同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1-Parkin通路在过敏性鼻炎中的作用机制

[目的]探讨同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)-Parkin通路在卵清蛋白（OVA）所致过敏性鼻炎（AR）中的作用机制.[方法]选择雌性BALB/c小鼠随机分为对照组和模型组，采用OVA致敏（25μg OVA）和激发（100μg OVA）的方法建立AR小鼠模型，在激发期间观察并记录两组小鼠的打喷嚏和挠鼻次数.采用HE染色方法观察鼻黏膜上皮细胞的形态和嗜酸性粒细胞的浸润情况;采用Western blot法检测两组小鼠鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和线粒体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3的表达水平.[结果]与对照组比较，模型组小鼠打喷嚏和挠鼻次数明显增多（P<0.05），鼻黏膜下炎性细胞浸润明显，鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达均显著升高，Bcl-2表达显著降低.[结论]P INK1-Parkin信号通路可能改善AR小鼠鼻黏膜组织的炎症反应，抑制炎症细胞因子的表达，对AR具有保护作用.     

球形脂联素对间歇低氧所致H9C2细胞损伤的保护作用及机制

目的：探讨Parkin介导的线粒体自噬在球形脂联素(globular adiponectin,gAPN)减轻间歇低氧(intermittent hypoxia, IH)所致H9C2心肌细胞损伤中的作用及相关机制。方法：建立H9C2细胞IH模型来模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征。 采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。采用免疫印迹法检测Parkin、Bax、Bcl-2蛋白表达。采用Parkin siRNA抑制Parkin基因表达。采用LC3与线粒体红色荧光探针进行荧光共定位检测线粒体自噬。结果：IH暴露后,H9C2细胞凋亡率、Bax及Parkin蛋白表达水平、线粒体自噬明显升高,MMP下降,Bcl-2 蛋白表达水平下降;给予gAPN保护后,IH+gAPN组细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平较IH组下降,MMP较IH组升高,Bcl-2及 Parkin蛋白表达水平、线粒体自噬也较IH组升高。抑制Parkin基因表达后,线粒体自噬明显下降,线粒体损伤、心肌细胞凋亡率明显增加。结论：gAPN通过上调Parkin介导的线粒体自噬减轻IH所致H9C2心肌细胞损伤。     

白藜芦醇诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用及机制

目的探讨白藜芦醇(RES)对人肝癌细胞HepG2凋亡的作用及其影响机制。方法选取对数生长期人肝癌细胞HepG2,分为对照组(DMSO)和RES组(40μmol/L),通过MTT检测RES对HepG2细胞增殖的影响;应用JC-1染色观察RES对HepG2细胞线粒体膜电位的影响;使用Western blot检测RES对HepG2细胞线粒体自噬相关蛋白PINK1及Parkin的影响;检测HepG2细胞自噬及凋亡相关蛋白Beclin 1及Bcl-2表达情况;使用TUNEL染色观察RES对HepG2细胞的凋亡作用。结果 MTT检测结果显示,经RES处理后12及24 h后,HepG2细胞增殖被明显抑制;JC-1染色结果显示,RES处理HepG2细胞12及24 h后,HepG2细胞线粒体膜电位显著降低;Western blot结果显示,RES处理HepG2细胞12及24 h后,线粒体自噬相关蛋白PINK1及Parkin显著上调;RES处理HepG2细胞12及24 h后,Beclin 1蛋白表达显著升高而Bcl-2蛋白表达量明显降低;TUNEL染色结果显示,经RES处理HepG2细胞12及24 h后,HepG2细胞的凋亡被激活。结论 RES可通过PINK1/Parkin介导HepG2细胞线粒体自噬,从而调节Beclin 1/Bcl-2复合体的表达,激活HepG2细胞的凋亡。     

