慢性乙型肝炎患者外周血中T淋巴细胞亚群和CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞的表达水平与HBV DNA定量的相关分析

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+T)和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)表达水平与HBV DNA定量的相关性。方法选取2012年7月-12月在兰州市第二人民医院就诊的175例HBV感染者作为研究对象,分为CHB组(63例)、HBV携带者(ASC组)(112例),以同期50例健康体检者作为对照组。采用流式细胞术检测3组患者血清中的CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T和CD4+CD25+Treg表达水平,实时荧光定量PCR法检测HBV DNA载量。多组间均数比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,计数资料组间比较采用χ2检验;采用Pearson进行相关性分析。结果 CHB患者外周血CD4+CD25+Treg表达水平(30.97±18.78)%显著高于对照组(27.30±17.59)%,差异具有统计学意义(P0.05);与对照组相比,CHB组、ASC组的CD3+T、CD4+T淋巴细胞百分数和CD4+与CD8+T淋巴细胞百分数比值显著降低,差异均有统计学意义(P值均0.05),CD8+T淋巴细胞百分数显著升高,差异均有统计学意义(P值均0.05);ASC组和CHB组CD4+CD25+Treg表达水平与HBV DNA呈正相关(r值分别为0.501、0.682,P值均0.01)。结论 HBV感染者存在T淋巴细胞亚群比例异常,HBV DNA可以促进CD4+CD25+Treg表达水平升高,说明CD4+CD25+Treg和CD4+与CD8+T淋巴细胞比例失衡在乙型肝炎慢性化过程中发挥重要作用。     

慢性HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其与白细胞介素15、白细胞介素16的相关性分析

目的分析慢性HBV感染者外周血T淋巴细胞(CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)及细胞因子白细胞介素(IL)15、IL-16表达水平的变化及临床意义。方法选择2014年7-12月在兰州市第二人民医院治疗的慢性乙型肝炎患者63例(CHB组),慢性HBV携带者112例(ASC组),健康对照者84例(对照组),运用流式细胞术检测3组患者血清中T淋巴细胞亚群水平,酶联免疫法检测IL-15、IL-16表达水平,运用聚合酶链反应检测HBV DNA载量。多组间比较采用方差分析,组内数据的相关分析采用Pearson相关法。结果与健康对照组相比,ASC组和CHB组CD3+、CD4+T淋巴细胞百分数以及CD4+/CD8+T淋巴细胞百分数比值均显著降低,CD8+T淋巴细胞百分数显著升高,差异均有统计学意义(P值均0.05);ASC组和CHB组IL-15、IL-16表达水平均显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P值均0.05)。CHB患者中HBV DNA高载量组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T淋巴细胞百分数比值较HBV DNA低载量组显著降低,CD8+T淋巴细胞百分数显著升高,差异均有统计学意义(P值均0.05);ASC组HBV DNA高载量者CD4+、CD4+/CD8+T淋巴细胞百分数比值显著低于HBV DNA低载量组,CD8+T淋巴细胞百分数显著高于HBV DNA低载量组,差异均有统计学意义(P值均0.05)。CHB患者外周血CD4+表达水平与IL-15呈正相关(r=0.516,P0.05),CD8+表达水平与IL-16呈正相关(r=0.665,P0.05)。ASC组外周血CD3+表达水平与IL-15呈正相关(r=0.618,P0.05)。结论 HBV感染者存在T细胞亚群比例异常,IL-15、IL-16可能导致机体存在不同程度细胞免疫功能障碍和细胞免疫调节异常。     

慢性HBV感染患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及其临床意义

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞与慢性HBV感染后不同临床转归和临床特点的相关性。方法在26例慢性乙型肝炎(CHB)患者、15例无症状HBsAg携带者(ASC)和11例肝炎肝硬化(LC)患者和16例正常对照者,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平。结果CHB组和ASC组的CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分率分别为4.40±2.76%和4.43±2.10%,均高于正常对照组(2.70±0.97%),差异显著(P0.01);CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平与HBVDNA水平无相关性(r=0.018,P0.05);在HBeAg阳性与阴性组患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达也无明显的差异(P0.05)。结论慢性HBV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,可能与HBV感染的慢性化有关。     

