雷公藤内酯醇降低T淋巴细胞核因子—kB的活性

目的：研究雷公藤内酯醇对Ｔ淋巴细胞核因子－ｋＢ（ＮＦ－ｋＢ）活力的影响，进一步研究雷公藤内酯醇免疫抑制作用的机制。方法：和凝胶迁移率实验（ＥＭＳＡ）检测不同浓度的雷公藤内酯醇对于普通培养状态下和同时使用佛波脂／植物血凝素（ＰＭＡ／ＰＨＡ）激活的Ｊｕｒｋａｒ细胞中ＮＦ－ｋＢ活力的影响。结果：在普通培养状态下和同时使用ＰＭＡ／ＰＨＡ激活的Ｊｕｒｋａｔ细胞中均存在一定活力的ＮＦ－ｋＢ，使用ＰＭＡ／ＰＨＡ     

雷公藤内酯醇对人近端肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子合成的影响

目的：观察雷公藤内酯醇对炎症因子刺激下人肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子（ＭＣＰ－１）产生的影响。方法：以ＩＦＮ－γ（２００μｇ／Ｌ）及ＴＮＦα（２０μｇ／Ｌ）联合刺激人近端小管上皮细胞,细胞ＭＣＰ－１蛋白含量以流式细胞仪检测,培养上清中ＭＣＰ－１的分泌量以双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法测定,细胞ＭＣＰ－１ ｍＲＮＡ含量采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ法进行测定。结果：普通培养人近端肾小管上皮细胞及培养上清中有少量ＭＣＰ－１分泌,ＩＦＮ－γ（２００μｇ／Ｌ）及ＴＦＮα（２０μｇ／Ｌ）联合刺激２４ｈ,人近端小管上皮细胞合成ＭＣＰ－１明显增加。雷公藤内酯醇可以抑制肾小管上皮细胞ＭＣＰ－１分泌,并使细胞ＭＣＰ－１ ｍＲＮＡ含量明显降低,该抑制效应呈剂量依赖性。结论：雷公藤内酯醇可以抑制炎症刺激下人近端肾小管上皮细胞合成ＭＣＰ－１,这可能     

雷公藤内酯醇对Bcl—2基因转染细胞凋亡作用的研究

目的：通过比较转染Ｂｃｌ－２（＋／＋）及未转染ｂｃｌ－２（－／－）原癌基因的２Ｂ４细胞，在雷公藤内酯醇作用下细胞凋亡和细胞增殖的差别，探讨了该化合物诱导淋巴细胞凋亡的机制。方法：以ｂｃｌ－２（＋／＋）２Ｂ４细胞及ｂｃｌ－２（－／－）２Ｂ４细胞为研究对象，结合流式细胞仪，ＤＮＡ凝胶电泳，及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入等方法，评价雷公藤内酯醇对此两种细胞的作用，结果：（１）雷公藤内酯醇只能促使ｂｃｌ－２（－／－     

雷公藤内酯醇通过细胞凋亡阻人T细胞增殖

通过观察雷公藤内酯醇是否能导致人外周血Ｔ细胞发生细胞凋亡，探讨该化合物阻止淋巴细胞增殖的作用机理。方法：选择被ＰＨＡ－Ｐ，佛波脂，及白介素－２（ＩＬ－２）等丝分裂原刺激的人Ｔ细胞为研究对象，以吖啶橙染色细胞的形态，ＤＮＡ片断的测定，和ＤＮＡ凝胶电泳作为判断细胞出现细胞凋亡的标准。结果：（１）未发现雷公藤内酯醇能使处于静止状态的Ｔ细胞出现细胞凋亡；（２）雷公藤内酯醇与有丝分裂原同时作用于Ｔ细胞后，其     