PINK1低表达诱导线粒体自噬障碍致糖尿病缺血心肌易损及机制

【立论依据】 糖尿病患者发生缺血性心脏病(IHD)后心肌损伤程度明显高于非糖尿病患者,但其具体机制尚待阐明。线粒体自噬是细胞通过自噬机制选择性清除线粒体的过程,对于维持线粒体功能和细胞生存至关重要。新近研究表明,线粒体激酶PINK1可通过线粒体融合蛋白Mfn2募集并结合E3泛素连接酶Parkin,介导线粒体自噬。然而,PINK1在糖尿病心肌中的表达变化及其介导的Mfn2-Parkin通路在心肌缺血损伤中的作用尚不清楚。 【设计思路】 本课题拟在整体和细胞水平研究PINK1在糖尿病心肌中是否低表达、并引发线粒体自噬障碍,进而增加糖尿病缺血心肌易损性。 【实验内容】 (1)高脂饲料(45%脂肪含量)喂养C57BL/6小鼠16周,建立2型糖尿病(T2DM)小鼠模型。(2)在对照和T2DM小鼠构建心肌缺血(MI)模型,观察缺血心肌损伤、心肌PINK1-Mfn2-Parkin信号变化、线粒体自噬及线粒体功能。(3)分离乳鼠心肌细胞,高糖/高脂培养,利用腺病毒转染过表达PINK1或RNAi技术剔除PINK1表达,研究PINK1介导的线粒体自噬与心肌细胞缺氧损伤的关系。 【材料】 C57BL/6小鼠,SD乳鼠,线粒体膜电位测试盒,TUNEL凋亡检测试剂盒,蛋白质印迹、RNA干扰、腺病毒转染所需试剂等。 【可行性】 我们成功制备了T2DM小鼠模型;预实验结果提示,与对照组相比,T2DM小鼠心肌PINK1表达减少,且MI后心肌线粒体自噬水平显著降低,心肌缺血损伤加重(P<0.05)。过表达PINK1可有效增加高糖/高脂培养心肌细胞的线粒体自噬,减少缺氧心肌细胞凋亡(P<0.05)。以上结果强烈提示,PINK1的低表达通过影响线粒体自噬加重糖尿病心肌易损性的假设是可行的。本课题涉及的实验方法在前期研究中已熟练运用,为顺利完成奠定了基础;且实验室具备所需实验条件,所有实验试剂均可在国内购得。 【创新性】 PINK1-Mfn2-Parkin介导的线粒体自噬对于糖尿病心肌易损性的作用未见报道。预实验结果证实,PINK1低表达诱导线粒体自噬障碍致糖尿病缺血心肌易损性增加,增加心肌PINK1表达可显著改善糖尿病心肌抗缺血损伤的能力。如能彻底阐明该问题,可为减轻糖尿病IHD患者的心肌损伤提供全新的干预靶点和实验依据。     

黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。【方法】将大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:正常对照组、高糖刺激组(给予葡萄糖30 mmol/L,作用48 h)及黄芪甲苷干预组(给予葡萄糖30 mmol/L刺激的同时加用黄芪甲苷100μmol/L,48 h)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖能力;采用Westernblot法检测促凋亡蛋白cleaved-caspase-3及同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ的表达。【结果】黄芪甲苷可有效缓解高糖对细胞增殖的抑制作用(P 0.01)。高糖可上调NRK-52E细胞促凋亡蛋白cleaved-caspase-3,线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(均P 0.01);而黄芪甲苷干预可显著下调上述促凋亡蛋白及线粒体自噬相关蛋白的表达(P 0.05或P 0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞NRK-52E的凋亡,减轻其由PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。     

线粒体自噬在百草枯中毒大鼠模型肺纤维化中的作用研究

目的:建立百草枯(paraquat,PQ)中毒大鼠模型,观察不同阶段肺线粒体膜电位(JC-1染色)、调控线粒体自噬关键性蛋白PINK1、Parkin及活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化,探讨线粒体自噬是否参与PQ中毒肺纤维化的发生。方法:成年雄性SD大鼠42只,随机分为正常对照组(n=6)、模型组(n=36),模型组下设2 h、12 h、1 d、3 d、7 d和14 d共6个时间点,每个时间点各6只大鼠。使用20%PQ溶液50 mg/kg一次性灌胃大鼠建立PQ中毒模型。通过流式细胞仪检测血红细胞ROS浓度;HE染色和Masson染色观察PQ中毒后肺组织病理损害;JC-1染色检测肺组织线粒体膜电位变化;Western blot检测PINK1、Parkin蛋白变化。结果:与对照组相比,随着PQ中毒时间的延长,肺纤维化病理评分较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);PQ组ROS荧光阳性强度率比值在中毒后2 h显著升高,中毒后12 h达高峰后逐渐下降(P<0.05),中毒后14 d与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);PQ组肺组织JC-1红绿荧光比均较对照组降低,Western blot提示随中毒时间延长,PINK1及Parkin蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。PQ组肺组织JC-1红绿荧光比与PINK1及Parkin、肺纤维化病理评分均呈负相关(r=-0.890,P<0.01;r=-0.845,P<0.01;r=-0.794,P<0.01)。在PQ中毒12 h内,血红细胞ROS荧光强度阳性率与JC-1红绿荧光比呈负相关(r=-0.712,P<0.01),与PINK1及Parkin、肺纤维化病理评分呈正相关(r=0.571,P<0.01;r=0.484,P<0.01;r=0.602,P<0.05)。结论:PQ中毒导致大鼠产生了明显氧化应激,诱发了线粒体自噬。ROS的产生与线粒体自噬的发生密切相关,共同参与了PQ大鼠肺纤维化的发生发展。     