慢性HBV感染者外周血CXCR5~+CD4~+Tfh细胞的测定及其与FoxP3~+Treg细胞的相关性

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染不同阶段患者外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的百分比及其意义.方法:应用流式细胞术检测15例慢性无症状HBV携带者(chronic asymptomatic HBV carriers,AsC)、42例慢性乙型肝炎(chronic hepatitisB,CHB)患者(HBeAg阳性25例、HBeAg阴性17例)、11例非活动性HBsAg携带者(inactive HBsAg carriers,InC)外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比,并与15例健康对照(healthycontrol,HC)进行比较.结果:AsC、HBeAg(+)CHB、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例分别为17.66(15.34%-20.56%),21.95(19.60%-26.32%),22.33(17.58%-24.85%),显著高于HC组的13.67(9.80%-15.32%),差异具有统计学意义(P<0.001).与AsC及InC组的16.11(12.33%-19.73%)相比,HBeAg(+)、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).此外,AsC组外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为7.70(6.35%-9.13%),显著高于HC组的6.53(5.54%-7.35%),P<0.05.HBeAg(+)CHB组外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的频率为7.52(6.09%-8.49%),与AsC组相比呈降低的趋势.外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例与HBVDNA载量呈负性相关(r=-0.275,P<0.05);而与血清ALT水平、HBsAg滴度无相关性.结论:CD4+CXCR5+Tfh细胞可能参与了慢性HBV感染所介导的免疫反应,外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及CD4+CXCR5+Tfh细胞的消长可能与疾病的活动性相关.     

HBeAg(+)与HBeAg(-)乙型肝炎病毒携带者外周血CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞比例的变化及意义

目的探讨HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)的变化及其意义。方法 HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者两组各50例患者,应用流式细胞仪测定外周血CD3+T淋巴细胞所占比例、CD4+和CD8+T淋巴细胞所占比例及其比值、CD4+CD25+Treg所占比例;以同期门诊健康体检者20例为健康对照组。结果与健康对照组相比,HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者,在外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+与CD8+T淋巴细胞所占比例差异无统计学意义。CD4+与CD8+T淋巴细胞比值,在HBeAg(+)HBV携带者有升高趋势,但与HBeAg(-)HBV携带者和对照组比较差异无统计学意义。HBeAg(+)HBV携带者,CD4+CD25+Treg所占比例较对照组明显升高,而HBeAg(-)HBV携带者,CD4+CD25+Treg所占比例较对照组明显降低,差异均有统计学意义。结论尽管肝功能在正常范围,HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者外周血CD4+CD25+Treg比例不同,HBeAg(+)HBV携带者高于健康对照组,而HBeAg(-)HBV携带者低于健康对照组,提示HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者处于不同的免疫状态。     

乙型肝炎病毒感染不同阶段患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的测定

目的 测定HBV感染不同阶段患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的频率及标记分子,并分析其与临床指标的相关性.方法 采集79例慢性乙型肝炎(CHB)、12例急性乙型肝炎(AHB)患者、26例无症状HBV携带者(ASC)和20例健康对照的外周血,流式细胞仪分析Treg频率、Treg细胞表面和胞内特征性分子的表达.普通RT-PCR和相对荧光定量PCR测定叉头/翼状转录因子3(Foxp3)在CD25+Treg细胞的表达水平.所有患者及健康对照均经ELISA检测HBV血清标记物水平,实时荧光定量PCR测定血清HBV DNA载量,并进行肝功能检测.结果 总CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比率,在各患者组和健康对照组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).HBeAg阳性CHB组CD4+CD25高表达T细胞频率(3.42%±0.81%)与HBeAg阴性CHB组(3.19%±0.67%)、ASC组(3.05%±0.64%)比较,差异无统计学意义(均P＞0.05),但明显高于健康对照组(2.72%±0.71%,P=0.034)和AHB组(2.25%±0.54%,P=0.013).CD4+CD25高表达T细胞表面高表达CD45RO、CD25分子,低表达CD45RA,细胞内高表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)和Foxp3.各患者组及健康对照组Treg中Foxp3表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05).CHB组患者的Treg频率与血清病毒载量呈正相关(r=0.48,P=0.018).结论 Treg可能通过抑制T细胞免疫应答反应而影响病毒清除,并与CHB患者的持续感染密切相关.     

