抑制糖原合酶激酶活性改善动脉粥样硬化小鼠内皮祖细胞功能

目的 探讨抑制糖原合酶激酶3β(GSK3β)活性对动脉粥样硬化(As)小鼠内皮祖细胞(EPC)数量、增殖、迁移及黏附功能的影响。方法 建立As小鼠模型,密度梯度离心法分离培养As小鼠骨髓源EPC,基因转染法转染抑制GSK3β活性的重组缺陷型腺病毒(基因转染组)至对数生长期的EPC。采用镜下计数法、MTT法、改良Boyden小室迁移试验及黏附试验法测定GSK3β活性对As小鼠EPC数量、增殖、迁移及黏附能力的影响。结果 与正常对照组比较,As小鼠EPC数量显著减少,细胞增殖、迁移及黏附能力明显受损(P＜0.01,n＝5)。与As组比较,抑制GSK3β活性的基因转染组EPC数量(P＜0.01,n＝5)及增殖能力(P＜0.05,n＝5)显著增加,EPC的迁移功能及黏附功能均明显改善(P＜0.01,n＝5)。结论 抑制GSK3β活性可增加As小鼠EPC数量并显著改善其增殖、迁移及黏附功能。     

内皮祖细胞分泌SDF-1及其抗内皮祖细胞凋亡作用

目的探讨内皮祖细胞（EPC）能否分泌基质细胞衍生因子-1（SDF-1）,及SDF-1能否抑制紫杉醇、AMD3100（特异性阻断SDF-1与其受体CXCR4结合）等诱导的EPC凋亡。方法取不同时间段的EPC培养液上清,采用ELISA检测上清中SDF-1a浓度。用不同浓度的紫杉醇、AMD3100及无血清培养诱导EPC凋亡;或在上述基础上加不同浓度的SDF-1a处理;48 h后采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组EPC凋亡率。结果EPC培养液上清中SDF-1a浓度显著高于对照组（P<0.01）。紫杉醇、AMD3100和无血清培养一样,均可显著增高EPC凋亡率（P<0.01）;加入外源性SDF-1a可显著降低紫杉醇组、无血清培养组EPC凋亡率（P<0.01）,却不能降低AMD3100组EPC凋亡率。结论体外培养的EPC可分泌SDF-1a,采用AMD3100阻断其作用可诱导EPC凋亡;SDF-1a可对抗紫杉醇和无血清培养诱导的EPC凋亡,但对AMD3100诱导的凋亡无效。     

罗格列酮对高糖环境下内皮祖细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高糖环境对内皮祖细胞(EPC)的损伤作用及罗格列酮对其的保护作用.方法 将健康志愿者骨髓单个核细胞接种于包被有人纤维黏连蛋白的培养板中,培养7天后获得正分化的EPC.贴壁细胞随机分为对照组、高糖组和高糖加罗格列酮组,分别于24h、96h后MTT测定3组细胞增殖功能,PI单染法检测其凋亡率.结果 高糖作用24h促进EPC的增殖能力,与对照组比,其OD值更大(P<0.05),且凋亡率没有明显增加(P>0.05).96h后,高糖明显抑制其增殖能力,OD值低于对照组(P<0.05),且凋亡率明显增加(P<0.01).罗格列酮干预后OD值比高糖组明显增加(P<0.05),且凋亡率明显降低(P<0.01).结论 长期高糖作用可抑制EPC增殖功能,使凋亡率增加;罗格列酮可能保护高糖环境下EPC的增殖能力并降低凋亡率.     