雷公藤内酯醇通过细胞凋亡阻止人T细胞增殖

目的：通过观察雷公藤内酯醇是否能导致人外周血Ｔ细胞发生细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ），探讨该化合物阻止淋巴细胞增殖的作用机理。方法：选择被ＰＨＡＰ，佛波脂（ＰＭＡ），及白介素２（ＩＬ２）等有丝分裂原刺激的人Ｔ细胞为研究对象，以吖啶橙染色细胞的形态，ＤＮＡ片断的测定，和ＤＮＡ凝胶电泳作为判断细胞出现细胞凋亡的标准。结果：①未发现雷公藤内酯醇能使处于静止状态的Ｔ细胞出现细胞凋亡；②雷公藤内酯醇与有丝分裂原同时作用于Ｔ细胞后，其３ＨＴｄＲ掺入率明显降低的同时，只有少量的Ｔ细胞呈细胞凋亡的表现，ＤＮＡ片断检测也无显著变化；③对已活化的Ｔ细胞，雷公藤内酯醇可使大量Ｔ细胞呈细胞凋亡样变化，此时其ＤＮＡ片断的测定和ＤＮＡ凝胶电泳均证实活化的Ｔ细胞已发生了细胞凋亡；而且，作者还证实活化的Ｔ细胞细胞凋亡的发生与雷公藤内酯醇呈浓度依赖性。活化的Ｔ细胞３ＨＴｄＲ掺入明显减少。结论：雷公藤内酯醇阻止活化Ｔ细胞增殖的效应与其诱导细胞凋亡作用相关     

雷公藤内酯醇对内皮细胞血管内皮细胞生长因子活？…

目的：研究雷公藤内酯醇对人内皮细胞血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）ｍＮＲＡ表达及ＶＥＧＦ生成与分泌的影响,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法：对人内皮细胞系ＥＣＶ－３０４为研究对象,利用ＲＴ－ＰＣＲ,流式细胞仪,酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂（ＰＭＡ）诱导的内皮细胞ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ表达及ＶＥＧＦ生成与分泌的影响。结果：雷公藤内酯醇可以抑制     

雷公藤内酯醇对T细胞功能的影响与cAMP／PKA的关系

目的：观察雷公藤内酯醇是否能够影响淋巴细胞内环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）水平及依赖ｃＡＭＰ蛋白激酶（ＰＫＡ），探讨雷公藤内酯醇影响了Ｔ细胞功能的作用机制。 方法：以人外周血Ｔ细胞为研究对象，分别采用放射免疫法和酶底物显色法测定细胞内ｃＡＭＰ水平及ＰＫＡ酶活性。 结果：（１）雷公藤内酯醇能够明显增加Ｔ细胞内ｃＡＭＰ水平，同时细胞内ＰＫＡ酶活性也明显增强，并且与雷公藤内酯醇的浓度密切相关；（２）应用腺苷酸环     

α—干扰素致甲状腺自身免疫机制的研究

为阐明α－干扰素（ＩＦＮ－α）致甲状腺自身免疫的机制，应用ＩＦＮ－α与自身免疫性甲状腺疾病（ＡＩＴＤ）患者的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的体外培养系统，观察在不同浓度的ＩＦＮ－α作用下，６例正常人和９例ＡＩＴＤ患者的Ｔ细胞、Ｔ细胞亚群、Ｂ细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞的变化以及甲状腺自身抗体的产生，发现ＩＦＮ－α对体外的Ｔ淋巴细胞呈普遍的抑制作用。这种抑制作用在抑制性Ｔ细胞（ＣＤ８／ＣＤ１１ｂ）亚群表现的尤为显著。ＩＦＮ－α的这种抑制和刺激作用同样表现在ＡＩＴＤ患者和正常对照组，不具有选择性。根据免疫系统Ｔ细胞亚群调节平衡学说，临床应用ＩＦＮ－α诱致的甲状腺自身免疫作用可能与抑制性Ｔ细胞功能低下有关。ＩＦＮ－α有刺激Ｂ细胞和巨噬细胞增生作用，而Ｂ细胞、巨噬细胞功能的亢进可能也是导致甲状腺自身免疫的原因之一。     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T辅助细胞1,2型因子的表达