和解汤对慢性乙型肝炎功能性T细胞亚群的影响

[目的]探讨和解汤对慢性乙型肝炎(CHB)功能性T淋巴细胞亚群的影响.[方法]将72例CHB患者随机分为2组,治疗组(42例)采用和解汤治疗,对照组(30例)采用核苷类似物治疗,观察2组治疗后外周血功能性T淋巴细胞亚群(CD8 CD28 、CD4 CD28 )、白细胞介素2(IL-2)水平及乙肝病毒(HBV)标志物及肝功能的变化.[结果]治疗组治疗后CD8 CD28 、CD4 CD28 T细胞和IL-2水平较治疗前明显升高(P＜0.05),6例患者HBeAg阴转、HBV DNA量下降至1×105 copy/ml以下;对照组治疗前后CD8 CD28 T细胞、CD4 CD28 T细胞及IL-2水平无明显变化(P＞0.05),1例患者HBeAg阴转,22例HBV DNA量下降至1×105 copy/ml以下.CHB显效者治疗后CD8 CD28 、CD4 CD28 T细胞水平和IL-2水平明显升高(P＜0.01);非显效组治疗前后CD8 CD28 T细胞、CD4 CD28 T细胞水平无明显变化(P＞0.05).[结论]和解汤清除HBV的疗效,可能与CD8 CD28 T细胞的有效激活有关,细胞免疫在HBV感染发病机制和病毒清除过程中起重要作用.     

HBeAg导致慢性乙型肝炎患者外周血Th1/Th2型细胞因子失衡

目的 探讨HBeAg对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)功能的调节作用. 方法 以重组的HBeAg体外刺激CHB患者和健康志愿者的PBMC,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验法检测其刺激前后Th1/Th2型细胞因子的变化情况,并观察HBeAg对CHB患者PBMC表面细胞程序性死亡受体(PD)1及其配体(PD-L)1表达的影响.两组间资料比较采用独立样本t检验; PD-1/PD-L1表达水平与HBV DNA拷贝数的相关性采用Spearman相关分析.结果 HBeAg刺激后可使HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD3+CD4+T淋巴细胞内干扰素(IFN)γ表达水平(0.17％±0.08％与0.17％±0.04％)明显低于未刺激组(0.30％±0.16％与0.32％±0.12％),t值分别为-2.382和-4.190,P值均＜0.01;培养上清液中白细胞介素(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子α含量明显高于未刺激组(HBeAg阴性CHB患者的t值分别为2.504,3.583和4.324,健康志愿者t值分别为3.542,6.246和5.273,P值均＜0.01).HBeAg刺激PBMC后,HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD14+细胞表面PD-L1表达水平分别为13.02％±4.98％和3.10％±2.47％,明显高于未刺激组的5.89％±1.56％和0.97％±0.83％,t值分别为4.815和3.454,P值均＜0.05.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CD3+CD4+T淋巴细胞内IFNγ表达水平为0.23％±0.09％,明显低于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.34％±0.15％和0.35％±0.09％(t=-3.177,P＜0.01 ; t=-4.541,P＜0.01);而IL-4表达水平为0.39％±0.16％,明显高于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.26％±0.12％和0.23％±0.12％,t值分别为3.382和4.393,P值均＜0.01.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CDB+T淋巴细胞表面PD-1和PD-L1表达水平明显高于HBeAg阴性CHB患者及健康志愿者(P值均＜ 0.01),CD14+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平显著高于HBeAg阴性患者和健康志愿者,t值分别为5.092和5.473,P值均＜0.01 ; HBeAg阴性CHB患者外周血中CD3+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平明显高于健康志愿者(t=3.214,P＜0.01).结论 HBeAg可以明显抑制Th1型细胞因子IFN γ的产生,促进Th2型细胞因子IL-6和IL-10分泌,上调外周血PBMC表面PD-1/PD-L1的表达,从而有利于形成对HBV感染的免疫耐受.因此,HBeAg可能是造成慢性HBV感染者体内免疫耐受的重要因素之一.     