蒺藜皂苷对NaCN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及机制

目的：探讨蒺藜皂苷（GSTT）对NaCN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法：采用NaCN建立心肌细胞内缺氧模型,GSTT干预后流式细胞术检测凋亡百分率及线粒体膜电位,激光共聚焦显微系统检测细胞内钙水平,Western blotting检测Bcl-2/Bax的蛋白表达。 结果：NaCN诱导的心肌细胞凋亡百分率GSTT组［（3.31±0.24）%］与模型组［(16.65±0.18)%］比较明显降低（P<0.01）;心肌细胞膜电位(mV)GSTT组(158.29±0.40)高于缺氧模型组(121.71±0.80)(P<0.01),低于正常对照组(167.10±0.70)(P<0.01);细胞内钙水平(色密度)GSTT组(323.73±68.19)低于缺氧模型组(496.65±80.10),高于正常对照组(280.18±48.10)(P<0.01)。Bcl-2蛋白表达强度上调, Bax蛋白表达强度下调。 结论：GSTT对NaCN诱导心肌细胞凋亡具有抑制作用,该作用与其调节Bcl-2/Bax蛋白表达、稳定线粒体膜电位以及改善细胞内钙超载有关。     

不同月龄APP/PS1双转基因AD小鼠海马神经元线粒体的动态变化

目的:检测不同月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠海马神经元中线粒体自噬的动态变化,并探讨其意义.方法:选取20只雄性APP/PS1双转基因AD小鼠为研究对象,分为3月龄组、6月龄组、9月龄组和12月龄组,以C57小鼠为对照组.获取海马组织,通过电镜观察海马区神经元中线粒体的形态变化,用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达水平;线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin和Miro1的表达水平;线粒体外膜蛋白Tom20的表达水平.结果:电镜观察结果显示:随着月龄增大,APP/PS1双转基因AD小鼠海马区神经元中线粒体损伤的病理变化呈逐渐加重的过程,即线粒体明显水肿、透明,嵴排列不规则,断裂,甚至消失.Western blot结果显示,与野生小鼠组比较,LC3、P62、PINK1和Parkin蛋白表达水平在6月龄组、9月龄组和12月龄组小鼠中明显增高(P＜0.05),而Miro1蛋白却明显降低(P＜0.05),Tom20的表达水平无明显差异(P＞0.05).结论:随着APP/PS1双转基因AD小鼠月龄的增加,其海马区神经元线粒体病理改变呈动态,线粒体自噬呈动态增强但伴随线粒体清除障碍.     

自噬调控对小鼠精原细胞缺氧/复氧损伤的影响研究

目的 研究自噬调控对小鼠精原细胞缺氧/复氧损伤(H/RI)的影响,探讨自噬对小鼠睾丸组织缺血再灌注损伤(IRI)的影响。方法 以小鼠精原细胞系GC1 spg为研究对象构建H/RI模型,雷帕霉素(RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别作为自噬激动剂和抑制剂,设置对照组、模型组(H/RI)、自噬激动剂干预组(H/RI+自噬激动剂)、自噬抑制剂干预组(H/RI+自噬抑制剂)。用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞活性氧(ROS)释放水平和凋亡水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞自噬相关基因Beclin1和凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、p62和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的表达水平。结果 与对照组比较,模型组增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(P<0.01),p62和Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P<0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA相对表达水平明显上升(P<...     

