组、中剂量组、高中剂量组的FOXP3基因DNA启动子区的甲基化水平分别为(7. 24±0. 91)、(5. 04±3. 08)、(1. 87±1. 46)、(1. 57±0. 64)、(2. 04±1. 14),FOXP3 mRNA相对表达量分别为(1. 02±0. 18)、(0. 81±0. 19)、(0. 62±0. 15)、(0. 53±0. 14)、(0. 32±0. 04),随着PM2. 5干预剂量的提高,大鼠的FOXP3基因DNA启动子区的甲基化水平及FOXP3 mRNA相对表达量均逐渐降低。结论 PM 2. 5对哮喘大鼠的损伤有一定的剂量依赖性,这可能与调低FOXP3基因DNA启动子区甲基化水平及FOXP3 mRNA相对表达量有关。     

哮喘动物模型建立的研究进展

通过对近10年国内,外支气管哮喘动物建模方面实验研究的回顾与整理,总结哮喘动物模型建立及评价方面最新进展,发现过敏性哮喘模型仍是最经典与广泛复制的模型类型,而基于哮喘表型与异质性因素而提出的中性粒细胞哮喘、难治性哮喘模型的复制也取得一定进展。