慢性乙型肝炎患者血清转化生长因子β1与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞的关系

目的 调查慢性乙型肝炎患者转化生长因子β1(TGF β1)与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞异常的关系.方法 将实验对象分为慢性乙型肝炎(CHB)患者、无症状HBV携带者(AsC)、乙型肝炎恢复者、正常人对照4组.通过流式细胞术分析外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞的表型和频率以及实时荧光定量PCR分析Foxp3表达水平;并通过酶联免疫吸附法检测血清中TGF β1水平.根据数据不同采用方差分析或秩和检验进行统计学分析.结果 CHB或AsC组外周CD4~+T淋巴细胞中CD4~+CD25~+Foxp3~+T淋巴细胞频率以及CD4~+CD25~+T淋巴细胞中Foxp3 mRNA表达水平显著高于正常人对照组,差异有统计学意义(P<0.05).CHB患者和AsC血清中TGF β1水平显著高于正常人和乙型肝炎恢复者,并与CD4~+CD25~+Foxp3~+T淋巴细胞频率存在显著正相关(r=0.78,P<0.01).结论 CHB和AsC患者TGF β1与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T淋巴细胞增高有密切关系.     

恩替卡韦联合苦参素片治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎52例疗效观察

目的:观察恩替卡韦联合苦参素片治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)的疗效。方法:102例HBeAg阳性CHB患者随机分为治疗组和对照组。治疗组52例给予恩替卡韦联合苦参素片治疗,对照组仅用恩替卡韦治疗,疗程1年。结果:治疗组HBeAg阴转率、HBeAg/HBeAb转换率及HBV DNA阴转率明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);两组患者血清丙氨酸转氨酶(ALT)复常率差异无显著性意义(P>0.05);治疗组患者治疗后CD4+T淋巴细胞百分率以及CD4+/CD8+比例明显回升,CD8+T淋巴细胞百分率下降,与治疗前比较,差异有显著性意义(P<0.05);对照组患者治疗后CD4+T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+比例及CD8+T淋巴细胞百分率同治疗前比较,差异无显著性意义(P>0.05);治疗组患者治疗后肝纤维化3项指标明显好转,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:恩替卡韦联合苦参素片治疗CHB,能增强抗病毒效果,同时具有调节免疫和抗肝纤维化的效果。     

恩替卡韦分散片对HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者T细胞亚群的影响

目的探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者接受恩替卡韦抗病毒治疗前后细胞免疫功能的变化。方法纳入HBeAg阴性CHB患者62例,接受恩替卡韦抗病毒治疗24周。通过流式细胞术检测患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的变化。结果在治疗24周结束时,患者肝功能ALT、HBV DNA水平较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P0.05);患者外周血CD3~+、CD4~+和CD8~+细胞计数较治疗前升高,CD4~+/CD8~+比值也显著高于治疗前,差异有统计学意义(P0.05)。结论恩替卡韦可能通过抑制HBV复制、降低CHB患者体内病毒载量,间接引起机体细胞免疫功能的改善。     

补肾健脾方对ALT轻度升高的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者程序性死亡受体1/程序性死亡配体1表达的影响

目的研究补肾健脾方对ALT轻度异常的HBe Ag阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者程序性死亡受体(PD)1/程序性死亡配体(PD-L)1表达的影响。方法选取2010年9月1日-2013年12月31日在上海中医药大学附属曙光医院就诊的32例ALT轻度升高的HBe Ag阳性CHB患者。在明确临床疗效的基础上,分离外周血单个核细胞,流式细胞仪检测补肾健脾方治疗前后患者外周血T淋巴细胞上PD-1和树突状细胞(DC)上PD-L1的表达变化。计量资料组间比较采用独立样本t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果与治疗前相比,治疗组患者外周血CD4+T细胞表达PD-1百分率明显降低(P0.01),CD4+T细胞表达PD-1的平均荧光强度(MFI)显著下降(P0.05);治疗后两组患者CD4+T细胞表达PD-1百分率和MFI比较,差异均有统计学意义(P值均0.05)。治疗组CD8+T细胞表达PD-1百分率和MFI与治疗前相比均明显降低(P值均0.01);治疗后两组患者CD8+T细胞表达PD-1的MFI比较差异有统计学意义(P0.05)。与治疗前相比,治疗组DC表达PD-L1的MFI水平降低(P0.05),髓样树突状细胞(m DC)表达PD-L1的MFI亦明显降低(P0.01);治疗后两组患者比较DC和m DC的PD-L1表达水平,差异均无统计学意义(P值均0.05)。结论补肾健脾方治疗HBe Ag阳性的CHB患者能够显著降低外周血CD4+T、CD8+T细胞的PD-1的表达水平,降低DC和m DC的PD-L1表达水平,与其临床疗效有一定关系。     