贝那普利对体外高血压患者内皮祖细胞功能的影响及时间依赖性研究

目的:探讨贝那普利对体外高血压患者内皮祖细胞增殖、迁移、黏附、凋亡、氧化应激能力影响及时间依赖性。方法:选取符合《中国高血压防治指南2010》的诊断标准的1级高血压病患者,用密度梯度离心法分离单个核细胞,acLDL-DiI和、FITC-lectin染色程双阳性细胞被认为是正在分化的内皮祖细胞(EPC)。对照组为年龄、性别与研究组相匹配的健康体检者。将培养5d的EPC用于研究分别在贝那普利不同干预时间点收获细胞,检测EPC的增殖、迁移、黏附能力及凋亡、氧化应激指标。结果:1与对照组比较高血压组外周血EPS增殖、迁移、黏附能力均明显降低(P0.01),EPS凋亡率明显增加,氧化应激反应明显增高(P0.01)。2贝纳普利可以显著改善EPC增殖、迁移、黏附能力及凋亡和氧化应激反应,且呈时间依赖性(P0.05)。结论:贝那普利可以改善高血压患者EPC增殖、迁移、黏附、凋亡和氧化应激能力,并呈时间依赖性。     

胰岛素改善糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞动员障碍研究

目的:探讨胰岛素对糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞(EPC)动员的影响及其机制.方法:链脲霉素诱导C57BL/6雄鼠糖尿病,随机分为非糖尿病组、糖尿病组和糖尿病胰岛素治疗组(胰岛素组)3组(各组n=32).入组小鼠饲养2个月后行左侧股动脉高位结扎离断术造成急性单侧后肢缺血模型.胰岛素组皮下注射胰岛素控制血糖.流式细胞术检测术后(0,1,3,7天,n=6-10)外周血单个核细胞中干细胞因子受体/干细胞抗原-1/胎肝激酶-1阳性早期EPC比例.酶联免疫吸附法测定血浆及骨髓血管内皮生长因子(VEGF)及间充质衍生因子1α(SDF-1α)水平.免疫印迹法测定骨髓VEGF、蛋白激酶B、内皮一氧化氮合酶及基质金属蛋白酶-9的蛋白表达及磷酸化水平,酶谱法测定基质金属蛋白酶-9酶活性.结果:糖尿病组呈现缺血诱导的骨髓EPC动员障碍,动员高峰期其外周血早期EPC数量较非糖尿病组显著减少(P<0.01);并伴随血浆及骨髓VEGF及SDF-1α释放减少(P<0.01);骨髓VEGF蛋白表达受抑制、蛋白激酶B与内皮一氧化氮合酶磷酸化减弱及基质金属蛋白酶-9酶活性受损(P<0.05),差异均有统计学意义.胰岛素组缺血术后骨髓EPC动员能力、VEGF及SDF-1α释放水平及骨髓蛋白激酶B/内皮一氧化氮合酶/基质金属蛋白酶-9信号通路活化水平较糖尿病组均明显提高(P<0.05),差异均有统计学意义.结论:胰岛素改善糖尿病动物缺血诱导的骨髓EPC动员障碍,这种作用可能通过恢复受损的SDF-1α/VEGF信号通路活化而介导.     

雷帕霉素对内皮祖细胞增殖、黏附及迁移能力影响的实验研究

目的药物洗脱支架可抑制支架处血管内膜再内皮化,但对骨髓源性内皮修复作用的影响尚不清楚,为此观察了雷帕霉素对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)增殖、黏附及迁移的影响。方法采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度雷帕霉素(0.01～100ng/ml),培养12天后,激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数。收集培养8天贴壁细胞,分别加入不同浓度雷帕霉素(0.1～200ng/ml)培养12～96h。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察EPC的增殖、迁移和黏附能力。结果雷帕霉素显著抑制骨髓单个核细胞分化为EPC,0.1ng/ml浓度雷帕霉素作用12天,EPC减少了(59.3±5.8)%(P<0.01)。雷帕霉素也显著抑制EPC增殖,其抑制作用随雷帕霉素浓度增加及作用时间延长而增加,1ng/ml浓度雷帕霉素作用24h使EPC数量减少(41.5±2.2)%(P<0.01)。雷帕霉素也显著抑制EPC的黏附和迁移能力。结论雷帕霉素可抑制骨髓单个核细胞分化为EPC,并抑制EPC的增殖及迁移能力。     