目的 了解慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤ＾＋４Ｔ细胞内Ｔ辅助细胞１,２型（Ｔｈ１／Ｔｈ２）因子,干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）和白细胞介素－４（ＩＬ－４）的表达情况,以测定Ｔｈ０／Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞的百分数,探明Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 常规分离ＰＢＭＣ,在佛波二酯（ＰＭＡ）,Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ,Ｍｏｎｅｎｓｉｎ的刺激下,采用流式细胞检测仪（Ｆ     

抗肺癌单克隆抗体ING－1和干扰素IFN－a对LAK细胞活性和抗体依赖性细胞毒效应的影响

抗肺癌单克隆抗体ＩＮＧ－１和干扰素ＩＦＮ－ａ对ＬＡＫ细胞活性和抗体依赖性细胞毒效应的影响陈茂森ＨａｎｋＪＡＳｕｒｆｕｓＪｓｃｈｉｌｌｅｒＪＨＡｒｂａｉｇｅＹｓｏｎｄｅｌＰＭ临床上单独应用白细胞介素－２（ＩＬ－２）或联合应用淋巴因子激活杀伤细胞（ＬＡＫ...     

雷公藤抑制致敏小鼠T淋巴细胞活化及其白细胞介素-5mRNA表达

通过对致敏小鼠活化Ｔ淋巴细胞 (ＣＤ2 5)与白细胞介素(ＩＬ) 5ｍＲＮＡ表达相关性的观察 ,探讨雷公藤内酯醇对Ｔ淋巴细胞活化和ＩＬ 5ｍＲＮＡ表达的影响 ,同时就雷公藤内酯醇的作用机制与氟美松进行比较。一、材料与方法1.动物模型建立及分组 :4～ 6周健康ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 (第三军医大学动物所提供 ) 2 4只 ,雌雄不限 ,体重 16～ 2 0ｇ。随机分为 4组 ,每组 6只。 (1)Ａ组 :致敏组 ,以卵蛋白 (ＯＶＡ)致敏和激发[1] 建立致敏模型 ;(2 )Ｂ组 :雷公藤内酯醇组 ,每次激发前 1ｈ腹腔注射雷公藤内酯醇 40 μｇ/ｋｇ体重 ;(3)Ｃ组 :氟美松组 ,…     

淋巴丝虫感染中T淋巴细胞的免疫应答──白细胞介素2和γ干扰素的体外诱生分析

目的：探讨淋巴丝虫感染中Ｔ淋巴细胞的免疫应答机制。方法：检测安徽省班氏丝虫病流行区人群及感染马来丝虫的长爪沙鼠体外诱生的白细胞介素２（ＩＬ－２）和γ干扰素（ＩＦＮ－γ）。结果：对非特异性有丝分裂原ＰＨＡ及ＣｏｎＡ的刺激，各组人群外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ水平无显著差异。对马来丝虫成虫抗原的刺激，微丝蚴血症者ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ水平比流行区无症状、无微丝蚴血症者显著低下，长爪沙鼠实验结果与人群的相似。结论：本实验提示，班氏丝虫病流行区微丝蚴血症者及马来丝虫微丝蚴血症长爪沙鼠的Ｔ细胞对丝虫抗原处于一种低应答状态，且这种受抑制的Ｔ细胞主要是Ｔｈ１亚群细胞。     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生的实验研究

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况。方法：从６月龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：①经１０－８、１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ刺激４８ｈ后，系膜细胞的ＡＴ１受体ｍＲＮＡ表达均有升高，并呈一定的浓度依赖性；而ＡＴ２受体ｍＲＮＡ仅在１０－５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激下才有微弱表达。②１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ能明显促进系膜细胞产生ＦＮ和ＦＮ的ｍＲＮＡ表达的上调，并与ＡｎｇⅡ刺激浓度呈正相关。结论：ＡｎｇⅡ刺激后可使系膜细胞的ＡＴ１受体基因表达和ＦＮ的产生明显增加，并呈一定的浓度依赖性，而ＡｎｇⅡ高浓度可以使ＡＴ２受体表达上调     