静脉血栓栓塞症与冠状动脉粥样硬化患者T细胞免疫功能变化的比较分析

目的:研究静脉血栓栓塞症(VTE)患者、冠心病(CHD)患者与正常对照组之间T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)水平变化以及超敏C-反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)的差异。方法:入选247名研究对象,其中正常对照组82例,VTE组51例,CHD组114例。分别检测T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、hs-CRP、空腹血糖(FBG)以及血脂系列。结果:VTE组与对照组相比,CD3+T淋巴细胞显著降低(P0.05),CD4+T淋巴细胞没有显著性差异(P0.05),CD8+T淋巴细胞显著降低(P0.01),CD4/CD8比例升高(P0.05)。CHD组与对照组相比,CD8+T显著降低(P0.01),CD4/CD8升高(P0.05)。VTE组与CHD组相比CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+无显著性差异。观察3组间CD值过低、正常及过高各占比例,并行χ2值检验,结果发现VTE组、CHD组与对照组相比有统计学意义,主要表现在CD3+和CD8+T淋巴细胞下降的比例升高;CD4+/CD8+升高的比例显著增多,而CHD组与VTE组没有明显区别。VTE组和CHD组hs-CRP均高于对照组,而VTE组和CHD组间差异没有统计学意义。结论:VTE组与CHD组均存在T淋巴细胞免疫功能紊乱,表现为CD3+和CD8+T淋巴细胞减少,CD4+T淋巴细胞没有明显变化,CD4/CD8比值显著升高。提示VTE和CHD患者整体的T细胞识别抗原和转导活化信号的功能下降,同时T细胞直接杀伤病毒微生物的功能显著下降。同时炎性因子hs-CRP在VTE组及CHD组均明显升高,提示相同的炎症免疫机制参与了静脉血栓与动脉血栓的发生发展。     

国人慢性HBV携带者HBV复制水平与T细胞亚群变化的关系

目的:研究慢性HBV携带者(HBVc)HBV复制水平与T细胞亚群变化的关系.方法:应用流式细胞仪检测肝功能正常的HBvc 216例和正常人100例外周血T细胞亚群百分比,ELISA法检测血清乙肝标志物(HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb,Anti-HBcAb IgM),实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA,对T细胞亚群结果与血清HBV DNA载量和HBeAg表达的关系进行分析.结果:HBV c外周血CD3~ ,CD4~ 及CD4~ / CD8~ 较正常人显著降低(P<0.01),而CD8~ 显著升高(P<0.01).与HBV DNA(-)组比较,HBV DNA( )组CD3~ ,CD4~ 及CD4~ /CD8~ 分别降低20.4%,17.8%和35.7%,CD8~ 升高21.9%(P<0.0 1).与HBeAg(-)组比较,HBeAg( )组CD3~ ,CD4~ 及CD4~ /CD8~ 分别降低19.5%,14.0%和28.6%,CD8~ 升高19.6%(P<0.01).随着病毒载量的升高,CD3~ ,CD4~ 及CD4~ /CD8~ 显著下降,分别与病毒载量呈显著负相关(r=-0.67,-0.54,-0.67,P<0.01);CD8~ 显著升高,与病毒载量呈显著正相关(r=0.61,P<0.01).HBV DNA( )和HBeAg( )组与HBV DNA单阳性组和阴性组比较,CD3~ ,CD4~ 及CD4~ /CD8~ 显著降低(P<0.05,P<0.01),CD8~ 显著升高(P<0.01).有母亲感染史者CD3~ ,CD4~ 及CD4~ /CD8~ 较无母亲感染史者明显降低,CD8~ 则显著升高(P<0.01).在有母亲感染史者中,血清HBV DNA( )82.2%,HBeAg( ) 75.2%,HBV DNA水平>1×10~(10)copies/L者65.1%,均分别显著高于无母亲感染史者的34.5%,OR=8.65,95%CI:[4.45,17.33],28.7%,OR=7.44,95%CI:[3.91,14.56]和10.3%,OR=15.94,95%CI:7.13,39.66].有母亲感染史和无母亲感染史者中,与HBV DNA(-)组比较,HBV DNA( )组CD3~ ,CD4~ 及CD4~ /CD8~ 均显著降低(P<0.05,P<0.01),CD8~ 均显著升高(P<0.01);与HBeAg(-)组比较,HBeAg( )组CD3~ ,CD4~ 及CD4~ /CD8~ 比均显著降低(P<0.05,P<0.01).结论:肝功能正常的HBVc T细胞免疫功能紊乱与病毒复制水平之间存在显著相关性,HBV活跃复制进一步加重紊乱.     