基质细胞衍生因子1α参与血管损伤后内皮祖细胞动员及再内皮化

背景 基质细胞衍生因子1(SDF-1)在干/祖细胞动员和归巢过程中起关键作用,最近的研究显示SDF-1在损伤动脉局部强表达,且在稳定性冠心病中其血浆浓度明显高于不稳定性患者.目的 探讨SDF-1是否参与血管损伤后的内皮祖细胞(EPC)动员.方法 采用0.35 mm直径的弹性导丝损伤小鼠左颈总动脉,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测术后各时间点损伤动脉SDF-1α的表达变化;采用SDF-1α酶联免疫吸附测定试剂盒测定术后各时间点外周血及骨髓SDF-1α浓度的变化;流式细胞仪检测术后各时间点外周血EPC(Sca-1 VEGFR2 细胞)数量.给颈动脉损伤小鼠注射SDF-1α单克隆抗体,检测术后各时间点外周血EPC数量,及采用Evans blue染色和病理形态学分析检测14 d后损伤动脉的再内皮化面积和新生内膜增生情况.结果 动脉损伤后1 d即可见损伤血管局部SDF-1α表达明显上调,3 d时达到高峰.外周血SDF-1α浓度在术后1 d明显升高,3 d时达到顶峰.而骨髓SDF-1α浓度在动脉损伤后明显下降,同时外周血EPC数量明显升高(与假手术组比较,P＜0.01).在SDF-1α单克隆抗体注射组,仅术后1 d时外周血EPC数量轻度升高,高于假手术组(P＜0.05),但明显低于IgG1同型对照组(P＜0.05),其余各时间点未检测到外周血EPC数量明显变化(与假手术组比较,P＞0.05).术后14 d SDF-1α单克隆抗体注射组损伤动脉再内皮化面积明显明显低于IgG1同型对照组(P＜0.01),而新生内膜面积两组间无明显差异(P＞0.05).结论 SDF-1参与介导血管损伤后的EPC动员,其介导动员的EPC参与调节动脉内膜损伤后的再内皮化过程.     

微小RNA-126抑制间质转化中内皮祖细胞的增殖与迁移

目的探讨微小RNA-126(mi R-126)对间质转化中的血管内皮祖细胞(EPC)增殖与迁移的影响。方法分离大鼠骨髓源内皮祖细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)诱导EPC的间质转化,慢病毒转染建立mi R-126过表达EPC,通过MMT法检测EPC的增殖,细胞划痕实验与Transwell法检测细胞迁移能力。结果 TGF-β1成功诱导EPC间质转化,mi R-126抑制间质转化中EPC损伤细胞间距的缩短,抑制Transwell小室膜下单位面积的细胞数量。结论 mi R-126过表达抑制间质转化中EPC的增殖与迁移。     

美乐托宁对冠心病患者循环血中内皮祖细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨抗氧化剂美乐托宁对冠心病患者循环血中内皮祖细胞增殖与凋亡的影响及其机制.方法 选择冠状动脉造影确定冠心病患者36例,密度梯度离心法获取冠心病患者外周血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度美乐托宁(0.5、1.0和2.0 mmol/L)干预6、12、24和48 h.MTT法检测美乐托宁对内皮祖细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测美乐托宁对细胞凋亡率的影响,逆转录.聚台酶链式反应技术检测Bcl-2mRNA表达,Western blot检测Bcl-2的蛋白表达.结果 美乐托宁呈浓度和时间依赖性改善体外培养的冠心病患者外周血内皮祖细胞的粘附、迁移和增殖能力(P<0.01);美乐托宁抑制体外培养的冠心病患者外周血中内皮祖细胞的凋亡,作用呈浓度和时间依赖性(P<0.01);美乐托宁上调内皮祖细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).结论 美乐托宁能改善体外培养的冠心病患者外周血内皮祖细胞的粘附、迁移和增殖能力,并通过上调凋亡抑制基因Bcl-2而发挥抑制内皮祖细胞凋亡的作用.     