细胞因子对树突状细胞抗肝癌作用的影响

目的研究人血树突状细胞（ＤＣ）和细胞因子ＴＮＦ,ＧＭＣＳＦ或ＩＦＮγ联合ＤＣ对淋巴因子和ＰＨＡ激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外杀伤人肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２的影响．方法实验分为Ｌ组（ＬＰＡＫ）,Ｄ组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ）,Ｔ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５０００ｋＵ／Ｌ）,Ｔ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ１００ｋＵ／Ｌ）,Ｉ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ５００ｋＵ／Ｌ）和Ｉ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ１００ｋＵ／Ｌ）．每组效靶细胞比分别采用５∶１和１０∶１两种．培养４８ｈ后用中性红比色法检测细胞毒活性．结果Ｌ,Ｄ,Ｔ２和Ｔ１组的细胞毒活性依次增强,各组间差异有显著性（Ｐ＜００１）．Ｇ１和Ｇ２组均高于Ｄ组（Ｐ＜００１）,但Ｇ１,Ｇ２组间差异无显著性．Ｉ１,Ｉ２组与Ｄ组相比,也无显著性差异．随效靶比增加,各组细胞毒活性均相应增强．结论ＤＣ能增强ＬＰＡＫ细胞对肝癌细胞ＢＥＬ７４０２的细胞毒活性;ＴＮＦ或ＧＭＣＳＦ与ＤＣ联用,两者有协同作用;但与ＩＦＮγ联用,则无进一步增强作用     

血小板活化因子介导过氧化氢诱导肾小球系膜细胞-白细胞粘附

目的：研究过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）对肾小球系膜细胞－中性粒细胞（ＧＭＣ－ＰＭＮ）粘附的影响及其机制。方法：用体外培养的人肾小球系膜细胞与不同浓度血小板活化因子（ＰＡＦ）或Ｈ２Ｏ２作用，并以各类拮抗剂观察其对ＧＭＣ－ＰＭＮ粘附的影响。结果：不同浓度Ｈ２Ｏ２促进ＧＭＣ依赖性ＰＭＮ粘附，以１０－２ｍｏｌ／Ｌ浓度的作用最强，使ＰＭＮ粘附率增强２．２倍。用ＰＡＦ受体拮抗剂预处理ＰＭＮ对粘附无影响。预处理ＧＭＣ可显著降低粘附率，磷酯酶Ａ２抑制剂对溴基苯酰基溴、钙调蛋白抑制剂氯丙嗪和钙离子螯合剂ＥＧＴＡ预处理ＧＭＣ，均能降低Ｈ２Ｏ２引起的ＧＭＣ－ＰＭＮ粘附。结论：Ｈ２Ｏ２可促进ＧＭＣ与ＰＭＮ的粘附。Ｈ２Ｏ２的这一作用可能是通过ＰＡＦ介导的。     

过氧化氢在老化红细胞调节T淋巴细胞分泌机制中的作用

制备老化红细胞模型，测定老化红细胞的过氧化氢酶（ＣＡＴ）活力，利用丝裂原激活的小鼠脾细胞方法测定Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２的分泌水平，并利用抗氧化剂进一步探讨。结果表明：０．５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ、１×１０－３ｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２能明显降低老化红细胞的ＣＡＴ活力（Ｐ＜０．０１），丹酚酸Ｂ５μｇ、１５μｇ能明显提高老化红细胞的ＣＡＴ活力（Ｐ＜０．０１）。５×１０５／ｍｌ、１×１０６／ｍｌ、５×１０６／ｍｌ老化红细胞对Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２的分泌水平有明显的提高作用。经过０．５×１０－３ｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２温育后的老化红细胞明显降低Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２的分泌水平（Ｐ＜０．０１）；再经过丹酚酸Ｂ５μｇ温育后的老化红细胞明显提高Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２的分泌水平（Ｐ＜０．０１）。由此说明Ｈ２Ｏ２可能介导老化红细胞调节Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２的分泌活动。     