不同临床类型HBV感染者外周血T细胞亚群的差异

目的:观察不同临床类型HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群的差异.方法:收集2006-9/2009-03贵阳医学院附属医院门诊及住院部慢性HBV携带者30例、慢性乙型肝炎患者47例、重型乙型肝炎患者26例以及非乙型肝炎且无影响T细胞亚群疾患者34例(高血压15例, 冠心病9例, 非甾体药物相关性消化性溃疡10例)的外周血, 用流式细胞技术检测T细胞亚群.结果:慢性HBV携带者组、慢性乙型肝炎患者组及重型乙型肝炎患者组外周血中CD3+、CD4+、CD8+ T细胞计数及CD3+、CD4+ T细胞百分数及CD4+/CD8+(计数与百分数比)均较正常对照组明显降低( P<0.05或0.01), CD8+ T细胞百分数明显升高( P<0.05或0.01), 以上改变有统计学意义, 且不同组间对比也有不同程度的统计学差异( P<0.05或0.01).结论:不同临床类型的慢性HBV感染者均存在不同程度的细胞免疫功能低下及免疫调节紊乱, 紊乱的程度与病情的进展有关.     

苦参碱联合干扰素α-2b治疗转氨酶轻度升高慢性乙型肝炎患者的疗效观察

目的观察注射用苦参碱联合重组人干扰素α-2b对转氨酶轻度升高慢性乙型肝炎（CHB）患者的抗病毒疗效,并从细胞免疫学角度探讨其作用机制。方法研究对象为随机选择CHB轻度患者60例,苦参碱联合重组人干扰素α-2b组及重组人干扰素α-2b组各30例,观察治疗1个月ALT、AST及治疗3个月HBeAg定量、HBV DNA载量变化;同时采用流式细胞技术检测外周血淋巴细胞各亚群数量。结果治疗3个月HBV DNA载量、HBeAg定量显著降低,CD3＋T、CD4＋T和CD8＋T细胞计数均显著升高,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论苦参碱联合重组人干扰素α-2b对于CHB转氨酶轻度升高的患者有较好的抗病毒疗效和安全性。     

不同HBeAg状态下慢性乙型肝炎患者肝组织内CD4~+、CD8~+、CD20~+、CD57~+ T淋巴细胞的表达分析

目的探讨HBe Ag阳性和阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者肝内免疫活性细胞(CD4+、CD8+、CD20+、CD57+T淋巴细胞)与肝脏病理及临床的关系。方法选取2008年1月-2013年12月在桂林市第三人民医院住院的70例CHB患者进行肝穿刺活组织检查,其中HBe Ag阳性患者38例,HBe Ag阴性患者32例。运用免疫组化染色分析肝组织内CD4+、CD8+、CD20+、CD57+T淋巴细胞的表达,比较不同HBe Ag状态患者CD4+、CD8+、CD20+、CD57+T淋巴细胞与临床相关性。等级资料采用Kruskal-Walls H检验,组间比较采用Nemenyi法,相关性分析采用直线相关分析法。结果 HBe Ag阳性和阴性患者的炎症程度到达G3~G4,其肝组织中CD8+、CD20+T淋巴细胞的表达均比G1组明显增加(P值均0.05);HBe Ag阳性患者炎症程度到达G4、而HBe Ag阴性患者炎症程度到达G3,其肝组织中CD4+T淋巴细胞的表达比G1组明显增加(P值均0.05);在HBe Ag阴性患者中CD4+、CD8+、CD20+、CD57+T淋巴细胞均与ALT水平呈正相关(r值分别为0.353、0.628、0.693、0.540,P值均0.05),且CD20+T淋巴细胞还与HBV DNA水平呈正相关(r=0.378,P0.05)。而在HBe Ag阳性患者中只有CD8+、CD20+T淋巴细胞与ALT水平呈正相关,与HBV DNA水平无相关性。结论不同HBe Ag状态患者肝组织内CD4+、CD8+、CD20+T淋巴细胞表达与肝组织内炎症分级均有明显相关性,但肝内免疫活性细胞与ALT、HBV DNA水平的相关性存在差异。     