β-淀粉样蛋白对幼鼠骨髓干细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)对幼鼠骨髓干细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法培养新生小鼠骨髓干细胞,将其分为对照组和Aβ处理组。利用Brd U方法检测两组阳性细胞数;检测Aβ蛋白对幼鼠骨髓干细胞迁移的影响;流式细胞仪检测对照组和Aβ处理组细胞凋亡情况;Western印迹检测Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 Aβ处理组的细胞生长速度明显低于对照组,对照组Brd U阳性率显著高于Aβ处理组(P<0.05);Aβ处理组的细胞迁移距离及凋亡率显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);经Aβ蛋白处理的骨髓干细胞中Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量明显升高,而Bcl-2蛋白表达量与对照组相比明显减少(P<0.01)。结论 Aβ能抑制骨髓干细胞的增殖,加速骨髓干细胞的迁移和凋亡。     

C反应蛋白对内皮祖细胞部分生物学功能的影响及其机制的实验研究

目的 观察C反应蛋白(CRP)对体外培养骨髓源性内皮祖细胞(EPC)数量及增殖、迁移、黏附功能的影响及其机制探讨. 方法 密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集紊I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定.单个核细胞培养7 d后进行实验分组,分为对照组和CRP干预组.CRP干预组加入不同浓度CRP(分别为5、10、15、20 μg/ml)培养48 h,然后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定来观察EPC的增殖、迁移和黏附能力.RT-PCR检测不同浓度下CRP对EPC内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的影响,并检测EPC的NOS活性. 结果 CRP(分别为5、10、15、20 μg/ml)各组EPC数量分别为(58±3)、(54±3)、(47±3)和(39±5)个,对照组EPC数量为(60±3)个.MTT法检测CRP各亚组EPC在490 nm吸光度值分别为0.332±0.003、0.297±0.036、0.273±0.013和0.259±0.035,对照组为0.345±0.014.CRP浓度为10、15、20μ/ml 3个亚组EPC的数量及增殖能力显著低(P＜0.01).CRP各组(10、15、20 μg/ml)与对照组相比EPC黏附数量明显低[(28±2)、(22±3)、(19±3)和(16±2)个比(30±2)个,P＜0.05].不同浓度CRP各组与对照组相比EPC迁移数量明显低[(11±2)、(9±2)、(6±2)和(5±1)个比(12±2)个,P＜0.05].CRP各亚组(5、10、15、20μg/ml)EPC eNOS mRNA相对光密度显著低于对照组.CRP呈剂量依赖性降低EPC NOS活性,CRP各组EPC的NOS活性分别为(66.29±1.81)、(57.44±3.25)、(48.37±3.86)和(36.82±4.89)nmol/mg蛋白,对照组EPC NOS活性为(68.56±2.82)nmol/mg蛋白,其中浓度为10、15、20μg/ml CRP组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 CRP可能通过影响EPC eNOS表达活性降低EPC数量并影响其部分生物学功能.     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞增殖的影响

目的 观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)增殖的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物. 方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入小同浓度辛伐他汀(0.01～10.00μmol/L)培养6～48 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光素结合的植物凝集素(FITC-UEA-I)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数. 结果 辛伐他汀显著抑制骨髓源SPC增殖,0.01μmol/L辛伐他汀作用24 h,SPC数量减少了(5.8±3.1)%(对照组与0.01μmol/L辛伐他汀组分别为4070±184与3833±126,P<0.05).辛伐他汀可促进EPC增殖,其促进作用随辛伐他汀浓度增加及作用时间延长而增加,1.00μmol/L辛伐他汀作用24 h EPC数量增加(2.0±0.1)倍(对照组与1 μmol/L辛伐他汀组分别为1249±146与3762±138,P<0.01). 结论 辛伐他汀抑制SPC增殖,促进EPC增殖,局部应用有抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化可能.     