孕酮对大鼠脑损伤后神经细胞保护作用及其可能机制

目的:探讨孕酮(PROG)对大鼠创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞保护作用及其可能的机制.方法: 雄性SD大鼠108只随机分为假手术组,损伤组和PROG治疗组,每组36只.按照改进的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型,建模后6, 12, 24, 48, 72和144 h各组分别利用末端脱氧核酸转移酶介导的三磷酸鸟苷末端标记法(TUNEL) 测定大鼠海马CA1区神经细胞凋亡,利用免疫组织化学方法测定大鼠海马CA1区Bcl-2, Bax的表达.结果: 假手术组未见神经细胞凋亡,Bcl-2和Bax阳性细胞;PROG治疗组伤后24, 48和72 h神经细胞凋亡数分别为9.80±1.36,10.90±1.13,9.50±1.62, 低于损伤组细胞凋亡数11.60±1.95,13.20±1.04,11.80±1.84,差异有统计学意义(P《0.05, P《0.01);PROG治疗组大鼠脑组织中Bcl-2阳性神经细胞表达高于损伤组(P《0.05, P《0.01),Bax阳性神经细胞表达低于损伤组(P《0.05, P《0.01);PROG治疗组损伤后12, 24, 48, 72和144 h Bcl-2/Bax细胞比值分别为3.84±0.49,3.48±0.72,3.31±0.38,3.94±0.67,4.88±0.93, 大于损伤组Bcl-2/Bax比值2.91±0.74,2.43±0.52, 2.34±0.41, 2.99±1.04, 3.69±0.87,差异有统计学意义(P《0.05, P《0.01).结论:脑损伤后,PROG可能通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax的表达,增加Bcl-2/Bax比值,从而减少神经细胞凋亡.     

我的梦想是做“百年老店”——记首都医科大学三博脑科医院神经外科于春江教授

目的 探讨干预miRNA-181a(miR-181a)促进多发性骨髓瘤凋亡的机制。方法 首先检测健康志愿者外周血、骨髓瘤患者骨髓、骨髓瘤细胞株MM1S中miR-181a的表达水平。再将miR-181a抑制剂(miR-181a inhibitor)及对照siRNA分别转染进MM1S细胞,回复实验进一步验证miR-181a功能。流式细胞术检测凋亡率和线粒体膜电位,透射电镜观察线粒体超微结构及自噬泡,Western blotting检测Cleaved-caspase-3、Bcl-2/Bax、LC3 Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62、Parkin。结果 骨髓瘤及MM1S细胞株中miR-181a的相对表达水平显著升高(P<0.05),分别为1.57±0.09及1.64±0. 06。miRNA-181a 抑制剂作用下,MM1S细胞的凋亡率及Cleaved-caspase-3显著高于健康对照组及阴性转染对照组,电镜下自噬泡数目增加而且线粒体结构毁坏严重,线粒体膜电位水平低下伴有Bcl-2/Bax、LC3 Ⅱ/LC3-Ⅰ水平的显著升高,而P62水平的显著降低。过表达Parkin的回复实验显示,miRNA-181a 抑制剂对骨髓瘤细胞的作用明显降低。结论 抑制miRNA-181a可以升高Parkin表达水平,进而促进该基因通路介导的线粒体自噬,抑制骨髓瘤细胞的增殖。     

氟中毒对神经细胞线粒体功能及凋亡的影响

摘要:目的 通过研究神经细胞线粒体改变探索氟中毒致神经损伤的潜在生物学机制。方法 将 SH-SY5Y 细胞 设置为对照组和20、40、60mg/LNaF染毒剂量组,检测线粒体跨膜电位(ΔΨm)及线粒体内活性氧(MitoROS)水平,通 过 Westernblot法检 测 线 粒 体 动 力 学 和 自 噬 相 关 蛋 白 (Miro1、ATG5 和 PINK1)及 凋 亡 相 关 蛋 白 (PARP、cleaved Caspase-3和 Bcl-2)的表达情况,细胞免疫荧光法检测 Miro1、ATG5和 PINK1蛋白与线粒体共定位情况,流式细胞术检 测细胞凋亡。结果 随着 NaF浓度增加,SH-SY5Y 细胞 ΔΨm 降低(P<0.01),MitoROS水平升高(P<0.05);线粒体 转运蛋白 Miro1表达升高(P<0.05),自噬相关蛋白 ATG5(P<0.05)和 PINK1(P<0.05)表达均升高;细胞早期凋亡率 和总凋亡率均升高(均P<0.05),凋亡相关蛋白 PARP(P<0.05)和cleavedCaspase-3(P<0.05)表达升高,抗凋亡蛋白 Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论 高剂量氟可促进线粒体的氧化应激、转运和自噬,并诱导神经元凋亡。     