CD127在慢性重型乙型肝炎患者外周血T细胞中的表达及意义

目的:研究慢性重型乙型肝炎患者外周血T细胞表面CD127表达水平的变化及与慢性重型乙型肝炎发病的关系。方法:流式细胞术检测30例慢性重型乙型肝炎、20例慢性乙型肝炎(CHB)患者和20例健康志愿者外周血T细胞中CD127的表达,用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-7(白细胞介素-7)的表达。结果:慢性重型乙型肝炎组和CHB组CD8+T比例均较健康对照组高(P均<0.01),慢性重型乙型肝炎组CD4+T比例较健康对照组高(P<0.01)。慢性重型乙型肝炎与CHB组CD127+细胞的比例均较健康对照组低(P均<0.05)。慢性重型乙型肝炎组CD4+CD127+双阳性细胞的比例低于CHB组,CHB组又低于健康对照组(P均<0.01);慢性重型乙型肝炎组CD8+CD127+双阳性细胞比例较CHB组和健康对照组低(P均<0.01)。CD8+CD127+细胞的表达与HBV DNA载量呈负相关。慢性重型乙型肝炎组和CHB组血清IL-7含量均较健康对照组高(P均<0.01)。结论:慢性重型乙型肝炎患者外周血中CD4+CD127+、CD8+CD127+细胞表达降低;以CD8+CD127+降低更明显,并与HBV DNA载量呈负相关;血清中IL-7表达增高,可能与慢性重型乙型肝炎的发病有关。     

恩替卡韦治疗后慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体1表达与HBeAg血清学转换的关系

目的 动态观察慢性乙型肝炎患者恩替卡韦抗病毒治疗后不同时期外周血T淋巴细胞(简称T细胞)表面程序性死亡受体1(PD-1)表达的变化,并探讨其与HBeAg血清学转换间的关系.方法 对20例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以恩替卡韦抗病毒治疗并随访51周,根据HBeAg是否发生血清学转换分为:HBeAg未转换组(14例),HBeAg转换组(6例).分别于治疗前(基线,T0)、治疗2～4周(T1)、治疗5～10周(T2)、治疗11～20周(T3)、治疗21～30周(T4)、治疗31～51周(T5)收集外周血,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞表面PD-1的表达水平,实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量,同时检测血清ALT水平.正态分布资料采用独立样本t检验,非正态分布者采用Mann-Whitney U检验比较组间差异,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 治疗前两组患者血清HBV DNA载量分别为(7.54±0.67)log10拷贝/ml、(7.30±0.79)log10拷贝/ml(P＞0.05),ALT水平为(187.26±184.15)U/L、(272.17±215.07)U/L(P＞0.05),外周血CD4+T细胞表面PD-1表达水平为6.04%±3.71%6.77%±2.88%(P＞0.05),CD8+T细胞表面PD-1表达水平为6.39%±3.33%、8.88%±2.84%(P＞0.05).恩替卡韦抗病毒治疗后两组患者血清HBV DNA载量、ALT水平的下降与CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下调呈显著正相关(r=0.212,P=0.05;r=0.377,P＜0.01;r=0.279,P＜0.05;r=0.347,P＜0.01).在相同的随访时间段内,HBeAg转换组血清HBV DNA载量、ALT水平及外周血CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率均高于HBeAg未转换组,且两组间△ T0～T1、△T0～T2期HBV DNA的下降率及△T0～T2、△T0～T3期CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率差异有统计学意义(分别为49.9%对比37.3%,56.7%对比47.4%,70.1%对比-4.2%,66.9%对比24.5%,P值均＜0.05).结论 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,外周血CD8+T细胞表面PD-1表达的快速下调与血清HBV DNA相似,可作为预测后期HBeAg血清学转换的指标之一.