水飞蓟素对雷帕霉素诱导的内皮祖细胞凋亡和生长抑制的拮抗作用

目的:水飞蓟素对雷帕霉素诱导的内皮祖细胞（EPCs）凋亡和生长抑制的拮抗作用。方法:通过密度梯度离心法分离、培养、鉴定得到EPCs;在EPCs培养物中加入不同浓度（0、01、1、10、100 ng/ml）的雷帕霉素干预24 h和加入（1 ng/ml）雷帕霉素干预不同时间（0 、6、12、24、48 h）。收集细胞检测其增殖和迁移能力。在EPCs培养物中加入不同浓度（0、25、50、100 μg/ml）的水飞蓟素干预24 h后,收集细胞检测其增殖、迁移和凋亡的水平。在EPCs培养物中同时加入（1 ng/ml）雷帕霉素和不同浓度（25、50、100 μg/ml）水飞蓟素干预24 h后,收集细胞检测其增殖、迁移、凋亡和体外血管生成的能力。结果:与未药物干预的EPCs培养物相比较,雷帕霉素（1、10、100 ng/ml）能抑制EPCs增殖和迁移,并随干预浓度的增加和干预时间的延长而增加（P<0.05）。水飞蓟素干预24 h后,50 μg/ml和100 μg/ml的水飞蓟素可明显增加EPCs增殖和迁移的能力（P<0.05）,25~100 μg/ml的水飞蓟素可明显抑制EPCs凋亡（P<005）,并呈浓度依赖性。EPCs在加入雷帕霉素（1 ng/ml）和不同浓度水飞蓟素（25、50、100 μg/ml）共同干预24 h后,50 μg/ml和100 μg/ml的水飞蓟素都可明显改善雷帕霉素对EPCs的促凋亡作用,并能逆转雷帕霉素对EPCs增殖、迁移和血管形成能力的抑制作用（P<0.05）。结论:雷帕霉素能抑制EPCs增殖和迁移,并呈浓度和时间依赖性。水飞蓟素能增强EPCs增殖和迁移,抑制其凋亡,并呈浓度依赖性。水飞蓟素能抑制雷帕霉素对EPCs的促凋亡作用,并能逆转雷帕霉素对EPCs增殖、迁移和血管形成能力的抑制作用。     

雌二醇对骨髓内皮祖细胞部分生物学功能的影响

目的观察雌二醇对体外培养骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量及增殖、迁移、黏附功能的影响。方法密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定。单个核细胞培养4天后进行实验分组,分为对照组和雌二醇治疗组。雌二醇治疗组加入不同浓度雌二醇(分别为0.001、0.01、0.1μmol/L)培养48 h,然后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定来观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果雌二醇剂量依赖性增加EPCs数量并显著改善了EPCs的黏附、迁移和增殖能力,与对照组比较差异显著。结论雌二醇可增加培养EPCs的数量并改善EPCs部分生物学功能。     

SDF-1alpha/CXCR4 decreases endothelial progenitor cells apoptosis under serum deprivation by PI3K/Akt/eNOS pathway