线粒体途径在慢性低氧高二氧化碳小鼠骨骼肌凋亡中的作用

目的探讨线粒体途径在慢性低氧高二氧化碳小鼠骨骼肌凋亡中的作用。方法成年storage protect feature(SPF)级雄性C57BL/6小鼠16只随机分成两组:正常对照组(n=8)和实验组(n=8),将实验组小鼠置于常压低氧高二氧化碳舱内,通过氮气调节舱内氧浓度,使其维持在9%～11%,通入二氧化碳使其浓度维持在5%～6%,每天8h,共4周。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测骨骼肌细胞胞质内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)的含量,荧光实时定量PCR法检测胞浆内细胞色素C(Cyt-C)及细胞凋亡因子Bax、Bcl-2基因的表达情况。结果与正常对照组相比,实验组骨骼肌细胞内的caspase-3含量增加(P<0.05),Cyt-C mRNA表达增多,Bax mRNA表达增多,而Bcl-2 mRNA表达减少,Bcl-2/Bax比值下降。结论线粒体途径可能参与了慢性低氧高二氧化碳小鼠骨骼肌细胞的凋亡,Bcl-2/Bax比值下降可能是促进骨骼肌线粒体途径凋亡的重要因素。     

去甲斑蝥素通过诱导自噬体聚集促使乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

探究去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、cleaved-PARP/PARP、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和MCL-1表达水平的影响;采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I,Parkin和PINK1表达水平的影响;采用流式细胞术检测NCTD对MDA-MB-231细胞线粒体膜电位及线粒体活性氧（reactive oxygen species,ROS）变化情况的影响;采用共聚焦显微镜检测NCTD对表达mCherry-EGFP-LC3的MDA-MB-231细胞自噬流的影响;采用流式细胞术检测NCTD联合使用氯喹（chloroquine,CQ）或3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）后,对MDA-MB-231细胞凋亡情况的影响。实验结果显示,NCTD可显著上调Bax/Bcl-2、cleaved...     

颈椎稳定性异常老龄小鼠脑海马神经细胞中Bcl-2和Bax的表达

目的：探讨颈椎失稳老龄小鼠脑海马神经细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,阐明颈椎失稳所致老龄小鼠记忆和学习能力下降的机制。方法：选取ICR小鼠20只,随机分为模型组和对照组,每组10只,分组后模型组采用颈椎乳酸堆积法制备小鼠颈椎稳定性异常病理模型,对照组未经任何处理。水迷宫实验检测小鼠学习和记忆能力;HE染色观察脑海马神经细胞形态学变化;TUNEL染色观察脑海马神经细胞凋亡情况;RT-PCR和免疫组织化学法检测小鼠脑海马组织Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果：与对照组比较,模型组小鼠水迷宫实验游全程时间和错误次数显著增加(P<0.01);HE染色,与对照组比较,模型组小鼠脑海马神经细胞排列稀疏,死亡细胞明显增多;TUNEL染色,与对照组（7.52%±0.99%）比较,模型组脑海马凋亡细胞数（29.63%±1.63%）明显增多（P<0.01）;RT-PCR和免疫组织化学染色,模型组小鼠脑海马神经细胞Bcl-2表达明显减弱,Bax表达明显增强。结论：颈椎稳定性异常导致的小鼠脑海马神经细胞Bcl-2表达下调,Bax表达上调,可能是促进其细胞凋亡的主要机制之一。     

葫芦巴碱通过Pink1/Parkin信号通路介导线粒体自噬对OGD/R诱导的神经元凋亡的影响

目的:探究葫芦巴碱通过PTEN诱导性激酶蛋白1(Pink1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路介导线粒体自噬对氧-糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元凋亡的影响。方法:原代培养大鼠海马神经元,经下调Pink1或葫芦巴碱预处理后通过OGD/R诱导神经元损伤,实验分组包括对照组、OGD/R组、葫芦巴碱组、pLKO空载体组(转染pLKO空载体)、pLKO-Pink1组(转染连接Pink1 shRNA干扰质粒的pLKO载体)、葫芦巴碱+pLKO-Pink1组。Annexin V-FITC/PI双染法测定神经元凋亡率;JC-1法测定线粒体膜电位(MMP);Calcein-AM法测定线粒体膜通透性转换孔(MPTP)开放程度;透射电镜观察自噬小体数量;Western Blot检测线粒体自噬相关蛋白(微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Pink1、Parkin)表达。结果:与对照组相比,OGD/R组神经元凋亡率、MPTP开放程度增加,MMP下降,自噬小体数量及LC3-Ⅱ、Pink1、Parkin蛋白表达增加(P<0.05);与OGD/R组相比,葫芦巴碱组神经元凋亡率、MPTP开放程度减少...     

PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬在神经系统损伤中的研究进展

PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1, PINK1)/帕金蛋白（Parkin）通路是线粒体自噬经典的信号转导通路。在神经系统损伤中,PINK1/Parkin信号转导通路受多种蛋白因子及药物的调节,参与疾病损伤中的细胞凋亡和氧化应激,并对损伤后的神经发挥保护作用。本文分别从PINK1、Parkin的结构与组成、PINK1/Parkin信号通路的激活、PINK1/Parkin信号通路与细胞凋亡和神经系统损伤性疾病的关系等方面展开论述,希望为神经系统疾病的基础实验研究及其临床治疗提供新的思路。     

丹黄散激活PINK 1/Parkin信号通路对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的 基于PINK 1/Parkin信号通路探究丹黄散对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的作用，并探讨其具体的作用机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞进行体外培养，随机分为对照组、生长因子组、丹黄散组、高糖组、高糖+生长因子组、高糖+丹黄散组，每组3例，干预48 h;细胞划痕实验检测细胞转移率，Transwell实验检测细胞侵袭率；免疫荧光法测定抗凋亡蛋白Bcl-2、Beclin-1、促凋亡蛋白Bax的表达水平；Western blot技术测定假定激酶(PINK 1)、帕金森病蛋白(Parkin)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC 3-Ⅱ)的蛋白表达水平。结果 细胞划痕实验、Transwell实验结果显示，在正常环境下及高糖处理后，丹黄散均可降低细胞的细胞转移率和侵袭率(P<0.05);荧光免疫法结果显示，在正常环境下及高糖处理后，丹黄散均可上调细胞中的Bcl-2、Beclin-1蛋白表达水平(P<0.05);Western blot结果显示，在正常环境下及高糖处理后，丹黄散均可下调Bax的蛋白表达水平(P<0.05),升高细胞中的PINK 1、Parkin和LC 3-Ⅱ蛋白表达水...     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响

目的研究补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法36只SD大鼠随机分为3组，每组12只：①假手术组；②模型对照组；③补阳还五汤组。线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，脑缺血-再灌注48h后TIC染色计算脑梗塞体积，TUNEL染色检测神经细胞凋亡，免疫组化方法检测缺血侧皮质Bcl-2／Bax的表达，电镜观察线粒体的变化。结果脑缺血再灌注后缺血侧皮质神经细胞凋亡增多，同时Bcl-2表达减少，Bax表达增多，Bcl-2／Bax比值下降，线粒体肿胀且大多破裂。补阳还五汤干预后，细胞凋亡减少，脑梗塞体积减小，Bcl-2／Bax比值上升，线粒体肿胀减轻。结论补阳还五汤可能通过抑制神经细胞凋亡而减小脑梗塞体积，其机制可能是通过上调Bcl-2／Bax比值，保护线粒体，防止发生线粒体通透性转变。     

芒果苷通过PI3K/Akt/mTOR通路对蛛网膜下腔出血后神经细胞的保护作用

目的 探讨芒果苷(MF)在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期阶段对神经细胞的保护作用及机制.方法 采用小鼠来源神经瘤母细胞(Neuro-2a细胞)和氧合血红蛋白(OxyHb)建立体外SAH模型,分为对照组、蛛网膜下腔出血组(SAH)及芒果苷干预组(MF+SAH)3组,利用免疫荧光检测受损线粒体与溶酶体的结合;利用JC-1和DCFH-DA分别检测线粒体膜电位(Δψm)和活性氧(ROS);Western blot分别检测细胞内磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,胞浆、线粒体中凋亡相关蛋白淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl2关联X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)和Caspase-3的表达.结果 与对照组相比,SAH组线粒体膜电位(Δψm)明显去极化(P<0.05),细胞内ROS水平增多(P<0.01),p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达水平显著减少(P<0.05),胞浆内Cyt-C表达水平显著增加(P<0.05),线粒体内Cyt-C表达水平显著减少(P<0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著增加(P<0.05),Bcl-2表达水平显著减少(P<0.05);与SAH组相比较,MF+SAH组Δψm和ROS明显恢复(P<0.05),p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达水平明显增加(P<0.05),胞浆内Cyt-C表达水平显著下降(P<0.05),线粒体内Cyt-C表达水平显著增加(P<0.05),Bax和Caspase-3表达显著减少(P<0.05),Bcl-2表达显著增加(P<0.05).结论 芒果苷可以通过稳定线粒体膜电位,减少ROS的产生,改善线粒体功能障碍,从而抑制SA H后早期阶段神经细胞的凋亡.