感染乙型肝炎病毒MT2淋巴细胞表达Fas

目的：观测Ｔ淋巴细胞－ＭＴ２细胞对乙型肝炎病毒感染的敏感性，了解病毒感染对淋巴细胞表达Ｆａｓ的影响。方法：体外培养ＭＴ２细胞，用ＨＢＶ ＤＮＡ阳性血清直接感染，用酶联免疫和斑点杂交，ＰＣＲ法检测感染后的细胞病毒复制与表达状况，用酶联免疫法检测了Ｆａｓ抗原表达。结果：ＭＴ２细胞于阳性血清感染后第八天可测到ＨＢｅＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ同时出现Ｆａｓ表达信号，结论：ＭＴ２细胞对ＨＢＶ易感，ＨＢＶ     

肺结节病支气管－肺泡灌洗液中血管紧张素转换酶与T淋巴细胞亚群相关性的研究

应用笠原法检测１９例肺结节病患考支气管。肺泡灌洗液中血管紧张素转换酶（ＢＡＬＦ－ＡＣＥ）水平，并将灌洗液中的淋巴细胞％，Ｔ辅助细胞／Ｔ抑制细胞（Ｔ＿Ｈ／Ｔｓ）比值与ＢＡＬＦ－ＡＣＥ含量进行相关分析，结果二者之间有明显正相关（ｒ＝０．４４５３，Ｐ＜０．０５和，ｒ＝０．７０８５，Ｐ＜０．０１）。活动性肺结节病随激素治疗病情好转，ＢＡＬＦ－ＡＣＥ水平逐渐下降。提示ＢＡＬＦ－ＡＣＥ是诊断肺结节病及判定其活动性又一敏感的生物学指标。     

乙型肝炎病毒X蛋白对NFкB启动子和增强子反式激活作用

应用杆状病毒穿梭质粒载体与ＨＢＶＸ表达质粒共转染ＨｅＰＧ２细胞,研究ＨＢＶＸ蛋白对杆状病毒载体中的ＮＦкＢ启动子和增强子反式激活作用,作为进一步杆状病毒载体应用研究的基础。 １．材料与方法：（１）为构建ＮＦкＢ启动子和增强子驱动的氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）报告基因质粒,合成寡核苷酸引物 Ｆ１含ＮＦкＢ启动子、增强子序列（３０ ｂｐ）及 ＣＡＴ启动于 ５’末端序列（２０ｂｐ）,引物 Ｆ２含 ＣＡＴ基因 ３’端序列,以ｐｃＤＮＡ ３．１／ＣＡＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）质粒为模板, ＰＣＲ扩增获得ＮＦкＢ启动子…     

恶性疟原虫疫苗研究Ⅵ．多价保护性抗原的免疫原性

利用工程菌ＰＷＲ－１／ＪＭ１０９以融合蛋白的形式表达人工合成的恶性疟重组基因ｐｆＣＭＲ。经培养、ＩＰＴＧ诱导后收集菌体、超声波破菌、透析、电泳纯化等步骤，分离表达蛋白。结果在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中显示６５ｋＤ蛋白诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的体液免疫和细胞免疫反应进行了观察。结果表明，纯化后的蛋白免疫鼠血清能与表达产物粗提物产生特异的免疫反应，其抗体滴度高达１∶５１０２；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ在６５ｋＤ处亦产生特异免疫反应；另在体外用ＰＨＡ和粗提物以及纯化蛋白刺激免疫鼠脾细胞，其Ｔ淋巴细胞转化率分别高达４４．２０±５．２６％、２４．００±４．７４％和３３．５０±３．８４％。提示融合蛋白中含有恶性疟原虫抗原Ｔ－／Ｂ－细胞位点。