Recent studies have demonstrated that stromal cell-derived factor-1alpha (SDF-1alpha)/CXCR4 interaction regulates multiple cell signal pathways and a variety of cellular functions such as cell migration, proliferation, survival and angiogenesis. In present study, we aimed to determine the effect of SDF-1alpha on endothelial progenitor cells (EPCs) apoptosis induced by serum deprivation and the implication of phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/Akt and mitogen-activated protein kinases (MAPKs) signaling in this effect. EPCs were isolated and characterized. SDF-1alpha decreased EPCs apoptosis induced by serum deprivation in a dose-dependent manner and the inhibitory effect was CXCR4 dependent as confirmed by the total abolishment by AMD3100, a CXCR4-specific peptide antagonist. SDF-1alpha treatment also significant decreased caspase-3 expression and activity. The inhibitory effect of SDF-1alpha on EPCs apoptosis was nearly completely abolished by PI3K inhibitors (either Wortmannin or LY294002) and partially abolished by NOS inhibitor, N(G)-nitro-arginine methyl ester, whereas inhibitors of MAPKs had no significant effect on this inhibitory effect. The treatment of EPCs with SDF-1alpha resulted in time-dependent Akt, eNOS, extracellular-regulated kinase (ERK1/2), p38 MAPK and c-Jun N-terminal kinase (JNK) phosphorylations. These findings suggest that PI3K/Akt/eNOS activation, but not MAPKs activation, is required for the inhibitory effect of SDF-1alpha on EPCs apoptosis.     

晚期内皮祖细胞对共培养心肌细胞功能的影响

目的:研究晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)和心肌细胞(cardiomyocyte,CM)在非接触条件下共培养对CM细胞增殖、凋亡功能的影响,并分析其相关机制。方法:采用密度梯度法从大鼠骨髓获取单个核细胞,培养28 d,FITC-UEA-I、Dil-acLDL和DAPI三染色鉴定为晚期EPCs。分别吸取晚期EPCs和乳大鼠CM,按0∶1,1∶1,5∶1,10∶1的细胞比率分别植于Transwell小室,下室植入晚期EPCs,上室植入CM。将晚期EPCs与CM非接触共培养12～48 h,分别采用MTT比色法、Tunel法检测其增殖、凋亡功能。并于晚期EPCs与CM共培养48 h后,应用ELISA试剂盒检测不同比率组(0∶1～10∶1)上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度。结果:体外培养7 d时,EPCs细胞呈典型长梭形;28 d时,呈铺路石样,并可摄取FITC-UEA-I、Dil-acLDL。晚期EPCs可促进共培养的CM增殖,减少凋亡。随着晚期EPCs与CM细胞比率的增加,不同共培养时间组的CM增殖功能均明显增强(P<0.05),凋亡功能均明显降低(P<0.05);且随共培养时间延长,不同比率组的CM增殖功能亦均明显增强(P<0.05),凋亡功能均明显降低(P<0.05);当晚期EPCs与CM比率为10∶1、共培养48 h时,CM增殖功能最强(P=0.00),凋亡最低(P=0.00)。当晚期EPCs与CM共培养48 h后,随晚期EPCs/CM数量比率的增加上清液中VEGF浓度明显增加(P<0.05)。结论:在非接触共培养条件下,随着晚期EPCs与CM比率的增加以及共培养时间的延长,CM增殖明显增强、凋亡明显降低;可能与晚期EPCs通过分泌VEGF从而改善CM增殖、凋亡功能有关。     

吡格列酮和胰岛素对内皮祖细胞增殖和凋亡及分泌一氧化氮的影响

目的观察吡格列酮和胰岛素对大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)的增殖能力、凋亡及分泌NO能力的影响,并探讨其机制。方法取正常SD大鼠32只,随机分为吡格列酮组和非吡格列酮组,各16只,分别给予吡格列酮和生理盐水灌胃预处理。喂养10天后,断颈处死,密度梯度离心法取骨髓单个核细胞,在M199培养液中培养扩增EPCs并进行鉴定。贴壁细胞培养4天后,将吡格列酮组EPCs消化后进一步分为两组,分别给予胰岛素(1nmol/L)或空白干预,非吡格列酮组EPCs处理同吡格列酮组EPCs。24h后检测NO水平,3天后检测凋亡情况,7天后检测细胞增殖能力。结果吡格列酮预处理能提高EPCs数量(P<0.01),吡格列酮预处理和(或)体外给予胰岛素干预组EPCs与未处理组细胞相比EPCs增殖能力提高(P<0.01),凋亡程度降低(P<0.05),培养上清中NO浓度增加(P<0.05)。结论体内吡格列酮预处理与体外胰岛素干预均能促进EPCs增殖,抑制EPCs凋亡,并促进EPCs分泌NO,且两种药物联合应用具有协同作用。     