Abstract：

Objective To observe longitudinally the expression of Programmed death 1 (PD-1) on peripheral blood T cells in chronic hepatitis B patients underwent antiviral treatment with entecavir (ETV)and to explore the relationship between PD-1 expression and HBeAg seroconversion.Methods Twenty HBeAg positive patients underwent antiviral treatment with ETV were followed up for 51 weels.14 patients remained HBeAg positive and 6 patients achieved HBeAg seroconversion.Peripheral blood was collected at six time points:T0:baseline,T1:2-4week;T2:5-10week;T3:11-20week;T4:21-30week:T5:31-51week.PD-1 expressions on T cells were assessed by flow cytometry.Serum HBV DNA loads were determined by real-time fluorescent quanttative polymerase chain reaction (PCR) and serum ALT levels were examined at the same time.Results At baseline,serum HBV DNA load of patients without HBeAg seroconversion and with HBeAg seroconversion were (7.54 ± 0.67) log10 copies/ml and (7.30 ± 0.79) log10 copies/ml(P ＞ 0.05),the ALT levels were (187.26 ± 184.15) U/L and (272.17 ± 215.07) U/L (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD4+ T cells were 6.04% ± 3.71% and 6.77% ± 2.88% (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD8+ T cells were 6.39% ± 3.33% and 8.88% ± 2.84% (P ＞ 0.05).After ETV treatment,serum HBV DNA loads and ALT levels both decreased gradually,which was positively correlated with PD-1 expressions on CD4+ and CD8+ T cells (r = 0.212,P = 0.05;r = 0.377,P ＜ 0.01;r = 0.279,P ＜ 0.05;r = 0.347,P ＜ 0.01 ).During the same monitoring period,the HBV DNA loads,ALT levels and PD-1 expressions on T cells of the patients with HBeAg seroconversion decreased significantly as compared with the patients without HBeAg seroconversion.Besides,the decrease of HBV DNA loads during period △ T0-T1 and △ T0-T2 and PD-1 expressions on CD8+ T cells during period △ T0-T2 and △ T0-T3 were significantly different between these two kinds of patients (49.9% vs 37.3%,P ＜ 0.05;56.7% vs 47.4%,P ＜ 0.05;70.1% vs -4.2%,P ＜ 0.05;66.9% vs 24.5%,P ＜ 0.05).Conclusion The rapid decrease of PD-1 expression on peripheral CD8+ T cells after antiviral treatment with ETV is positvely correlated with the decrease of serum HBV DNA loads and may be used as a predictive index for HBeAg seroconversion in HBeAg positive patients.     

慢性乙型肝炎患者CD3+CD56+淋巴细胞及其表型与病情的关系

目的 探讨CD3+CD56+淋巴细胞与慢性乙型肝炎(CHB)患者病情变化和转归的关系.方法 CHB患者53例,HBV携带者17例,19名健康体检者为对照组.研究对象均抽取外周血2～3ml,采用流式细胞技术测定CD3+CD56+淋巴细胞,并进一步分析CD3+CD56+淋巴细胞表面CD4,CD8、T细胞抗原受体(TCR)V α 24,TCR α/β以及TCR γ/δ的表达.结果CHB组CD3+CD56+淋巴细胞为7.4%±4.6%,慢性HBV携带者组为4.5%±3.5%,对照组为4.4%±3.7%,CHB组CD3+CD56+淋巴细胞明显升高.3组人群CD3+CD56+淋巴细胞TCR V α 24的表达,差异无统计学意义.慢性HBV携带者组CD3 CD56+细胞表达的TCR V α 24为2.8%±1.4%,明显高于对照组1.7%±1.0%.CHB组CD3+CD56+细胞CD8和TCRα/β的表达分别为61.9%±16.8%和68.1%±16.9%,对照组为49.2%±15.6%和56.4%±17.9%,CHB组均明显高于对照组.CHB组和HBV携带者组TCR γ/δ的表达,分别为29.6%±15.4%和30.5%±14.8%,CHB组和HBV携带者明显低于对照组41.4%±19.4%.CHB重度患者CD3+CD56 1细胞CD8和TCR α/β的表达分别为69.0%±14.0%和76.1%±12.9%,CHB中度患者CD8的表达为66.4%±14.9%,均明显高于CHB轻度患者51.4%±16.2%和62.1%±14.6%. 结论 慢性乙型肝炎的活动可能与CD3+CD56+淋巴细胞的CD8高表达有关.