过表达Jagged1促老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移

目的 探讨过表达Jagged1对老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移能力的影响.方法 PBS冲洗1～2月龄和19～ 26月龄SD大鼠股骨和胫骨骨髓,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞,应用含10％ FBS的DMEM/F12培养基差速贴壁法进行体外培养,以Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染和vWF免疫组织化学染色进行鉴定.实验分为四组:对照组(未进行基因转染的老龄大鼠内皮祖细胞组)、PIRES2-EGFP转染组、PIRES2-EGFP-Jagged1转染组和未转染的年轻大鼠来源内皮祖细胞组.荧光显微镜下计数GFP表达细胞数并计算转染效率;免疫荧光、RT-PCR和Western blot检测Jagged1 mRNA和蛋白表达;Transwell培养和MTT法分别检测细胞迁移和增殖能力.结果 免疫组织化学、RT-PCR和Western blot检测均显示转染后Jagged1显著增高,PIRES2-EGFP-Jagged1转染组mRNA和蛋白表达均较对照组显著增强(P＜0.01);与对照组相比,过表达Jagged1显著增强老龄大鼠来源内皮祖细胞迁移和增殖能力(P ＜0.05或P＜0.01).结论 过表达Jagged1增强老龄大鼠来源内皮祖细胞增殖和迁移能力.     

Stromal cell-derived factor-1 enhances pro-angiogenic effect of granulocyte-colony stimulating factor

OBJECTIVE: Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) mobilizes bone marrow mononuclear cells into the peripheral circulation. Stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) enhances the homing of progenitor cells mobilized from the bone marrow and augments neovascularization in ischemic tissue. We hypothesize that SDF-1 will boost the pro-angiogenic effect of G-CSF. METHODS AND RESULTS: NIH 3T3 cells retrovirally transduced with SDF-1alpha gene (NIH 3T3/SDF-1) were used to deliver SDF-1 in vitro and in vivo. Endothelial progenitor cells (EPCs) co-cultured with NIH 3T3/SDF-1 cells using cell culture inserts migrated faster and were less apoptotic compared to those not exposed to SDF-1. NIH 3T3/SDF-1 (10(6) cells) were injected into the ischemic muscles immediately after resection of the left femoral artery and vein of C57BL/6J mice. G-CSF (25 mug/kg/day) was injected intraperitioneally daily for 3 days after surgery. Blood perfusion was examined using a laser Doppler perfusion imaging system. The perfusion ratio of ischemic/non-ischemic limb increased to 0.57+/-0.03 and 0.50+/-0.06 with the treatment of either SDF-1 or G-CSF only, respectively, 3 weeks after surgery, which was significantly higher than the saline-injected control group (0.41+/-0.01, P<0.05). Combined treatment with both SDF-1 and G-CSF resulted in an even better perfusion ratio of 0.69+/-0.08 (P<0.05 versus the single treatment groups). Mice were sacrificed 21 days after surgery. Immunostaining and Western blot assay of the tissue lysates showed that the injected NIH 3T3/SDF-1 survived and expressed SDF-1. CD34(+) cells were detected with immunostaining, capillary density was assessed with alkaline phosphatase staining, and the apoptosis of muscle cells was viewed using an in situ cell death detection kit. More CD34(+) cells, increased capillary density, and less apoptotic muscle cells were found in both G-CSF and SDF-1 treated group (P<0.05 versus other groups). CONCLUSION: Combination of G-CSF-mediated progenitor cell mobilization and SDF-1-mediated homing of EPCs promotes neovascularization in the ischemic limb and increases the recovery of blood perfusion.